一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法及干扰仪与流程

1.本发明是关于癌细胞抑制方法及设备，特别是关于一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法及干扰仪。


背景技术：

2.随着社会科技不断的发展，人们的压力也越来越大，越来越多人处于亚健康状态或者患有各种疾病。当前治疗各种疾病主要有药物治疗和物理治疗。物理治疗就是将物理因子作用于人体，促进人体康复的设备。常见的物理因子包括电、声、光、磁、压力等等。物理治疗相对于药物治疗安全性较高，也较环保，而且物理治疗的作用对某些疾病也非常见效，比如通过改善血液循环来改善人体脏器的功能或者改善人体局部组织的状态。其中，理疗仪是物理治疗疾病的重要组成部分。
3.光量子理疗，按照物理学概念来说，这种治疗方式属于光疗法，日常生活中常见的是利用阳光或人工光线(红外线、紫外线、可见光、激光)防治疾病和促进机体康复的方法。
4.交变电场理疗，是通过不同频率、强度的交变电场作用于人体，从而达到治疗及促进康复的作用。低频电场和高频电场已被广泛开发应用于人体疾病的控制、治疗、康复等医学领域；而中频电场抑制癌细胞分裂增殖的新发现在实际应用中则极少。
5.目前，肿瘤电场治疗对于乳腺癌细胞的影响作用仍不清楚，电场频率、电场强度等适用参数等与扰乱癌细胞分裂进而起到肿瘤治疗作用的相关性有待研究。通过此实验，我们欲确认细胞外电场对于mcf-7和mda-mb-231 乳腺癌细胞的作用，确认电场扰乱乳腺癌细胞再生的最佳的电场震荡频率及电场理疗设备功率和干涉时间。
6.公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。


技术实现要素：

7.本发明的目的在于提供一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其能够在特定的交变电场频率和强度下，对人乳腺癌细胞增殖进行高效的抑制。
8.本发明的另一目的在于提供一种外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，其能够高效抑制人乳腺癌细胞的增值，具有极佳的使用效果；采用交变电场和光量子辐射的复合手段，增强抑制效果，光电量子流能够改善促进健康细胞的代谢更新；机型小巧便携，便于使用。
9.为实现上述目的，本发明提供了一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，所述方法的步骤包括：
10.细胞复苏：将冻存的人乳腺癌细胞解冻后制得细胞悬液，再放置于细胞培养箱中培养；
11.细胞传代及冻存：取生长状态良好的人乳腺癌细胞进行传代培养；选择生长状态良好的处于对数生长期的人乳腺癌细胞进行细胞冻存以保存细胞系；
12.细胞铺板及电场抑制：取生长状态良好、处于对数期的人乳腺癌细胞接种于培养
板中，将培养板外加预设的频率为145-155khz、强度为2v/cm的电场，放置于细胞培养箱中进行培养；
13.抑制效果检测：采用噻唑蓝染色法或结晶紫染色法检测细胞抑制效果。
14.在一个或多个实施方式中，所述细胞铺板及电场抑制步骤中的电场是频率为150khz的交变电场。
15.在一个或多个实施方式中，所述细胞复苏的操作步骤为：
16.解冻：是将冻存的人乳腺癌细胞从液氮中取出，并迅速置于预先打开的 37℃水浴锅中，并不断摇晃冻存管，使细胞冻存液迅速融化；
17.离心：再将解冻后的人乳腺癌细胞冻存管用酒精消毒后迅速转移到超净台中，并将细胞悬液加入到盛有6ml10％fbs的rpmi1640或dmem-basic 培养基的15ml离心管中，用吸管轻轻吹打使之混合均匀；然后将离心管放入离心机，配平后以室温1000rpm的转速离心3-4分钟；
18.制细胞悬液：取出离心管消毒后，放入超净台后用吸管吸取去除上清液，再用吸管吸取3ml细胞培养液反复轻轻吹打离心管中细胞成细胞悬液；
19.细胞培养：将细胞悬液转移至10cm直径的细胞培养皿中，并补充6ml 含有10％fbs的完全培养液，将培养皿置于37℃、co2浓度为5％的细胞培养箱中培养。
20.在一个或多个实施方式中，所述细胞传代及冻存中，细胞传代的步骤为：
21.培养：先用酒精将倒置显微镜擦拭干净，然后将从细胞培养箱取出的细胞置于倒置显微镜下进行观察，待生长状态良好的细胞生长至占比75-85％时，进行细胞的传代处理；
