一种超微量全长RNA测序文库的构建方法与流程

技术特征：
1.一种超微量全长rna测序文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法主要包括以下步骤：1）获得细胞或者亚细胞样本中的超微量的总rna，构建包含rrna序列信息的cdna文库；2）对步骤1）中获得的cdna文库进行扩增；3）根据细胞或者亚细胞相应物种的rrna序列，设计特异性的sgrna序列组合，所述的sgrna序列组合包括seq id no.1
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seq id no.58；4）将sgrna序列组合配置的溶液与步骤2）扩增的cdna文库进行混合，利用crispr/cas9系统在cas9蛋白作用下进行特异性的切割，获得不包含rrna信息的cdna文库。2.根据权利要求1所述的超微量全长rna测序文库构建方法，其特征在于，所述细胞或者亚细胞样本中的超微量的总rna的起始量为0.5
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500 pg。3.根据权利要求1所述的超微量全长rna测序文库构建方法，其特征在于，步骤2）中扩增为pcr扩增或等温扩增。4.根据权利要求1所述的超微量全长rna测序文库构建方法，其特征在于，步骤4）中配置rrna去除反应体系，37 ℃孵育0.5
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2 h。5.根据权利要求1所述的超微量全长rna测序文库构建方法，其特征在于，步骤4）中cas9蛋白的浓度为10 nm
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m。6.根据权利要求1所述的超微量全长rna测序文库构建方法，其特征在于，步骤4）中所述sgrna序列组合在配置的溶液中的浓度为0.1
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技术总结
本发明公开超微量的全长总RNA测序文库的构建方法，包括以下步骤：1）对获得细胞或者亚细胞样本中的超微量的总RNA，进行cDNA文库的构建，获得包含rRNA序列信息的cDNA文库；2）对获得的cDNA文库进行无偏性扩增；3）根据相应物种的rRNA序列，设计sgRNA序列组合；4）将sgRNA序列组合配置的溶液与步骤扩增产生的cDNA文库进行混合，获得不包含rRNA信息的cDNA文库。本发明能够实现超微量的总RNA及全长建库，同时又能够在cDNA合成之后使用CRISPR/Cas9高效切割PCR扩增产生的含有rRNA的cDNA文库，从而避免RNA的降解；适用于超低起始量的转录组建库，且花费较低。且花费较低。且花费较低。


技术研发人员：葛芹玉 施华娟 贾二腾 赵祥伟 刘芝余 白云飞
受保护的技术使用者：东南大学
技术研发日：2021.08.16
技术公布日：2021/12/13