一种子宫内膜类器官培养基及培养方法与流程

技术特征：
1.一种子宫内膜类器官培养基，其特征在于：按照终浓度组成包括：10-100ng/ml的egf，20-500ng/ml的noggin，20-500ng/ml的r-spondin 1，20-500ng/ml的wnt3a，1-100ng/ml的fgf9，10-200ng/ml的kiaa1199，1-100ng/ml的sox2，10-100nm异黄酮，100-2000nm的chir99021，1-40μm的a83-01，2-50μm的rock抑制剂，50-200ug/ml的原代细胞抗生素；以上成分均溶于dmem/f12培养液中。2.根据权利要求1所述的一种子宫内膜类器官液体培养基，其特征在于：所述液体培养基按照终浓度的组成包括：20-100ng/ml的egf，100-400ng/ml的noggin，100-400ng/ml的r-spondin 1，100-400ng/ml的wnt3a，20-50ng/ml的fgf9，50-100ng/ml的kiaa1199，20-80ng/ml的sox2，20-80nm异黄酮，500-1000nm的chir99021，5-20μm的a83-01，5-20μm的rki-1477，50-150ug/ml原代细胞抗生素。3.根据权利要求1或2所述的一种子宫内膜类器官液体培养基，其特征在于：所述液体培养基组成中，将fgf9替换为fgf10。4.一种子宫内膜类器官培养方法，其特征在于：是采用权利要求1～3任意一项所述的液体培养基，包括以下步骤：步骤一，将获得的子宫内膜标本经过预处理得到细胞数量为3-50个细胞的细胞团；步骤二，将细胞团与matrigel基质胶混匀后铺板，待凝固后倒置固定20-30min；步骤三，加入所述液体培养基，于37℃、5％co2条件下培养4-7天，期间每隔2-3天更换一次培养基，即得。

技术总结
本发明提供一种子宫内膜类器官培养基及培养方法，该培养基按照终浓度组成包括：10-100ng/ml的EGF，20-500ng/ml的Noggin，20-500ng/ml的R-spondin 1，20-500ng/ml的Wnt3a，1-100ng/ml的FGF9，10-200ng/ml的KIAA1199，1-100ng/ml的sox2，10-100nM异黄酮，100-2000nM的CHIR99021，1-40μM的A83-01，2-50μM的ROCK抑制剂，50-200ug/ml的原代细胞抗生素；以上成分均溶于DMEM/F12培养液中。将该培养基用于子宫内膜类器官培养，有利于子宫内膜干细胞的快速扩增以及类器官的成熟与分化，并且传代次数显著提高，多次传代后仍能维持原代组织同样的组织结构与基因组特性。组织结构与基因组特性。组织结构与基因组特性。


技术研发人员：兰坚强 朱宇 张慧星 刘丹 黄敏
受保护的技术使用者：创芯国际生物科技（广州）有限公司
技术研发日：2021.09.06
技术公布日：2022/1/21