一种抗肿瘤灵芝提取物及其生产设备和制备方法与流程

1.本发明属于天然产物提取和中药制剂领域，涉及灵芝子实体的加工利用技术领域，具体涉及一种抑制肿瘤细胞增殖的灵芝提取物的制备方法及其设备


背景技术：

2.灵芝ganoderma lucidum(leyss.exfr.)karst.或紫芝ganoderma sinense zhao,xu et zhang为多孔菌科真菌灵芝的干燥子实体(中国药典2020版一部)，味甘性平，扶正固本。归心、肝、肺、肾经，能安心神、健脾胃、益气血，主治失眠、神疲乏力、心悸、冠心病、肿瘤等。灵芝含有多种化学成分，其中的活性成分以多糖、三萜、核苷、甾醇类为主，具有一定的抗肿瘤、抗炎、保肝、降糖、抗衰老等活性常规提取分离浓缩设备如图1所示，它包括提取罐a、滤网b、料液泵c、浓缩罐d、冷凝器e、回收罐f和真空泵g。其提取过程通常是提取罐a中进行，放入提取原料,经阀门a放入提取溶剂，关闭阀门a和b，加热提取罐a进行静态提取；结束后，提取液的分离过程通常是在重力作用下完成，打开阀门b和阀门c、关阀门d，提取液经过提取罐a的罐底滤网b，滤网b的目数为200目，经过料液泵c打入浓缩罐。其浓缩过程通常是：打开阀门f、关闭阀门c、阀门d、阀门e和阀门g，经真空泵g抽真空减压后，加热浓缩罐，提取溶剂汽化与提取物分离，经冷凝器e后液化，进入回收罐f，回收到的提取溶剂经回收罐下部的阀门e放出，浓缩得到的提取物经浓缩罐下部的阀门d放出。
3.常规提取分离浓缩设备只适用于单次的提取，若要对提取罐中的原料进行第二次提取，则需要放出第一次提取的提取液，重新加入一定量的提取溶剂，关闭提取罐的相应阀门，在密闭环境中提取：提取物依靠分子热运动在提取溶剂中进行静态的传质扩散，在形成扩散平衡后，提取液中的提取物浓度不再升高，单次提取率的高低取决于原料和提取溶剂的比值，这种提取方式不利于生产的连贯性，必须依靠加入多次提取溶剂提高总得率，导致多次浓缩，耗时耗力。
4.常规提取分离浓缩设备在提取过程中只能依靠温度导致分子热运动，单次提取不完全，如灵芝等疏松多孔的原料，在一定的物料和提取液比例下，需要至少两次才能将活性成分提取完全。已有文献报道，压力也是提取过程中的重要因素，亚临界、超临界和超高压技术在常规压力的几百倍甚至几千倍条件下，单次提取即能将活性成分完全提取。但亚临界、超临界和超高压技术所需设备耐压要求高，价格昂贵，同时需要操作人员具备相应耐压设备操作技术和资质，在工业生产上难以普及。
5.常规提取分离浓缩设备在分离过程中靠重力分离提取液，分离不完全，如灵芝等疏松多孔的原料，废渣仍在提取后保有大量的提取液，1kg物料通常能吸收2
‑
5kg提取液，无法滤出进行浓缩利用，造成提取率低；同时由于其仅靠滤网过滤，而滤网不能完全截留其目数以上的原料中混有的超微粉，导致最终提取物中仍含有超微粉杂质，导致活性成分含量下降。
6.常规提取分离浓缩设备一般使用蒸发器加热，辅以真空，将提取液中的提取溶剂
和阀门v7之间有阀门f3连通到外部；阀门v10和高压泵ⅱ之间有阀门f4连通到外部。
15.提取溶剂储罐体积大于滤液储罐和浓缩液储罐；滤液储罐体积等于浓缩液储罐，并大于渗滤罐。
16.所述灵芝提取物的制备过程为：将待提取的灵芝子实体放入渗滤罐中，提取溶剂由提取溶剂储罐经阀门v1进入渗滤罐与灵芝子实体接触，由高压泵ⅱ和渗滤罐夹层的作用保持渗滤罐内部的压力和温度，提取液经滤网到达渗滤罐底部，经微调阀门v2进入滤液储罐，提取液的液位高于滤液储罐设定值时，提取液经阀门v3、料液泵ⅰ和阀门v4，进入离心机，分离过程在离心机中进行：滤液经离心去除超微粉渣，离心液经阀门v5进入浓缩液储罐，离心液液位高于浓缩液储罐设定值时，离心液经阀门v6、高压泵ⅰ和阀门v7，加压进入膜分离装置，压力0.2
‑
