一种阿基瑞林的中间体组合物及其制备方法与应用与流程

1.本技术涉及一种阿基瑞林的中间体组合物及其制备方法与应用，属于多肽合成技术领域。


背景技术：

2.目前阿基瑞林的固相合成方法公开报道的有以下几种方法：
3.方法一：在cn106749529a中，技术路线图如1所示，此路线简洁方便、树脂价格便宜，固相和液相结合的方法新颖，但上样量比传统am树脂少，并且ctc树脂存在着对温度敏感、容易掉肽的问题，对合成效率和收率造成影响，且需要进行两次切割，气味大，容易污染环境。固相固有的上载量小、氨基酸投入需要过量、需大量溶剂洗涤且无法回收等问题也会导致生产成本较高。与此方法类似有专利cn110684077和cn111620928。所不同的是，专利cn110684077采用ctc树脂全保护切割后沉淀过滤烘干，生成osu活化酯，反应6-8小时后加入氨水生成酰胺，过柱纯化后再切割脱保护纯化得到产品。专利cn111620928也是采用ctc树脂全保护切割后沉淀过滤烘干，液相法合成全保护酰胺，用2,4-二甲氧基苄胺进行二次酰胺化反应除去少量未反应完全的保护肽羧酸，最后脱保护纯化得到产品，与cn110684077比，后处理结晶工艺优化，原料杂质少，纯化压力小。这两个专利中样品载样量大，树脂便宜，酰胺化反应方便，切割方案温和无气味，但是也存在着多次切割沉淀的问题，arg羧基端活化效率难以保证，酰胺化反应收率不高，全保护肽羧酸和全保护酰胺分子量接近，出峰时间也近，给纯化带来困难，不利于工业化生产。
4.方法二：在cn103694316b中，技术路线图如2所示，此路线简洁方便，但此方法放大生产对设备要求高，废液量大，生产成本都需要2-3倍量，原料经济性差。ac-glu(o
t
bu)-oh价格昂贵，此氨基酸为非氧碳基类保护基，存在很大的消旋风险，此外成本问题值得考虑，大生产不合适。与此类似的方法有专利cn106632609，该专利采用fmoc-arg(pbf)-arg(pbf)-oh片段与rink am树脂连接，但是fmoc-arg(pbf)-arg(pbf)-oh片段在多肽合成中属于困难序列，并且原料液相合成难度大，纯度不能保证，不适用于大规模生产。
5.目前阿基瑞林的液相合成方法公开报道的有一种方法：在专利cn103613642b中，技术路线如图3所示，相对固相合成法，片段液相合成法比较适合放大规模化生产，原料浪费少，但是此路线中，采用了活性酯osu的方法，此方法在合成多肽上存在多个不确定风险，消旋是其中最大的风险，还有中间体储存问题，中间体原料降解或者未反应完的原料导致中间体不干净的副产物等，在上述的osu酯中，均不是氧羰基保护的氨基酸，消旋杂质无法进行有效控制。并且，在各个步骤中所形成的中间体中，对产品的溶解性都存在很大的问题，不适合放大生产。在需要合成的多个活性中间体中，如acosu，ac-glu(o
t
bu)-osu，ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-osu，fmoc-gln(trt)-osu中间体溶液活性高不容易保存；h-arg-nh2.2hcl价格高，水溶性还特别好，不利于工业化大生产。在osu的反应中，osu酯的水解是一个不可避免的副反应，工艺中产生的中间体降解杂质特别多，很难获得干净的产品。


技术实现要素：

6.根据本技术的一个方面，提供一种阿基瑞林的中间体组合物，所述阿基瑞林的中间体组合物用于阿基瑞林的合成，可以避免使用活性酯中间体，以及避免中间体保存的稳定性问题。
7.一种阿基瑞林的中间体组合物，所述中间体组合物包括ac-glu(r1)-glu(r2)-met-oh和h-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2；
8.其中，r1、r2为glu的侧链保护基团，独立地选自glu侧链保护基团中的任一种；
9.r3为gln的侧链保护基团，选自gln侧链保护基团中的任一种；
10.r4、r5为arg的侧链保护基团，独立地选自arg侧链保护基团中的任一种。
11.可选地，所述glu侧链保护基团选自
t
bu、tbs、dpm、苄基、甲氧基苄基中的任一种；
12.所述gln侧链保护基团选自trt、tmb、dm中的任一种；
13.所述arg侧链保护基团选自pbf、pmc、mtr中的任一种；
