用于检测生物分子的探针测定的制作方法

技术特征：
1.一种用于检测一种或多种目的靶标的存在的组合物，其中所述组合物包含以下组分：-根据结构i的第一发夹引发剂分子：其中所述结构包含结构域a、b1*、b2、b2*、e、e*、s和x*；其中相邻结构域彼此直接连接或通过连接子连接；其中结构域x*与所述一种或多种目的靶标结合或互补；其中结构域b1*形成发夹环；其中结构域b2*和b2具有相同的长度并且彼此互补；其中结构域b2*和b2的长度至少为2个核苷酸；其中结构域e和e*具有相同的长度，长度至少为2个核苷酸，并且彼此互补；其中结构域a的长度至少为3个核苷酸；其中结构域s是间隔子；和-根据结构ii的第二引发剂分子：
其中所述结构包含结构域a*、c*、e*、s’和y*；其中结构域y*与所述一种或多种目的靶标互补或结合；其中结构域a和a*彼此互补；其中结构ii的结构域e*长度至少为2个核苷酸，并且在结合所述目的靶标后与结构i的结构域e结合，其中结构域c*能够结合至信号产生分子/信号产生复合物；和其中结构域s’是间隔子，其中选择结构域s和s’的长度以允许结构域b1*、b2*和c*在结合时彼此相邻。2.根据权利要求1所述的组合物，其中除结构域x*、y*、s和s’之外的所有结构域都是核酸序列。3.根据权利要求1所述的组合物，其中结构域x*和y*选自由核酸序列、蛋白质序列、包括翻译后修饰形式的蛋白质序列、抗体、抗原和小分子组成的组。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域a*的长度为3至10个核苷酸。5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域b1*的长度至少为3个核苷酸。6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域b2*的长度为2至6个核苷酸。7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域c*至少是结构域b1*的长度。8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域e*的长度为2至8个核苷酸。9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域s的长度为1至50nm。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域a*的长度为3至10个核苷酸；其中结构域b1*的长度至少为3个核苷酸；其中结构域b2*的长度为2至6个核苷酸；其中结构域c*至少是结构域b1*的长度；其中结构域d*的长度为6至12个核苷酸；并且其中结构域e*的长度为2至8个核苷酸。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域a*的长度为3至10个核苷酸；其中结构域b1*的长度至少为3个核苷酸；其中结构域b2*的长度为2至6个核苷酸；其中结构域c*至少是结构域b1*的长度；其中结构域d*的长度为6至12个核苷酸；其中结构域e*的长度为2至8个核苷酸；并且其中结构域s的长度为1-50nm。12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中结构域b2*的长度为2或3个核苷酸。
13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种目的靶标选自由dna、rna、单核苷酸多态性(snp)、微小rna(mirna)、基因组dna、病毒dna、蛋白质、翻译后修饰的蛋白质、细胞表面受体、代谢物、脂质、碳水化合物和小分子组成的组。14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物进一步包含一种或多种信号产生分子/信号产生复合物。15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，进一步包含一对核酸发夹，所述核酸发夹包含分别根据结构iii和iv的第一发夹报告子(hp1)和第二发夹报告子(hp2)：-其中所述第一发夹报告子包含结构域b、c、d和c*，-其中结构域b是长度为6至12个核苷酸的5’核酸突出端，-其中结构域d是长度为6至12个核苷酸的发夹环，-其中结构域c*如权利要求1至15中任一项所定义，-其中所述第二发夹报告子(hp2)包含结构域d*、c’、b3*和c*’，-其中结构域b3*是与结构域b长度相同的发夹环，-其中结构域d*是与结构域d长度相同的核酸突出端，-其中结构域c’和c*’具有相同的长度，并且能够彼此结合，并且-其中结构域b3*和d各自形成发夹环。