一种含紫杉烷类药物的胶束、其制备方法及应用与流程

1.本发明属于医药领域，具体是涉及一种含紫杉烷类药物的胶束、其制备方法及应用。


背景技术：

2.紫杉烷类药物是从植物中得到的一大类天然药物，结构分类上属于二萜类。卡巴他赛和多西他赛均属于紫杉烷类药物，为脂溶性化合物，由于其水溶性差、半衰期短以及毒性大等缺点限制了其在临床上的应用。目前，国内外上市的多西他赛注射液和卡巴他赛注射液均为将药物溶解于吐温-80中，临床应用中需要严格使用专用的注射用溶媒将其稀释，且操作要求严格，输液时也需要采用特殊的输液装置等，不仅使用方法繁琐，而且由于制剂中含有大量的吐温-80，非常容易引起溶血及过敏等不良反应，需提前服用地塞米松等药物预防，临床用药不方便，用药安全性低(annals of allergy,asthma and immunology,2005,95(6):593-599；journal of investigational allergology and clinical immunology,2016,26,394-396)。迄今为止，此问题并没有得到较好的解决。
3.现有技术中已有含紫杉烷类药物的脂质体，但是其也存在着诸多缺点。如：脂质体的制备过程复杂，需要多种脂质成分的复合(至少两种脂质成分)，粒径控制需要特殊的设备和装置；储存过程中易絮凝等。
4.江苏大学张丽等制备的卡巴他赛脂质体的包封率仅有约86％，且冻干前后的粒径变化较大，从68nm增大至108nm，增加了复溶后脂质体的不稳定性。(张丽.卡巴他赛冻干脂质体的制备及药代动力学研究[d].江苏:江苏大学,2017.)
[0005]
在普通脂质体处方中添加一定比例的聚乙二醇衍生化磷脂可以制备成长循环脂质体。peg长链在脂质体表面形成空间位阻和亲水保护层，能阻止吞噬细胞对脂质体的识别和摄取，增加其在血液中的循环时间，赋予此类型脂质体的长循环性能，但是当聚乙二醇衍生化磷脂和磷脂的质量比超过一定数值时，药物的包封率和稳定性会显著下降，这是由于聚乙二醇衍生化磷脂含量高时，很难插入脂质体的磷脂双分子层，并且容易与磷脂形成混合胶束而影响脂质体的稳定性。(colloids and surfaces b:biointerfaces 155(2017):266-275.)
[0006]
聚合物纳米胶束是近年来发展起来的针对难溶性药物的载药系统，具有核壳结构，其中核为疏水性部分，壳为亲水性部分。聚合物纳米胶束可以将难溶性药物装载于核壳分界层处达到对难溶性药物的增溶。与常用的增溶剂吐温-80和聚氧乙基代蓖麻油等相比，聚合物胶束载体常选择生物降解性材料，安全性高，因此作为难溶性药物的载体辅料具有很好的应用前景(journal of controlled release,2001,73,137-172；pharmaceutical research,2007,24(1),1-16)。目前，有多项紫杉烷类药物的纳米制剂正在研究中(cn103990135a；cn107625730a；cn104758256a)，这些纳米制剂都在一定程度上解决了紫杉烷类药物水溶性差，不良反应多，生物利用度低等问题。但是目前的紫杉烷类药物纳米制剂都存在载药量低，包封率低以及稳定性差的问题(cn103990135a；cn107625730a；
cn104758256a；cn102293736a；cn101732234a；cn101804021a；cn101829046a)。现有的纳米制剂的载药量一般低于5％，包封率小于90％，导致在制剂中会引入大量的载体材料，由于很多纳米材料还没有在临床中得到安全性验证，甚至存在在人体内降解产生有毒物质的隐患，会限制其在临床中的使用(journal of controlled release,2009,133,11-17；international journal of pharmaceutics,2014,464(1-2):178-184.)；另一方面，大部分难溶性药物的纳米制剂都存在稳定性差的问题，在很短时间内就会发生包封率降低，导致药物泄露，特别是对紫杉烷类药物，当其包封率下降至95％以下时，药液中就会出现不溶性微粒，影响制剂的质量，使其在临床中无法得到真正应用(cn103990135a，cn107625730a，cn104758256a)；同时很多纳米制剂存在使用前配制过程非常复杂，有的甚至需要加热搅拌过程，给临床应用带来了诸多风险(cn101972480a；drug delivery and translational research,2018,5,1365-1379)。
[0007]
聚乙二醇衍生化磷脂，例如peg-dspe，作为胶束载药系统具有一系列的独特优势，而且peg-dspe聚合物分子是获得fda批准的药用辅料，安全性好(journal of controlled release,2013,171,133
–
142；pharmaceutical research,2012,29,1977-1989；journal of the national cancer institute,2007,99,1004-1015)。我们前期的研究表明，某些水溶性小分子药物可以成功地通过在水溶液中以一个简单的一步自组装的方式加载到形成的peg-dspe纳米胶束中(pharmaceutical research,2010,27(2),361-370)，这些载药胶束通过拆卸和插入细胞膜的方式将它们的有效载荷的药物卸载到细胞膜上，从而导致膜流动性的增加并加速药物的细胞内转运(journal of controlled release,2012,160,637-651)。