14.可选地，所述ac-glu(r1)-glu(r2)-met-oh和所述
15.h-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2的质量比为400～800∶800～1500。
16.可选地，所述中间体组合物包括片段ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-met-oh与片段h-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2。
17.根据本技术的另一方面，提供上述任一项所述的中间体组合物的制备方法，所述h-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2的制备包括：
18.(s1)将ri-arg(r5)-oh和化合物i缩合i得到中间体i；
19.所述化合物i选自氨、铵盐中的至少一种；
20.(s2)将中间体i脱保护基团ri，和rii-arg(r4)-oh缩合ii得到中间体ii；
21.(s3)将所述中间体ii脱保护基团rii，和riii-gln(r3)-oh缩合iii得到中间体iii；
22.(s4)将中间体iii脱保护基团riii，得到所述h-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2；
23.所述ac-glu(r1)-glu(r2)-met-oh的制备包括：
24.(sa)将h-met-r
x
的酸盐和ri-glu(r2)-oh缩合i，得到中间体i；
25.(sb)将所述中间体i脱保护基团ri，和rii-glu(r1)-oh缩合ii，得到中间体ii；
26.(sc)将所述中间体ii脱保护基团rii，和乙酰化试剂缩合iii得到中间体iii；
27.(sd)将所述中间体iii脱保护基团r
x
，得到所述
28.ac-glu(r1)-glu(r2)-met-oh；
29.其中，ri、rii、riii、ri、rii为氨基酸主链氨基的保护基团，所述ri、rii、riii、ri、rii独立地选自氨基保护基团中的任一种；
30.所述r
x
为氨基酸主链羧基的保护基团，选自羧基保护基团中的任一种。
31.可选地，所述铵盐包括氯化铵；
32.所述乙酰化试剂选自醋酸酐、醋酸、乙酰氯中的至少一种；
33.所述h-met-r
x
的酸盐中的酸选自盐酸、硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸中的任一种；
34.所述氨基保护基团包括fmoc；
35.所述羧基保护基团包括ome。
36.可选地，所述h-met-r
x
的酸盐为h-met-ome.hcl。
37.可选地，采用氯化铵合成酰胺，解决了一般液相合成酰胺时直接购买昂贵的酰胺原料或者通氨气等危险操作，反应时间短，产量大，收率高，适用于规模化合成，同固相合成相比，方法更加简单，成本更低，同时对环境友好，安全可靠。
38.可选地，(s1)中，所述缩合i包括：含有溶剂i、ri-arg(r5)-oh、化合物i、缩合剂i的原料反应i；
39.可选地，所述溶剂i包括dmf；
40.所述缩合剂i选自以下任一项所述的缩合剂组合中的任一种：edci/nmm/hobt、dic/hobt、edci/hobt、dcc/hobt、diea/edci/hobt、dic/hoat、edci/hoat、dcc/hoat、dic/hoobt、edci/hoobt、dcc/hoobt、dic/oxyma、edci/oxyma、dcc/oxyma、hbtu/nmm/diea；
41.可选地，所述溶剂i、ri-arg(r5)-oh、化合物i、缩合剂i的比例为15～25l∶0.5～1.5kg∶100～200g∶800～1800g；
42.可选地，所述反应i的条件包括：反应时间为10～20h。
43.可选地，所述反应i的条件包括：反应时间为过夜。
44.可选地，所述反应i的条件包括：搅拌下反应。
45.可选地，(s2)中，所述脱保护基团ri包括：
46.含有溶剂i’、中间体i、脱保护剂i’的原料反应i’；
47.可选地，所述溶剂i’包括dcm；
48.脱保护剂i’包括哌啶；
49.可选地，所述溶剂i’、中间体i、脱保护剂i’的比例为10～30l∶500～1500g∶3～8l；
