基于结冷胶和苯肾上腺素的组合物、生产方法以及用作眼科产品的用途与流程

基于结冷胶和苯肾上腺素的组合物、生产方法以及用作眼科产品的用途
1.本发明涉及一种当沉积在眼睛上时能够胶凝的特定组合物和其作为眼科产品的用途，具体地用于诱导眼睛的散瞳。本发明还涉及一种用于制造这种组合物的特定方法。
2.许多眼科检查或如白内障外科手术等眼睛外科手术都需要瞳孔扩张，也被称为散瞳。
3.已知能够引起散瞳的若干种分子。
4.这具体地是使用苯肾上腺素的情况，并且更具体地是使用盐酸苯肾上腺素的情况。苯肾上腺素是对α1受体具有较高亲和力的α-肾上腺素能受体激动剂，所述α1受体主要位于瞳孔中。苯肾上腺素允许通过径向扩张肌肉的收缩获得活动性散瞳。苯肾上腺素通常用于名为的滴眼剂中。
5.由于其散瞳效应而已知的另一种分子是托吡卡胺，一种m4受体的竞争性拮抗剂，所述m4受体主要位于虹膜中。在施用第一滴滴眼剂后10分钟观察到托吡卡胺的散瞳效应。托吡卡胺通常用于名为的滴眼剂中。
6.两种其它分子可以用于诱导散瞳：
[0007]-阿托品，但阿托品表现出全身水平的显著副作用，
[0008]-环喷托酯，但环喷托酯具有短暂的作用并且阻碍视觉调节。
[0009]
常规地，为了实现瞳孔扩张，已知使用苯肾上腺素和托吡卡胺的组合。此组合协同作用以允许瞳孔的有效扩张。已知使用这些分子诱导散瞳的不同方法。
[0010]
最经典的方法由两种滴眼剂在液体溶液中的组合(托吡卡胺0.5％和10％：苯肾上腺素10％)组成。然而，以常规滴眼剂形式施用通常导致托吡卡胺和苯肾上腺素的眼部生物利用度非常低。眼睛的生理防御机制，具体地眼睑眨动和鼻泪引流，会引起眼睛表面的快速消除；这减少了散瞳效应的持续时间，这必须通过随着时间的推移重复施用来补偿。为了诱导有效的散瞳，在30到45分钟的时间段内，有必要以每滴之间间隔5分钟施用三到五滴滴眼剂。因此，这是导致患者管理时间长、产品施用量过大以及医院结构的护理时间成本显著的限制性方案。另外，眼睛的生理防御机制还会引起全身水平的高吸收，这可能导致副作用。具体地，全身水平的苯肾上腺素的存在会引起强血管收缩和反射心动过缓，所述强血管收缩和反射心动过缓对已经患有热衰竭或心律失常的患者可能是严重的。
[0011]
另一种方法依赖于施用苯肾上腺素和托吡卡胺的固体插入物。插入物是由医疗保健专业人员放置在下结膜囊中的渗透片剂，并且必须在适当位置保持30到45分钟以获得预期的散瞳效应。然后必须在施用后最多2小时内由医疗保健专业人员将插入物移除。因此，患者护理时间也很长，并且渗透片剂的成本很高。
[0012]
最后，存在由前房内注射最近已经上市的托吡卡胺、苯肾上腺素和利多卡因组成的第三种方法。然而，此产品不能用于常规检查，并且由于所述产品的施用方法和其组合物中麻醉剂的存在，因此其仅建议在术前阶段使用。另外，眼内注射，即使用于术前散瞳，也是
涉及患者风险的复杂程序并且具有显著成本。
[0013]
同样，非常需要能够表现出有效且快速的散瞳效果的易于使用且价格低廉的产品。
[0014]
本发明的目的是满足这种需要并且通过提供能够在与眼睛接触时胶凝的组合物来克服现有技术的缺点。
[0015]
为此，本发明的主题是至少包括结冷胶和苯肾上腺素的组合物。由于离子环境的变化，至少这两种分子的组合允许组合物呈液体形式并且在与眼睛接触时胶凝。因此，液相允许组合物扩散并且具有比固体形式更大的吸收表面，并且凝胶相使得可以延长组合物在眼睛表面上的停留时间。这使苯肾上腺素和组合物中存在的任何其它分子易于施用并且具有高眼部生物利用度。另外，所述组合物具体地由于其低粘度而有利地具有低工业制造成本。
[0016]
具体地，本发明的主题是一种呈溶液形式的组合物，所述组合物在介于20℃与25℃之间的温度下的粘度小于或等于500mpa
·
s，所述组合物至少包括：
[0017]-结冷胶；和
[0018]-苯肾上腺素；以及
[0019]-胶凝调节剂，所述胶凝调节剂选自柠檬酸钠、有机酸、有机酸的盐和其混合物。
[0020]
因此，本发明的主题还在于所述组合物用作非治疗性眼科产品，具体地散瞳剂的用途，或所述组合物用于治疗某些眼科病状的用途。
[0021]
有利地，相对于现有技术的常规滴眼剂的若干次滴注(2到8滴)，根据本发明的组合物使得可以在单次施用液体形式的一滴或两滴中获得有效的散瞳。因此，苯肾上腺素的量以及托吡卡胺(当存在时)的量比根据现有技术使用滴眼剂时所需的量少4到8倍，并且因此患者暴露于局部和全身性副作用的风险更低。另外，本发明使得可以在小于10分钟内获得散瞳的最佳强度和持续时间。此外，没有必要求助于高素质人员，因为将根据本发明的组合物单次滴注到眼睛中足以获得有效的散瞳。
[0022]
因此，根据本发明的用途是容易、安全且可重复的。
[0023]
根据以下对本发明的详细描述，其它特征和优点将变得显而易见。
具体实施方式
[0024]
本发明因此涉及一种眼科组合物，所述眼科组合物至少包括结冷胶和苯肾上腺素。术语“眼科”意指适用于人类或动物的眼睛。
[0025]
具体地，本发明的主题是一种呈溶液形式的组合物，所述组合物在介于20℃与25℃之间的温度下的粘度小于或等于500mpa
·
s，所述组合物至少包括：
[0026]-结冷胶；和
[0027]-苯肾上腺素；以及
[0028]-胶凝调节剂，所述胶凝调节剂选自柠檬酸钠、有机酸、有机酸的盐和其混合物。
[0029]
优选地，所述组合物还包括溶剂，优选地水。
[0030]
所述组合物呈溶液形式，所述组合物具有低粘度，即在介于20℃与25℃之间的温度下的粘度小于或等于500mpa
·
s，优选地在介于20℃与25℃之间的温度下的粘度介于10mpa
·
s与500mpa
·
s之间。根据本发明的组合物可以表现出剪切稀化的特性，也就是说，
当产品被剪切时，所述组合物的粘度会发生变化。优选地，根据本发明的组合物表现出：
[0031]-在低剪切下，在25℃下的粘度为300mpa
·
s到400mpa
·
s；
[0032]-在高剪切下，在25℃下的粘度为3mpa
·
