用于靶实体检测的系统、组合物和方法与流程

技术特征：
1.一种方法，其包括：(a)使可能包含关注的生物实体的样品与至少一组检测探针接触，每个检测探针针对靶标，所述组至少包含针对第一靶标的第一检测探针和针对第二靶标的第二检测探针，使得生成包含所述关注的实体和所述检测探针组的组合，其中所述第一检测探针包含第一靶结合部分和偶联至所述第一靶结合部分的第一寡核苷酸结构域，所述第一寡核苷酸结构域包含第一双链部分和从所述第一寡核苷酸结构域的一端延伸的第一单链悬突；其中所述第二检测探针包含第二靶结合部分和偶联至所述第二靶结合部分的第二寡核苷酸结构域，所述第二寡核苷酸结构域包含第二双链部分和从所述第二寡核苷酸结构域的一端延伸的第二单链悬突，其中所述第二单链悬突包含与所述第一单链悬突的至少一部分互补的核苷酸序列，并且可由此与所述第一单链悬突杂交；并且其中所述第一寡核苷酸结构域和所述第二寡核苷酸结构域具有这样的组合长度，使得当所述第一靶标和所述第二靶标同时存在于所述关注的实体上并且所述检测探针组的探针结合到它们各自在所述关注的实体上的靶标时，所述第一单链悬突和所述第二单链悬突可杂交在一起；(b)在允许所述检测探针组与其在所述关注的实体上的各自的靶标结合的条件下保持所述组合，使得当所述关注的实体包含所述第一靶标和所述第二靶标时，所述第一检测探针和所述第二检测探针结合到所述关注的实体以形成双链复合物；(c)使所述双链复合物与核酸连接酶接触以产生包含所述第一双链部分的链和所述第二双链部分的链的连接模板；以及(d)检测所述连接模板，其中所述连接模板的存在指示所述样品中包含所述第一靶标和所述第二靶标的关注的实体的存在。2.如权利要求1所述的方法，其中所述检测包括对所述连接模板进行扩增并检测所述扩增产物的存在。3.如权利要求2所述的方法，其中所述扩增是或包括定量聚合酶链反应。4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述第一单链悬突和/或所述第二单链悬突的长度为四个核苷酸。5.如权利要求4所述的方法，其中所述第一单链悬突或所述第二单链悬突的核苷酸序列为gagt。6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述组合长度不超过200nm。7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述关注的实体固定在固体基底上。8.如权利要求7所述的方法，其中所述固体基底是或包含珠。9.如权利要求7所述的方法，其中所述固体基底是或包含表面。10.如权利要求9所述的方法，其中所述表面为过滤器、基质、膜、板、管和/或孔的捕获表面。11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中方法不包括在步骤(c)的所述接触之前，使所述双链复合物与连接所述第一寡核苷酸与所述第二寡核苷酸结构域的连接器寡核苷酸接触。12.如权利要求11所述的方法，其中所述连接器寡核苷酸与所述第一寡核苷酸结构域
的至少一部分和所述第二寡核苷酸结构域的至少一部分杂交。13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述第一靶结合部分和/或所述第二靶结合部分包含抗体剂。14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述检测探针组还包含针对第三靶标的另外的检测探针，所述另外的检测探针包含第三靶结合部分和偶联至所述第三靶结合部分的第三寡核苷酸结构域，所述第三寡核苷酸结构域包含双链部分和从所述第三寡核苷酸结构域的每一端延伸的第三单链悬突。15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述检测探针组包含2个至20个检测探针，每个检测探针针对特定靶标，所述检测探针中的每个包含靶结合部分和偶联至所述靶结合部分的寡核苷酸结构域，所述核苷酸结构域包含双链部分和从所述寡核苷酸结构域的至少一端延伸的单链悬突。16.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中(i)所述检测探针组含有两个不同的检测探针；并且(ii)所述双链复合物的特征在于所述双链复合物的每条链在核酸连接酶的存在下可连接。17.如权利要求14所述的方法，其中(i)所述检测探针组含有至少三个或更多个不同的检测探针；并且(ii)所述双链复合物的特征在于所述双链复合物的一条链在核酸连接酶的存在下可连接，而所述双链复合物的另一条链在核酸连接酶的存在下不可连接。