同时，最近我们发现peg-dspe纳米胶束具有天然分子伴侣的功能，其外壳形成的亲水性纳米笼，能够容纳胰岛素的a链和b链，并促进两条链的正确折叠并防止胰岛素的聚集，根据形成的纳米笼的空间结构，peg-dspe纳米胶束可以容纳分子量小于20kd的蛋白质分子(biomaterials,2016,77,139-148)。尽管peg-dspe具有优秀的载药能力，但是其对装载的药物具有一定的结构选择性，如盐酸阿霉素，酒石酸长春瑞滨，硫酸长春新碱能够成功的载入peg-dspe胶束，包封率高达99.9％(cn1840193a；cn101322681a；cn1739525a；cn101138545a)，然而peg-dspe胶束并不具有装载所有小分子药物的能力，比如盐酸吉西他滨与紫杉醇不能成功稳定的载入peg-dspe胶束中，无法实现临床用药的目的(pharmaceutical research,2010,27(2),361-370；philosophical transactions of the royal society a,20120309,371；molecular cancer therapeutics,2014,13(12),2864-2875)。


技术实现要素：

[0008]
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术无法有效制备高载药量、高包封率及稳定性好的紫杉烷类药物纳米胶束制剂的问题；而提供了一种含紫杉烷类药物的胶束、其制备方法及应用。载药量低、包封率低以及稳定性差是影响纳米药物制剂在临床应用的主要因素。本发明提供的紫杉烷类药物纳米胶束，其含有治疗有效量的紫杉烷类药物；载药量高达6.25％～9.09％，包封率达到98％～100％以及复溶后纳米胶束稳定性(及包封率为98％～100％)大于24小时；可以有效地解决其在临床应用中出现的问题。同时本发明提供的载药量大、包封率高及稳定性好的紫杉烷类药物纳米胶束是一种动力学稳定的体系，
临床配制简单，不需要使用特殊输液装置等特点，并在体内具有靶向作用，能增加药物在肿瘤组织的分布，提高疗效、降低毒性。
[0009]
本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题的。
[0010]
本发明提供了一种含物质a的胶束，按重量份数计，其包括如下组分：1份物质a和5份～25份聚乙二醇衍生化磷脂；所述的物质a为多西他赛和/或卡巴他赛；所述的聚乙二醇衍生化磷脂包括聚乙二醇部分和磷脂部分，其磷脂部分是二(c
12-c
24
脂肪酰基)磷脂酰乙醇胺。
[0011]
本发明的某一方案中，聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂部分可为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(c
18
，简称dspe)、二棕榈酸磷脂酰乙醇胺(c
16
，简称dppe)、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(c
14
，简称dmpe)和二油酰磷脂酰乙醇胺(c
18
，简称dope)中的一种或多种；优选二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)。
[0012]
所述的聚乙二醇衍生化磷脂中，其聚乙二醇分子量范围为1000～5000，例如聚乙二醇分子量为2000。
[0013]
本发明的某一方案中，所述的聚乙二醇衍生化磷脂可为聚乙二醇1000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg1000-dspe)、聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg2000-dspe)、聚乙二醇5000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg5000-dspe)、聚乙二醇2000二油酰基磷脂酰乙醇胺(peg2000-dope)、聚乙二醇2000二棕榈酰磷脂酰乙酰胺(peg2000-dppe)或聚乙二醇2000二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(peg2000-dmpe)；鉴于peg-dspe聚合物分子是获得fda批准的药用辅料，安全性好，因此，优选peg2000-dspe。
[0014]
本发明的某一方案中，按重量份数计，其包括如下组分：1份物质a和10份～15份聚乙二醇衍生化磷脂。
[0015]
本发明的某一方案中，所述的物质a的胶束由所述的物质a和所述的聚乙二醇衍生化磷脂组成。
[0016]
本发明的某一方案中，按重量份数计，其包括如下组分：1份多西他赛和5份或15份聚乙二醇衍生化磷脂(例如peg2000-dspe)。例如，由1份多西他赛和5份或15份所述的聚乙二醇衍生化磷脂(例如peg2000-dspe)组成。其载药量可高达6.25％。
[0017]
本发明的某一方案中，按重量份数计，其包括如下组分：1份卡巴他赛和5份、10份或15份聚乙二醇衍生化磷脂(例如peg1000-dspe、peg2000-dspe、peg5000-dspe、peg2000-dope、peg2000-dppe、peg2000-dmpe)。例如由1份卡巴他赛和5份、10份或15份聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺组成，或，由1份卡巴他赛和10份聚乙二醇1000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇5000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇2000二油酰基磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇2000二棕榈酰磷脂酰乙酰胺或聚乙二醇2000二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺组成)组成。其载药量可高达9.09％。