s到50mpa
·
s。
[0033]
所有流变分析均在anton paar mcr102流变仪上执行，并且所有数据均使用专用软件进行分析。几何形状是不锈钢锥体/平面(直径50mm，角度1
°
并且气隙100μm)，其提供样品的均匀剪切。锥体配备有溶剂阱，以防止在测量期间发生蒸发。由于在板的下部中放置了珀耳帖二极管(peltier diode)，因此可以以0.1℃的精度控制温度。此文件中呈现的所有粘度值均通过此方法获得。
[0034]
当溶液的离子环境发生改变时，所述溶液能够胶凝。因此，当所述组合物沉积在眼睛表面时，所述组合物会在泪液中含有的单价阳离子和二价阳离子，具体地钙和镁的作用下转化成凝胶形式。在到达眼睛表面时，根据本发明的组合物因此表现出从液态到凝胶态的相变。这种原位胶凝允许延长根据本发明的组合物在眼睛表面上的停留时间。令人惊讶的是，尽管在施用时离子强度降低，但仍获得了液体-凝胶相变。这是可能的，因为根据本发明的组合物的张力比泪液的张力更高，并且因此在离子强度降低期间存在胶凝。这种张力具体地与至少一种胶凝调节剂的存在有关，所述至少一种胶凝调节剂选自柠檬酸钠、有机酸和有机酸盐。
[0035]
液相有利地允许：
[0036]-在眼睛中施用的可递送性、安全性和简易性；
[0037]-接触表面的扩散和增加；
[0038]-易于制造和灭菌。
[0039]
凝胶相有利地允许：
[0040]-粘膜粘附；
[0041]-在眼睛表面上的长保留时间；
[0042]-延长释放和受控释放。
[0043]
一旦施用，根据本发明的组合物立即从液态变为凝胶态。这些快速胶凝动力学使得防止呈液态的组合物的消除。另外，根据本发明的组合物能够长时间保持与眼睛表面接触，同时保持其机械和流变性质，尽管在泪液中稀释和眼睑眨动。这种延长的接触通过粘膜粘附现象而增强。这些特性允许苯肾上腺素和任何其它活性分子在有效浓度下随时间推移快速且持续释放。
[0044]
根据另一个优点，保持苯肾上腺素的散瞳活性和组合物中存在的任何其它活性分子的活性。
[0045]
另外，根据本发明的组合物对眼睛表面是无害的并且不会干扰患者的视力。
[0046]
所有这些特性和优点都与结冷胶与苯肾上腺素组合的特定选择有关。确实存在已知在能够胶凝的溶液中使用的许多聚合物，但仅结冷胶使得可以满足所有这些特性：
[0047]-结冷胶构成活性物质的眼部施用的选择的载体；
[0048]-结冷胶具有生物来源并且具有糖类性质，使得结冷胶是生物相容的且可生物降解的；
[0049]-由于结冷胶的四糖单元上存在的乙酸酯和甘油酸酯基团，因此结冷胶在中性ph下是带负电荷的聚电解质；
[0050]-结冷胶可溶于水性介质，其中结冷胶的多糖链被组织成即使在非常低的浓度下提供合适的粘弹性性质的临时且可逆的三维网络；
[0051]-结冷胶的剪切稀化性质通过降低眼睑眨动期间的刺激风险而允许良好的局部耐受性，并且结冷胶的非触变性行为允许结冷胶在每次眼睑剪切后重构并恢复其初始粘度；
[0052]-结冷胶具有粘膜粘附力；
[0053]-结冷胶的粘度和弹性促进其在眼睛表面处的持久性并且允许延长的停留时间；
[0054]-结冷胶形成澄清且透明的凝胶，其允许保持患者的视力；
[0055]-结冷胶在存在阳离子的情况下在其胶凝期间形成基质网络，这赋予其持续释放性质；
[0056]-结冷胶对眼睛无害。
[0057]
优选地，结冷胶是脱乙酰化胶。脱乙酰化形式使得可以获得透明凝胶。所述脱乙酰化胶可以是例如kelcogel结冷胶可以任选地是乙酰化结冷胶。所述乙酰化结冷胶可以是例如kelcogel
[0058]
根据本发明的组合物优选地包括至多0.6％，具体地0.05％到0.6％(包含端值)，具体地0.1％到0.6％(包含端值)并且具体地0.1％到0.5％(包含端值)的结冷胶(百分比以结冷胶的重量/组合物的体积给出)。非常优选地，根据本发明的组合物包括0.05％到0.25％，具体地介于0.1％与0.5％之间的结冷胶(百分比以结冷胶的重量/组合物的体积给出)。
[0059]
为了获得根据本发明的组合物的效果和特性，优选的是这些浓度的结冷胶。
[0060]
根据本发明的组合物优选地包括至少0.1％，甚至更优选地介于0.1％与10％之间的苯肾上腺素(百分比以苯肾上腺素的重量/组合物的体积给出)。这些苯肾上腺素浓度与分子与根据本发明的组合物中的结冷胶的缔合是相容的，并且还使得可以获得有效的散瞳效应而无不利影响。
[0061]
根据合适的实施例，苯肾上腺素是苯肾上腺素的盐并且具体地盐酸苯肾上腺素。
[0062]
除了结冷胶、苯肾上腺素和任选的溶剂之外，根据本发明的组合物还包括胶凝调节剂以在组合物沉积在眼睛上时促进胶凝相。根据本发明的组合物优选地包括至少一种胶凝调节剂，所述至少一种胶凝调节剂具体地选自柠檬酸钠、有机酸、有机酸的盐和其混合物。所述胶凝调节剂优选地是柠檬酸钠。柠檬酸钠允许在储备溶液的制备期间结冷胶链的更好水合。柠檬酸钠作为阳离子螯合剂的性质允许其捕获结冷胶中含有的残余阳离子。因此，在不存在阳离子的情况下，结冷胶链更加延长并且聚合物更好地水合。这赋予组合物更好的胶凝性质和更高的粘度。这也允许结冷胶的水合温度降低。另外，柠檬酸钠的存在使得可以减少对氧化敏感的苯肾上腺素的降解。
[0063]
按选自柠檬酸钠、有机酸、有机酸的盐和其混合物的胶凝调节剂的重量/组合物的体积计，胶凝调节剂(柠檬酸钠和/或有机酸和/或有机酸的盐和/或其混合物计)优选地在0.01％与0.2％之间(包含端值)存在。
[0064]
除了这种或这些胶凝调节剂之外，根据本发明的组合物可以任选地包括至少一种其它胶凝调节剂，所述至少一种其它胶凝调节剂优选地选自螯合剂和其混合物。按螯合剂的重量/组合物的体积计，螯合剂优选地在0.01％与0.2％之间(包含端值)存在。
[0065]
螯合剂可以例如是：
[0066]-edta；
[0067]-酒石酸钠、酒石酸钾或酒石酸钙或酒石酸；
[0068]-钾、镁或柠檬酸柠檬酸盐。
[0069]
有利地，螯合剂的存在使得可以减少对氧化敏感的苯肾上腺素的降解。