16.根据权利要求15所述的组合物，其中结构域d和d*彼此互补。17.根据权利要求15至16中任一项所述的组合物，其中所述结构域c’和c*’彼此互补。18.根据权利要求15至17中任一项所述的组合物，其中所述第一发夹报告子(hp1)包含第一检测部分。19.根据权利要求15至18中任一项所述的组合物，其中所述第二发夹包含第二检测部分。20.根据权利要求18至19中任一项所述的组合物，其中所述检测部分选自由荧光团、小分子、蛋白质和无机纳米材料组成的组。21.根据权利要求15至20中任一项所述的组合物，其中结构域d*的长度为6至12个核苷酸。22.一种用于检测样品中的一种或多种目的靶标的方法，所述方法包括提供被认为包含所述一种或多种目的靶标的样品并使用根据权利要求1至21中任一项所述的组合物检测所述一种或多种目的靶标，其中每种组合物对于一种目的靶标是特异性的。23.一种用于检测样品中一种或多种目的靶标的存在的方法，所述方法包括：-将根据权利要求1至21中任一项所述的一种或多种组合物添加到所述样品中；-允许所述一种或多种组合物与被认为包含在所述样品中的所述一种或多种目的靶标结合；-测量由所述组合物与所述目的靶标结合产生的一种或多种信号；其中一种或多种信号的产生检测到所述样品中存在所述目的靶标中的一种或多种。
24.根据权利要求23所述的方法，其中同时或依次添加如权利要求1至21中任一项所定义的一种或多种组合物的每种组分。25.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中如权利要求1中所定义的所述第一发夹引发剂分子和所述第二引发剂分子结合至至少一个目的靶标。26.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中权利要求1的组合物与所述一种或多种目的靶标的结合不需要酶。27.根据权利要求22至26中任一项所述的方法，其中所述方法在单一温度下进行，在所述温度下，结合至所述目的靶标的所述组合物是稳定的。28.根据权利要求22至27中任一项所述的方法，其中所述方法在单一反应容器中进行。29.根据权利要求22至28中任一项所述的方法，其中所述一种或多种目的靶标选自由dna、rna、单核苷酸多态性(snp)、微小rna(mirna)、基因组dna、病毒dna、蛋白质、蛋白质相互作用、翻译后修饰的蛋白质、细胞表面受体代谢物、脂质、碳水化合物和小分子组成的组。30.根据权利要求1至21中任一项所述的组合物，或根据权利要求22至29中任一项所述的方法，其中所述一种或多种目的靶标的存在指示疾病的存在。31.一种鉴定疾病的方法，所述方法包括-将一种或多种根据权利要求1至21中任一项或权利要求30的组合物添加到从怀疑患有所述疾病的受试者获得的样品中；-允许所述一种或多种组合物与所述一种或多种目的靶标结合；-测量由所述组合物与所述目的靶标结合产生的一种或多种信号；和-鉴定所述疾病，其中一种或多种信号的存在指示所述样品中存在所述目的靶标中的一种或多种；并且其中所述目的靶标中的所述一种或多种是疾病特异性的。32.一种试剂盒，包含如权利要求1至21中任一项或权利要求30所定义的组合物。33.根据权利要求32所述的试剂盒，其中所述组合物的每种组分以冻干粉末的形式或作为浓缩储备溶液单独提供。34.根据权利要求32至33中任一项所述的试剂盒，包含如权利要求1所定义的组合物，其中所述第一发夹引发剂分子和所述第二引发剂分子被进一步修饰以适于缀合。35.根据权利要求32至34中任一项所述的试剂盒，任选地包含i)用于进行亲和缀合的试剂，或ii)用于与选自由dna、抗体和蛋白质组成的组的分子进行共价缀合的试剂。36.根据权利要求1至21中任一项所述的组合物在药物发现中的用途。

技术总结
本文公开了用于检测一种或多种目的靶标的存在的组合物，其中所述组合物包含第一发夹引发剂分子和第二引发剂分子。还公开了使用所述组合物的方法。述组合物的方法。述组合物的方法。


技术研发人员：翁林锐 翁燕珊
受保护的技术使用者：新加坡国立大学
技术研发日：2020.05.22
技术公布日：2022/3/4