50.可选地，所述反应i’的条件包括：温度为10～40℃，反应时间为0.5～3h。
51.可选地，所述反应i’的条件包括：温度为室温。
52.可选地，(s2)中，所述缩合ii包括：
53.含有脱保护基团ri后的产物、溶剂ii、rii-arg(r4)-oh、缩合剂ii的原料反应ii；
54.可选地，所述溶剂ii包括dcm；
55.所述缩合剂ii选自以下任一项所述的缩合剂组合中的任一种：dic/hobt、edci/hobt、dcc/hobt、diea/edci/hobt、dic/hoat、edci/hoat、dcc/hoat、dic/hoobt、edci/hoobt、dcc/hoobt、dic/oxyma、edci/oxyma、dcc/oxyma、hbtu/nmm/diea；
56.可选地，所述中间体i、溶剂ii、所述rii-arg(r4)-oh、和所述缩合剂ii的比例为800～1200g∶10～30l∶800～1200g∶500～1000g；
57.可选地，所述反应ii的条件包括：反应时间为10～20h。
58.可选地，所述反应ii的条件包括：反应时间为过夜，反应温度为室温。
59.可选地，所述反应ii的条件包括：搅拌下反应。
60.可选地，(s3)中，所述脱保护基团rii包括：
61.含有溶剂ii’、中间体ii、脱保护剂ii’的原料反应ii’；
62.可选地，所述溶剂ii’包括dcm、；
63.脱保护剂ii’包括哌啶；
64.可选地，所述溶剂ii’、中间体ii、脱保护剂ii’的比例为10～30l∶1000～1800g∶3～8l；
65.可选地，所述反应ii’的条件包括：温度为10～40℃，反应时间为0.5～3h。
66.可选地，所述反应ii’的条件包括：温度为室温。
67.可选地，(s3)中，所述缩合iii包括：
68.含有脱保护基团rii后的产物、溶剂iii、riii-gln(r3)-oh、缩合剂iii的原料反应iii；
69.可选地，所述溶剂iii包括dcm；
70.所述缩合剂iii选自以下任一项所述的缩合剂组合中的任一种：dic/hobt、edci/hobt、dcc/hobt、diea/edci/hobt、dic/hoat、edci/hoat、dcc/hoat、dic/hoobt、edci/hoobt、dcc/hoobt、dic/oxyma、edci/oxyma、dcc/oxyma、hbtu/nmm/diea；
71.可选地，所述中间体ii、溶剂iii、所述riii-gln(r3)-oh和所述缩合剂iii的比例为1000～1500g∶10～30l∶500～1000g∶500～1000g；
72.可选地，所述反应iii的条件包括：反应时间为10～20h。
73.可选地，所述反应iii的条件包括：反应时间为过夜。
74.可选地，所述反应iii的条件包括：搅拌下反应。
75.可选地，(s4)中，所述脱保护基团iii包括：
76.含有溶剂iii’、中间体iii、脱保护剂iii’的原料反应iii’；
77.可选地，所述溶剂iii’包括dcm；
78.脱保护剂iii’包括哌啶；
79.可选地，所述溶剂iii’、中间体iii、脱保护剂iii’的比例为10～30l∶1000～1800g∶3～8l；
80.可选地，所述反应iii’的条件包括：反应时间为0.5～3h。
81.可选地，(sa)中，所述缩合i包括：
82.含有溶剂i、ri-glu(r2)-oh、h-met-r
x
的酸盐、缩合剂i的原料反应i；
83.可选地，所述溶剂i包括dmf、dcm中的至少一种；
84.所述缩合剂i选自以下任一项所述的缩合剂组合中的任一种：dic/hobt、diea/edci/hobt、edci/hobt、dcc/hobt、diea/edci/hobt、dic/hoat、edci/hoat、dcc/hoat、dic/hoobt、edci/hoobt、dcc/hoobt、dic/oxyma、edci/oxyma、dcc/oxyma、hbtu/nmm/diea；
85.可选地，所述溶剂i、ri-glu(r2)-oh、h-met-r
x
的酸盐、缩合剂i的比例为15～25l∶0.5～1.5kg∶200～600g∶1000～2000g；
86.可选地，所述反应i的条件包括：反应温度为-4～20℃；
87.可选地，所述反应i的条件包括：搅拌下反应。