[0070]
根据本发明的组合物还可以包括至少一种抗氧化剂。所述抗氧化剂可以例如是抗坏血酸、苹果酸、柠檬酸或其钠等效物、抗坏血酸钠、马来酸钠、edta或柠檬酸钠。
[0071]
根据本发明的组合物还可以包括其它成分，具体地托吡卡胺，因为其与苯肾上腺素的协同散瞳作用。优选地，托吡卡胺以至少0.1％(百分比以托吡卡胺的重量/组合物的体积给出)的量存在于组合物中；甚至更优选地，所述组合物包括0.1％到10％(包含端值)的托吡卡胺。
[0072]
根据本发明的组合物还可以包括至少一种纤维素衍生物。所述纤维素衍生物可以优选地是羟乙基纤维素(例如，natrosolnatrosol)和/或羟丙基甲基纤维素。纤维素衍生物并且具体地羟乙基纤维素和羟丙基甲基纤维素具有良好的耐受性，并且与结冷胶组合，表现出合适的粘度和质地性质。所述纤维素衍生物使得可以进一步改进根据本发明的组合物的活性分子的粘度、粘膜粘附和释放性质。
[0073]
优先地，按纤维素衍生物的重量/组合物的体积计，纤维素衍生物以0％到2％(包含端值)，甚至更优选地0％到1％(包含端值)的量存在。根据一个实施例，根据本发明的组合物包括0％到1％的羟乙基纤维素和0％到1％的羟丙基甲基纤维素。
[0074]
根据本发明的组合物可以通过任何合适的制造/制备方法获得。
[0075]
优选地，根据本发明的组合物通过进行包括以下步骤的制备方法获得：
[0076]-制备溶液a，所述溶液a至少包括结冷胶和胶凝调节剂并且任选地还包括螯合剂和/或有机酸和/或抗氧化剂和/或水，所述胶凝调节剂选自柠檬酸钠、有机酸、有机酸的盐和其混合物；
[0077]-制备溶液b，所述溶液b至少包括苯肾上腺素并且任选地还包括托吡卡胺和/或纤维素衍生物和/或水；
[0078]-将溶液a与溶液b混合，溶液a占20％到40％并且溶液b占60％到80％，百分比是以两种溶液的混合物总重量的重量给出的。
[0079]
非常优选地，将含有结冷胶的溶液(溶液a)倒入含有苯肾上腺素的溶液(溶液b)中。这使得可以获得均匀的、透明的、流体的且低粘度的制剂。
[0080]
优选地，溶液a通过进行以下步骤制备：
[0081]
*优选地在搅拌下，将结冷胶和胶凝调节剂以及任选地螯合剂和/或抗氧化剂溶解在水中，所述胶凝调节剂选自柠檬酸钠、有机酸、有机酸的盐和其混合物；
[0082]
*优选地在搅拌下，将溶液加热到60℃到90℃；
[0083]
*继续搅拌1到15分钟；
[0084]
*停止加热，并且继续搅拌直到温度达到15℃到30℃；
[0085]
*任选地，优选地用孔隙率小于或等于0.22μm的过滤器进行灭菌过滤。
[0086]
优选地，溶液b通过进行以下步骤制备：
[0087]
*将苯肾上腺素和可能的托吡卡胺溶解在水中；
[0088]
*搅拌1到3小时直到完全溶解；
[0089]
*任选地，溶解纤维素衍生物；
[0090]
*任选地，优选地用孔隙率小于或等于0.22μm的过滤器进行灭菌过滤。
[0091]
优选地，溶液a和溶液b的混合通过进行以下步骤来完成：
[0092]
*搅拌溶液a，优选地缓慢搅拌以获得更大的均匀性；
[0093]
*添加溶液b，同时进行搅拌，优选地缓慢搅拌以获得更大的均匀性；
[0094]
*继续搅拌直到获得均匀的混合物。
[0095]
根据本发明的组合物优选地储存在适合于眼科用途的单剂量容器中。所述单剂量容器优选地在环境温度下和/或在允许其保存直至使用的条件下储存。
[0096]
根据本发明的组合物可以用作眼科产品，具体地用作非治疗性眼科产品。因此，本发明旨在这种用途。事实上，所述组合物的特征在于，当所述组合物沉积在眼睛的表面上时，所述组合物会在泪液中含有的单价阳离子和二价阳离子的作用下胶凝。
[0097]
具体地，本发明涉及以上描述的组合物用作散瞳眼科产品的用途。事实上，根据本发明的组合物可以用于人类或动物的眼睛中，以具体地在对所述眼睛进行手术之前或在对所述眼睛进行检查之前诱导散瞳。根据本发明的组合物可以用于在小于10分钟内诱导散瞳，并且所述散瞳持续超过120分钟。
[0098]
根据本发明的用途优选地包含在眼睛中施用至少一滴。事实上，单滴足以快速诱导散瞳并且持续长时间。
[0099]
独立于其在进行眼睛检查或眼睛手术之前诱导瞳孔扩张以促进这些程序的非治疗性用途，根据本发明的组合物可以用作治疗眼部病理，并且具体地用于治疗葡萄膜炎(前葡萄膜炎和后葡萄膜炎，继发于创伤或外科手术的葡萄膜反应，以防止或停止后粘连的形成)和/或角膜炎的药物。实际上，所诱导的扩张使得可以治疗这些病理。
[0100]
现在通过根据本发明的组合物的实例和通过证明本发明的效果，具体地散瞳效果的测试结果来说明本发明。
[0101]
实例
[0102]
实例1：结冷胶-苯肾上腺素组合物的实例
[0103]
实例1的组合物由以下组成：
[0104]-结冷胶：0.5％
[0105]-柠檬酸钠：0.05％
[0106]-苯肾上腺素：9％
[0107]-水：qs
[0108]
所述组合物通过进行以下步骤获得：
[0109]-在罐1中制备溶液a：
[0110]
*在搅拌下，将结冷胶和柠檬酸钠溶解在水中，
[0111]
*在搅拌下，将溶液加热到75℃，
[0112]
*继续搅拌5分钟，
[0113]
*停止加热，并且继续搅拌直到溶液恢复到室温，
[0114]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0115]-在罐2中制备溶液b：
[0116]
*将苯肾上腺素溶解在水中，
[0117]
*继续搅拌大约1小时45分钟直到完全溶解，
[0118]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0119]-在罐3中的最终混合：
[0120]
*搅拌溶液a，
[0121]
*添加溶液b，同时进行搅拌，
[0122]
*继续搅拌直到获得均匀的混合物。
[0123]
实例2：结冷胶-苯肾上腺素组合物的实例
[0124]
实例2的组合物由以下组成：
