一种黄杞叶总黄酮的制备方法及其在提高免疫力药物中的应用与流程

1.本发明涉及医药，特别是一种黄杞叶总黄酮的制备方法及其在制备提高 免疫力药物中的应用。


背景技术：

2.动脉粥样硬化(atherosclerosis，as)是一种以脂质沉积、单核-巨噬 细胞浸润及斑块形成为主要病理特征的慢性炎症[1]。在动脉粥样硬化早期，巨 噬细胞摄取过多胆固醇而转变为泡沫细胞，并通过分泌大量促炎因子等促进as 斑块的形成。因此，有效阻断泡沫细胞的形成，就可以有效防止动脉粥样硬化早 期病变。
[0003]
动脉粥样硬化(as)是一种由脂质代谢异常引起的慢性炎性疾病。炎症 及免疫反应在as斑块形成、不稳定性以及最终破裂中均起着至关重要的作用。 近年来大量的研究表明，体液免疫在as发生发展中的重要性。体液免疫是通过 b细胞产生抗体来达到保护的特异性免疫机制，尤如获得性免疫系统中的一只
ꢀ“
橄榄球队”。
[0004]
igm型抗体是获得性免疫系统中最早形成的抗体类型，分为天然型igm 和诱导型igm抗体，前者由b1细胞产生，是非t细胞依赖型抗体，也是机体预 防病毒或细菌感染最好的“第一抗体”，兼具调节免疫细胞清除凋亡细胞与自体 抗原的功能。后者由b2细胞产生，是t细胞依赖型抗体。临床研究发现，人体 血浆中特异性氧化抗原表型的igm抗体水平与心血管疾病风险呈负相关。
[0005]
iga型抗体是人体中最丰富的抗体类型，广泛分布与粘膜组织和体循环中。 粘膜iga抗体的主要功能是担当“第一道防线”阻止入侵者吸附到位于粘膜表面 的细胞上，并将这些不速之客赶出体外。有研究显示，iga抗体可通过肠道微生 物继而影响as的发生和发展。
[0006]
igg抗体是体内寿命最长的抗体类型。研究显示，对ldl受体缺陷的小鼠 腹腔注射重组的人igg抗体，可以完全阻止由动脉外膜损伤所造成的动脉粥样硬 化斑块的形成，进而发挥免疫调节作用。
[0007]
黄杞叶为胡桃科黄杞属植物黄杞engelhardia roxburghiana wall的干燥 叶，具有清热解毒，生津解渴，解暑利湿的功效，用于治疗脾胃湿滞、胸腹胀闷、 感冒发烧、湿热泄泻、疝气腹痛等。黄杞叶中主要含有黄酮化合物、甾体类和三 萜类等成分。目前黄杞叶总黄酮的提取方法已见有部分公开报道，如水煎、冷浸， 单纯渗漉等法，不但总黄酮提取收率低，提取时间长，所用于提取的乙醇浓度也 较高，最终成本也较高。