18.如权利要求17所述的方法，其中所述双链复合物的不可连接链包含缺口。19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述检测探针组还包含对照探针，其中所述对照探针的特征在于所述对照探针与所述关注的实体的结合抑制连接模板的产生和/或抑制来自非靶生物实体的连接模板的扩增。20.如权利要求19所述的方法，其中所述对照探针被配置为结合对照参考。21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述核酸连接酶是或包含dna连接酶(例如，t4或t7 dna连接酶)。22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述样品来源于受试者的血液来源的样品(例如，血浆或血液样品)。23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述关注的实体是或包含完整细胞或其片段。24.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述关注的实体是或包含细胞外囊泡。25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述寡核苷酸结构域通过共价方式偶联至所述靶结合部分。26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述样品来自人受试者。27.如权利要求26所述的方法，其中所述检测探针组是癌症特异性的；并且所述连接模板的存在指示人受试者患有癌症或处于发展癌症的风险。28.如权利要求27所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：急性淋巴细胞性白血病、急性髓系白血病、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓系白血病、结直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃肠癌、霍奇金淋巴瘤、肾癌、肝癌、肺癌、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、皮肤癌和胃癌。
29.如权利要求27所述的方法，其中所述癌症为结直肠癌。30.如权利要求27所述的方法，其中所述癌症为肺癌。31.如权利要求27所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌。32.如权利要求27所述的方法，其中所述癌症为卵巢癌。33.如权利要求26至32中任一项所述的方法，其中所述人受试者为无症状人受试者。34.如权利要求33所述的方法，其中所述无症状人受试者具有癌症家族史。35.如权利要求33所述的方法，其中所述无症状人受试者先前接受过癌症治疗。36.如权利要求33所述的方法，其中所述无症状人受试者在癌症治疗后有癌症复发的风险。37.如权利要求33所述的方法，其中所述无症状人受试者在癌症治疗后有所缓解。38.如权利要求33至37中任一项所述的方法，其中所述无症状人受试者先前或定期筛选至少一种癌症生物标记物的存在。39.如权利要求26至32中任一项所述的方法，其中所述人受试者先前已筛选癌症。40.如权利要求39所述的方法，其中所述人受试者先前被诊断为患有或易患癌症。41.如权利要求26至40中任一项所述的方法，其中周期性地进行所述方法以筛选无症状人受试者的早期癌症或癌症复发。42.如权利要求26至32中任一项所述的方法，其中所述人受试者为确定患有癌症的人受试者。43.如权利要求42所述的方法，其还包括基于所述连接模板的存在和/或量来确定所述人受试者是否可能对治疗作出反应。44.如权利要求42或43所述的方法，其还包括基于所述连接模板的存在和/或量来选择用于施用于所述人受试者的治疗。45.如权利要求26至33中任一项所述的方法，其中所述人受试者为接受治疗的人受试者。46.如权利要求45所述的方法，其还包括在对所述人受试者进行治疗一段时间之后，用来自所述人受试者的第二样品重复所述方法的步骤(a)至步骤(d)。47.如权利要求46所述的方法，其还包括基于所述连接模板的量的变化来评估所述人受试者接受的治疗的功效。48.一种药盒，其包含至少一组检测探针，每组检测探针针对靶标，所述组包含：a.针对第一靶标的第一检测探针，其中所述第一检测探针包含第一靶结合部分和偶联至所述第一靶结合部分的第一寡核苷酸结构域，所述第一寡核苷酸结构域包含第一双链部分和从所述第一寡核苷酸结构域的一端延伸的第一单链悬突；以及b.针对第二靶标的第二检测探针，其中所述第二检测探针包含第二靶结合部分和与所述第二靶结合部分偶联的第二寡核苷酸结构域，所述第二寡核苷酸结构域包含第二双链部分和从所述第二寡核苷酸结构域的一端延伸的第二单链悬突，其中所述第二单链悬突包含与所述第一单链悬突的至少一部分互补的核苷酸序列，并且可由此与所述第一单链悬突杂交；其中所述第一寡核苷酸结构域和所述第二寡核苷酸结构域具有这样的组合长度，使得当所述第一靶标和所述第二靶标同时存在于关注的实体(例如，关注的生物实体)上并且所