[0018]
在本发明中，所述的含物质a的胶束，其为核壳结构的球形；其中，内核为磷脂层，外壳为聚乙二醇(peg)层，所述的物质a分布在所述的聚乙二醇衍生化磷脂胶束内(即包裹在胶束内部的核壳分界层处)。
[0019]
在本发明的某一方案中，所述的胶束的粒径范围可为5-50nm，优选10-20nm。
[0020]
在本发明的某一方案中，所述的胶束的多分散度(pdi)为小于0.3，粒径分布较均一；优选小于0.2，例如当所述的物质a为卡巴他赛时，多分散度(pdi)为0.100-0.140。当所
述的物质a为多西他赛时，多分散度为0.100-0.180。
[0021]
在本发明的某一方案中，当所述的聚乙二醇衍生化磷脂为peg2000-dspe时，所述的胶束的平均直径为10-15nm(例如12nm)。
[0022]
在本发明的某一方案中，当所述的聚乙二醇衍生化磷脂为peg2000-dspe时，所述的胶束的聚集数约为90。
[0023]
本发明的另一个目的是提供一种含紫杉烷类药物的物质的制备方法，其包括以下步骤：
[0024]
步骤1：将溶液中有机溶剂除去，得到含紫杉烷类药物的聚合物脂膜；其中，所述的溶液由1份紫杉烷类药物、5份～25份聚乙二醇衍生化磷脂与所述的有机溶剂组成；所述的紫杉烷类药物为多西他赛和/或卡巴他赛；所述的聚乙二醇衍生化磷脂包括聚乙二醇部分和磷脂部分，其磷脂部分是二(c
12-c
24
脂肪酰基)磷脂酰乙醇胺；
[0025]
步骤2：将步骤1得到的聚合物脂膜在水性溶剂中进行水化，得到含紫杉烷类药物的物质即可。
[0026]
本发明的某一方案中，聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂部分可为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)、二棕榈酸磷脂酰乙醇胺(dppe)、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(dmpe)和二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)中的一种或多种；优选二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(dspe)。
[0027]
所述的聚乙二醇衍生化磷脂中，其聚乙二醇分子量范围为1000～5000，例如聚乙二醇分子量为2000。
[0028]
本发明的某一方案中，所述的聚乙二醇衍生化磷脂可为聚乙二醇1000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg1000-dspe)、聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg2000-dspe)、聚乙二醇5000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg5000-dspe)、聚乙二醇2000二油酰基磷脂酰乙醇胺(peg2000-dope)、聚乙二醇2000二棕榈酰磷脂酰乙酰胺(peg2000-dppe)或聚乙二醇2000二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(peg2000-dmpe)；鉴于peg-dspe聚合物分子是获得fda批准的药用辅料，安全性好，因此，优选peg2000-dspe。
[0029]
本发明的某一方案中，按重量份数计，所述的溶液包括如下组分：1份紫杉烷类药物和10份～15份聚乙二醇衍生化磷脂。
[0030]
本发明的某一方案中，按重量份数计，所述的溶液包括如下组分：1份多西他赛和5份或15份聚乙二醇衍生化磷脂(例如peg2000-dspe)。
[0031]
本发明的某一方案中，按重量份数计，所述的溶液包括如下组分：1份卡巴他赛和5份、10份或15份聚乙二醇衍生化磷脂(例如由1份卡巴他赛和5份、10份或15份聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺组成，或，由1份卡巴他赛和10份聚乙二醇1000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇5000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇2000二油酰基磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇2000二棕榈酰磷脂酰乙酰胺或聚乙二醇2000二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺组成)。
[0032]
步骤1中，所述的有机溶剂可为本领域该类制备方法中常规的有机溶剂，例如醇类溶剂(又例如甲醇和/或乙醇)、卤代烃类溶剂(又例如氯仿)和腈类溶剂(又例如乙腈)中的一种或者至少两种的混合物，优选乙醇和/或乙腈，最优选乙醇。
[0033]
本领域技术人员可以理解，所述的步骤1)中的所述的紫杉烷类药物、聚乙二醇衍生化磷脂与有机溶剂的溶液，目的是将药物和聚乙二醇衍生化磷脂溶于有机溶剂中，使两者可以在分子层面上接触，因此有机溶剂的量可不做特别限定，控制在将两者溶解即可。
[0034]