22.传代处理：将要传代的细胞置于超净台中，用吸管吸去旧培养液，沿细胞培养皿的侧壁轻轻加入3ml生理盐水，轻微上下颠倒培养皿使其充分冲洗残留的细胞培养液，然后用吸管将生理盐水吸出；再向培养皿中滴加1-2滴胰酶，上下颠倒培养皿，使胰酶充分覆盖细胞表面；在倒置显微镜下观察细胞的状态，当细胞间隙增大时，及时加入适量含有10％fbs的培养液终止消化过程；然后用吸管轻轻反复吹打细胞，使细胞吹打成细胞悬液，然后用吸管将细胞悬液吸入15ml离心管内，室温1000rpm条件下离心4分钟；取出离心管，弃去上清液，加入适量细胞培养液，轻轻吹打混合均匀；然后将其吹打均匀的细胞悬液转移至3个盛有6ml含10％fbs细胞培养液的培养皿中，继续置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中培养，完成细胞传代；
23.细胞冻存的操作为：将上步细胞传代处理中离心后的离心管中，弃去上清液，加入适量的细胞冻存液，用吸管轻轻吹打混合均匀，并将其转移至细胞冻存管中，每支细胞冻存管加入1.5ml细胞悬液，用记号笔标记细胞名称，冻存日期信息；将细胞冻存管先放入细胞冻存盒，再将其置入-80℃冰箱，隔天将细胞冻存管置入液氮中长期保存。
24.在一个或多个实施方式中，所述细胞铺板及电场抑制步骤的操作为：
25.取生长状态良好，处于对数期的人乳腺癌细胞细胞，用胰酶消化后，进行细胞计数后接种于细胞96孔培养板中，每个孔的细胞接种量控制在 4000-5000个，每个孔加入细胞培养液200μl，每个孔设置3到5个孔作为复孔；然后将实验组96孔培养板置于预设参数的电场中，再将实验组和对照组细胞的96孔培养板统一置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养。
26.在一个或多个实施方式中，所述所述细胞铺板及电场抑制步骤的操作为：
27.取生长状态良好，处于对数期的人乳腺癌细胞细胞，用胰酶消化后，进行细胞计数后接种于细胞96孔培养板中，每孔细胞为300、500和800三个密度梯度，每个孔加入细胞培养液2ml，按照“十”字方向晃动培养板促使细胞均匀分散；每个孔设置3孔作为复孔；然后将实验组96孔培养板置于预设参数的电场中，再将实验组和对照组细胞的96孔培养板统一置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养。
28.在一个或多个实施方式中，所述抑制效果检测的操作为：
29.噻唑蓝染色法(mtt检测)的步骤为：
30.在细胞超净台的灯光关闭条件下，于第二天、第三天、第四天、第五天分别向对应的实验组和对照组的96孔培养板中的200μl培养液中加入20μl 噻唑蓝mtt溶液，然后将加入噻唑蓝mtt溶液的96孔培养板继续放入置于 37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养孵育4小时；
31.孵育结束后，将96细胞培养板置于离心机，4000rpm转速离心5分钟；用微量移液器轻轻吸去上清液，轻柔吸取避免吸走结晶；
32.再向96细胞培养板的孔中加入150μl的dmso溶液，置于振荡器上震荡10分钟，从而使孔内的结晶充分溶解；
33.使用酶标仪选择570nm的波长，测定每孔的吸光值，通过吸光值的大小判断细胞的增殖活性，吸光值越大，增殖活性越大；
34.将第二天至第五天测得的数据，输入excel表，通过计算平均数和标准差来进行曲线的绘制，进行结果分析；
35.结晶紫染色法的步骤为：
36.将96孔培养板置于培养箱中孵育10-14天，每1-2天观察细胞增殖状态，并换液；
37.观察细胞生长至肉眼可见的细胞克隆团时，即终止培养，弃去培养液，用pbs溶液清洗2-3遍，每孔加入4％多聚甲醛2ml，室温固定30min，弃去固定液，然后每孔加入结晶紫染色液2ml，室温染色15-20min，弃去染色液，再用pbs洗去染色液，置于室温晾干后拍照并进行统计分析。
38.本发明同时提供了一种外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，所述所述干扰仪的内部电路包括：
39.电子震荡电路：所述电子震荡电路输出145-155khz的震荡波；
40.震荡波整理定型电路：震荡波整理定型电路的输入端与电子震荡电路连接；震荡波整理定型电路输出经过波型选择的震荡波；
41.初级放大电路：初级放大电路与震荡波整理定型电路的输出端连接；初级放大电路将震荡波信号放大10倍；
