一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿的制作方法

1.本发明属于园艺、农学等器械领域，特别涉及一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿。


背景技术：

2.培养皿在上述各个领域都是比较常用的器皿。
3.葡萄霜霉菌是葡萄的主要病害之一，特别是一些经济型的葡萄品种，因此葡萄霜霉病是葡萄病害的一个主要研究方向。
4.目前在葡萄霜霉菌的研究中，会经常用到具有不同感染力的霜霉菌品种。目前实验室的常用方法是采用叶饼培养，即使用打孔器在叶片上打出圆形叶饼，再将其培养在琼脂培养皿中；虽然琼脂会提供部分水分，但是其叶片边缘往往会失水萎缩和枯黄，这样会影响菌的生长以及菌的活性。而广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室的一项设计（cn108060067a）采用了加湿器提供水分，其能够有效防止叶饼失水，但是加湿器在汽体流量的控制上并不方便，由于其提供大部分都是水雾，这些水雾即使量少，但相对整个培养时间，也会在叶片上形成大量的凝结水，因此会形成一层水膜层，阻碍了叶片呼吸，不仅造成叶片腐烂还会造成菌体培养失败。由于实验中出现的种种不良情况，上述装置（cn108060067a）也不能用于区分不同菌种的感染能力。因此，在菌种活力和葡萄抗性实验中，需要一种能够保证叶片不失水、不腐烂、能够检测区分不同葡萄品种抗性、且能够反应不同菌种真实感染力的培养器皿。