0.5mpa，浓缩过程在膜分离装置中进行：离心液经滤膜分离后，提取物被截留在浓缩液中留在滤膜内部，提取溶剂被分离到滤膜外部，浓缩液经阀门v8回到浓缩液储罐，与浓缩液储罐中的离心液混合，再一次进入膜分离装置，循环进行膜分离；膜分离装置中所分离出的提取溶剂经阀门v9进入提取溶剂储罐，重复使用，提取溶剂由提取溶剂储罐经阀门v10、高压泵ⅱ、阀门v11和v1重新进入提取罐，循环进行提取，提取完成后，关闭阀门v11，开微调阀门f1和阀门f2，膜分离装置及其管线中滞留的提取溶剂经阀门f2出回收，压缩气体经微调阀门f1、阀门v1进入渗滤罐，进行加压，将提取罐中原料渣所吸附的所有提取液，经滤网、微调阀门v2压入滤液储罐，参与后续的离心，离心完成时，关闭阀门v5，将所有离心液导入浓缩液储罐，浓缩完成时，浓缩液即提取物经阀门v6，高压泵ⅰ和阀门f3出，回收的提取溶剂经阀门v10、高压泵ⅱ、阀门f2出。
17.开始运行时，提取溶剂从阀门f4进入提取溶剂储罐，经阀门v10，高压泵ⅱ，阀门v11和v1进入渗滤罐1进行提取，若提取溶剂储罐液位过低，中途补充提取溶剂依上述操作进行，若提取溶剂储罐液位过高，则打开阀门f4排出部分提取溶剂。
18.所述的提取完成是指提取液的密度已达设计值。
19.所述的滤液储罐设定值、浓缩液储罐设定值是指在设定值的液位处设置有位置传感器，位置传感器有高、中、低位三个，中部的传感器用于启动料液泵ⅰ、离心机或高压泵ⅰ工作，在工作中高位传感器与低位传感器一起用于调整设备转速，以使提取循环时保持稳定液位，滤液储罐中液位高过高位传感器时，自动降低高压泵ⅱ转速和关小微调阀门v2，低于低位传感器则反之；浓缩液储罐中液位高过高位传感器时，自动降低料液泵ⅰ和离心机转速，低于低位传感器则反之，并同时自动降低高压泵ⅰ转速。
20.所述的灵芝子实体为中华人民共和国药典2020版一部所收录的多孔菌科真菌赤芝ganoderma lucidum(leyss.ex fr.)karst.或紫芝ganoderma sinense zhao,xu et zhang的干燥子实体。
21.本发明采用的技术方案，采用精心的工艺设计，经反复多次的试验，采用特定的工艺参数，其有益效果为：1.本发明使用提取分离浓缩连续生产设备制备灵芝提取物，完全避免了常规提取分离浓缩设备的缺点，并能在提取时控制一定的温度和压力，提高提取物得率；通过高目数滤网和离心机完全去除超微粉，通过膜分离装置去除小分子量杂质，提高提取物活性成分含量，同时做到连续生产；最后在提取结束时使用气体压力完全分离固液，进一步提高提取物得率。
22.2.本发明的灵芝提取物多糖含量≥30％，三萜含量≥5％，提取率≥10％，在药理活性和制备功能食品，保健食品和药品上具有极大潜力，同时由于提取分离浓缩连续生产过程从提取时间和成本上较常规提取分离浓缩大为降低。同时在提取率和三萜含量上优于常规提取分离浓缩技术。在多糖含量上优于亚临界提取技术。在提取时间上优于常规提取分离浓缩技术和亚临界技术。
23.3.本发明进一步进过药理实验证明灵芝提取物具有对kb，hela和4t1肿瘤细胞增殖的抑制能力，对kb肿瘤细胞增殖的半抑制浓度ic
50
为0.715mg/ml，对hela肿瘤细胞增殖的半抑制浓度ic
50
为0.239mg/ml，对4t1肿瘤细胞增殖的半抑制浓度ic
50
为0.226mg/ml。并且抑制能力优于常规提取分离浓缩和亚临界提取得到的提取物。
附图说明
24.图1是常规提取分离浓缩设备示意图图2是本发明的提取分离浓缩在线连续生产设备示意图其中：a，提取罐、b，滤网、c，料液泵、d，浓缩罐、e，冷凝器、f，回收罐、g，真空泵、阀门a
‑
g 1，渗滤罐、2，滤网、3，滤液储罐、4，料液泵ⅰ、5，离心机、6，浓缩液储罐、7，高压泵ⅱ、8，膜分离装置、9，滤膜、10，提取溶剂储罐、11，高压泵ⅲ、微调阀门v2、阀门v1
‑
v11，阀门f1