本发明中，所述的除去有机溶剂的操作可为本领域中的常规操作，例如，通过减压旋蒸方法除去有机溶剂和/或在真空条件下除去有机溶剂；本发明中，所述的旋蒸温度为30℃-60℃，优选为40℃
±
5℃，其旋转速度10～500r/min，优选为60～150r/min。
[0035]
本发明中，所述的水性溶剂选自去离子水、pbs缓冲溶液(例如0.01m-0.2m磷酸缓冲盐溶液)、生理盐水(0.9％的氯化钠水溶液)、葡萄糖注射液(例如5-50g/ml)和氨基酸注射液(例如5-10g/ml)中的一种或者至少两种的混合物，优选为去离子水。
[0036]
本发明中，所述的紫杉烷类药物在所述的水性溶剂中的质量体积比可为0.5mg/ml-15mg/ml，优选5mg/ml-10mg/ml(例如，当所述的紫杉烷类药物为多西他赛时，为5-6mg/ml，当所述的紫杉烷类药物为卡巴他赛时，为5-8mg/ml)。
[0037]
所述的水化的操作可为本领域该类水化的常规操作，本发明中，可为涡旋震荡摇动或者超声水化。所述的涡旋震荡摇动水化可为1-3小时。超声水化的时间可为1-60分钟，优选超声时间为10-30分钟(例如20分钟)，其超声声强可在0.1～15w/cm2(例如10w/cm2)，频率可为0.1～100khz。(例如40khz)
[0038]
所述的水化的温度可为本领域该类水化操作中常规的温度，例如为0℃～60℃；本发明中，优选20℃-40℃(例如20℃-40℃的水浴)；例如30-40℃。
[0039]
本发明的某一方案中，所述的水化可在无药用辅料或者在药用辅料存在下进行。较佳地，在无药用辅料存在下进行。
[0040]
本发明的某一方案中，所述的制备方法中，所述的步骤2中还可包括过滤步骤，所述的过滤步骤可为本领域该类方法中常规的过滤步骤；例如，其为如下步骤：水化后(例如当所述的水性溶剂为去离子水时)，经过纳米级滤膜挤压过滤(除去杂质)，得到所述的含紫杉烷类药物的物质即可；或者，水化后(例如当所述的水性溶剂为去离子水时)，与药用辅料的混合物经过纳米级滤膜挤压过滤(除去杂质)，得到所述的含紫杉烷类药物的物质即可；较佳地，在去离子水中水化后，与药用辅料的混合物经过纳米级滤膜挤压过滤(除去杂质)，得到所述的含紫杉烷类药物的物质即可。
[0041]
所述的步骤2中，如上所述的药用辅料可为本领域该类胶束中常规的药用辅料，例如冻干赋型剂(或称冻干保护剂)。所述的冻干赋型剂可为葡萄糖，甘露醇，乳糖，海藻糖、蔗糖、右旋糖苷、甘氨酸、果糖和山梨醇的一种或多种，优选为葡萄糖。所述的冻干赋型剂与所述的紫杉烷类药物的质量比可为0至25:1(例如15.6:1、20.8:1)。所述的冻干赋型剂还有另一功能，可以帮助冻干粉快速复溶，减少冻干粉复溶至澄清所需时间。
[0042]
本发明中，所述的纳米级滤膜可选自孔径为10～300nm的滤膜，优选为孔径为220nm的滤膜，滤膜材质为混合纤维素酯微孔滤膜、尼龙滤膜、聚四氟乙烯滤膜、聚偏氟乙烯膜、聚醚砜滤膜或聚丙烯滤膜，优选为聚偏氟乙烯膜或聚醚砜滤膜，最优选为聚醚砜滤膜。
[0043]
在本发明的某一方案中，其可包括以下步骤：将所述重量份数的紫杉烷类药物、聚乙二醇衍生化磷脂溶于所述的有机溶剂(例如乙醇)中，旋转蒸发(例如在30℃-60℃)，除去所述的有机溶剂，形成均匀的聚合物脂膜，加入水性溶剂(例如去离子水)，20℃-40℃(例如30-40℃)水浴中超声水化，纳米级滤膜(例如220nm)过滤除去杂质，得到所述的含紫杉烷类药物的物质即可；或者，水化后，与药用辅料混合，纳米级滤膜(例如220nm)过滤除去杂质，得到所述的含紫杉烷类药物的物质即可。
[0044]
本发明的某一方案中，所述的含紫杉烷类药物的物质由所述的紫杉烷类药物和所
述的聚乙二醇衍生化磷脂，或还包括所述的水性溶剂组成；或者，当存在所述的药用辅料时，所述的含紫杉烷类药物的物质由所述的紫杉烷类药物、所述的聚乙二醇衍生化磷脂和所述的药用辅料，或还包括所述的水性溶剂组成。
[0045]
本发明的某一方案中，所述的制备方法还包括冻干步骤，所述的冻干步骤的操作可为本领域常规的操作。
[0046]
本发明的某一方案中，所述的含紫杉烷类药物的物质为含所述的紫杉烷类药物的胶束；例如为如上所述的含物质a的胶束；其通过如下原理得到：所述的含紫杉烷类药物的聚合物脂膜中所述的聚乙二醇衍生化磷脂，经所述的水化作用，作为载体材料在所述的水性溶剂中通过相互作用力自组装形成复合骨架，将所述的紫杉烷类药物包裹于聚乙二醇衍生化磷脂形成的胶束中。
[0047]
本发明中，当所述的含紫杉烷类药物的物质为含所述的紫杉烷类药物的胶束时，可通过高压乳匀、高速均质或超声等工艺减小胶束的粒径和粒径分布。所述的胶束的粒径范围可为5-50nm，优选10-20nm。所述的胶束的多分散度(pdi)为小于0.3，粒径分布较均一；优选小于0.2，例如当所述的物质a为卡巴他赛时，多分散度(pdi)为0.100-0.140。当所述的物质a为多西他赛时，多分散度为0.100-0.180。所述的胶束的平均直径可为10-15nm。当所述的聚乙二醇衍生化磷脂为peg2000-dspe时，所述的胶束的聚集数可为90。其中紫杉烷类药物的包封率可大于98％(例如100％)。其中多西他赛纳米胶束的室温稳定性不短于4小时。其中卡巴他赛纳米胶束的室温稳定性不短于8小时。
[0048]
本发明还提供了一种含紫杉烷类药物的物质，其按照如上所述的制备方法制备得到。
[0049]
本领域技术人员可以理解，所述的含紫杉烷类药物的物质中“实质上不含”有机溶剂；本文所用“实质上不含”意指没有或无关紧要的量(即对所述的含紫杉烷类药物的物质的物理性质无可测量影响的量)。例如，可不包括有机溶剂，或者还包括如上所述的有机溶剂；所述的有机溶剂为制备过程中残留的本领域该类制备方法中常规的有机溶剂(例如甲醇、乙醇、氯仿、乙腈或者它们的混合物，又例如乙醇和/或乙腈，再例如乙醇)。所述的有机溶剂可在2％(有机溶剂/药物的重量百分比)以内。
