一类新型昆虫激肽类似物及其在蚜虫防治中的应用的制作方法

andtheirdiureticactivityincrickets.actabiochim.pol.2004,51,121‑127.；nachman,r.j.等anactiveinsectkininanalogwith4‑aminopyroglutamate,anovelcis‑peptidebond,typeviβ‑turnmotif.biopolymers2004,75,412‑419.；zubrzak,p.等β‑aminoacidanalogsofaninsectneuropeptidefeaturepotentbioactivityandresistancetopeptidasehydrolysis.biopolymers2007,88,76‑82.；nachman,r.j.等towardthedevelopmentofnovelpestmanagementagentsbaseduponinsectkininneuropeptideanalogues.ann.n.y.acad.sci.2009,1163,251‑261.；smagghe,g.等antifeedantactivityandhighmortalityinthepeaaphidacyrthosiphonpisum(hemiptera:aphidae)inducedbybiostableinsectkininanalogs.peptides(newyork,ny,unitedstates)2010,31,498‑505.；nachman,r.j.等biostableanalogsofinsectkininandinsectatachykininneuropeptides:areviewofnovelclassesofantifeedantsandaphicides.pestycydy2011,23‑34.；nachman,r.j.等activediureticpeptidomimeticinsectkininanalogsthatcontainβ‑turnmimeticmotif4‑aminopyroglutamateandlacknativepeptidebonds.peptides(newyork,ny,unitedstates)2012,34,262‑265；zhangc.l.等design,synthesisandaphicidalactivityofn‑terminalmodifiedinsectkininanalogs.peptides(n.y.,ny,u.s.)2015,68,233‑238；zhangc.等synthesis,aphicidalactivityandconformationofnovelinsectkininanaloguesaspotentialeco‑friendlyinsecticides.pestmanagementscience,2020,76(10):3432‑3439；yangx,lix,zhangz等.aclassofinsectkininanaloguesandtheirapplications:cn108276473a[p]；yangx,zhangc.l,ling.y.等.novelinsectkininanaloguesandtheirapplications:cn105061556a[p].上述文献通过用位阻较大的非天然氨基酸或羧酸修饰天然昆虫激肽而得到相应的类似物，能够提高它们的抗酶解活性，同时具有一定的生物活性。但是这些激肽类似物的生物活性仍不十分突出，作为农药分子直接应用于农业生产中仍然有一定的局限性。技术实现要素：[0005]本发明针对活性激肽类似物的活性构象vi型β转角的转折点即关键性位点phe2进行了取代修饰，采用线性、成环、酯化、及空间位阻、走向限定的天然氨基酸或非天然氨基酸等基团对phe2进行了取代修饰，发明了一类新型的昆虫激肽类似物，并经过生物活性测试发现该类化合物不仅具有很好的杀大豆蚜的活性，对豌豆蚜和桃蚜也具有一定的活性。[0006]本发明提供的一类新型的昆虫激肽类似物，其结构通式为式a：[0007][0008]其中，raa为天然氨基酸或非天然氨基酸，所述天然氨基酸或非天然氨基酸可选resin。继续脱除fmoc基团，以相同方法依次接入fmoc‑trp(boc)‑oh、fmoc‑β‑ala‑oh、fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯和肉桂酸。最后利用三氟乙酸：苯酚：苯甲硫醚：水＝90:5:2.5:2.5的混合溶液与树脂反应4h得到目标物。过滤，除去tfa，加入适量的冰冻乙醚沉淀，离心去除上层清液，所得固体冷冻干燥后即得到粗产物。粗产品经过反相c18半制备高效液相色谱分离后得纯品，色谱条件为：流动相是50％乙腈的水溶液(含0.1％的tfa)，流速是10ml/min，检测波长为215nm，hplc保留时间在12min左右。结构鉴定数据见表1，经高分辨质谱确证结构正确。[0021]其它目标化合物均按照上述方法制备得到。[0022]实施例2、ai‑2所示化合物的制备(raa来自叔亮氨酸)[0023]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑2所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑叔亮氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0024]实施例3、ai‑3所示化合物的制备(raa来自l‑烯丙基甘氨酸)[0025]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑3所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑l‑烯丙基甘氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0026]实施例4、ai‑4所示化合物的制备(raa来自l‑2‑氨基‑5‑苯基戊酸)[0027]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑4所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑l‑2‑氨基‑5‑苯基戊酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0028]实施例5、ai‑5所示化合物的制备(raa来自氨基环丙烷羧酸)[0029]