技术实现要素：

5.针对上述技术问题，本发明设计一种能够反应叶片真实情况、菌种真实活力的培养皿。
6.一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿，包括皿盖1和皿盒4，其特征在于，还包括托盘2和气台3。
7.所述皿盖1包括盖顶1.1、盖壁1.2和通滤管1.3，所述通滤管1.3设置于盖顶1.1上部中央位置，为圆筒状；所述通滤管1.3的筒状壁上设有若干个通滤孔1.31，所述通滤孔1.31用于排出培养皿内部气体。
8.所述盖顶1.1上设置有管孔1.11，管孔1.11位于通滤管1.3内部中央位置，所述管孔1.11用于贯通进气管3.1；所述管孔1.11周围设置有若干个盖气孔1.12，所述盖气孔1.12用于排出培养皿内部气体。
9.所述托盘2为圆形，包括叶盘2.1和固定管2.2，固定管2.2设置在所述叶盘2.1的中心位置，并通过固定筋2.3加固；进气管3.1能够贯穿叶盘2.1和固定管2.2；所述叶盘2.1用于放置培养霜霉菌的叶片。
10.靠近所述叶盘2.1的外侧边沿处设置有若干个叶柄孔2.4，用于插入叶片的叶柄；若干个所述叶柄孔2.4围绕固定管2.2设置，并且叶柄孔2.4倾斜向固定管2.2。
11.靠近所述固定管2.2的叶盘2.1上设置有若干个吹气孔2.5；所述吹气孔2.5下部口小，上部口大，并且倾斜向外设计；所述吹气孔2.5与叶柄孔2.4间隔设置。
12.所述气台3为倒立漏斗状，其包括进气管3.1、支撑台3.2、斗壁3.3、底座3.4；支撑台3.2位于进气管3.1下部，用于支撑托盘2；斗壁3.3为倒立漏斗状；所述斗壁3.3下部设置有底座3.4，底座下部设置有导气槽3.5；所述导气槽3.5连通斗壁3.3内部空间和培养皿。
13.皿盒4包括盒底4.1与盒壁4.2；所述盒壁4.2的高度高于盖壁1.2，以便于采用封口膜对盒壁4.2和盖壁1.2之间的缝隙进行密封。
14.所述气台3通过进气管3.1贯通托盘2，并穿过皿盖1，所述气台3底座3.4抵触在皿盒4的盒底4.1内。
15.盖壁1.2与盒壁4.2均为圆筒状，盖壁1.2的高度小于盒壁4.2的高度，方便封口膜（或密封膜）对缝隙进行密封。
16.所述进气管3.1连接风机，风机为培养皿提供所需气体；所述进气管3.1与通滤管1.3之间的空隙放置脱脂棉，脱脂棉用于防止气体倒吸时带入杂菌；在培养过程中，所述皿盒4内放置葡萄生长所需的营养液；所述营养液的液面没过底座3.4，在通气过程中，为营养液提供氧气；所述进气管3.1内加入脱脂棉，脱脂棉用于过滤进气中的杂菌。
17.培养皿内使用较淡的培养液，保证叶片在培养霜霉菌过程中够用即可，不必多加。在叶片进行培养过程中，叶柄端部插入到培养液内培养。
18.实验采用组培的葡萄植株叶片，一年四季均可获得，并且葡萄植株没有经过霜霉菌感染，没有形成葡萄免疫抗性。进气可以采用间歇的进气方式，对通气量进行调节，防止大通气扰动培养皿内部气流。
19.有益技术效果为：（1）本平皿内采用较淡的培养液，其能够给叶片提供其正常生长所需要的营养物质和水分。采用整片带有叶柄的叶片，并使用营养液培养，叶片没有营养和水分的缺失所产生的应激反应，因此，能够反应叶片的真实抗性，也能反应出普通菌种的真实感染力。（2）由于整片叶片的叶柄端部插入到营养液内，叶柄可以从营养液中吸收水分与营养；叶片没有切口，因此不会造成水分流失，也不会造成腐败菌的感染，对于抗性鉴定以及纯霜霉菌的培养都能够提高实验的准确性。叶片完整，不需要较大的空气湿度，因此不必连接加湿器，营养液中吹起，带出一部分水气，不会使得湿度过高使得叶片结出水珠，也会保证霜霉菌侵染所需要的湿润环境。实验过程中，在营养液内放置一定的抑菌药物（例如抗生素），可以防止叶片感染。（3）相比叶片琼脂或加湿器培养；本发明采用小型风机进气，气体进入到营养液会带出部分水气，其为气态，会增加空气的湿度，但凝结较少，因此不会因为水太多而造成叶片腐烂（部分是由于抑制呼吸所造成的，一部分是腐败菌感染伤口），也不会因为湿度太小而造成叶片失水而皱缩和枯黄。（4）叶柄孔和吹气孔间隔设置，出气不会吹到叶片，不会吹干叶片背面的菌液，造成菌种感染失败。而叶片接种时，采用毛笔或其他柔软的小刷子进行接种；在叶片背面或形成一层较薄的水层，在培养过程中回慢慢消失掉，因此在培养过程中，不必在打开盖子，吸除叶片上的水分；因此，降低了实验工作量，同时降低了二次感染的危险。（5）吹气孔的下口小，上口大，防止出气形成强劲的空气流，造成托盘上部空气紊乱而使得叶片移动。并且能够使得空气均匀分散到培养皿内部。（6）吹气孔倾斜向上，吹到皿盖内部，防止其内表面形成水膜导致透光性降低，以致叶片光合作用降低，并且使得叶片免疫能力降低。（7）风机进气经过培养液，可以为营养液提供氧气，防止营养液
缺氧而造成叶柄根部腐烂，也能够为培养皿内增加湿度防止叶片萎缩，一举两得。（8）叶柄孔具有一定倾斜，其大致与叶片和叶柄的角度相似，防止叶柄出现弯折而造成营养液和水分在叶柄中的运输发生阻碍。（9）盖壁的高度小于盒壁的高度，方便封口膜（或密封膜）对缝隙进行密封，能够有效防止杂菌感染。