[0050]
本发明提供了一种药物组合物，其包括如上所述的含物质a的胶束或如上所述的含紫杉烷类药物的物质、和药用辅料。
[0051]
所述的药物组合物可为冻干形式的制剂、注射剂、口服制剂等，其经本领域常规的制剂工艺，如冷冻干燥、喷雾干燥、减压蒸发等制备得到。
[0052]
本发明的某一方案中，所述的药物组合物根据需要可以是溶液形式，也可以是冻干形式，优选为冻干形式。
[0053]
所述的药用辅料可为本领域该类药物组合物中常规的药用辅料；例如，水性溶剂和/或冻干赋形剂；所述的水性溶剂可为去离子水、pbs缓冲溶液(例如0.01m-0.2m磷酸缓冲盐溶液)、生理盐水(0.9％的氯化钠水溶液)、葡萄糖注射液(例如5-50g/ml)和氨基酸注射液(例如5-10g/ml)中的一种或者至少两种的混合物，优选为去离子水；所述的冻干赋形剂可为葡萄糖，甘露醇，乳糖，海藻糖、蔗糖、右旋糖苷、甘氨酸、果糖和山梨醇的一种或多种，优选为葡萄糖。
[0054]
本发明还提供了一种如上所述的含物质a的胶束或如上所述的含紫杉烷类药物的
物质在制备治疗癌症的药物中的应用。其中，所述的物质a或所述的紫杉烷类药物可为治疗有效量的。所述的癌症选自乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、头颈部癌、胰腺癌、小细胞肺癌、胃癌、黑色素瘤、软组织肉瘤。
[0055]
为了更好的理解本发明的内容，我们对一些专业术语解释如下。
[0056]
在本发明中所使用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0057]
在本技术中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药用辅料。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0058]
所述的药用辅料可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。所述的辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体ph值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
[0059]
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
[0060]
本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、肌内)给药。
[0061]
术语“胶束”是指双亲性分子在水溶液中的浓度超过临界胶团浓度时(cmc)，能够自发地聚合形成胶束。胶束的结构与脂质体不同，不具有脂双层的结构特征。一般来讲，胶束的结构为疏水部分向内，形成疏水核，亲水部分向外形成亲水表面。胶束粒径小，平均粒径在10～50nm左右。因此，其不但是热力学稳定体系，而且是动力学稳定体系。另外，胶束颗粒不易聚集分层，包载容量高，即在低浓度时可包载较高的药量。
[0062]
术语“胶束聚集数”是胶束大小的量度，即缔合成胶束的表面活性剂分子或离子单体数。
[0063]
术语“治疗有效量”是指所述的物质a或所述的紫杉烷类药物产生治疗效果的用量。根据本发明，所述的物质a或所述的紫杉烷类药物的单位剂量(每平方米体表面积的所用的药物的量)为5～100mg/m2，优选单位剂量10～20mg/m2，最优单位剂量为20mg/m2，剂量将根据每个特殊个体的需要而调整。
[0064]
本发明中，所述的聚乙二醇衍生化磷脂为聚乙二醇分子通过共价键与磷脂分子上的含氮碱基结合而形成。其结构中，磷脂部分的脂肪酸包含的碳原子数为10～24个，优选的是12、14、16、18、20、22、24个碳原子(例如14、16、18个)，再优选的是18个碳原子；脂肪酸链可以是饱和的，也可以是部分饱和的，较佳地，所述的脂肪酸为月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、
硬脂酸或油酸或亚油酸、二十碳脂肪酸、山俞酸和lignocerate(二十四烷酸)中的一种或多种。
[0065]
本发明的胶束制剂以聚乙二醇衍生化磷脂为主要基质，聚乙二醇分子在包载药物的疏水核外形成亲水性保护层，可以避免药物与血液中的酶等蛋白分子接触和保护纳米胶束不被体内的网状内皮系统吞噬，延长纳米胶束在血液循环中的保留时间；药物包载于胶束中的疏水核中，可以使药物免受外界因素(水、氧、光)的破坏，大大提高药物在储存过程中的稳定性；除此以外，同时改变药物在体内分布的动力学性质，进而增强疗效、降低毒性。
[0066]
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
[0067]
本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0068]
本发明的积极进步效果在于：1)所提供的所述的紫杉烷类药物胶束制剂选用了安全且成分简单的聚合物载体材料，提高了所述的紫杉烷类药物的溶解性和制剂的顺应性，实现了具有充分临床效果的药物装载量，载药量可高达6.25％～9.09％，且药物包封率高达98％～100％，能以较低的辅料用量下实现所述的紫杉烷类药物的装载。
[0069]
2)本发明所述的紫杉烷类药物纳米粉状制剂，提高了药物的稳定性，顺应性和安全性。所述的粉状制剂溶解后可水化成纳米胶束制剂，稳定性好，室温放置稳定性(包封率98％～100％)大于24小时，可直接用于静脉注射，不用特殊的输液装置。其在体外条件下，由于没有白蛋白，免疫球蛋白，血红蛋白等等体内相关蛋白的竞争性结合，其稳定性较高；当载药胶束进入血液中后，由于血流速度，血压，蛋白的相互作用，胶束会逐步解离释放药物分子。