[0125]-结冷胶：0.2％
[0126]
‑‑
柠檬酸钠：0.08％
[0127]-0.1％羟乙基纤维素和/或0.1％羟丙基甲基纤维素-苯肾上腺素：9％
[0128]-水：qs
[0129]
所述组合物通过进行以下步骤获得：
[0130]-在罐1中制备溶液a：
[0131]
*在搅拌下，将结冷胶和柠檬酸钠溶解在水中，*在搅拌下，将溶液加热到75℃，
[0132]
*继续搅拌5分钟，
[0133]
*停止加热，并且继续搅拌直到溶液恢复到室温，
[0134]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0135]-在罐2中制备溶液b：
[0136]
*将苯肾上腺素溶解在水中，
[0137]
*继续搅拌大约1小时45分钟直到完全溶解，
[0138]
*溶解羟乙基纤维素和/或羟丙基甲基纤维素，同时进行搅拌，
[0139]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0140]-在罐3中的最终混合：
[0141]
*搅拌溶液a，
[0142]
*添加溶液b，同时进行搅拌，
[0143]
*继续搅拌直到获得均匀的混合物。
[0144]
实例3：结冷胶-苯肾上腺素组合物的实例
[0145]
实例3的组合物由以下组成：
[0146]-结冷胶：0.2％
[0147]-柠檬酸钠：0.1％
[0148]-苯肾上腺素：7％
[0149]-托吡卡胺：0.5％
[0150]-水：qs
[0151]
所述组合物通过进行以下步骤获得：
[0152]-在罐1中制备溶液a：
[0153]
*在搅拌下，将结冷胶和柠檬酸钠溶解在水中，
[0154]
*在搅拌下，将溶液加热到75℃，
[0155]
*继续搅拌5分钟，
[0156]
*停止加热，并且继续搅拌直到溶液恢复到室温，
[0157]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0158]-在罐2中制备溶液b：
[0159]
*将苯肾上腺素和托吡卡胺溶解在水中，
[0160]
*继续搅拌大约2小时直到完全溶解，
[0161]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0162]-在罐3中的最终混合：
[0163]
*搅拌溶液a，
[0164]
*添加溶液b，同时进行搅拌，
[0165]
*继续搅拌直到获得均匀的混合物。
[0166]
实例4：结冷胶-苯肾上腺素组合物的实例
[0167]
实例4的组合物由以下组成：
[0168]-结冷胶：0.2％
[0169]-柠檬酸钠：0.05％
[0170]-苯肾上腺素：8％
[0171]-托吡卡胺：0.6％
[0172]-水：qs
[0173]
所述组合物通过进行以下步骤获得：
[0174]-在罐1中制备溶液a：
[0175]
*在搅拌下，将结冷胶和柠檬酸钠溶解在水中，
[0176]
*在搅拌下，将溶液加热到75℃，
[0177]
*继续搅拌5分钟，
[0178]
*停止加热，并且继续搅拌直到溶液恢复到室温，
[0179]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0180]-在罐2中制备溶液b：
[0181]
*将苯肾上腺素和托吡卡胺溶解在水中，
[0182]
*继续搅拌大约2小时直到完全溶解，
[0183]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0184]-在罐3中的最终混合：
[0185]
*搅拌溶液a，
[0186]
*添加溶液b，同时进行搅拌，
[0187]
*继续搅拌直到获得均匀的混合物。
[0188]
实例5：结冷胶-苯肾上腺素组合物的实例
[0189]
实例5的组合物由以下组成：
[0190]-结冷胶：0.15％
[0191]-柠檬酸钠：0.09％
[0192]-羟乙基纤维素0.25％
[0193]-苯肾上腺素：5％
[0194]-托吡卡胺：0.5％
[0195]-水：qs
[0196]
所述组合物通过进行以下步骤获得：
[0197]-在罐1中制备溶液a：
[0198]
*在搅拌下，将结冷胶和柠檬酸钠溶解在水中，
[0199]
*在搅拌下，将溶液加热到75℃，
[0200]
*继续搅拌4分钟，
[0201]
*停止加热，并且继续搅拌直到溶液恢复到室温，
[0202]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0203]-在罐2中制备溶液b：
[0204]
*将苯肾上腺素和托吡卡胺溶解在水中，
[0205]
*继续搅拌大约2小时直到完全溶解，
[0206]
*溶解羟乙基纤维素和/或羟丙基甲基纤维素，同时进行搅拌，
[0207]
*在灭菌过滤下转移到罐3中；
[0208]-在罐3中的最终混合：
[0209]
*搅拌溶液a，
[0210]
*添加溶液b，同时进行搅拌，
[0211]
*继续搅拌直到获得均匀的混合物。
[0212]
测试和结果
[0213]
在以下呈现的研究中，测试了三种根据本发明的组合物。所述三种组合物呈现在表1中。
[0214]
[表1]
[0215][0216]
i.证明了根据本发明的组合物在施用前的液态和其在存在人工泪液的情况下的胶凝的体外研究i
[0217]
评估组合物a、b和c的ph、渗透压和透明度及其流变性质，以及其粘度和其胶凝能力。
[0218]
透明度
[0219]
使用uv-vis perkin-elmer lambda 25光谱仪测量400nm到800nm波长的可见光光谱中透光率相对于作为参考的水的百分比。以一式三份地执行测量，并且计算每种组合物的平均值
±
sd值。
[0220]
ph测量
[0221]
使用先前校准的ph计测量组合物的ph。以一式三份地测试组合物的ph，并且计算平均值
±
sd值。
[0222]
渗透压
[0223]