88.可选地，所述反应i的条件包括：反应时间为过夜。
89.可选地，(sb)中，所述脱保护基团ri包括：
90.含有溶剂i’、中间体i、脱保护剂i’的原料反应i’；
91.可选地，所述溶剂i’包括thf；
92.脱保护剂i’包括碱类物质中的至少一种；
93.可选地，所述碱类物质选自有机碱、无机碱中的至少一种；
94.可选地，所述有机碱为乙二胺；
95.可选地，所述溶剂i’、中间体i、脱保护剂i’的比例为10～30l∶500～1500g∶3～8l；
96.可选地，所述反应i’的条件包括：温度为10～40℃，反应时间为3～7h。
97.可选地，所述反应i’的条件包括：温度为室温。
98.可选地，(sb)中，所述缩合ii包括：
99.含有脱保护基团ri后的产物、溶剂ii、rii-glu(r1)-oh、缩合剂ii的原料反应ii；
100.可选地，所述溶剂ii包括dmf；
101.所述缩合剂ii选自以下任一项所述的缩合剂组合中的任一种dic/hobt、edci/hobt、dcc/hobt、diea/edci/hobt、dic/hoat、edci/hoat、dcc/hoat、dic/hoobt、edci/hoobt、dcc/hoobt、dic/oxyma、edci/oxyma、dcc/oxyma、hbtu/nmm/diea；
102.可选地，所述中间体i、溶剂ii、所述rii-glu(r1)-oh、和所述缩合剂ii的比例为1000～1500g∶15～30l∶800～1200g∶500～1000g；
103.可选地，所述反应ii的条件包括：反应时间为10～20h；
104.可选地，所述反应ii的条件包括：搅拌下反应。
105.可选地，所述反应ii的条件包括：反应时间为过夜；
106.可选地，(sc)中，所述脱保护基团rii包括：
107.含有溶剂ii’、中间体ii、脱保护剂ii’的原料反应ii’；
108.可选地，所述溶剂ii’包括dcm；
109.脱保护剂ii’包括哌啶；
110.可选地，所述溶剂ii’、中间体ii、脱保护剂ii’的比例为10～30l∶1500～2000g∶3～8l；
111.可选地，所述反应ii’的条件包括：温度为10～40℃，反应时间为0.1～2h。
112.可选地，(sc)中，所述缩合iii包括：
113.含脱保护基团rii后的产物、溶剂iii、乙酰化试剂、缩合剂iii的原料反应iii；
114.可选地，所述溶剂iii包括dcm；
115.可选地，所述缩合剂iii包括nmm；
116.可选地，所述中间体ii、溶剂iii、乙酰化试剂和所述缩合剂iii的比例为1500～2000g∶10～30l∶300～600g∶300～600g；
117.可选地，所述反应iii的条件包括：反应时间为0.1～2h；
118.可选地，所述反应iii的条件包括：搅拌下反应。
119.可选地，(sd)中，所述脱保护基团r
x
包括：
120.含有溶剂iii’、中间体iii、脱保护剂iii’的原料反应iii’；
121.可选地，所述溶剂iii’包括thf、甲醇中的至少一种；
122.脱保护剂iii’包括无机碱溶液中的至少一种；
123.可选地，所述无机碱溶液的浓度为1～10wt％；
124.可选地，所述无机碱溶液中的无机碱包括氢氧化钠；
125.可选地，所述溶剂iii’、中间体iii、脱保护剂iii’的比例为5～30l∶800～1500g∶1～5l；
126.可选地，所述反应iii’的条件包括：温度为10～40℃，反应时间为1～4h。
127.可选地，所述反应v的条件包括：反应时间为10～20h。
128.根据本技术的另一个方面，提供上述任一项所述的阿基瑞林的中间体组合物或根据上述任一项所述的制备方法制备得到的阿基瑞林的中间体组合物中的至少一种在制备
阿基瑞林中的应用。
129.根据本技术的另一个方面，提供一种阿基瑞林的制备方法，所述制备方法包括：含有阿基瑞林的中间体组合物的原料缩合iv，得到ac-glu(r1)-glu(r2)-met-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2，切割保护基团r1、r2、r3、r4和r5，得到所述阿基瑞林；
130.所述阿基瑞林的中间体组合物选自上述任一项所述的阿基瑞林的中间体组合物或根据上述任一项所述的制备方法制备得到的阿基瑞林的中间体组合物中的至少一种。