‑
f4。
具体实施方式
25.以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制，在不背离本发明的精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所做的修改或替换，均属于本发明的范围。本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备，均来自市售产品。本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域技术人员所知晓的常规方法。
26.在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上；术语“上”、“下”、“左”、“右”、“内”、“外”、“前端”、“后端”、“头部”、“尾部”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，直接相连，也可以通过中间媒介间接相连。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义一种抗肿瘤灵芝提取物，其要点是它是由提取分离浓缩连续生产设备提取灵芝子实体得到的，灵芝提取物中的多糖含量≥30％、三萜含量≥5％，提取率≥10％，灵芝提取物具有对kb，hela和4t1肿瘤细胞增殖的抑制能力，对kb肿瘤细胞增殖的半抑制浓度ic
50
为0.715mg/ml，对hela肿瘤细胞增殖的半抑制浓度ic
50
为0.239mg/ml，对4t1肿瘤细胞增殖的半抑制浓度ic
50
为0.226mg/ml。
27.所述的提取、分离、浓缩连续生产是指：对原料进行多次提取，最终得到提取物,控制在一定的温度和压力下渗滤提取灵芝子实体得到提取液，提取液经离心得到离心液，离心液经膜分离浓缩得到浓缩液即提取物，膜分离回收得到的溶剂返回渗滤罐进行连续提
取，提取循环时保持稳定液位，提取结束时使用压力气体将提取原料内吸附的残留提取液全部回收。
28.灵芝提取物的制备过程为：将待提取的灵芝子实体放入渗滤罐1中，提取溶剂由提取溶剂储罐10经阀门v1进入渗滤罐1与灵芝子实体接触，由高压泵ⅱ11和渗滤罐夹层的作用保持渗滤罐内部的压力和温度，提取液经滤网2到达渗滤罐底部，经微调阀门v2进入滤液储罐3，提取液的液位高于滤液储罐设定值时，提取液经阀门v3、料液泵ⅰ4和阀门v4，进入离心机5，分离过程在离心机5中进行：滤液经离心去除超微粉渣，离心液经阀门v5进入浓缩液储罐6，离心液液位高于浓缩液储罐设定值时，离心液经阀门v6、高压泵ⅰ7和阀门v7，加压进入膜分离装置8，压力0.2
‑
0.5mpa，浓缩过程在膜分离装置8中进行：离心液经滤膜9分离后，提取物被截留在浓缩液中留在滤膜9内部，提取溶剂被分离到滤膜9外部，浓缩液经阀门v8回到浓缩液储罐6，与浓缩液储罐中的离心液混合，再一次进入膜分离装置，循环进行膜分离；膜分离装置8中所分离出的提取溶剂经阀门v9进入提取溶剂储罐10，重复使用，提取溶剂由提取溶剂储罐10经阀门v10、高压泵ⅱ11、阀门v11和v1重新进入提取罐1，循环进行提取，提取完成后，关闭阀门v11，开微调阀门f1和阀门f2，膜分离装置及其管线中滞留的提取溶剂经阀门f2出回收，压缩气体经微调阀门f1、阀门v1进入渗滤罐，进行加压，将提取罐中原料渣所吸附的所有提取液，经滤网、微调阀门v2压入滤液储罐3，参与后续的离心，离心完成时，关闭阀门v5，将所有离心液导入浓缩液储罐6，浓缩完成时，浓缩液即提取物经阀门v6，高压泵ⅰ7和阀门f3出，回收的提取溶剂经阀门v10、高压泵ⅱ11、阀门f2出。
