用于治疗病况和疾病的反义寡聚体的制作方法

技术特征：
1.一种调节细胞中scn1a蛋白的表达的方法，该细胞具有含有无义介导的rna衰变诱导外显子(nmd外显子mrna)并且编码scn1a蛋白的mrna，该方法包括使治疗剂与所述细胞接触，由此所述治疗剂调节从所述编码scn1a蛋白的nmd外显子mrna剪接所述nmd外显子，从而调节经加工的编码scn1a蛋白的mrna的水平，并调节所述细胞中scn1a蛋白的表达，其中所述治疗剂与所述编码scn1a的nmd外显子mrna的靶向部分结合，并且其中所述靶向部分处于：nmd诱导外显子(nie)的5’末端上游约1000个核苷酸至该nie的5’末端上游约100个核苷酸；或者该nie的3’末端下游约100个核苷酸至该nie的3’末端下游约1000个核苷酸。2.一种通过调节有需要的受试者的细胞中scn1a蛋白的表达来治疗该受试者的疾病或病况的方法，该方法包括：使所述受试者的细胞与调节从所述细胞中的mrna剪接无义介导的mrna衰变诱导外显子(nmd外显子)的治疗剂接触，该mrna含有所述nmd外显子并且编码scn1a，从而调节经加工的编码scn1a蛋白的mrna的水平，并调节所述受试者的细胞中scn1a蛋白的表达；其中所述治疗剂与所述编码scn1a的nmd外显子mrna的靶向部分结合，并且其中所述靶向部分处于：nmd诱导外显子(nie)的5’末端上游约1000个核苷酸至该nie的5’末端上游约100个核苷酸；或者该nie的3’末端下游约100个核苷酸至该nie的3’末端下游约1000个核苷酸。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述治疗剂干扰参与从所述靶向部分的区域剪接所述nmd外显子的因子的结合。4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述靶向部分处于所述nie的5’末端上游至多约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸。5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述靶向部分处于所述nie的5’末端上游至少约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸、约40个核苷酸、约30个核苷酸、约20个核苷酸、约10个核苷酸、约5个核苷酸、约4个核苷酸、约2个核苷酸、约1个核苷酸。6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述靶向部分处于所述nie的3’末端下游至多约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸。7.根据权利要求1或2所述的方法，所述靶向部分处于所述nie的3’末端下游至少约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸、约40个核苷酸、约30个核苷酸、约20个核苷酸、约10个核苷酸、约5个核苷酸、约4个核苷酸、约2个核苷酸、约1个核苷酸。8.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中所述治疗剂是反义寡聚体(aso)。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述aso包含与seq id no:12
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731中的任一个至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％相同的序列。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的方法，其中所述治疗剂促进所述nmd外显子从所述经加工的编码scn1a蛋白的mrna中的排除。11.根据权利要求10所述的方法，其中与对照细胞中所述nmd外显子从所述经加工的编码scn1a蛋白的mrna中的排除相比，在与所述治疗剂接触的细胞中，所述nmd外显子从所述经加工的编码scn1a蛋白的mrna中的排除增加约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述治疗剂增加所述细胞中所述经加工的编码scn1a蛋白的mrna的水平。13.根据权利要求10所述的方法，其中与对照细胞中所述经加工的编码scn1a蛋白的mrna的总量相比，在与所述治疗剂接触的细胞中，所述经加工的编码scn1a蛋白的mrna的量增加约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。14.根据权利要求2所述的方法，其中所述疾病或病况是由na
v
1.1中的失功能突变诱导的。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病或病况与所述scn1a基因的单倍性不足相关，并且其中所述受试者具有编码功能性scn1a的第一等位基因，以及不产生或以降低的水平产生scn1a的第二等位基因，或编码非功能性scn1a或部分功能性scn1a的第二等位基因。16.根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病或病况是脑病。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述脑病是癫痫性脑病。18.根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病或病况是dravet综合征(ds)；婴儿严重肌阵挛性癫痫(smei)