131.可选地，所述缩合iv包括：
132.含有阿基瑞林的中间体组合物、溶剂iv、缩合剂iv的原料反应iv；
133.可选地，所述溶剂iv包括dmf；
134.所述缩合剂iv包括hobt、nmm、edci中的至少一种；
135.可选地，所述缩合剂iv包括hobt、nmm和edci；
136.可选地，所述hobt、nmm和edci的质量比为200～300∶200～300∶200～300；
137.可选地，所述溶剂iv、所述阿基瑞林的中间体组合物、和所述缩合剂iv的比例为10～30l∶1200～2500g∶500～900g；
138.可选地，所述反应iv的条件包括：反应时间为10～20h；
139.可选地，所述反应iv的条件包括：搅拌下反应。
140.可选地，所述反应iv的条件包括：反应时间为过夜。
141.可选地，所述切割包括：含有ac-glu(r1)-glu(r2)-met-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2和切割液的原料反应v，得到所述阿基瑞林；
142.可选地，所述切割液包括tfa∶tis∶edt和水；
143.可选地，所述tfa∶tis∶edt和水的体积比为60～100∶3～8∶1～5∶3～8；
144.可选地，所述ac-glu(r1)-glu(r2)-met-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2和切割液的比例为1500～2000g∶10～30l。
145.作为一种实施方式，本技术提供一种液相合成路线：本方法采用了3 3的方法合成了多肽阿基瑞林，基本公式为ac-glu(r1)-glu(r2)-met-oh与片段h-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2缩合形成阿基瑞林中间体，再经过切割工艺得到阿基瑞林的方法，其中r1、r2、r3、r4、r5一般代表能够在各种酸性条件下从产品上裂解下来的保护基团，如r1和r2为glu的侧链保护基团，包括
t
bu、tbs、dpm、苄基、甲氧基苄基等，r3为gln的侧链保护基团，包括trt、tmb、dmt等，r4和r5为arg的侧链保护基团，包括pbf、pmc、mtr等。具体地，本方法采用了片段ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-met-oh与片段h-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2缩合形成阿基瑞林中间体，再经过切割工艺得到阿基瑞林；本方法公开了片段ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-met-oh与片段h-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2的相关合成方法，凡是涉及到工艺路线中相关中间体后合成的相关片段都属于本方法保护范围内；本方法合成路线中，glu的保护基团以
t
bu为主，但也包括苄基、甲氧基苄基等，gln采用trt保护，但也包含在其他酸性条件下能从gln侧链上切割下来的保护基团，arg采用pbf为保护基团，但也包括mtr等胍基的相关保护基团。
146.本方法采用了3 3的方法合成了多肽阿基瑞林，基本公式为ac-glu(r1)-glu(r2)-met-oh与片段h-gln(r3)-arg(r4)-arg(r5)-nh2缩合形成阿基瑞林中间体，再经过切割工艺得到阿基瑞林的方法。
147.其中r1、r2、r3、r4、r5一般代表能够在各种酸性条件下从产品上裂解下来的保护基团，如r1和r2为glu的侧链保护基团，包括
t
bu、tbs、dpm、苄基、甲氧基苄基等，r3为gln的侧链保护基团，包括trt、tmb、dmt等，r4和r5为arg的侧链保护基团，包括pbf、pmc、mtr等。具体地，其中本方法采用了片段ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-met-oh与片段h-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2缩合形成阿基瑞林中间体，再经过切割工艺得到阿基瑞林。