29.开始运行时，提取溶剂从阀门f4进入提取溶剂储罐10，经阀门v10，高压泵ⅱ11，阀门v11和v1进入渗滤罐1进行提取，若提取溶剂储罐10液位过低，中途补充提取溶剂依上述操作进行，若提取溶剂储罐10液位过高，则打开阀门f4排出部分提取溶剂。
30.所述的提取完成是指提取液的密度已达设计值。
31.所述的滤液储罐设定值、浓缩液储罐设定值是指在设定值的液位处设置位置传感器，位置传感器有高、中、低位三个，中部的传感器用于启动料液泵ⅰ4、离心机5或高压泵ⅰ7工作，中部的传感器开始工作后，高、低位的传感器进入工作状态，在工作中高位传感器与低位传感器一起用于调整设备转速，以使提取循环时保持稳定液位，滤液储罐3中液位高过高位传感器时，自动降低高压泵ⅱ11转速和关小微调阀门v2，低于低位传感器则反之；浓缩液储罐6中液位高过高位传感器时，自动降低料液泵ⅰ4和离心机5转速，低于低位传感器则反之，自动提高料液泵ⅰ4和离心机5转速,并同时自动降低高压泵ⅰ7转速。
32.一种抗肿瘤灵芝提取物，它是由提取分离浓缩连续生产设备提取灵芝子实体得到的,所述的提取分离浓缩连续生产是指：控制在一定的温度和压力下渗滤提取灵芝子实体得到提取液，提取液经离心得到离心液，离心液经膜分离浓缩得到浓缩液即提取物，膜分离回收得到的溶剂可返回渗滤罐进行连续提取，提取结束时使用气体压力完全分离固液。
33.灵芝提取物的制备过程为：将待提取的灵芝子实体放入渗滤罐1中，提取溶剂由提取溶剂储罐10经阀门v1进入渗滤罐1与灵芝子实体接触，在高压泵ⅱ11和夹层的作用保持压力和温度，提取液经滤网2到达渗滤罐底部，经微调阀门v2进入滤液储罐3，提取液液位高于滤液储罐一半时，可经阀门v3、料液泵ⅰ4和阀门v4，进入离心机5，分离过程在离心机5中进行：滤液经离心去除超微粉渣，离心液经阀门v5进入浓缩液储罐6，离心液液位高于浓缩液储罐一半时，再经阀门v6、高压泵ⅰ7和阀门v7，加压进入膜分离装置8，压力0.2
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0.5mpa，
浓缩过程在膜分离装置8中进行：离心液经滤膜9分离后，提取物被截留在浓缩液中留在滤膜9内部，提取溶剂被分离到滤膜9外部，浓缩液经阀门v8回到浓缩液储罐6，循环进行膜分离；膜分离装置8中所分离出的提取溶剂经阀门v9进入提取溶剂储罐10，重复使用，提取溶剂储罐10，阀门v10，高压泵ⅱ11，阀门v11和v1重新进入提取罐1，循环进行提取，提取完成后，关闭阀门v11，开阀门f1和f2，膜分离装置及其管线中滞留的提取溶剂经阀门f2出回收，压缩气体经阀门f1，v1进入渗滤罐1加压，将提取罐中原料所吸附的所有提取液，经微调阀门v2压入滤液储罐3，离心完成时，关闭阀门v5，将所有离心液导入浓缩液储罐6，浓缩完成时，浓缩液即提取物经阀门v6，高压泵ⅰ7和阀门f3出，回收的提取溶剂经阀门v10，高压泵ⅱ11，阀门f2出。开始运行时，提取溶剂可从阀门f4进入提取溶剂储罐10，经阀门v10，高压泵ⅱ11，阀门v11和v1进入渗滤罐1进行提取，若中途补充提取溶剂依上述操作进行。
34.灵芝提取物的多糖含量检测方法为中华人民共和国药典2020版一部灵芝含量测定中多糖的测定；灵芝提取物的三萜含量检测方法为中华人民共和国药典2020版一部灵芝含量测定中三萜及甾醇的测定；灵芝提取物的提取率为浓缩干燥成粉的提取物(水分≤6％)的重量与提取时灵芝子实体的重量比；灵芝提取物对肿瘤细胞增殖的抑制作用的检测方法为mtt法，以半抑制浓度ic
50
为标准，ic
50
是指在用药后存活的细胞数量减少一半时所需的药物浓度。在mtt法中，就是以对照组吸光度od值减少一半所需的药物浓度为ic
50
。
35.实施例1如图2所示，一种用于制作上述灵芝提取物的提取分离浓缩连续生产设备，如图2所示：它包括渗滤罐1、滤液储罐3、料液泵ⅰ4、离心机5、浓缩液储罐6、高压泵ⅰ7、膜分离装置8、提取溶剂储罐10、高压泵ⅱ11、微调阀门v2，阀门v1