[0070]
3)所述的紫杉烷类胶束的平均粒径在10-20nm，能够利用肿瘤组织的渗透增强和滞留效应(epr效应)实现纳米制剂对肿瘤的被动靶向，促进药物在肿瘤组织的选择性分布，可以增加药效并减少系统毒副作用。
[0071]
4)本发明的制备工艺简单，重复性好，适合工业化生产。
附图说明
[0072]
图1为实施例9中不同卡巴他赛制剂对小鼠体重的影响。
[0073]
图2为实施例10中卡巴他赛胶束对mc-38细胞的细胞毒作用。
具体实施方式
[0074]
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
[0075]
载药胶束粒径分析
[0076]
采用动态光散射法(dynamic light scattering,dls)测定载药胶束的粒径分布。用生理盐水将样品稀释至1mg/ml，取1ml样品，利用malvern zetasizer nano-zs光散射粒度分析仪测量载药胶束的粒径分布以及多分散度pdi。仪器的激光束波长设定为633nm，入射光与散射光束的夹角为90
°
。每个样品测定20个循环时间，测定温度设定为25℃。每个制剂的测定结果为3批制剂测定结果的平均值。多分散度(pdi)表示粒子大小的均匀程度，多
分散度越小则粒子越均匀。
[0077]
药物包封率和载药量
[0078]
取1ml载药胶束溶液，经220nm微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法测定载药胶束以及过滤液中载药胶束的浓度，采用下述公式计算包封率和载药量。
[0079]
包封率％＝c2/c1
×
100％
[0080]
式中，c1：载药胶束溶液中药物浓度；c2：220nm滤膜过滤后，载药胶束溶液中药物浓度(未被胶束包封的所述药物以固体形式过滤除去)。通过高效液相色谱法分别测定溶液中从载药胶束中释放出的药物浓度。
[0081]
载药量％＝(c2
×
v)/(c1
×
v m)
×
100％
[0082]
式中，v：载药胶束体积；m：载药胶束中载体投入量
[0083]
聚集数的测定根据静态光散射方法
[0084]
十八角度静态光散射仪(static light scattering，sls)与示差检测器联用，测量胶束的摩尔质量mw。甲苯校准后，5个不同浓度的样品从低到高依次注入检测仪中，每次注射量为2ml，流速0.5ml/min，检测温度为25℃。数据收集后，用astra软件进行分析，然后根据下述公式计算聚集数。
[0085]
聚集数＝mw/2805
[0086]
残留溶剂检测参照药典方法
[0087]
实施例1多西他赛纳米胶束制剂的制备及稳定性考察
[0088]
处方见表1：
[0089]
表1实施例1多西他赛纳米胶束制剂处方
[0090]
药物脂类/药物(质量比)药物浓度(mg/ml)水化溶剂多西他赛15:16去离子水多西他赛5:16去离子水
[0091]
制备工艺：按上述处方比例称取多西他赛及聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg2000-dspe，购自avanti公司)置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类可以完全溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，于30℃水浴中超声5min(40khz,50w；下同)，使脂膜完全溶解(药物浓度6mg/ml)，加入冻干赋型剂葡萄糖适量，使葡萄糖终浓度为125mg/ml，轻柔摇动使葡萄糖完全溶解，然后220nm的微孔滤膜过滤，分装冻干，即得载药量大、包封率高及稳定性高的多西他赛纳米胶束制剂冻干粉。
[0092]
聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺空胶束的摩尔质量约为2.52x 105gmol-1
，聚集数约为90。装载药物后，胶束的摩尔质量随载药量的增加而增加，但是聚集数并未发生明显变化，依然为90左右。
[0093]
所得样品复溶后为澄清透明溶液，粒径分布5～20nm之间，平均粒径为12nm，pdi为0.107；药物装载量分别为6.25％、16.67％(质量百分比)，包封率为98％～100％，25℃放置稳定性(包封率98％～100％)大于4小时(其中15:1时，大于24小时)。(聚集数并未发生明显变化，依然为90)。
[0094]
实施例2：卡巴他赛纳米胶束制剂的制备及稳定性考察
[0095]
处方见表2：
[0096]
表2实施例2卡巴他赛纳米胶束制剂处方
[0097]
药物脂类/药物(质量比)药物浓度(mg/ml)水化溶剂卡巴他赛10:18去离子水
[0098]
制备工艺：按上述处方比例称取卡巴他赛及聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，于30℃水浴中超声20min，使脂膜完全溶解，加入冻干赋型剂葡萄糖适量，使葡萄糖终浓度为125mg/ml，轻柔摇动使葡萄糖完全溶解，然后220nm的微孔滤膜过滤，分装冻干，即得载药量大、包封率高及稳定性高的多西他赛纳米胶束制剂冻干粉。所得样品复溶后为澄清透明溶液，粒径分布5～20nm之间，平均粒径为12nm，pdi为0.114；药物装载量为9.1％，包封率为98％～100％，25℃放置稳定性(包封率98％～100％)大于24小时。(聚集数并未发生明显变化，依然为90左右)
[0099]
实施例3：紫杉醇纳米胶束包封率高，但是稳定性差不能满足临床用药需求