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑5所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑氨基环丙烷羧酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0030]实施例6、ai‑6所示化合物的制备(raa来自3‑(2‑呋喃基)‑l‑丙氨酸)[0031]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑6所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑3‑(2‑呋喃基)‑l‑丙氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0032]实施例7、ai‑7所示化合物的制备(raa来自1‑氨基‑1‑环己基甲酸)[0033]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑7所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑1‑氨基‑1‑环己基甲酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0034]实施例8、ai‑8所示化合物的制备(raa来自环丁基丙氨酸)[0035]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑8所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑环丁基丙氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0036]实施例9、ai‑9所示化合物的制备(raa来自蛋氨酸)[0037]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑9所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑蛋氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0038]实施例10、ai‑10所示化合物的制备(raa来自2‑氨基‑5‑甲基己酸)[0039]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑10所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑2‑氨基‑5‑甲基己酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0040]实施例11、ai‑11所示化合物的制备(raa来自1‑氨基环丁甲酸)[0041]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑11所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑1‑氨基环丁甲酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0042]实施例12、ai‑12所示化合物的制备(raa来自3‑(2‑噻吩基)‑l‑丙氨酸)[0043]按照与实施例1相同的步骤制备ai‑12所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑3‑(2‑噻吩基)‑l‑丙氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0044]实施例13、aii‑1所示化合物的制备(raa来自谷氨酸1‑烯丙酯)[0045]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑1所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑谷氨酸1‑烯丙酯。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0046]实施例14、aii‑2所示化合物的制备(raa来自天冬氨酸‑1‑苄酯)[0047]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑2所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑天冬氨酸‑1‑苄酯。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0048]实施例15、aii‑3所示化合物的制备(raa来自谷氨酸甲酯)[0049]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑3所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑谷氨酸甲酯。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0050]实施例16、aii‑4所示化合物的制备(raa来自天冬氨酸‑4‑环己酯)[0051]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑4所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑天冬氨酸‑4‑环己酯。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0052]实施例17、aii‑5所示化合物的制备(raa来自o‑乙酰基‑l‑苏氨酸)[0053]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑5所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑o‑乙酰基‑l‑苏氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0054]实施例18、aii‑6所示化合物的制备(raa来自谷氨酸‑5‑苄酯)[0055]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑6所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑谷氨酸‑5‑苄酯。