附图说明
20.图1为一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿组装后的斜俯透视图。
21.图2为一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿的爆炸视图。
22.图3为一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿的皿盖斜俯视图。
23.图4为一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿的托盘斜俯视图。
24.图5为一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿的气台斜俯视图。
25.图6为一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿的气台斜仰视图。
26.图中，1-皿盖，4-皿盒，2-托盘，3-气台，1.1-盖顶，1.2-盖壁，1.3-通滤管，1.11-管孔，1.12-盖气孔，1.31-通滤孔，2.1-叶盘，2.2-固定管，2.3-固定筋，2.4-叶柄孔，2.5-吹气孔，3.1-进气管，3.2-支撑台，3.3-斗壁，3.4-底座，3.5-导气槽，4.1-盒底，4.2-盒壁。
27.实施方式下面结合附图1-6和实施例对本发明的具体结构和使用方法进一步说明。
28.一种用于培养葡萄霜霉菌的仿生培养皿，包括皿盖1和皿盒4，其特征在于，还包括托盘2和气台3（图1-2）。所述皿盖1包括盖顶1.1、盖壁1.2和通滤管1.3，所述通滤管1.3设置于盖顶1.1上部中央位置，为圆筒状；所述通滤管1.3的筒状壁上设有若干个通滤孔1.31，所述通滤孔1.31用于排出培养皿内部气体。所述盖顶1.1上设置有管孔1.11，管孔1.11位于通滤管1.3内部中央位置，所述管孔1.11用于贯通进气管3.1；所述管孔1.11周围设置有若干个盖气孔1.12，所述盖气孔1.12用于排出培养皿内部气体。
29.所述托盘2为圆形，包括叶盘2.1和固定管2.2，固定管2.2设置在所述叶盘2.1的中心位置，并通过固定筋2.3加固；进气管3.1能够贯穿叶盘2.1和固定管2.2；所述叶盘2.1用于放置培养霜霉菌的叶片。靠近所述叶盘2.1的外侧边沿处设置有若干个叶柄孔2.4，用于插入叶片的叶柄；若干个所述叶柄孔2.4围绕固定管2.2设置，并且叶柄孔2.4倾斜向固定管2.2。靠近所述固定管2.2的叶盘2.1上设置有若干个吹气孔2.5；所述吹气孔2.5下部口小，上部口大，并且倾斜向外设计；所述吹气孔2.5与叶柄孔2.4间隔设置。
30.所述气台3为倒立漏斗状，其包括进气管3.1、支撑台3.2、斗壁3.3、底座3.4；支撑台3.2位于进气管3.1下部，用于支撑托盘2；斗壁3.3为倒立漏斗状；所述斗壁3.3下部设置有底座3.4，底座下部设置有导气槽3.5；所述导气槽3.5连通斗壁3.3内部空间和培养皿。皿盒4包括盒底4.1与盒壁4.2；所述盒壁4.2的高度高于盖壁1.2，以便于采用封口膜对盒壁4.2和盖壁1.2之间的缝隙进行密封。所述气台3通过进气管3.1贯通托盘2，并穿过皿盖1，所述气台3底座3.4抵触在皿盒4的盒底4.1内。
31.所述进气管3.1连接风机，风机为培养皿提供所需气体。所述进气管3.1与通滤管1.3之间的空隙放置脱脂棉，脱脂棉用于防止气体倒吸时带入杂菌。在培养过程中，所述皿盒4内放置葡萄生长所需的营养液。所述营养液的液面没过底座3.4，在通气过程中，为营养液提供氧气。所述进气管3.1内加入脱脂棉，脱脂棉用于过滤进气中的杂菌。
32.在霜霉菌的培养之前，在皿盒4放入浓度较低的营养液，营养液内放入抑菌剂；之后，再将气台3的进气管3.1插入到托盘2的固定管2.2内，并放入到皿盒4内，使得营养液淹没过底座3.4；取组培葡萄苗的叶片，使用毛笔或其他柔软的小刷子在叶片背面刷含有霜霉菌孢子的悬浮液；将叶柄通过叶柄孔2.4插入到营养液内，叶片正面朝上，叶片尖端部分朝向固定管2.2；之后盖上皿盖1，使得进气管3.1从通滤管1.3内伸出，通滤管1.3和进气管3.1之间加入脱脂棉，脱脂棉具有防止气体倒吸时出现外部气体进入到培养皿内，防止长时间培养时杂菌滋生。在皿盖1和皿盒4之间的缝隙使用封口膜（或密封膜）进行密封；防止内部营养液从皿盖1和皿盒4之间的缝隙蒸发掉，同时防止外部杂菌从缝隙进入。进气管3.1内加入脱脂棉，并且通过软管连接小型风机。软管与进气管3.1的连接处，向下按压并把通滤管1.3和进气管3.1之间的脱脂棉压实。最后将培养皿放在适宜的光照和温度的培养箱中进行培养，并对培养所需要的实验数据进行收集。
33.以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。