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11，微调阀门f1,阀门f2
‑
4。渗滤罐1进口有阀门v1，v1连接进入渗滤罐1，渗滤罐1内底部固定有滤网2，滤网的目数为300目，出口处有微调阀门v2。
36.渗滤罐通过微调阀门v2与滤液储罐3相连，滤液储罐3通过阀门v3、料液泵ⅰ4、阀门v4与离心机5相连，滤液储罐内装有液位传感器，传感器有高、中、低位三个，一般高位位于全罐高度的4/5
‑
2/3之间，中部一般在1/2处，低位一般位于全罐高度的1/5
‑
1/3之间，中部的传感器用于启动料液泵ⅰ4、离心机5，高位传感器与低位传感器一起用于调整设备转速，以使提取循环时保持稳定液位，滤液储罐3中液位高过高位传感器时，自动降低高压泵ⅱ11转速和关小微调阀门v2，低于低位传感器则反之。
37.离心机5通过阀门v5与浓缩液储罐6相连；浓缩液储罐内装有液位传感器，传感器有高、中、低位三个，一般高位位于全罐高度的4/5
‑
2/3之间，中部一般在1/2处，低位一般位于全罐高度的1/5
‑
1/3之间，中部的传感器用于启动高压泵ⅰ7，浓缩液储罐6中液位高过高位传感器时，自动降低料液泵ⅰ4和离心机5转速，低于低位传感器则反之，自动提高料液泵ⅰ4和离心机5转速,并同时自动降低高压泵ⅰ7转速。
38.浓缩液储罐通过阀门v6、高压泵ⅰ7、阀门v7与膜分离装置8中的滤膜9内部下端相连；膜分离装置8内含滤膜9；滤膜9内部的上端通过阀门v8与浓缩液储罐6相连，形成循环；提取溶剂渗透到滤膜外，滤膜9外部通过阀门v9与提取溶剂储罐10相连；膜分离装置8中所
分离出的提取溶剂经阀门v9进入提取溶剂储罐10，提取溶剂储罐10经阀门v10、高压泵ⅱ11、阀门v11和v1连接渗滤罐1，形成循环；阀门v11和v1之间有微调阀门f1连通到外部；高压泵ⅱ11和阀门v11之间有阀门f2连通到外部；高压泵ⅰ7和阀门v7之间有阀门f3连通到外部；阀门v10和高压泵ⅱ11之间有阀门f4连通到外部。提取溶剂储罐10体积大于滤液储罐3和浓缩液储罐6；滤液储罐3体积等于浓缩液储罐6，并大于渗滤罐1。
39.一种提取分离浓缩连续生产设备提取产物的方法，在连续生产中，它的操作步骤为：1.将10kg灵芝颗粒(10
‑
20目)装入渗滤罐1，开启阀门f4，v10,v11和v1，将200kg水经高压泵ⅲ10加压，经阀门f4，v10,v11和v1，进入渗滤罐1，待提取液充满渗滤罐1，待压力到达0.2mpa，打开微调阀门v2，保持渗滤罐1压力的同时，将提取液输送至滤液储罐3。同时开始通入高压蒸汽加热渗滤罐1的夹层，保持渗滤罐温度在115
‑
120℃。
40.2.待滤液储罐3液位过半时，触动启动传感器，开启阀门v3，v4，料液泵ⅰ，v5，离心机5，开始离心，离心液浊度≤50nut；保持滤液储罐3滤液液位的同时，调整离心机5速率，离心液经过v5进入浓缩液储罐6。
41.3.浓缩液储罐6液位过半时，开启阀门v6，v7，v8，v9，高压泵ⅰ7，将离心液加压泵入膜分离装置9进行膜分离，截留液经v8返回浓缩液储罐6，循环进行膜分离浓缩；将膜分离滤出的水输送至提取溶剂储罐10，膜分离压力为0.1
‑
0.5mpa。
42.4.提取溶剂储罐10液位过半时，开启阀门v10，水通过阀门v10、高压泵ⅱ11、阀门v11和v1输送至渗滤罐1，形成循环；将水全部加入后，关闭阀门f4，开始循环提取，提取时间30min。提取完成时，关闭阀门v11，开阀门f1和f2，水经阀门f2出；压缩气体经阀门f1和v1进入渗滤罐1加压，压力为0.2
‑
1mpa，，将提取罐中灵芝颗粒所吸附的所有提取液压入滤液储罐3。继续进行离心和浓缩。
43.5.离心完成时，关闭阀门v5，将浓缩液储罐6所收集的离心液，通过v6、高压泵ⅰ7、阀门v7输送至膜分离装置进行膜分离浓缩。
