一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法及干扰仪与流程

技术特征：
1.一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述方法的步骤包括：细胞复苏：将冻存的人乳腺癌细胞解冻后制得细胞悬液，再放置于细胞培养箱中培养；细胞传代及冻存：取生长状态良好的人乳腺癌细胞进行传代培养；选择生长状态良好的处于对数生长期的人乳腺癌细胞进行细胞冻存以保存细胞系；细胞铺板及电场抑制：取生长状态良好、处于对数期的人乳腺癌细胞接种于培养板中，将培养板外加预设的频率为145-155khz、强度为2v/cm的电场，放置于细胞培养箱中进行培养；抑制效果检测：采用噻唑蓝染色法或结晶紫染色法检测细胞抑制效果。2.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞铺板及电场抑制步骤中的电场是频率为150khz的交变电场。3.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞复苏的操作步骤为：解冻：是将冻存的人乳腺癌细胞从液氮中取出，并迅速置于预先打开的37℃水浴锅中，并不断摇晃冻存管，使细胞冻存液迅速融化；离心：再将解冻后的人乳腺癌细胞冻存管用酒精消毒后迅速转移到超净台中，并将细胞悬液加入到盛有6ml 10％fbs的rpmi 1640或dmem-basic培养基的15ml离心管中，用吸管轻轻吹打使之混合均匀；然后将离心管放入离心机，配平后以室温1000rpm的转速离心3-4分钟；制细胞悬液：取出离心管消毒后，放入超净台后用吸管吸取去除上清液，再用吸管吸取3ml细胞培养液反复轻轻吹打离心管中细胞成细胞悬液；细胞培养：将细胞悬液转移至10cm直径的细胞培养皿中，并补充6ml含有10％fbs的完全培养液，将培养皿置于37℃、co2浓度为5％的细胞培养箱中培养。4.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞传代及冻存中，细胞传代的步骤为：培养：先用酒精将倒置显微镜擦拭干净，然后将从细胞培养箱取出的细胞置于倒置显微镜下进行观察，待生长状态良好的细胞生长至占比75-85％时，进行细胞的传代处理；传代处理：将要传代的细胞置于超净台中，用吸管吸去旧培养液，沿细胞培养皿的侧壁轻轻加入3ml生理盐水，轻微上下颠倒培养皿使其充分冲洗残留的细胞培养液，然后用吸管将生理盐水吸出；再向培养皿中滴加1-2滴胰酶，上下颠倒培养皿，使胰酶充分覆盖细胞表面；在倒置显微镜下观察细胞的状态，当细胞间隙增大时，及时加入适量含有10％fbs的培养液终止消化过程；然后用吸管轻轻反复吹打细胞，使细胞吹打成细胞悬液，然后用吸管将细胞悬液吸入15ml离心管内，室温1000rpm条件下离心4分钟；取出离心管，弃去上清液，加入适量细胞培养液，轻轻吹打混合均匀；然后将其吹打均匀的细胞悬液转移至3个盛有6ml含10％fbs细胞培养液的培养皿中，继续置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中培养，完成细胞传代；细胞冻存的操作为：将上步细胞传代处理中离心后的离心管中，弃去上清液，加入适量的细胞冻存液，用吸管轻轻吹打混合均匀，并将其转移至细胞冻存管中，每支细胞冻存管加入1.5ml细胞悬液，用记号笔标记细胞名称，冻存日期信息；将细胞冻存管先放入细胞冻存盒，再将其置入-80℃冰箱，隔天将细胞冻存管置入液氮中长期保存。
5.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述细胞铺板及电场抑制步骤的操作为：取生长状态良好，处于对数期的人乳腺癌细胞细胞，用胰酶消化后，进行细胞计数后接种于细胞96孔培养板中，每个孔的细胞接种量控制在4000-5000个，每个孔加入细胞培养液200μl，每个孔设置3到5个孔作为复孔；然后将实验组96孔培养板置于预设参数的电场中，再将实验组和对照组细胞的96孔培养板统一置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养。6.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述所述细胞铺板及电场抑制步骤的操作为：取生长状态良好，处于对数期的人乳腺癌细胞细胞，用胰酶消化后，进行细胞计数后接种于细胞96孔培养板中，每孔细胞为300、500和800三个密度梯度，每个孔加入细胞培养液2ml，按照“十”字方向晃动培养板促使细胞均匀分散；每个孔设置3孔作为复孔；然后将实验组96孔培养板置于预设参数的电场中，再将实验组和对照组细胞的96孔培养板统一置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养。7.