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边界(smeb)；发热性惊厥(fs)；全身性癫痫伴发热性惊厥 (gefs )；早期幼儿癫痫性脑病，13；隐源性全身性癫痫；隐源性局限性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；lennox
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gastaut综合征；west综合征；特发性痉挛；早期肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类的癫痫性脑病；癫痫猝死(sudep)；病窦综合征1；自闭症；或婴儿期恶性迁移性部分发作。19.根据权利要求18所述的方法，其中gefs 是全身性癫痫伴发热性惊厥 ，2型。20.根据权利要求18所述的方法，其中所述发热性惊厥是家族性发热性惊厥，3a。21.根据权利要求18所述的方法，其中smeb是不具有广泛棘波的smeb(smeb
‑
sw)、不具有肌阵挛性发作的smeb(smeb
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m)、缺乏多于一种smei特征的smeb(smeb
‑
o)或顽固性儿童癫
痫伴全身性强直性阵挛性发作(icegtc)。22.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述aso由选自seq id no:72或432的序列组成。23.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述aso由选自seq id no:73或433的序列组成。24.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述aso由选自seq id no:76或436的序列组成。25.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述aso由选自seq id no:181或541的序列组成。26.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述aso由选自seq id no:220或580的序列组成。27.一种调节细胞中scn1a蛋白的表达的方法，该细胞具有含有无义介导的rna衰变诱导外显子(nmd外显子mrna)并且编码scn1a蛋白的mrna，该方法包括使治疗剂与所述细胞接触，由此所述治疗剂调节从所述编码scn1a蛋白的nmd外显子mrna剪接所述nmd外显子，从而调节经加工的编码scn1a蛋白的mrna的水平，并调节所述细胞中scn1a蛋白的表达，其中所述治疗剂与所述编码scn1a的nmd外显子mrna的靶向部分结合，并且其中所述靶向部分处于nmd诱导外显子(nie)的5’末端上游约1000个核苷酸至该nie的3’末端下游约1000个核苷酸。28.一种通过调节有需要的受试者的细胞中scn1a蛋白的表达来治疗该受试者的疾病或病况的方法，该方法包括：使所述受试者的细胞与调节从所述细胞中的mrna剪接无义介导的mrna衰变诱导外显子(nmd外显子)的治疗剂接触，该mrna含有所述nmd外显子并且编码scn1a，从而调节经加工的编码scn1a蛋白的mrna的水平，并调节所述受试者的细胞中scn1a蛋白的表达；其中所述治疗剂与所述编码scn1a的nmd外显子mrna的靶向部分结合，并且其中所述靶向部分处于nmd诱导外显子(nie)的5’末端上游约1000个核苷酸至该nie的3’末端下游约1000个核苷酸。29.一种反义寡聚体(aso)，其包含与seq id no:12
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731中的任一个至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％相同的序列。30.一种反义寡聚体(aso)，其由选自seq id no:12
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731的序列组成。31.一种通过调节有需要的受试者的细胞中scn1a蛋白的表达来治疗该受试者的疾病或病况的方法，该方法包括：使所述受试者的细胞与权利要求29或权利要求30的aso接触。32.一种试剂盒，其包含权利要求29或权利要求30的aso。

技术总结
SCN1A基因中的可变剪接事件可导致非生产性mRNA转录物，其进而可导致异常的蛋白质表达，并且可靶向SCN1A基因中的可变剪接事件的治疗剂可调节Dravet综合征患者中功能性蛋白质的表达水平，并且/或者抑制异常蛋白质表达。此类治疗剂可用来治疗由SCN1A、SCN8A或SCN5A蛋白缺乏引起的病况。蛋白缺乏引起的病况。蛋白缺乏引起的病况。


技术研发人员：伊莎贝尔
受保护的技术使用者：斯托克制药公司
技术研发日：2020.02.27
技术公布日：2021/12/3