148.连接过程使用的缩合剂：dic/hobt、edci/hobt、dcc/hobt、dic/hoat、edci/hoat、dcc/hoat、dic/hoobt、edci/hoobt、dcc/hoobt、dic/oxyma、edci/oxyma、dcc/oxyma、hbtu/nmm/diea等。
149.连接过程使用的溶剂：dmf/dmso/nmp/dcm的单一溶剂或者混合溶剂。
150.切割条件：一定比例的tfa/tis/h2o/苯酚/edt。
151.本技术中，缩写说明如下：
152.glu：谷氨酸；
153.gln：谷氨酰胺；
154.arg：精氨酸；
155.t
bu：叔丁基；
156.trt：三苯甲基；
157.pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基；
158.fmoc：9-芴甲氧羰基；
159.dic：n,n'-二异丙基碳二亚胺；
160.edci：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；
161.dcc：二环己基碳二亚胺；
162.hobt：1-羟基苯并三唑；
163.hoat：1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑；
164.oxyma：2-肟氰乙酸乙酯；
165.hbtu：o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸盐；
166.nmm：n-甲基吗啉；
167.diea：n,n-二异丙基乙胺；
168.dmf：n,n-二甲基甲酰胺；
169.dmso：二甲基亚砜；
170.nmp：n-甲基吡咯烷酮；
171.dcm：二氯甲烷；
172.本技术能产生的有益效果包括：
173.(1)本技术所提供的阿基瑞林的中间体组合物，所述阿基瑞林的中间体组合物用于阿基瑞林的合成，可以避免使用活性酯中间体，以及避免中间体保存的稳定性问题避免了使用活性酯中间体，避免了中间体保存的稳定性问题；
174.(2)本技术所提供的阿基瑞林中间体组合物的制备方法，每个中间体片段只需分离4个关键中间体即可，且中间体都是固体而非油状物或者液体，易于工业化生产的中间体质量控制；
175.(3)本技术所提供的阿基瑞林的制备方法，工艺路线简单，整个工艺路线使用3 3
片段合成法，反应温和，不需要回流操作和低温反应，简单的设备即可进行；操作简单，关键中间体只需要简单的萃取洗涤旋干析晶过滤即可得到。
附图说明
176.图1为cn106749529a中的技术路线图。
177.图2为cn103694316b中的技术路线图。
178.图3为cn103613642b中的技术路线图。
179.图4为本技术的合成路线通式图。
180.图5为本技术的具体技术路线图。
具体实施方式
181.下面结合实施例详述本技术，但本技术并不局限于这些实施例。
182.如无特别说明，本技术的实施例中的原料均通过商业途径购买。
183.图4为本技术的合成路线通式图。
184.图5为本技术的具体技术路线图。
185.实施例1ac-glu-glu-met-gln-arg-arg-nh2的制备
186.(1)h-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2片段合成的第一步(fmoc-arg(pbf)-nh2)：
187.50l反应釜中加入20l dmf，加入1kg fmoc-arg(pbf)-oh和250g hobt，搅拌溶清后加165g氯化铵，加入500g edci和650g nmm，搅拌反应过夜，hplc检测原料反应完全。将反应液缓慢加入50l水中，析出固体，过滤得到的滤饼打浆洗涤，过滤烘干得980g，收率为98.2％，hplc纯度为95％。
188.(2)h-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2片段合成的第二步(fmoc-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2)：
189.50l反应釜中加入dcm 20l，再加入fmoc-arg(pbf)-nh