使用自动渗透压计测试组合物的渗透压。使用前，用无菌蒸馏水(0mosm/l)和300mosm/l的标准溶液校准装置。以一式三份地执行测量，并且计算每种组合物的平均值
±
sd值。
[0224]
流变研究
[0225]
所有流变分析均在流变仪上执行，并且所有数据均使用专用软件进行分析。几何形状是不锈钢锥体/平面(直径50mm，角度1
°
并且气隙100μm)，其提供样品的均匀剪切。锥体配备有溶剂阱，以防止在测量期间发生蒸发。由于放置在板的下部的珀耳帖二极管，因此可以以0.1℃的精度控制温度。
[0226]
对粘弹性行为和胶凝的评估
[0227]
在添加模拟泪液(stf)之前和之后，分别在25℃和35℃下评估原位胶凝系统的粘弹性行为。执行振荡实验。测量储能模量g'和损耗模量g”。用属于线性粘弹性状态的频率和振幅值进行实验，其中g'保持不变并且样品未经受结构变化。频率为1hz并且振幅为0.1％。所述结果与n＝6次实验的平均值
±
sd相对应。
[0228]
stf以7:30的比率添加，所述比率与生理泪液与滴注的滴剂组合物的体积比相对应。泪液的生理体积为7μl，并且一滴滴眼液的平均体积为30μl。
[0229]
stf的组成在表2中示出。
[0230]
[表2]
[0231] 重量(g)氯化钠0.670碳酸氢钠0.200氯化钙0.008氯化镁0.005氯化钾0.138水98.979
[0232]
流动行为和粘度
[0233]
在35℃下添加stf后确定上述原位凝胶的流动性质。2分钟后，剪切速率从0.1s-1逐渐增加到5000s-1(上升曲线)。然后将剪切速率在5000s-1下保持30秒，并且然后从5000s-1逐渐降低到0.1s-1(下降曲线)。结果是n＝6次实验的平均值
±
sd。
[0234][0235]
根据以下交叉方程(cross equation)拟合粘度曲线。
[0236]
其中η表示在给定剪切速率(mpa
·
s)下的表观粘度，
[0237]
是剪切速率(s-1)，
[0238]
η0是零剪切粘度(mpa
·
s)，
[0239]
η
∞
是在无限剪切下的粘度(mpa
·
s)，
[0240]
c是时间常数(秒)，并且反之，1/c给出了临界剪切速率，这是剪切速率的有用指标，
[0241]
m是克罗斯常数(cross's constant)，其是无量纲的并且是粘度对剪切速率依赖性程度的量度。m的值为零表示牛顿行为(newtonian behavior)，而m的值趋向于1表示剪切稀化行为的增加。
[0242]
对粘弹性行为和胶凝的评估
[0243]
振荡实验主要用于确定根据本发明的组合物是液体还是凝胶，是否具有stf。
[0244]
g'值越高，弹性性质越显著。相反地，g”值越高，粘性性质越显著。为了进行推断，可以认为当值g”大于值g'时，制剂表现出显性的粘性行为(也就是说，相似于液体)。相反地，当值g'大于值g”时，制剂表现出显性的弹性行为(即，相似于固体)。然后，相角的正切可以计算如下，所述相角的正切是流体中弹性的存在和程度的有用的量化器：tanδ＝g”/g'。因此，当tanδ》1时，观察到粘性状态(液体类型)。当tanδ≤1时，观察到凝胶态(固体类型)。超过此临界凝胶点，制剂不一定看起来是粘性的，但可以是流体凝胶的形式，也被称为“弱凝胶”。这种行为就眼部施用而言是高度寻求的。
[0245]
储能模量(g')、损耗模量(g”)和相角正切(tanδ)值在表7中示出。
[0246]
所获得的结果示出于下表中(表3：ph和渗透压；表4：透射率；表5和6：粘度和触变性；表7：粘弹性行为和胶凝)。
[0247]
[表3]
[0248]
组合物ph渗透压a6.46
±
0.02438
±
2.1b6.49
±
0.02438.7
±
5.0c6.50
±
0.02434.3
±
5.0
[0249]
三种根据本发明的组合物表现出相似的ph和渗透压。在ph值介于6.45与6.50之间的情况下，ph值呈微酸性但足够接近中性，并且处于用于眼科学的适当ph范围内。
[0250]
关于渗透压，已发现值为430-440mosm/l。乍一看，这些结果示出了与等渗性(300-320mosm/l)的相对大的偏差。然而，这些高渗透压值几乎仅归因于组合物中盐酸苯肾上腺素的高比例，这对于实现散瞳是必需的。已经显示含有10％盐酸苯肾上腺素的可商购获得的散瞳滴眼剂的渗透压大于900mosm/l。因此，在根据本发明的组合物的渗透压相对高于生理渗透压时，与现有技术中使用的散瞳滴眼剂相比，根据本发明的组合物的渗透压被优化并且降低一半。
[0251]
[表4]
[0252][0253]
根据本发明的组合物的透光率百分比在整个可见范围内大于90％，这使得所述组合物适用于眼科用途。另外，增加hec浓度揭示透明度略有下降，这可以归因于聚合物的固有性质。
[0254]
[表5]
[0255][0256]
[表6]
[0257][0258][0259]
根据本发明的组合物的三个实例表现出适合于眼部施用的流动行为和粘度。组合物a首先在高剪切速率下表现出非常低的粘度，但当剪切停止时几乎立即恢复。具有粘度调节剂的组合物b和c是更合适的，因为其在高剪切速率下表现出更高的粘度，随后在静止时延迟和不完全恢复。剪切稀化行为对于旨在保留在眼睛表面上的组合物呈现出真正的优点。剪切稀化行为允许当眼睛睁开时在静止时的高粘度和在眼睑剪切下的低粘度，从而避免刺激和不适。
[0260]
[表7]
[0261][0262]
在添加stf之前，三种根据本发明的组合物表现出具有非常低的储能模量值和损耗模量值以及大于1的相角正切值的液体型行为。施用前的液体样行为是允许良好流动和
形成液滴的能力的原位胶凝递送系统的先决条件。因此，根据本发明的组合物适用于容易、安全且可再现的眼部施用。
[0263]
在添加stf之后，根据本发明的组合物已经经历液体/凝胶转变。事实上，储能模量增加了30倍，并且所观察到的相角正切小于1。这些测量使得可以评估由于根据本发明的组合物与泪液的单价阳离子和二价阳离子之间的离子相互作用引起的体外胶凝。