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0056]实施例19、aii‑7所示化合物的制备(raa来自o‑苄基‑l‑丝氨酸)[0057]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑7所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑o‑苄基‑l‑丝氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0058]实施例20、aii‑8所示化合物的制备(raa来自o‑叔丁基‑l‑苏氨酸)[0059]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑8所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑o‑叔丁基‑l‑苏氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0060]实施例21、aii‑9所示化合物的制备(raa来自s‑乙酰氨甲基‑l‑半胱氨酸)[0061]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑9所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑s‑乙酰氨甲基‑l‑半胱氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0062]实施例22、aii‑10所示化合物的制备(raa来自谷氨酸‑1‑苄酯)[0063]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑10所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑谷氨酸‑1‑苄酯。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0064]实施例23、aii‑11所示化合物的制备(raa来自l‑天冬氨酸‑1‑烯丙酯)[0065]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑11所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑l‑天冬氨酸‑1‑烯丙酯。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0066]实施例24、aii‑12所示化合物的制备(raa来自o‑叔丁基‑l‑丝氨酸)[0067]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑12所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑o‑叔丁基‑l‑丝氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0068]实施例25、aii‑13所示化合物的制备(raa来自o‑苄基‑l‑苏氨酸)[0069]按照与实施例1相同的步骤制备aii‑13所示化合物，仅将fmoc‑谷氨酸‑5‑环己酯替换为fmoc‑o‑苄基‑l‑苏氨酸。结构鉴定数据见表1，经验证，结构正确。[0070]式a所示化合物的结构、高分辨质谱数据及纯度列于表1中[0071]表1[0072][0073][0074][0075][0076]实施例27、本发明化合物对大豆蚜(aphisglycinesmatsmura)的生物活性[0077]本发明化合物对蚜虫的杀虫活性测定采用浸液法(leaf‑dipping法)。将目标化合物配成200mg/l的测定液。再用1‑5ml移液枪取1mldmso加入称量瓶，加入9ml含有0.1％曲拉通x‑100的水溶液，充分混匀，得200mg/l的测定液，然后再用含有0.1％曲拉通x‑100的水溶液逐级稀释，充分混匀得到所需浓度。将室内培育未接触过任何药剂的大豆蚜虫和大豆叶片，用直径15mm的打孔器打出适合大小的叶片，分别浸入稀释好的药液中15秒，取出晾干。然后将叶片放入生测板中，底部加入1.5％的琼脂保湿，每孔接入大豆蚜20±3头，每个重复3次。48小时后检查结果。死亡判断标准为：轻触虫体，不能正常爬行个体视为死亡。计算校正死亡率，公式如下所示：[0078]校正死亡率(％)＝(样品死亡率‑空白对照死亡率)/(1‑空白对照死亡率)*100％.[0079]杀蚜毒力lc50值用统计分析软件spss计算得到。[0080]杀大豆蚜活性测试结果见表2[0081]表2式a化合物对大豆蚜(aphisglycinesmatsmura)的杀虫活性[0082][0083][0084]表2生物活性测试结果表明，本发明的化合物对大豆蚜均具有杀死活性，其中，有8个化合物对大豆蚜的致死率高于80％。将所有化合物进一步进行致死中浓度(lc50)的测试发现，化合物ai‑1、aii‑1、aii‑2、aii‑3、aii‑4、aii‑7对大豆蚜虫的lc50值远低于商品化药剂吡蚜酮，进一步表明这些化合物的杀蚜活性优异，具有作为蚜虫控制剂进一步开发的价值。[0085]实施例28、本发明部分化合物对豌豆蚜(acyrthosiphonpisum)、桃蚜(myzuspersicae(sulzer))的生物活性[0086]对豌豆蚜虫和桃蚜的杀虫活性测定同样采用实施例2中所述的leaf‑dipping法，结果分别见表3和表4。[0087]表3式a中部分化合物对豌豆蚜(acyrthosiphonpisum)的杀虫活性[0088][0089]经过活性测定发现，这类昆虫激肽化合物对于豌豆蚜虫也具有很好的活性，其中化合物ai‑1和ai‑8对于豌豆蚜的lc50均低于吡蚜酮，表明它们的杀豌豆蚜活性优于商品化药剂吡蚜酮。[0090]表4式a部分化合物对桃蚜(myzuspersicae(sulzer))的杀虫活性[0091][0092]经过对桃蚜的杀虫活性测试发现，这些化合物对于桃蚜都有一定的活性，其中化合物ai‑1、aii‑2和aii‑3的lc50均低于吡蚜酮，表明它们的杀桃蚜活性优于商品化药剂吡蚜酮。[0093]以上结果表明，本发明的化合物对于大豆蚜、豌豆蚜和桃蚜具有杀死活性。尤其是经过lc50活性测试发现ai‑1对于这三种蚜虫的杀蚜活性均优于商品化药剂吡蚜酮，有一定的广谱性，具有作为蚜虫防治剂进行应用开发的价值。当前第1页12当前第1页12