2 980g，溶清后加入5l哌啶，室温搅拌反应1h，tlc检测原料基本反应完全。将反应液旋干，得到的固体用乙酸乙酯(10l)和水(10l)溶解分层，调节水层ph＝2～3，弃去有机层，水层继续用碳酸钠调节ph＝8～9，并用20l dcm萃取产品，dcm层用无水硫酸钠干燥，过滤直接用于下一步反应。
190.室温下加入hobt 300g、fmoc-arg(pbf)-oh 931g，溶清后加入edci500g，搅拌反应过夜后hplc检测，反应完全。加入20l水洗涤，然后用饱和食盐水洗涤，干燥，过滤，旋干得1480g，收率为92.8％，hplc纯度为95％。
191.(3)h-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2片段合成的第三步(fmoc-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh2)：
192.50l反应釜中加入dcm 20l，再加入fmoc-arg(pbf)-arg(pbf)-nh21356g，溶清后加入哌啶5l，室温搅拌反应1h，tlc检测原料基本反应完全。将反应液旋干，得到的固体用乙酸乙酯(10l)和水(10l)溶解分层，调节水层ph＝2～3，弃去有机层，水层继续用碳酸钠调节ph＝8～9，并用20l dcm萃取产品，dcm层用无水硫酸钠干燥，过滤直接用于下一步反应。
193.室温下加入hobt原料300g、fmoc-gln(trt)-oh 666g，溶清后加入edci 500g，搅拌反应过夜，tlc检测原料基本反应完全。加水20l萃取分层，有机相再用10l饱和食盐水洗涤，
1270g、ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-met-oh 612g和hobt 200g，nmm 262g，再加入edci 251g，搅拌反应过夜，hplc检测原料基本反应完全。加入8l水洗涤，再用4l饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到产品1670g，收率为87.7％，hplc纯度为88.7％。
208.(10)粗品合成(ac-glu-glu-met-gln-arg-arg-nh2)：
209.50l反应釜中加入17l切割液(tfa∶tis∶edt∶水＝87.5∶5∶2.5∶5，体积比)，机械搅拌下分批加入ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-met-gln(trt)-arg(pbf)-arg(pbf)-nh
2 1630g，搅拌反应，ms检测原料基本反应完全。过滤，滤液缓慢搅拌加到70l冷的叔丁基甲醚中析出固体，离心过滤，用10l叔丁基甲醚打浆3次，真空干燥得到0.98kg，收率为93％，hplc纯度为75％。粗品经纯化得到550g产品，纯化收率为56％。
210.实施例2ac-glu-glu-met-gln-arg-arg-nh2的制备
211.实施例1的制备步骤的区别仅在于步骤(5)不同，本实施例的步骤(5)为：
212.(5)ac-glu(o
t
bu)-glu(o
t
bu)-met-oh片段合成的第一步(fmoc-glu(o
t
bu)-met-ome)：
213.50l反应釜中加入20l dcm，再依次加入1000g fmoc-glu(o
t
bu)-oh、470g h-met-ome.hcl、360g hobt，溶清后降温至15℃，滴加556g edci和349g nmm，室温搅拌反应过夜，hplc检测反应完全。过滤，加水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得1280g，收率为95％，hplc纯度为94.6％。
214.以上所述，仅是本技术的几个实施例，并非对本技术做任何形式的限制，虽然本技术以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限制本技术，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本技术技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于技术方案范围内。