42.阻抗转换电路：阻抗转换电路的输入端与初级放大电路的输出端连接；阻抗转换电路用于减小辐射和功率损耗；
43.功率选择电路：功率选择电路的输入端与阻抗转换电路的输出端连接；功率选择电路调整输出电压以控制电场强度；
44.推挽式功率放大电路：推挽式功率放大电路的输入端与功率选择电路的输出端连接；推挽式功率放大电路的震荡波输出峰峰值电压是输入峰峰值电压的20倍；
45.物理换能器：物理换能器的输入端与推挽式功率放大电路的输出端连接；物理换能器向外输出交变电场和光量子流；
46.复合电源：复合电源分为一级供电电路和二级供电电路；一级供电电路分别与电子震荡电路、震荡波整理定型电路、初级放大电路、阻抗转换电路供电连接；二级供电电路分别与功率选择电路、推挽式功率放大电路供电连接；二级供电电路的供电电压为一级供电电路电压的2倍；
47.所述物理换能器输出的光量子流是15.5～98thz的光量子辐射，所述物理换能器输出的交变电场为150khz、强度为1.6-2.5v/cm的交变电场；
48.所述物理换能器包括皮肤接触型换能器和定向辐射型换能器；
49.皮肤接触型换能器包括平面式换能器、穿戴式换能器、绑带式换能器；
50.定向辐射型换能器包括喇叭式换能器、阵列式换能器。
51.在一个或多个实施方式中，所述交变电场强度为1.6v/cm、1.8v/cm、2v/cm 或2.5v/cm；所述光量子辐射的频率为15.5thz、28thz、47.5thz、76thz 或98thz；
52.所述在推挽式功率放大电路中，其输入端信号为正弦波信号，其工作状态为两只三极管各负责正负半周波形放大任务的乙类工作状态；
53.所述阻抗转换电路为单节阻抗变换电路；
54.所述干扰仪的机型为便携式随身机，复合电源为可充电的电池组电源，交变电场的强度可调节，采用所述皮肤接触型换能器；所述皮肤接触型换能器为贴片形式的平面式换能器。
55.在一个或多个实施方式中，所述干扰仪的机型为台式小型机，其内置变压器，电源为220v/1a交流电，采用皮肤接触型换能器或者定向辐射型换成器；所述定向辐射型换能器为喇叭式换能器。
56.与现有技术相比，根据本发明的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其能够在特定的交变电场频率和强度下，对人乳腺癌细胞增殖进行高效的抑制。
57.本发明外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，提供了一套完整电路设计包含了交变电场和光量子辐射的不同频率和强度的输出，能够满足不同的干扰理疗需求；使用特定的150khz、2v/cm的交变电场具有对人乳腺癌细胞最佳的干扰效果，能够高效抑制其增值，并且对人体正常组织无害，因而具有极佳的干扰效果；光量子辐射能够对特定的人乳腺癌细胞进行高效干扰，有效杀死人乳腺癌细胞，与交变电场复合达到最佳的理疗效果，光电量子流能够改善促进健康细胞的代谢更新；干扰仪机型小巧便携，便于使用；干扰仪电路紧凑，能效高，能够有效降低能耗。
附图说明
58.图1是根据本发明一实施方式的外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪的电路结构示意图；
59.图2是根据本发明一实施方式的噻唑蓝染色法检测150khz频率下mcf-7 细胞系增殖能力结果统计图；
60.图3是根据本发明一实施方式的噻唑蓝染色法检测150khz频率下 mda-mb-231细胞系增殖能力结果统计图；
61.图4是根据本发明一实施方式的噻唑蓝染色法检测120khz和200khz频率下mcf-7和mda-mb-231细胞系增殖能力结果统计图；
62.图5是根据本发明一实施方式的结晶紫染色法检测150khz频率下mcf-7 细胞系增殖能力结果统计图；
63.图6是根据本发明一实施方式的结晶紫染色法检测120khz频率和 200khz频率下mcf-7、mda-mb-231细胞系增殖能力结果统计图；
64.图7是根据本发明一实施方式的结晶紫染色法检测150khz频率下 200-250ma电流强度对细胞增殖能力作用结果统计图；
65.图8是根据本发明一实施方式的结晶紫染色法检测150khz频率下 180-220ma电流强度对细胞增殖能力作用结果统计图；
66.图9是根据本发明一实施方式的结晶紫染色法检测150khz频率下 90-110ma电流强度对细胞增殖能力作用结果统计图；