[0264]
ii.模拟眼睑眨动以确定根据本发明的组合物在眼睛表面上的流变行为的体外研究
[0265]
为了完成先前的观察结果，开发了两个流变实验。根据本发明的组合物经受一系列模拟眨眼(即，高剪切速率随后是静止时间段)以便预测眼睛表面上随时间推移的流变行为。
[0266]
旋转测量
[0267]
第一个测试测量了在眨动后静止间隔期间的粘度。随着每次模拟眨眼，由于剪切稀化行为，粘度达到最小值，然后在静止时间段期间恢复。与剪切循环(粘度)相对应的结果呈现在表8中。
[0268]
[表8]
[0269]
[0270]
[0271][0272][0273]
结果与流变行为和触变性研究一致。另外，在1s-1下的粘度的数量级与先前观察到的粘度的数量级相同。作为非触变性水凝胶，组合物a的粘度在静止时间段期间几乎瞬间稳定在其初始值，从而导致贯穿十个模拟眨眼循环的恒定粘度。相比之下，作为触变性水凝
胶，组合物b和c的粘度恢复而没有在静止间隔期间达到初始平台。这种延迟导致每次眨眼时粘度的轻微损失。因此，在两个循环之后，组合物b和c表现出比组合物a更低的粘度，组合物a最初是最不具粘性的组合物。
[0274]
振荡测量
[0275]
此测试测量了在静止间隔期间的储能模量(g')和损耗模量(g”)。tanδ参数用于评估组合物的凝胶态。随着每次模拟眨眼，由于凝胶的三维网络的部分解构，tanδ达到最大值，然后在静止时间段期间恢复。结果在表9中示出。
[0276]
[表9]
[0277]
[0278][0279]
组合物a贯穿十个循环表现出tanδ《1。因此，凝胶网络抵抗模拟眨眼的高剪切并且组合物a保持处于凝胶态。
[0280]
除了当剪切速率高时，组合物b贯穿十个循环也保持凝胶态。
[0281]
组合物c在前两个循环的静止时间段期间表现出tanδ《1并且随后被解构。
[0282]
iii.旨在证明根据本发明的组合物的粘膜粘附的体外研究
[0283]
拉伸强度测试
[0284]
在存在和不存在粘蛋白膜的情况下测量和比较最大水凝胶分离力(fmax)。与分离力有关的结果在表10中示出。
[0285]
[表10]
[0286][0287]
当将存在粘蛋白的情况下的fmax值(本文用fmax表示)与不存在粘蛋白的情况下的fmax值进行比较时，观察到根据本发明的所有组合物均显著增加(p《0.001)。
[0288]
这指示水凝胶与粘蛋白之间的正相互作用。因此，水凝胶可以通过与眼睛表面相关的粘蛋白相互作用而被保留，这将增加眼睛保留时间。
[0289]
在点i、ii和iii中呈现的研究和结果显示，根据本发明的所有组合物都表现出适合于眼科用途的物理化学性质。已经证明了适当的粘度和原位胶凝能力，以及关于患者舒适度有利于眼部施用的剪切稀化行为。hec的任选添加使得可以改进粘度同时降低凝胶对剪切应力的耐受性。另外，hec增强了组合物的粘膜粘附性质。然后，在体内评估眼睛停留时间，这允许更好地理解每个参数的重要性。事实上，眼睛停留时间是由在体外单独评估的所有参数的效果的组合产生的。
[0290]
因此，与现有技术的滴眼剂相比，根据本发明的组合物表现出许多优点，具体地关于所述组合物增加在眼睛表面上停留时间超过3小时的能力，以及因此所述组合物的生物利用度。这种增加的生物利用度导致更好的治疗效果，同时允许降低施用频率并且因此减少所施用的药物量。另外，根据本发明的组合物表现出副作用减少，并且其全身吸收降低。
[0291]
iv.使用具有或不具有膜的方法研究活性分子在散瞳效应来源处的释放的体外研究
[0292]
已经使用不同装置对眼科半固体盖仑剂型(galenic form)进行不同的体外释放研究。
[0293]
使用具有以下两种池模型的usp 4(流通池)设备(usp-nf，2013)进行所有药物释放实验：无膜标准池和带膜的用于半固体形式的适配器。进行此研究，以研究组合物a、b和c的体外释放曲线以及hec对释放机制的影响。
[0294]
stf(ph 7.4)用作溶出介质。
[0295]
使用标准池评估体外药物释放
[0296]
为了模拟眼睛表面的水性环境，在所有实验中使用了六个直径为22.6mm的标准池。在封闭配置中操作，将自动化系统连接到蠕动泵。对溶出介质进行手动采样并且通过hplc-uv进行分析。在每个池中，将5mm直径的红宝石珠和1mm直径的玻璃珠放置在流动池的底部以确保层流。将约300μl的水凝胶放置在玻璃珠床中。在测试期间，将150ml的stf以3毫升/分钟、8毫升/分钟和15毫升/分钟的流速循环到每个池中。贯穿整个研究，维持35
±
0.5℃的温度。还测试了5％phe和0.5％tpc的水溶液并且用作参考。结果是n＝6次实验的平均值
±
sd。绘制了用封闭构型获得的药物释放曲线，即累积药物释放百分比(mt/m1，％)对时间(t，分钟)。
[0297]
使用半固体适配器评估体外药物释放
[0298]
为了评估phe和tpc从水凝胶扩散的扩散曲线，使用了用于半固体形式的适配器(“usp 36-nf 31:(1724)半固体药物-性能测试(usp 36-nf 31:(1724)semi-solid pharmaceuticals
–
performance tests)”，2013)。适配器被设计成与usp 4装置的22.6mm池一起使用。
[0299]
适配器由两个基本组件组成：储器，将产品引入所述储器中；以及环，将膜保持在所述环中。将1200μl水凝胶放置在储器中，并且一旦装配有乙酸纤维素膜(0.45μm)，就用特定工具将环拧到储器上。然后将适配器滑入池的圆柱形部分中，使膜面朝下。还应用了封闭系统。将流速设置为15毫升/分钟。测试程序与先前在标准池中描述的相同。
[0300]
活性剂从半固体形式中的释放是复杂的现象。通常涉及两种主要机制。释放可以通过菲克扩散(fickian diffusion)(情况i)或通过系统的松弛/侵蚀(转运情况ii)来控制。在许多情况下，涉及两种机制并且因此释放被称为是异常的。
[0301]
