混合细胞基因疗法的制作方法

技术特征：
1.一种用以在靶标部位处产生透明软骨的混合细胞组合物，所述混合细胞组合物包含a)用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第一哺乳动物细胞群体；b)尚未用编码tgf-β或bmp的所述基因转染或转导的第二哺乳动物细胞群体，其中在所述靶标部位处所述第二哺乳动物细胞群体的内源性存在形式降低，并且其中由所述第一哺乳动物细胞群体在所述靶标部位处对治疗性蛋白质的产生刺激第二群体细胞以诱导治疗作用；和c)它们的药学上可接受的载体，其中尚未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第二哺乳动物细胞群体与已用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的所述第一哺乳动物细胞群体的比率是约1-20:1。2.根据权利要求1所述的混合细胞组合物，其中所述组合物是可注射组合物。3.如权利要求1所述的混合细胞组合物，其中在b)中，所述第二哺乳动物细胞群体是尚未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的成纤维细胞或软骨细胞。4.如权利要求3所述的混合细胞组合物，其中所述第二哺乳动物细胞群体是软骨细胞。5.如权利要求4所述的混合细胞组合物，其中在a)中，所述第一细胞群体是人胚肾细胞或上皮细胞。6.如权利要求5所述的混合细胞组合物，其中所述第一细胞群体是人胚肾细胞。7.根据权利要求1所述的混合细胞组合物，其中所述基因是tgf-β1或bmp-2。8.根据权利要求1所述的混合细胞组合物，其中所述比率是约1-10:1。9.根据权利要求8所述的混合细胞组合物，其中所述比率是约1-3:1。10.根据权利要求1所述的混合细胞组合物，其中用编码tgf-β1或bmp-2的基因转染或转导的所述第一细胞群体是经照射的。11.根据权利要求1所述的混合细胞组合物，其中所述第一细胞群体和所述第二细胞群体源于相同或不同来源生物体。12.一种在哺乳动物中的靶标部位处产生透明软骨的方法，所述方法包括：a)产生包含操作性地连接于启动子的编码tgf-β1或bmp-2的dna序列的重组载体；b)用所述重组载体在体外转染或转导哺乳动物细胞群体；以及c)将包含产生蛋白质的有效量的(i)用编码tgf-β1或bmp-2的基因转染或转导的第一哺乳动物细胞群体；(ii)尚未用所述基因转染或转导的第二哺乳动物细胞群体；和(iii)它们的药学上可接受的载体的混合细胞组合物注射至所述靶标部位中，其中在所述靶标部位处所述第二哺乳动物细胞群体的内源性存在形式降低，并且其中由所述第一哺乳动物细胞群体在所述靶标部位处对治疗性蛋白质的产生刺激第二群体细胞以诱导治疗作用，其中尚未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第二哺乳动物细胞群体与已用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的所述第一哺乳动物细胞群体的比率是约1-20:1。13.根据权利要求12所述的方法，其中在步骤(c)(i)中，所述第一哺乳动物细胞群体是人胚肾细胞或上皮细胞。14.如权利要求13所述的方法，其中所述第一哺乳动物细胞群体是人胚肾细胞。15.根据权利要求12所述的方法，其中在步骤(c)(ii)中，所述第二哺乳动物细胞群体是软骨细胞。16.根据权利要求12所述的方法，其中所述基因编码tgf-β1或bmp-2。
17.根据权利要求12所述的方法，其中尚未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第二成纤维细胞或软骨细胞群体与已用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的所述第一哺乳动物细胞群体的比率是约3-20:1。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述比率是约3-10:1。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述比率是约10:1。20.根据权利要求19所述的方法，其中用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第一成纤维细胞或软骨细胞群体是经照射的。21.根据权利要求12所述的方法，其中用编码tgf-β或bmp的所述基因转染或转导的所述第一哺乳动物细胞群体和未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第二成纤维细胞或软骨细胞群体相对于宿主接受体是同种同基因的或异种异体的。22.如权利要求12所述的方法，其中所述重组载体是病毒载体。23.如权利要求12所述的方法，其中所述重组载体是质粒载体。24.如权利要求12所述的方法，其中所述细胞在移植之前被储存。25.如权利要求24所述的方法，其中所述细胞在移植之前被储存在低温保存剂中。26.如权利要求12所述的方法，其中所述转染或转导通过脂质体包封、磷酸钙共沉淀、电穿孔、deae-右旋糖酐介导或病毒介导来实现。27.一种治疗骨关节炎的方法，所述方法包括：a)产生包含操作性地连接于启动子的编码转化生长因子β(tgf-β)或骨形态发生蛋白(bmp)的dna序列的重组载体；b)用所述重组载体在体外转染或转导哺乳动物细胞群体；以及c)将包含产生透明软骨和治疗骨关节炎的有效量的，(i)用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第一人胚肾细胞或上皮细胞群体；(ii)尚未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第二软骨细胞群体；和(iii)它们的不是无生命三维结构的药学上可接受的载体的可注射混合细胞组合物注射至哺乳动物的关节间隙中，以致发生编码tgf-β或bmp的所述dna序列在所述关节间隙内的表达，从而导致在所述关节间隙中产生骨和软骨组织，其中尚未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第二哺乳动物细胞群体与已用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第一哺乳动物细胞群体的比率是约1-20:1。28.如权利要求27所述的方法，其中在(c)(i)中，所述第一细胞群体是人胚肾细胞。29.一种可注射混合细胞组合物，所述可注射混合细胞组合物包含产生透明软骨的有效的和治疗骨关节炎的量的，a)用编码转化生长因子β(tgf-β)或骨形态发生蛋白(bmp)的基因转染或转导的第一人胚肾细胞或上皮细胞群体；b)尚未用编码tgf-β或bmp的基因转染或转导的第二软骨细胞群体；和c)它们的药学上可接受的载体。30.根据权利要求29所述的混合细胞组合物，其中所述第一细胞群体是人胚肾细胞。31.一种用于在约-70℃至约-196℃的温度下储存细胞的储存容器，所述储存容器包含如权利要求1所述的可注射混合细胞组合物。32.一种用于在约-70℃至约-196℃的温度下储存细胞的储存容器，所述储存容器包含
如权利要求29所述的可注射混合细胞组合物。

技术总结
本发明涉及一种用以通过提供用寻求表达的基因转染或转导的第一哺乳动物细胞群体和尚未用所述基因转染或转导的第二哺乳动物细胞群体来在靶标部位处产生治疗性蛋白质的混合细胞组合物，其中在所述靶标部位处所述第二哺乳动物细胞群体的内源性存在形式降低，并且其中由所述第一哺乳动物细胞群体在所述靶标部位处对所述治疗性蛋白质的产生刺激第二群体细胞以诱导治疗作用。体细胞以诱导治疗作用。


技术研发人员：M
受保护的技术使用者：可隆组织基因有限公司
技术研发日：2020.03.30
技术公布日：2022/1/13