[0100]
处方见表3：
[0101]
表3实施例3紫杉醇纳米胶束制剂处方
[0102]
药物脂类/药物(质量比)药物浓度(mg/ml)水化溶剂紫杉醇15:15去离子水
[0103]
制备工艺：按上述处方比例称取紫杉醇及聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，于30℃水浴中超声20min，使脂膜完全溶解，然后220nm的微孔滤膜过滤(或者，加入冻干赋型剂葡萄糖适量，使葡萄糖终浓度为125mg/ml，轻柔摇动使葡萄糖完全溶解，再220nm的微孔滤膜过滤)，包封率为99％，而后将其放置至室温考察其稳定性发现，紫杉醇纳米胶束制剂放置10min后有变浊趋势，20min后浊度增大，有沉淀析出，表明紫杉醇胶束在室温放置非常不稳定，不能满足临床用药。
[0104]
实施例4：冻干赋型剂对卡巴他赛纳米胶束冻干粉复溶时间以及室温放置稳定性的影响
[0105]
处方见表4：
[0106]
表4实施例4卡巴他赛纳米胶束制剂处方
[0107]
药物脂类/药物(质量比)药物浓度(mg/ml)水化溶剂卡巴他赛10:18去离子水
[0108]
制备工艺：按上述处方比例称取卡巴他赛及聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，于30℃水浴
中超声20min，使脂膜完全溶解，加入冻干赋型剂(葡萄糖、甘露醇、乳糖或者海藻糖)适量，使冻干赋型剂终浓度为125mg/ml，轻柔摇动使冻干赋型剂完全溶解，然后220nm的微孔滤膜过滤，分装冻干。取含有不同冻干赋性剂纳米胶束制剂冻干粉各一瓶，采用注射用水复溶，记录卡巴他赛胶束制剂复溶至澄清所需时间，以及其放置室温(25℃)24小时后的澄清度及包封率。结果见表5。试验结果显示，冻干赋型剂的添加不会影响制剂的稳定性，但是合适的冻干赋性剂可以明显减少冻干粉复溶至完全溶解所需时间，考虑到临床使用的方便性，我们选择葡萄糖作为紫杉烷类药物胶束制剂的冻干赋型剂！
[0109]
表5含有不同冻干赋型剂卡巴他赛纳米胶束制剂复溶所需时间以及稳定性考察
[0110][0111][0112]
稳定性大于100％由于测量误差导致，是正常误差范围。
[0113]
实施例5卡巴他赛纳米胶束制剂和卡巴他赛注射剂(市售)37℃稳定性对比
[0114]
将实施例2中卡巴他赛纳米胶束制剂以及卡巴他赛注射剂采用注射用水复溶或者稀释至药物终浓度为5mg/ml，然后将两种制剂放置于37℃恒温箱中，于不同时间点观察制剂澄清度，放置4小时后，发现卡巴他赛注射剂(市售)溶液中出现药物结晶形式，至8小时，药物结晶增多，底部出现大量沉淀物，而卡巴他赛纳米胶束制剂依然是澄清透明液体，此时的包封率为99％，表明卡巴他赛纳米胶束制剂的稳定性远远优于卡巴他赛注射液(市售)。
[0115]
实施例6脂类与药物的比例(重量比)影响紫杉烷类药物纳米胶束制剂的稳定性
[0116]
处方见表6：
[0117]
表6实施例6卡巴他赛纳米胶束制剂处方
[0118]
药物脂类/药物(质量比)药物浓度(mg/ml)水化溶剂卡巴他赛5:15去离子水卡巴他赛10:15去离子水卡巴他赛15:15去离子水
[0119]
制备工艺：按上述处方比例称取卡巴他赛及聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，于30℃水浴中超声20min，使脂膜完全溶解，然后220nm的微孔滤膜过滤，然后将不同药脂比的卡巴他赛
纳米胶束制剂放置室温(25℃)，观察制剂澄清度的变化考察期稳定性，结果见表7。
[0120]
表7脂类与药物的比例影响卡巴他赛纳米胶束制剂的稳定性
[0121][0122]
当给予病人同样剂量的药物时，载药量越低的纳米制剂，病人体内的载体量就越多，潜在的毒副作用就越大。
[0123]
当5:1、其为冻干形式时，采用注射用水复溶；25℃放置2小时，澄清度为澄清透明溶液，包封率(％)为99.1％，粒径(nm)为12.1，pdi为0.107。因此，在使用前2小时配置成所需的溶液形式，即可。
[0124]
实施例7不同水化温度对卡巴他赛纳米胶束制剂室温放置稳定性的影响
[0125]
处方见表8：
[0126]
表8实施例7卡巴他赛纳米胶束制剂处方
[0127][0128]
制备工艺：按上述处方比例称取卡巴他赛及聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，按照处方置于不同温度水浴中超声20min，使脂膜完全溶解，采用220nm的微孔滤膜过滤后，将不同水化
温度制备的卡巴他赛纳米胶束制剂放置室温(25℃)，观察制剂澄清度的变化考察期稳定性，结果见表9。
[0129]
表9水化温度对卡巴他赛纳米胶束制剂室温放置稳定性的影响
[0130][0131][0132]
na表示未测
[0133]
实施例8其他种类的聚合物材料与紫杉烷类药物形成的聚合物胶束稳定性差，不能满足临床用药需求
[0134]
处方见表10：
[0135]
表10实施例8其他种类聚合物纳米胶束制剂处方
[0136][0137]
工艺流程：按上述处方称取卡巴他赛(ctx)和聚合物材料置于旋蒸瓶中，加入适量氯仿轻柔摇动使ctx和聚合物材料溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸干器上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度40℃，抽干有机溶剂后聚合物材料和ctx均匀分布在旋蒸瓶内壁上。然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水10ml，然后于30℃下超声，使脂膜完全溶解，而后其放置至室温(25℃)考察其稳定性，结果见表11。试验结果提示，其他类的聚合物材料虽然也可以装载紫杉烷类药物，但是普遍存在稳定性差的特点，不能满足