67.图10是根据本发明一实施方式的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法的流程示意图。
具体实施方式
68.下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
69.除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
70.如图1所示，根据本发明优选实施方式的如图1所示，实现上述目的，本发明提供了一种外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，所述干扰仪的内部电路包括：电子震荡电路101，所述电子震荡电路101输出145-155khz的震荡波信号；震荡波整理定型电路102，震荡波整理定型电路102的输入端与电子震荡电路101连接；震荡波整理定型电路102输出经过波型选择的震荡波；初级放大电路103，初级放大电路103与震荡波整理定型电路102的输出端连接；初级放大电路103将震荡波峰峰值电压放大10倍；阻抗转换电路104，阻抗转换电路104的输入端与初级放大电路103的输出端连接；阻抗转换电路104用于减小辐射和功率损耗；功率选择电路105，功率选择电路105的输入端与阻抗转换电路104的输出端连接；功率选择电路105调整输出电压以控制电场强度；推挽式功率放大电路106，推挽式功率放大电路106的输入端与功率选择电路105的输出端连接；推挽式功率放大电路106的震荡波输出峰峰值电压是输入峰峰值电压的20倍；物理换能器108，物理换能器108的输入端与推挽式功率放大电路106的输出端连接，物理换能器108向外输出交变电场和光量子流；复合电源109，复合电源109分为一级供电电路和二级供电电路；一级供电电路分别与电子震荡电路101、震荡波整理定型电路102、初级放大电路103、阻抗转换电路104供电连接；二级供电电路分别与功率选择电路105、推挽式功率放大电路106供电连接；二级供电电路的供电电压为一级供电电路电压的2倍。
71.在一优选的实施方式中，所述物理换能器输出的光量子流是15.5～98thz 的光量子辐射。本发明的复合频谱光电量子理疗仪的光量子辐射频率在远红外理疗功能范围内，光谱峰值集中在8-11μm，全法向发射率为0.88，辐射效率符合国家安全标准，对人体正常组
织无害。
72.在一优选的实施方式中，所述物理换能器输出的交变电场为150khz、强度为1.6-2.5v/cm的交变电场。本发明的交变电场输出频率和强度，在试验中证明能够高效抑制人乳腺癌细胞的增值，具有极佳的抑制效果。
73.在一优选的实施方式中，所述交变电场强度为1.6v/cm、1.8v/cm、2v/cm 或2.5v/cm。
74.在一优选的实施方式中，所述光量子辐射的频率为15.5thz、28thz、 47.5thz、76thz或98thz。
75.在一优选的实施方式中，所述物理换能器包括皮肤接触型换能器和定向辐射型换能器；皮肤接触型换能器包括平面式换能器、穿戴式换能器、绑带式换能器，皮肤接触型换能器是直接接触皮肤，通过穿戴、绑扎、粘贴等形式附着在皮肤上；定向辐射型换能器包括喇叭式换能器、阵列式换能器，定向辐射型换能器固定在人体外的支架上，朝向病患部位进行交变电场和光量子流的处理。
76.在一优选的实施方式中，所述在推挽式功率放大电路中，其输入端信号为正弦波信号，其工作状态为两只三极管各负责正负半周的波形放大任务的的乙类工作状态。这样能够起到电路导通损耗小，提高功率放大效率的作用。
77.在一优选的实施方式中，所述阻抗转换电路为单节阻抗变换电路。能够减少辐射和信号衰减。
78.在一优选的实施方式中，所述干扰仪的机型为便携式随身机，复合电源为可充电的电池组电源，交变电场的强度可调节，采用所述皮肤接触型换能器；所述皮肤接触型换能器为贴片形式的平面式换能器。便携式机身小重量轻，能够方便携带和移动，满足病患的出行理疗需求。
79.在一优选的实施方式中，所述干扰仪的机型为台式小型机，其内置变压器，电源为220v交流电，采用皮肤接触型换能器或者定向辐射型换成器；所述定向辐射型换能器为喇叭式换能器。便于在全屏蔽特殊环境下对肿瘤细胞全身转移患者进行理疗。
80.本发明的实施例同时提供了一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法。该方法采用的材料、试剂及设备如下：
