一种唑螨酯抗原及其制备方法与应用与流程

技术特征：
1.一种唑螨酯抗原，其特征在于：结构通式如式a1或a2所示，所述式a1、a2中，x为芳香环、芳香杂环化合物中的一种，n为0-6的整数，a为1-6的整数，b为0-6的整数；protein表示载体蛋白，所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。2.根据权利要求1所述的一种唑螨酯抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将式b所示的1,3-二甲基-5苯氧基-1h-吡唑-4-甲醛肟与式c1或c2所示含有酯基的化合物进行反应得到含有羧基的式d1或d2所示化合物；y-(ch2)n-coo-(ch2)m-ch3式c1结构式y-(ch2)a-x-(ch2)b-coo-(ch2)m-ch3式c2结构式
所述式c1、c2和式d1、d2中，x为芳香环、芳香杂环化合物中的一种，y为cl、br和i基团中的一种，n为0-6的整数，m为0-6的整数，a为1-6的整数，b为0-6的整数；(2)式d1或d2所示化合物和n-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应得到式e1/e2所示化合物；所述式e1、e2中，x为芳香环、芳香杂环化合物中的一种，n为0-6的整数，a为1-6的整数，b为0-6的整数；(3)式e1或e2所示化合物与载体蛋白经偶联反应即得式a1或a2所示唑螨酯抗原；所述载体蛋白选自牛血清蛋白、卵清蛋白和血蓝蛋白中至少一种。3.根据权利要求2所述的一种唑螨酯抗原的制备方法，其特征在于：所述步骤1中，式c1所示化合物选自氯甲酸甲酯、氯甲酸乙酯、氯乙酸乙酯、氯乙酸丁酯、氯丙酸甲酯、氯丁酸甲酯、氯丁酸乙酯、氯丁酸丙酯、溴乙酸甲酯、溴乙酸乙酯、溴乙酸丁酯、溴丁酸甲酯、溴丁酸乙酯、溴丁酸丁酯、碘乙酸乙酯、碘丁酸甲酯、碘丁酸乙酯中至少一种；式c2所示化合物选自对氯苯甲酸甲酯、对氯苯乙酸乙酯、邻氯苯乙酸乙酯、间氯苯乙酸乙酯、对溴苯乙酸甲酯、对溴苯乙酸乙酯、对溴苯丙酸乙酯、对溴甲基苯甲酸甲酯、对溴甲基苯甲酸乙酯、间溴甲基苯甲酸甲酯、间溴苯甲酸甲酯、间溴苯甲酸乙酯、对碘苯甲酸甲酯、对碘苯甲酸乙酯、对碘苯乙酸乙酯、邻碘苯甲酸甲酯中至少一种。4.根据权利要求2所述的一种唑螨酯抗原的制备方法，其特征在于：所述步骤1中，式c1或c2化合物和式b化合物的投料摩尔配比为0.1-10：1；反应的温度为0～100℃，时间为6～48小时；
反应的溶剂选自吡啶、n,n-二甲基甲酰胺、二甲亚砜和四氢呋喃中至少一种。5.根据权利要求2所述的一种唑螨酯抗原的制备方法，其特征在于：所述步骤2中，式d1或d2所示化合物、n-羟基琥珀酰亚胺与二环己基碳二亚胺的摩尔份数比为1：1～5：1～5；式d1或d2所示化合物、n-羟基琥珀酰亚胺与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔份数比为1：1～5：1～5；所述偶联反应的温度为0～50℃，时间为4～24小时。6.根据权利要求2所述的一种唑螨酯抗原的制备方法，其特征在于：所述步骤3中，式e1或e2所示化合物与所述载体蛋白的摩尔份数比为5～30：1；所述偶联反应的温度为0～50℃，时间为8～36小时；所述偶联反应在ph值为5～9的条件下进行；式e1或e2所示化合物在所述载体蛋白的溶液中进行偶联反应，所述载体蛋白的溶液是由所述载体蛋白加入至缓冲溶液中得到的，所述缓冲溶液选自碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中至少一种，所述缓冲液的ph值均为7.4。7.根据权利要求2所述的一种唑螨酯抗原的制备方法，其特征在于：步骤3之后，所述方法还包括将所述偶联反应的反应体系进行透析的步骤；所述透析步骤中，所用透析液为ph值为4～10、浓度为0.01～0.2mol/l的磷酸盐缓冲溶液。8.根据权利要求2所述的一种唑螨酯抗原的制备方法，其特征在于：所述唑螨酯抗原是式e1或e2化合物与载体蛋白通过酰胺键连接形成的偶联物；所述酰胺键是式d1或d2上的羧基通过活泼酯与载体蛋白上的氨基形成的。9.根据权利要求1所述的唑螨酯抗原的应用，其特征在于，用于制备检测样品中唑螨酯的酶联免疫试剂盒、唑螨酯的发光免疫试剂盒或免疫亲和色谱柱。

技术总结
本发明公开了一种唑螨酯抗原及其制备方法与应用，包括：将1,3-二甲基-5苯氧基-1H-吡唑-4-甲醛肟与含有酯基的化合物进行反应得到含有羧基的化合物；再和N-羟基琥珀酰亚胺在二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐存在的条件下进行偶联反应；再与载体蛋白经偶联反应得唑螨酯抗原；唑螨酯抗原在制备用于检测样品中唑螨酯的酶联免疫试剂盒、唑螨酯的发光免疫试剂盒或免疫亲和色谱柱中的应用。本发明的优点在于：能够方便、快捷地获得唑螨酯抗原，合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。通过唑螨酯抗原进行免疫，可以得到的特异性好、灵敏度高的唑螨酯抗体。灵敏度高的唑螨酯抗体。


技术研发人员：张耀海 崔永亮 彭怡霖 金雅琪 张念 焦必宁 王成秋 李志霞 赵其阳 陈爱华 何悦 李晶 赵希娟
受保护的技术使用者：西南大学
技术研发日：2021.11.17
技术公布日：2022/1/28