使用佩帕斯-萨林模型(peppas-sahlin model)来定量扩散和侵蚀对活性成分从原位胶凝递送系统中释放的贡献。可以转换佩帕斯-萨林方程。在时间t处的扩散百分比和侵蚀百分比是通过曾氏方程(zeng's equation)获得的，假设系统几何形状的值为0.5。
[0302]
计算相似性因子f2(一种独立于模型的方法)，以用于所有释放曲线的成对比较。首先，进行了phe与tpc之间的释放性能的比较。然后，在每个流速下进行组合物a、b与c之间的比较。
[0303]
另外，根据佩帕斯-萨林方程计算25％、50％和80％的释放时间(分别为t25、t50和t80)。
[0304]
表11(3ml)、12(8ml)和13(15ml)中呈现了在没有半固体适配器的情况下获得的结果。
[0305]
[表11]
[0306][0307]
[表12]
[0308][0309]
[表13]
[0310][0311]
以上结果显示，在标准溶出池中，在由fda批准的usp 4装置上，原位胶凝递送系统表现出随时间推移的快速但持续的释放。所有对照溶液(ctrl)在10分钟内释放超过80％的药物，而组合物a、b和c的80％释放时间(t80)在30和180分钟之间达到，这取决于流量。药物随时间推移的延长释放可以用两种现象解释。药物从基质中的释放是由于扩散，或者药物的释放是这种基质的侵蚀的结果。观察到轻微的初始释放，这是施用后预期的快速诱导散瞳的有利条件。
[0312]
为了比较释放曲线，fda推荐独立于模型的方法。目的是研究相似性因子f2，这使得可以容易地比较曲线。因子f2的值为100意味着两个比较曲线完全相同，并且值为50与在所有时间点下的10％的差异相对应。因此，如果f2的值介于50与100之间，则认为两个曲线
相似(即，小于10％的差异)。通过比较组合物a、b和c在三种不同流速下的phe和tpc释放曲线而获得的f2值总结在表14中(相似性因子f2：活性剂在3毫升/分钟、8毫升/分钟和15毫升/分钟流速下的释放曲线的成对比较、phe和tpc释放曲线的组成内比较、phe释放曲线的组成间比较和tpc释放曲线的组成间比较)。
[0313]
[表14]
[0314][0315]
总释放量的25％、50％和80％的时间也是根据佩帕斯-萨林模型方程计算的，并且平均值在表15中示出。对于根据本发明的所有组合物，流速的增加导致t25、t50和t80的降低。
[0316]
[表15]
[0317][0318]
v.关于人角膜细胞的耐受性和细胞毒性研究，人角膜上皮细胞中的hce细胞系细胞毒性测定
[0319]
在补充有10％胎牛血清(欧洲生物公司(eurobio))、1％谷氨酰胺(欧洲生物公司)和1％青霉素和链霉素(欧洲生物公司)的杜尔贝科必需培养基(dulbecco's essential medium)(法国于利斯的欧洲生物技术公司)中培养人角膜上皮(hce)细胞系。将培养物在湿润的温育箱中在5％co2中维持在37℃下。
[0320]
所有孔接种相同数量的细胞(9
×
104个细胞/毫升溶液)。24小时后，细胞达到约70％到80％的汇合。将细胞用pbs进行洗涤，并且与100μl凝胶原位温育30分钟。使用白色凝胶(不含活性成分的组合物a、b和c)、5％phe和0.5％tpc对照溶液、1.29％nacl对照溶液(表现出与原位凝胶相同的渗透压)和可商购获得的滴眼剂(无菌单位剂量的0.5％和10％)作为对照。然后将细胞用pbs进行洗涤。在温育之后并且在培养基中恢复24小时之后立即进行中性红测试。实验一式三份地进行。
[0321]
中性红测试(瑞士布克斯的弗露卡分析公司(fluka,buchs,switzerland))是基于活细胞掺入中性红的能力的细胞活力测试，中性红是一种弱阳离子染料，其通过非离子扩散很容易穿透细胞膜并且在溶酶体中积聚。中性红与溶酶体基质中的阴离子位点结合。溶酶体膜的完整性与细胞活力密切相关，并且通过中性红荧光(在535nm处激发；在600nm处发射)进行评估[30]。在37℃下温育3小时之后，根据由borenfreund和puerner验证的方案，将细胞用pbs进行洗涤并且与每个孔200μl的中性红溶液(50μg/ml)一起温育。在37℃下在含有5％co2的潮湿气氛中温育3小时之后，将孔用pbs进行洗涤以去除任何剩余的未掺入染料。然后使用每个孔200μl裂解溶液(1％乙酸、50％乙醇和49％h2o)从细胞中释放染料，然后使用用于微孔板的荧光计(safire；法国里昂的帝肯公司(tecan,lyon,france))测量荧光。
[0322]
细胞毒性测试的结果在表16中示出。
[0323]
[表16]
[0324][0325]
首先，当将根据本发明的组合物施用于hce细胞时，所述组合物诱导活力的显著降低(p《0.001)，在24小时之后没有恢复。对于渗透压值为430mosm/l的1.29％nacl对照溶液，未观察到对细胞活力的影响(活力为98.7
±
6.0％)。因此，组合物a、b和c的相对高的渗透压不被认为是诱导毒性的参数。
[0326]
然后，测试含有5％phe和0.5％tpc的对照溶液。观察到活力显著降低(p《0.001)，相似于针对组合物a、b和c观察到的活力(p》0.05)。另外，分别测试了可商购获得的phe(10％)和tpc(0.5％)滴眼剂。再次，10％诱导了活力的显著降低，其中活力值相似于组合物a、b和c的活力值(p》0.05)。
0.5％诱导了细胞活力的较小降低，但这仍然不大于39.3
±
16.1％。因此，组合物a、b和c表现出的表观毒性应该归因于主要由phe但也由tpc诱导的毒性。
[0327]
最后，眼睛细胞膜的完整性未被不含phe和tpc的原位凝胶组合物(组合物a'、b'和c')改变并且保持大于100％。在暴露于组合物a'、b'和c'以及暴露于未经处理的细胞之后，中性红测定显示活力没有显著差异(p》0.05)。因此，所开发的施用系统不会诱导毒性，这是由于活性成分所致。尽管如此，fda和ema等已经广泛使用并且批准使用phe和tpc。另外，phe和tpc用作一次性散瞳治疗，并且不旨在用于长期眼部施用。因此，所开发的组合物的毒性不大于可商购获得的滴眼剂的毒性。另外，由于使用原位胶凝递送系统诱导有效散瞳可能需要的较少量的phe和tpc，因此可以降低眼部毒性。