81.材料与试剂：人乳腺癌细胞系mcf-7、mda-mb-231细胞系，由天津医科大学肿瘤医院公共实验室提供，上述细胞系按照实验所需生长条件进行培养。rpmi1640培养基、dmem-basic培养基、胎牛血清均购自美国gibco 公司；mtt购自北京索莱宝生物科技有限公司。
82.细胞培养液的配制：将50ml的fbs导入盛有450ml的rpmi1640或 dmem-basic的完全培养液中，混匀后加入5ml的双抗(100u/ml青霉素和 100u/ml链霉素)，配置成含10％fbs和1％双抗的细胞培养液。
83.mtt溶液(5mg/ml)：用电子天平准确称取mtt粉末250mg，先用适量的无菌双蒸水进行溶解，然后在用无菌双蒸水定容至50ml，配置成5mg/ml 的mtt溶液，然后应用0.22μm的滤器进行过滤，将其分装在ep管中，置于-20℃冰箱避光保存备用。在配制mtt溶液的过程中注意避光操作。
84.设备：实验采用甘华健康科技服务(北京)有限公司研发的外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，电场干涉强度为2v/cm，电场频率分别为120khz、 150khz、200khz，干扰仪工作
电流可调整。
85.本实施例外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，具体操作步骤为：
86.(一)细胞复苏：将冻存的人乳腺癌细胞解冻后制得细胞悬液，再放置于细胞培养箱中培养；具体为：
87.解冻：是将冻存的人乳腺癌细胞从液氮中取出，并迅速置于预先打开的 37℃水浴锅中，并不断摇晃冻存管，使细胞冻存液迅速融化；
88.离心：再将解冻后的人乳腺癌细胞冻存管用酒精消毒后迅速转移到超净台中，并将细胞悬液加入到盛有6ml10％fbs的rpmi1640或dmem-basic 培养基的15ml离心管中，用吸管轻轻吹打使之混合均匀；然后将离心管放入离心机，配平后以室温1000rpm的转速离心3-4分钟；
89.制细胞悬液：取出离心管消毒后，放入超净台后用吸管吸取去除上清液，再用吸管吸取3ml细胞培养液反复轻轻吹打离心管中细胞成细胞悬液；
90.细胞培养：将细胞悬液转移至10cm直径的细胞培养皿中，并补充6ml 含有10％fbs的完全培养液，将培养皿置于37℃、co2浓度为5％的细胞培养箱中培养。
91.(二)细胞传代及冻存：取生长状态良好的人乳腺癌细胞进行传代培养；选择生长状态良好的处于对数生长期的人乳腺癌细胞进行细胞冻存以保存细胞系；具体操作为：
92.细胞传代的步骤为：
93.培养：先用酒精将倒置显微镜擦拭干净，然后将从细胞培养箱取出的细胞置于倒置显微镜下进行观察，待生长状态良好的细胞生长至占比75-85％时，进行细胞的传代处理；
94.传代处理：将要传代的细胞置于超净台中，用吸管吸去旧培养液，沿细胞培养皿的侧壁轻轻加入3ml生理盐水，轻微上下颠倒培养皿使其充分冲洗残留的细胞培养液，然后用吸管将生理盐水吸出；再向培养皿中滴加1-2滴胰酶，上下颠倒培养皿，使胰酶充分覆盖细胞表面；在倒置显微镜下观察细胞的状态，当细胞间隙增大时，及时加入适量含有10％fbs的培养液终止消化过程；然后用吸管轻轻反复吹打细胞，使细胞吹打成细胞悬液，然后用吸管将细胞悬液吸入15ml离心管内，室温1000rpm条件下离心4分钟；取出离心管，弃去上清液，加入适量细胞培养液，轻轻吹打混合均匀；然后将其吹打均匀的细胞悬液转移至3个盛有6ml含10％fbs细胞培养液的培养皿中，继续置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中培养，完成细胞传代；
95.细胞冻存的操作为：将上步细胞传代处理中离心后的离心管中，弃去上清液，加入适量的细胞冻存液，用吸管轻轻吹打混合均匀，并将其转移至细胞冻存管中，每支细胞冻存管加入1.5ml细胞悬液，用记号笔标记细胞名称，冻存日期信息；将细胞冻存管先放入细胞冻存盒，再将其置入-80℃冰箱，隔天将细胞冻存管置入液氮中长期保存。
96.(三)细胞铺板及电场抑制：取生长状态良好、处于对数期的人乳腺癌细胞接种于培养板中，将培养板外加预设的频率为150khz、强度为2v/cm的电场，放置于细胞培养箱中进行培养。
97.铺板方法一：取生长状态良好，处于对数期的人乳腺癌细胞细胞，用胰酶消化后，进行细胞计数后接种于细胞96孔培养板中，每个孔的细胞接种量控制在4000-5000个，每个孔加入细胞培养液200μl，每个孔设置3到5个孔作为复孔；然后将实验组96孔培养板置于预
