多肽标签、高度可溶性的重组腈水解酶及其在医药化学品合成中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种含多肽标签的重组酶，其特征在于所述重组酶是将多肽标签连接至腈水解酶氨基酸序列的n端所得到的酶；所述多肽标签的氨基酸序列为gkgkgkg。2.如权利要求1所述含多肽标签的重组酶，其特征在于所述腈水解酶的氨基酸序列为seq id no.1所示。3.一种含权利要求1所述多肽标签的重组酶的编码基因构建的重组基因工程菌。4.一种含权利要求1所述多肽标签的重组酶在制备加巴喷丁中间体1
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氰基环已基乙酸中的应用，其特征在于所述的应用为：以含多肽标签的重组腈水解酶的编码基因的重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体纯化后的纯酶为催化剂，以1
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氰基环己基乙腈为底物，以0.2m、ph＝7.0的na2hpo4‑
nah2po4缓冲液为反应介质构成转化体系，35℃、200rpm恒温水浴反应完全，获得含1
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氰基环己基乙酸的转化液，转化液分离纯化，获得1
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氰基环己基乙酸；所述转化体系中，底物加入终浓度为1
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2m，催化剂加入量以湿菌体重量计为50g/l。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下方法制备：将重组基因工程菌接种至lb培养基，37℃培养12
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14h后，获得单菌落；挑取单菌落接种到含0.5μg/ml卡那霉素的lb试管培养基中，37℃培养8h后，以体积浓度2％的接种量转接至含0.5μg/ml卡那霉素的发酵培养基中，37℃培养2h后，加入终浓度0.1mm的iptg，28℃诱导产酶12
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14h，12,000转离心10min，沉淀用0.9％的生理盐水清洗2次，收集湿菌体。6.一种含权利要求1所述多肽标签的重组酶在制备氯吡格雷中间体邻氯扁桃酸中的应用，其特征在于所述的应用为：将含多肽标签的重组腈水解酶的基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以邻氯扁桃腈为底物，以0.2m、ph7.0的na2hpo4‑
nah2po4缓冲液为反应介质构成反应体系，35℃恒温水浴反应12h，获得含邻氯扁桃酸的反应液，分离纯化，得到邻氯扁桃酸；所述反应体系中，催化剂加入量以湿菌体重量计为50g/l，所述底物加入终浓度为1
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2m。

技术总结
本发明公开了一种多肽标签、高度可溶性的重组腈水解酶及其在医药化学品合成中的应用，所述重组酶是将多肽标签连接至腈水解酶氨基酸序列的N端所得到的酶；所述多肽标签的氨基酸序列为GKGKGKG。本发明重组腈水解酶制备1


技术研发人员：薛亚平 谢冬 熊能 郑裕国
受保护的技术使用者：浙江工业大学
技术研发日：2020.11.03
技术公布日：2021/12/17