如权利要求1所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，其特征在于，所述抑制效果检测的操作为：噻唑蓝染色法的步骤为：在细胞超净台的灯光关闭条件下，于第二天、第三天、第四天、第五天分别向对应的实验组和对照组的96孔培养板中的200μl培养液中加入20μl噻唑蓝mtt溶液，然后将加入噻唑蓝mtt溶液的96孔培养板继续放入置于37℃、co2浓度为5％细胞培养箱中进行培养孵育4小时；孵育结束后，将96细胞培养板置于离心机，4000rpm转速离心5分钟；用微量移液器轻轻吸去上清液，轻柔吸取避免吸走结晶；再向96细胞培养板的孔中加入150μl的dmso溶液，置于振荡器上震荡10分钟，从而使孔内的结晶充分溶解；使用酶标仪选择570nm的波长，测定每孔的吸光值，通过吸光值的大小判断细胞的增殖活性，吸光值越大，增殖活性越大；将第二天至第五天测得的数据，输入excel表，通过计算平均数和标准差来进行曲线的绘制，进行结果分析；结晶紫染色法的步骤为：将96孔培养板置于培养箱中孵育10-14天，每1-2天观察细胞增殖状态，并换液；观察细胞生长至肉眼可见的细胞克隆团时，即终止培养，弃去培养液，用pbs溶液清洗2-3遍，每孔加入4％多聚甲醛2ml，室温固定30min，弃去固定液，然后每孔加入结晶紫染色液2ml，室温染色15-20min，弃去染色液，再用pbs洗去染色液，置于室温晾干后拍照并进行统计分析。8.一种外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，其特征在于，所述所述干扰仪的内部电路包括：电子震荡电路：所述电子震荡电路输出145-155khz的震荡波；震荡波整理定型电路：震荡波整理定型电路的输入端与电子震荡电路连接；震荡波整
理定型电路输出经过波型选择的震荡波；初级放大电路：初级放大电路与震荡波整理定型电路的输出端连接；初级放大电路将震荡波信号放大10倍；阻抗转换电路：阻抗转换电路的输入端与初级放大电路的输出端连接；阻抗转换电路用于减小辐射和功率损耗；功率选择电路：功率选择电路的输入端与阻抗转换电路的输出端连接；功率选择电路调整输出电压以控制电场强度；推挽式功率放大电路：推挽式功率放大电路的输入端与功率选择电路的输出端连接；推挽式功率放大电路的震荡波输出峰峰值电压是输入峰峰值电压的20倍；物理换能器：物理换能器的输入端与推挽式功率放大电路的输出端连接；物理换能器向外输出交变电场和光量子流；复合电源：复合电源分为一级供电电路和二级供电电路；一级供电电路分别与电子震荡电路、震荡波整理定型电路、初级放大电路、阻抗转换电路供电连接；二级供电电路分别与功率选择电路、推挽式功率放大电路供电连接；二级供电电路的供电电压为一级供电电路电压的2倍；所述物理换能器输出的光量子流是15.5～98thz的光量子辐射，所述物理换能器输出的交变电场为150khz、强度为1.6-2.5v/cm的交变电场；所述物理换能器包括皮肤接触型换能器和定向辐射型换能器；皮肤接触型换能器包括平面式换能器、穿戴式换能器、绑带式换能器；定向辐射型换能器包括喇叭式换能器、阵列式换能器。9.如权利要求8所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，其特征在于，所述交变电场强度为1.6v/cm、1.8v/cm、2v/cm或2.5v/cm；所述光量子辐射的频率为15.5thz、28thz、47.5thz、76thz或98thz；所述在推挽式功率放大电路中，其输入端信号为正弦波信号，其工作状态为两只三极管各负责正负半周波形放大任务的乙类工作状态；所述阻抗转换电路为单节阻抗变换电路；所述干扰仪的机型为便携式随身机，复合电源为可充电的电池组电源，交变电场的强度可调节，采用所述皮肤接触型换能器；所述皮肤接触型换能器为贴片形式的平面式换能器。10.如权利要求8所述的外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，其特征在于，所述干扰仪的机型为台式小型机，其内置变压器，电源为220v交流电，采用皮肤接触型换能器或者定向辐射型换成器；所述定向辐射型换能器为喇叭式换能器。

技术总结
本发明公开了一种外电场抑制人乳腺癌细胞的方法，所述方法的步骤包括：细胞复苏；细胞传代及冻存；细胞铺板及电场抑制；抑制效果检测：采用噻唑蓝染色法或结晶紫染色法检测细胞抑制效果。本发明同时公开了一种外电场抑制人乳腺癌细胞的干扰仪，所述干扰仪的内部电路包括：电子震荡电路；震荡波整理定型电路；初级放大电路；阻抗转换电路；功率选择电路；推挽式功率放大电路；物理换能器；复合电源。本发明的方法，其能够在特定的交变电场频率和强度下，对人乳腺癌细胞增殖进行高效的抑制。本发明的干扰仪，其能够高效抑制人乳腺癌细胞的增值，具有极佳的使用效果；采用交变电场和光量子辐射的复合手段；机型小巧便携，便于使用。便于使用。便于使用。


技术研发人员：郑和平 王幼军 索芳 贾彩珍 余岳
受保护的技术使用者：甘华健康科技服务（北京）有限公司
技术研发日：2021.12.09
技术公布日：2022/2/6