临床用药，因此也不具有应用价值。
[0138]
表11他种类的聚合物材料与紫杉烷类药物形成的聚合物胶束稳定性差
[0139][0140][0141]
plga为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid)；pdlla为外消旋聚乳酸；pcl为聚己内酯；f127为泊洛沙姆。
[0142]
实施例9
[0143]
卡巴他赛胶束对动物体重的影响
[0144]
取balb/c小鼠(spf级)，6-8周龄，体重19-21g，按体重随机分七组，每组10只，对七组小鼠分别进行以下浓度卡巴他赛胶束(m-ctx)(实施例2)或卡巴他赛注射液(ctx-tween80)处理：12.5、25和50mg/kg的卡巴他赛胶束或卡巴他赛注射液，尾静脉给药一次，记录药物对小鼠体重的影响。结果见图1，根据给药后小鼠的体重结果可知，同剂量的卡巴他赛胶束制剂毒性显著低于卡巴他赛注射液。
[0145]
表12不同卡巴他赛制剂对小鼠体重的影响
[0146][0147]
实施例10
[0148]
体外细胞试验
[0149]
使用mtt(二甲基噻唑蓝)染色法测定卡巴他赛胶束(实施例2)和卡巴他赛注射剂(自制)(ctx-tween80)对于体外培养的mc-38的细胞毒性。体外培养的mc-38细胞(培养基为
rpmi 1640，含10％胎牛血清，青霉素和链霉素双抗，培养环境为37℃，饱和湿度，二氧化碳浓度5％)pbs清洗两遍，胰酶消化，细胞计数板计数，稀释至2
×
104个细胞每毫升，将细胞接种于96孔细胞培养板上，每孔接种100μl(2
×
103个细胞)；正常培养基培养过夜；每孔加入预定的含不同浓度卡巴他赛胶束和卡巴他赛注射剂的完全培养基，每个浓度六个平行样品，继续培养至72小时；pbs清洗除去含药物培养基，每孔加入100μl mtt溶液，37℃孵育4小时；弃去mtt，每孔加入100μl二甲基亚砜(dmso)，室温下轻摇10分钟使紫色晶体完全溶解；全自动酶标仪(thermo)于570nm波长检测溶液吸光值，绘制不同药物浓度下的细胞生长曲线(图2)。
[0150]
表13卡巴他赛胶束对mc-38细胞的细胞毒作用
[0151][0152]
实验结果表明，卡巴他赛胶束(m-ctx)在相同的浓度下比卡巴他赛注射液(ctx-tween80)对mc-38细胞的生长抑制作用更强，说明卡巴他赛胶束(m-ctx)与卡巴他赛注射液(ctx-tween80)相比对肿瘤细胞具有更强杀伤作用。
[0153]
实施例11：冻干赋型剂对多西他赛纳米胶束冻干粉复溶时间以及室温放置稳定性的影响
[0154]
处方见表：
[0155]
多西他赛纳米胶束制剂处方
[0156][0157][0158]
制备工艺：按上述处方比例称取多西他赛及聚乙二醇2000二硬脂酰磷脂酰乙醇胺置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，于30℃水浴中超声20min，使脂膜完全溶解，加入冻干赋型剂(葡萄糖、甘露醇、乳糖或者海藻糖)适量，使冻干赋型剂终浓度为125mg/ml，轻柔摇动使冻干赋型剂完全溶解，然后220nm的微孔滤膜过滤，分装冻干。取含有不同冻干赋性剂纳米胶束制剂冻干粉各一瓶，采用注射用水复溶，记录多西他赛胶束制剂复溶至澄清所需时间，以及其放置室温(25℃)6小时后的澄清度及包封率。结果见表。试验结果显示，冻干赋型剂的添加不会影响制剂的稳定性，但是合适的冻干赋性剂可以明显减少冻干粉复溶至完全溶解所需时间！
[0159]
含有不同冻干赋型剂多西他赛纳米胶束制剂复溶所需时间以及稳定性考察
[0160][0161]
稳定性大于100％由于测量误差导致，是正常误差范围。
[0162]
实施例12：多西他赛纳米胶束在黑色素瘤肿瘤模型上的药效学研究
[0163]
利用制备的多西他赛纳米胶束(实施例1)进行在人黑色素瘤b16f10的c57小鼠皮下移植瘤肿瘤模型下药效学试验：筛选合格的b16f10的c57成瘤动物20只，随机分为2组，每组10只，分别给予普通多西他赛注射液(10mg/kg)，多西他赛纳米胶束(10mg/kg)，尾静脉注射，每三天给药一次，共给药三次。每天2次观察动物一般临床症状，每3天进行一次瘤体积测量(当肿瘤体积超过5000mm3时不再记录)。
[0164]
时间(天)/肿瘤体积(mm3)dcx-tw80m-dcx1268.8239.14745.2368.771645.4627.6103132.81115.113-1494.716-2623.819-4603.3
[0165]
“-”
表示肿瘤体积超过5000mm3。
[0166]
药效结果见表。根据结果显示，多西他赛纳米胶束的抑制肿瘤生长疗效显著优于多西他赛注射液。
[0167]
实施例13：不同种类peg-pe制备的卡巴他赛纳米胶束
[0168]
处方见表：
[0169]
不同种类peg-pe制备的卡巴他赛纳米胶束处方
[0170][0171][0172]
制备工艺：按上述处方比例称取卡巴他赛及不同种类的peg-pe置于旋蒸瓶中，加入适量乙醇轻柔摇动使药物和脂类溶解，得到澄清透明溶液，于真空旋转蒸发仪上抽干旋蒸瓶内的有机溶剂，转速90r/min，水浴温度为40℃，抽干有机溶剂后脂类和药物均匀分布在旋蒸瓶内壁上，然后待旋蒸瓶冷却至室温后，加入去离子水，于25℃水浴中超声20min，使脂膜完全溶解，然后220nm的微孔滤膜过滤，然后将不同药脂比的卡巴他赛纳米胶束制剂放置室温(25℃)，观察制剂澄清度的变化考察期稳定性，结果见表。
[0173]
不同种类peg-pe制备的卡巴他赛纳米胶束制剂的包封率以及放置稳定性
[0174]