技术实现要素：

[0008]
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种黄 杞叶总黄酮的制备方法，可有效解决现有技术中黄杞叶总黄酮提取收率低，时间 长以及乙醇提取成本高的问题。
[0009]
本发明解决上述问题的技术方案是，将干燥黄杞叶粉碎后置于55％-65％ 乙醇中浸泡4-7h，同时超声处理，然后将浸泡液滤出。再以药材量8倍体积(m1) 的55％-65％乙醇进行渗漉提取，得渗漉液。优选在整个浸泡和渗漉过程中，均在 提取容器内进行超声处理。最后将所得浸泡液和渗漉液减压浓缩至无醇味，再以 水稀释，调整药液浓度为相当于含生药0.25g/ml。加入同体积的乙酸乙酯萃取， 重复萃取3次，合并3次萃取液蒸干得干膏。将干膏以水溶解稀释至质量浓度约 为15-25mg/ml，样品液上ab-8型大孔吸附树脂柱，以乙醇洗脱，得洗脱液。 将洗脱液减压回收乙醇，浓缩干燥，得黄杞叶总黄酮。经紫外分光光度法测定， 黄杞叶总黄酮提取收率≥20％。该黄杞叶总黄酮有效用于制备保护血管药物，实 现黄杞总黄酮在制备保护血管药物中的应用。
[0010]
本发明制备方法简单，原材料丰富，超声波可破坏细胞壁，增加溶剂穿 透力，通过与渗漉法结合，可提高提取率和缩短提取时间，从而高效、快速制备 黄杞叶总黄酮。同时渗漉所用乙醇浓度较现有技术报道的浓度降低，也能达到节 约成本的目的。制备的黄杞叶总黄酮具有调节免疫力的作用，有效用于制备免疫 调节药物，开拓了治疗动脉粥样硬化的新用途。
具体实施方式
[0011]
结合下列具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
[0012]
实施例1：将干燥黄杞叶粉碎后置于55％乙醇中浸泡5h，然后将浸泡液 滤出。然后再以药材量10-15倍体积(ml)的55％乙醇进行渗漉提取，渗漉速度 为18ml/(min.kg)，得渗漉液。在整个浸泡和渗漉过程中，均在提取容器中插入 大功率聚焦式超声棒进行超声处理，最后将所得浸泡液和渗漉液，减压浓缩至无 醇味，再以水稀释，调整药液浓度为相当于含生药0.25g/ml。加入同体积的乙 酸乙酯萃取，重复萃取3次，合并3次萃取液蒸干得干膏。将干膏以水溶解稀释 至质量浓度约为20mg/ml，样品液上ab-8型大孔吸附树脂柱，上样量与树脂体 积的比例为1∶5，树脂柱径高比为1∶10；以8倍柱体积的55％乙醇洗脱，得洗脱 液。将洗脱液减压回收乙醇，浓缩干燥，得黄杞叶总黄酮。经紫外分光光度法测 定黄杞叶总黄酮提取收率≥20％。该黄杞叶总黄酮有效用于制备保护血管药物， 实现黄杞总黄酮在制备保护血管药物中的应用。
[0013]
对比例：取黄杞叶粉碎，加入70％乙醇浸泡8h，滤除浸出液后，以药材量 16倍的70％乙醇渗漉。对渗漉液减压浓缩至无醇味，加水稀释后，以乙酸乙酯萃 取除杂，重复萃取3次。将3次萃取液蒸干得干膏。将干膏经大孔树脂纯化，以 50％乙醇洗脱，最终回收所得黄杞总黄酮。经紫外分光光度法测定所得总黄酮收 率为14％。
[0014]
本发明制备方法简单，原材料丰富，超声与渗漉法结合能更高效制备黄 杞叶总黄酮，时长短，且使用的提取溶剂浓度相应降低，可节约制备成本。制备 的黄杞叶总黄酮具有提高免疫力的作用，有效用于制备免疫调节药物，并经实验 取得满意的效果，有关实验分析结果如下：
[0015]
本发明检测了黄杞叶总黄酮对动脉粥样硬化小鼠免疫调节的影响。其中， 本实验例中所述黄杞叶总黄酮均由实施例1中所述方法提取得到。实验方法和结果如下：取雄性apoe-/-敲除小鼠，高脂喂养8周诱导动脉粥样硬化形成。将造模动物 按体重随
机分成：模型组、阿托伐他汀组(10mg/kg)、黄杞叶总黄酮高剂量组 和黄杞叶总黄酮低剂量组(500、250mg/kg)。另取正常c57小鼠作为对照组。 分组后，各组灌胃给予相应剂量药物8周，对照组与模型组灌胃给予等量蒸馏水。 8周给药结束后，取血分离血清用于免疫学指标检测，解剖动物摘取胸腺和脾脏， 计算胸腺指数和脾脏指数。免疫学指标结果图1-图3，胸腺指数和脾脏指数结果图4.其中：图1是iga血清水平图图2是igg血清水平图图3是igm血清水平图图4是胸腺、脾脏脏器指数结果显示，黄杞叶总黄酮高剂量组可显著升高动脉粥样硬化小鼠血清中igg、 igm、iga抗体水平，并显著升高胸腺指数和脾脏指数，发挥提高免疫力的药理 作用。


技术特征：
1.一种黄杞叶总黄酮的制备方法，其特征在于，将干燥黄杞叶粉碎后置于55％-65％乙醇中浸泡4-7h，同时超声处理，然后将浸泡液滤出，再以药材量8倍体积的55％-65％乙醇进行渗漉提取，得渗漉液，然后将所得浸泡液和渗漉液减压浓缩至无醇味，再以水稀释，调整药液浓度为含生药0.25g/ml，然后加入同体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取3次，合并3次萃取液蒸干得干膏，将所述干膏以水溶解稀释至质量浓度为15-25mg/ml，样品液上ab-8型大孔吸附树脂柱，上样量与树脂体积的比例为1∶5，树脂柱径高比为1∶10；以8倍柱体积的55％乙醇洗脱得洗脱液，将所述洗脱液减压回收乙醇，浓缩干燥，得黄杞叶总黄酮，收率≥20％。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在浸泡和渗漉过程中均进行超声处理。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将干燥黄杞叶粉碎后置于55％乙醇中浸泡5h。4.采用权利要求1-3任一项所述方法制备的黄杞叶总黄酮在制备提高免疫力药物中的应用。

技术总结
本发明涉及一种黄杞叶总黄酮的制备方法及其在制备提高免疫力药物中的应用，即将干燥黄杞叶粉碎后置于55％-65％乙醇中浸泡4-7h，并超声处理，再将浸泡液滤出。再以药材量8倍体积55％-65％乙醇进行渗漉提取，并将浸泡液和渗漉液减压浓缩至无醇味，再以水稀释药液浓度为含生药0.25g/ml。加入乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干得干膏。将干膏以水溶解稀释至15-25mg/ml，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，以55％乙醇洗脱。减压浓缩干燥得黄杞叶总黄酮提取收率≥20％。此法可提高提取率和缩短提取时间，渗漉所用乙醇浓度降低，制备的黄杞叶总黄酮具有提高免疫力的作用，实现黄杞总黄酮在制备提高免疫力药物中的应用。免疫力药物中的应用。免疫力药物中的应用。


技术研发人员：韦洁 何俊慧
受保护的技术使用者：广西壮族自治区中医药研究院
技术研发日：2020.07.08
技术公布日：2022/1/10