[0328]
vi.根据本发明的组合物对瞳孔扩张和在施用位点处的持久性的有效性的体内成像研究。
[0329]
体内实验在保存在容纳盒(containment box)中的非麻醉兔子中进行。然而，兔子的头部可以自由移动，因此在实验期间允许正常的眼睑和眼睛移动。
[0330]
使用塑料巴斯德移液管(pasteur pipette)将一滴制剂小心地施用于动物的结膜囊中。对侧眼不进行处理并且用作对照。测量了不同组成的液滴的体积以及对照溶液的体积，并且未观察到显著变化(从28.6
±
0.8μl到30.1
±
1.2μl)。将柔性滑块放置在兔子的脸颊上，并且使用配备有提供变焦和自动对焦的canon ef 100mm f/2.8微距镜头的canon eos 350d来记录双眼的图像，从而允许以高精度捕获眼睛区域并且然后使得可以聚焦在所关注区域上。将兔子放置在外科手术照明(halux led 20p sx，德龙格斯医用照明)下，以保持眼睛的恒定照明并且避免散瞳的生理变化。在施用之前(参考图像)以及在施用组合物之后至多五小时进行采集。
[0331]
将根据本发明的组合物a、b和c与对照溶液(ctrl)(无菌水中的5％苯肾上腺素和0.5％托吡卡胺)并且与可商购获得的滴眼剂(ced)进行比较：(托吡卡胺0.5％)和(盐酸苯肾上腺素10％)。在可商购获得的滴眼剂的情况下，遵循临床使用的标准方案：从t0到35分钟，每种滴眼剂滴注4滴，间隔五分钟。通过使用image j开源图像处理软件分析图像，最终获得散瞳的动力学数据。测量瞳孔直径，并且将直径减去参考直径对时间作图，以表达瞳孔扩张。计算曲线下面积(auc)。结果是对三只不同兔子进行的n＝3次实验的平均值
±
标准偏差。在两次实验之间，每只兔子的最短洗涤时间段为48小时。
[0332]
在方案结束时，由已批准社团将兔子置于养护护理中；没有必要处死。
[0333]
有效散瞳被定义为瞳孔直径相对于参考直径(t0)增加5mm或更多，并且被定义为不存在瞳孔反射。
[0334]
组合物a、b和c在小于10分钟内提供有效的散瞳并且保持足够的扩张持续超过3小时。相比之下，对照溶液在约20分钟内实现了有效的散瞳并且保持足够的效果持续小于一小时。重要的是应注意，一滴根据本发明开发的组合物含有与一滴对照溶液相同量的phe和tpc。因此，滴注相同量的phe和tpc。
[0335]
计算曲线下面积，并且与对照溶液相比，在组合物a、b与c之间观察到显著差异，证明了原位胶凝组合物对生物利用度的直接影响(表17)。这种瞳孔扩张的显著增加可以通过先前针对所开发的原位胶凝递送系统评估的延长的停留时间和持续的药物释放来解释。
[0336]
[表17]
[0337]
组合物auc
0-300分钟
(mm分钟)a1781.6
±
121.7b1618.8
±
151.8c1586.2
±
120.9对照1080.5
±
169.1ced1690.6
±
97.6
[0338]
体内停留时间(表18)和体内散瞳(表19)的结果呈现如下。
[0339]
[表18]
[0340][0341]
[表19]
[0342][0343]
通过施用ced，在大约20分钟内实现了有效的散瞳并且保持3小时。除了前20分钟之外，如果在ced施用后散瞳强度显著低于组合物a、b和c的散瞳强度，则散瞳的强度曲线是相当的。
[0344]
在施用单滴之后，根据本发明的所有组合物已经允许有效的散瞳。另外，比参考方案更快地获得足够的散瞳。组合物a、b和c诱导的散瞳的强度和持续时间相似于施用ced后获得的散瞳的强度和持续时间。
[0345]
因此，根据本发明的组合物可以被认为是现有治疗的有希望的替代方案。在滴注单滴液体之后，可以诱导有效的散瞳，所述液体在施用到眼睛表面之后会胶凝，从而增加药物的停留时间和持续释放，显著增加生物利用度。
[0346]
另外，根据ced方案施用的phe和tpc的量分别为8倍和4倍更多。尽管如此，瞳孔的扩张出现较慢并且没有持续更长时间，这突出了在施用经典滴眼剂之后在眼睛表面上活性
剂的较低生物利用度和较高消除速率。
[0347]
因此，本发明导致副作用的风险降低。一方面，可以减少对眼睛表面区域的局部刺激，因为使用在ced上开发的原位胶凝递送系统诱导散瞳所需的活性成分的总量更小。已经显示，phe和tpc对人角膜上皮细胞具有显著细胞毒性。在实验期间，在施用一滴苯肾上腺素(10％)(在施用30秒内另外眨眼5到6次)后观察到导致眨眼频率增加的不适。在施用组合物a、b和c之后没有观察到眨眼频率的增加或不适。这种效果可能是由于苯肾上腺素滴眼剂的高渗透压(》900mosm/l)所致。据报道，在施用这些滴眼剂之后，人会多次出现刺痛感[44]。因此，可以通过使用原位胶凝递送系统来改进患者舒适度。另一方面，由于从眼睛表面消除的可能被全身吸收的药物减少，因此可以降低全身性副作用。这是因为增加的眼睛停留时间允许phe和tpc保留在眼睛表面区域，这将导致更大量的局部吸收的药物。
[0348]
使用其它胶凝聚合物的比较测试
[0349]
已经测试了其它胶凝、增粘和/或粘膜粘附聚合物，如泊洛沙姆、卡波姆、藻酸盐或黄原胶。
[0350]
泊洛沙姆表现出取决于浓度和温度的胶凝，这不适用于根据本发明的眼部应用，因为在存在泪液的情况下的稀释效应会引起胶凝温度的巨大可变性。
[0351]
藻酸盐仅在存在钙离子的情况下才会胶凝。泪液中的钙浓度太低以致于无法使胶凝适用于所设想的应用和本发明的目的。
[0352]
黄原胶甚至在使用之前就导致制剂胶凝。这种胶凝具体地是由于离子化苯肾上腺素与黄原胶链的负电荷之间的离子相互作用。
[0353]
卡波姆是ph-胶凝聚合物。卡波姆在酸性ph下呈粘性液体形式，并且在中性ph下呈凝胶形式。对于患者耐受性和舒适度而言，向眼睛施用酸性溶液不是最佳的。