44.6.浓缩完成时，关闭阀门v7，浓缩液即提取物通过阀门v6，高压泵ⅰ7，阀门f3排出，浓缩液相对密度1.10～1.20(25℃)。回收的水通过阀门v9和v10，高压泵ⅱ11，阀门f2排出。
45.7.实施例1中提取分离浓缩所用工时大约为2h。浓缩液经干燥成粉，水分≤6％，即为灵芝提取物ⅰ；称重，重量为1.05kg，提取率为10.5％；取样检测多糖含量为31.6％，三萜含量5.01％。
46.实施例2常规提取分离浓缩设备提取产物的方法：在间歇生产中，它的操作步骤为：如图1所示：将10kg灵芝颗粒(10
‑
20目)装入提取罐a中,经阀门a放入提取溶剂100kg水，关闭阀门a和b，进行静态提取：提取温度95
‑
100℃，提取时间2h；其分离过程通常是在重力作用下，提取液经过罐底滤网b，滤网为200目，开阀门b和c，经过物料泵c打入浓缩罐d；其浓缩过程通常是：关闭阀门c、d、e，经真空泵g抽真空后，真空度为
‑
0.07
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0.08mpa，加热浓缩罐温度为50
‑
60℃，水汽化与提取物分离，经冷凝器e后液化，进入回收罐f，回收到的水经阀门e放出，浓缩得到的提取物经阀门d放出。重复操作步骤1次，合并两次提取液浓缩得到的提取物。浓缩液相对密度1.10～1.20(25℃)。
47.实施例2中提取分离浓缩的操作先后2次所用工时大约为7
‑
8h。浓缩液经干燥成
粉，水分≤6％，即为灵芝提取物ⅱ；称重，重量为0.75kg，提取率为7.5％；取样检测多糖含量为19.8％，三萜含量为1.5％。
48.实施例3亚临界提取分离浓缩设备提取产物的方法：在间歇生产中，它的操作步骤为：将1kg灵芝颗粒(10
‑
20目)装入亚临界提取罐中,放入提取溶剂10kg水，进行静态提取：提取压力4mpa，提取温度160℃，提取时间10min；提取后，再用10kg水冲洗，合并提取液和洗液，经过抽滤得到滤液，滤液浊度≤200nut滤液经浓缩，浓缩液相对密度1.10～1.20(25℃)。
49.实施例3中提取分离浓缩所用工时大约为2h。浓缩液经干燥成粉，水分≤6％，即为灵芝提取物ⅲ；称重，重量为0.24kg，提取率为2.4％；取样检测灵芝多糖含量为11.4％，三萜含量为5.7％。
50.对上述的得物进行检测实施例1、2及3的灵芝提取物ⅰ、ⅱ和ⅲ取样使用mtt法检测对肿瘤细胞增殖的抑制能力实验材料：灵芝提取物ⅰ、ⅱ和ⅲ用生理盐水溶解，离心，取上清，制备成不同浓度的生理盐水溶液。
51.实验方法：取对数生长期的人口腔上皮癌细胞kb，人宫颈癌癌细胞hela细胞，小鼠乳腺癌细胞4t1以2000～4000个/孔的细胞数接种于96孔板中，每孔180μl细胞液，置于37℃5％co2饱和湿度培养箱中培养过夜，细胞完全贴壁后，加入20μl不同浓度上述实验材料，每个浓度3个复孔，放培养箱继续培养72h；药物作用72h后，每孔加入20μl 5mg/ml的mtt，继续培养4h；弃去培养基，加入150μl dmso，室温震荡10min，待结晶完全溶解，用酶标仪570nm波长测定od值，计算出各组分对细胞的ic
50
，结果见表1表1灵芝提取物对不同癌细胞的半抑制浓度ic
50
结论：灵芝提取物ⅰ的半抑制浓度ic
50
小于灵芝提取物ⅱ和ⅲ，说明灵芝提取物ⅰ对肿瘤细胞增殖的抑制能力强于灵芝提取物ⅱ和ⅲ。
52.总结实施例1
‑
3和mtt实验结果显示：使用提取分离浓缩连续生产装置提取灵芝子实体得到的灵芝提取物在提取分离浓缩所用的时间，提取率，多糖含量，三萜含量和对肿瘤细胞增殖的抑制能力等方面均高于常规提取分离浓缩装置提取的提取物，在灵芝多糖含量和对肿瘤细胞增殖的抑制能力高于亚临界提取的提取物。