设参数的电场中，再将实验组和对照组细胞的96孔培养板统一置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养。
98.铺板方法二：取生长状态良好，处于对数期的人乳腺癌细胞细胞，用胰酶消化后，进行细胞计数后接种于细胞96孔培养板中，每孔细胞为300、500 和800三个密度梯度，每个孔加入细胞培养液2ml，按照“十”字方向晃动培养板促使细胞均匀分散；每个孔设置3孔作为复孔；然后将实验组96孔培养板置于预设参数的电场中，再将实验组和对照组细胞的96孔培养板统一置于 37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养。
99.(四)抑制效果检测：采用噻唑蓝染色法或结晶紫染色法检测细胞抑制效果。
100.铺板方法一培养的细胞采用噻唑蓝染色法(mtt法)检测的步骤为：
101.在细胞超净台的灯光关闭条件下，于第二天、第三天、第四天、第五天分别向对应的实验组和对照组的96孔培养板中的200μl培养液中加入20μl 噻唑蓝mtt溶液，然后将加入噻唑蓝mtt溶液的96孔培养板继续放入置于 37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养孵育4小时；孵育结束后，将96 细胞培养板置于离心机，4000rpm转速离心5分钟；用微量移液器轻轻吸去上清液，轻柔吸取避免吸走结晶；再向96细胞培养板的孔中加入150μl的dmso 溶液，置于振荡器上震荡10分钟，从而使孔内的结晶充分溶解；使用酶标仪选择570nm的波长，测定每孔的吸光值，通过吸光值的大小判断细胞的增殖活性，吸光值越大，增殖活性越大；将第二天至第五天测得的数据，输入excel 表，通过计算平均数和标准差来进行曲线的绘制，进行结果分析。
102.上述采用噻唑蓝染色法(mtt法)取得的试验结果为图2至图4所示：图2是噻唑蓝染色法检测150khz频率下mcf-7细胞系增殖能力结果统计图；由图2可知，实验组较对照组降低，在电场停留60h时抑制作用明显，差异有统计学意义(p《0.05)。
103.图3是噻唑蓝染色法检测150khz频率下mda-mb-231细胞系增殖能力结果统计图；由图3可知，实验组细胞系增殖能力较对照组降低，在电场停留72h时抑制作用明显，差异有统计学意义(p《0.05)。
104.图4是噻唑蓝染色法检测120khz和200khz频率下mcf-7和 mda-mb-231细胞系增殖能力结果统计图；由图4可知，实验组细胞系增殖能力较对照组无明显差异。
105.因此，由图2至图4可知，电场频率在150khz频率下的人乳腺癌细胞的抑制作用最显著。
106.图5是根据本发明一实施方式的结晶紫染色法检测150khz频率下mcf-7 细胞系增殖能力结果统计图；mcf-7细胞系实验组较对照组的增殖能力降低，差异有统计学意义(p《0.05)。
107.图6是根据本发明一实施方式的结晶紫染色法检测120khz频率和200khz频率下mcf-7、mda-mb-231细胞系增殖能力结果统计图；细胞系实验组和对照组的增殖能力无明显差异。进一步说明电场频率在150khz频率下的人乳腺癌细胞的抑制作用最显著。
108.图7至图9验证电流大小对于人乳腺癌细胞的抑制作用的比较：
109.图7是结晶紫染色法检测150khz频率下200-250ma电流强度对细胞增殖能力作用结果统计图；
110.图8是结晶紫染色法检测150khz频率下180-220ma电流强度对细胞增殖能力作用结果统计图；
111.图9结晶紫染色法检测150khz频率下90-110ma电流强度对细胞增殖能力作用结果统计图。
112.由图7至图9可知，在150khz频率下在不同电流对乳腺癌细胞增殖作用有差异，平板克隆实验(即结晶紫染色法检测)提示在180-220ma电流下 mcf-7、mda-mb-231细胞系增殖能力降低最明显，差异有统计学意义(p《0.05)。
113.因此，由图2至图9的试验结果表明，外电场对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用，频率为150khz，电场强度为2v/cm，工作电流为180-220ma，干涉时间为60h的细胞外电场干涉可以有效抑制人乳腺癌细胞的增殖。
114.前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。