述检测探针组的探针结合到所述关注的实体上的它们各自的靶标时，所述第一单链悬突和所述第二单链悬突可杂交在一起。49.如权利要求48所述的药盒，其中所述检测探针组包含2个至20个检测探针，每个检测探针针对不同的靶标，所述检测探针中的每个包含靶结合部分和与所述靶结合部分偶联的寡核苷酸结构域，所述核苷酸结构域包含双链部分和从所述寡核苷酸结构域的至少一端延伸的单链悬突。50.如权利要求48所述的药盒，其包含多个检测探针组，其中所述多个检测探针组的特征在于：(a)每组识别相同癌症的至少一个不同的生物标志物；或(b)每组识别不同癌症的至少一个不同的生物标志物；或(c)每组识别相同癌症的生物标志物(例如，至少两个)的不同组合；或(b)每组识别不同癌症的生物标志物(例如，至少两个)的不同组合；其中(a)、(b)、(c)或(d)中的每组包含至少2个或更多个检测探针，所述检测探针中的每个包含靶结合部分和与所述靶结合部分偶联的寡核苷酸结构域，所述核苷酸结构域包含双链部分和从所述寡核苷酸结构域的至少一端延伸的单链悬突。51.如权利要求50所述的药盒，其中所述癌症选自由以下组成的组：急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、结直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃肠癌、霍奇金淋巴瘤、肾癌、肝癌、肺癌、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、皮肤癌和胃癌。52.如权利要求48至51中任一项所述的药盒，其还包含用于捕获关注的实体的固体基底。53.如权利要求48至52中任一项所述的药盒，其还包含固定剂。54.如权利要求48至53中任一项所述的药盒，其还包含透化剂。55.如权利要求48至54中任一项所述的药盒，其还包含封闭剂。56.如权利要求48至55中任一项所述的药盒，其还包含核酸连接酶。57.如权利要求48至56中任一项所述的药盒，其还包含用于待扩增模板的一对或多对引物。58.如权利要求48至57中任一项所述的药盒，其用于筛选受试者的早期癌症。59.如权利要求58所述的药盒，其中所述受试者为无症状人受试者。60.如权利要求59所述的药盒，其中所述无症状人受试者具有癌症家族史。61.如权利要求59所述的药盒，其中所述无症状人受试者先前接受过癌症治疗。62.如权利要求59所述的药盒，其中所述无症状人受试者在癌症治疗后有癌症复发的风险。63.如权利要求59所述的药盒，其中所述无症状人受试者在癌症治疗后有所缓解。64.如权利要求58至63中任一项所述的药盒，其中所述受试者先前已筛选癌症。65.如权利要求64所述的药盒，其中所述人受试者先前被诊断为患有或易患癌症。66.如权利要求48至57中任一项所述的药盒，其用于监测已接受癌症治疗的受试者的肿瘤复发。67.如权利要求48至57中任一项所述的药盒，其用作与癌症治疗组合的伴随诊断。
68.如权利要求48至57中任一项所述的药盒，其用于监测或评估施用于有需要的受试者的治疗的功效。69.如权利要求48至57中任一项所述的药盒，其用于为有需要的受试者选择治疗。70.一种双链复合物，其包含：(a)包含第一靶标和第二靶标的关注的实体(例如，关注的生物实体)；(b)通过第一靶结合部分结合至所述第一靶标的第一检测探针，其中所述第一检测探针包含所述第一靶结合部分和偶联至所述第一靶结合部分的第一寡核苷酸结构域，所述第一寡核苷酸结构域包含第一双链部分和从所述第一寡核苷酸结构域的一端延伸的第一单链悬突；以及(c)通过第二靶结合部分结合至所述第二靶标的第二检测探针，其中所述第二检测探针包含所述第二靶结合部分和与所述第二靶结合部分偶联的第二寡核苷酸结构域，所述第二寡核苷酸结构域包含第二双链部分和从所述第二寡核苷酸结构域的一端延伸的第二单链悬突，并且其中所述第一单链悬突与所述第二单链悬突杂交。71.如权利要求70所述的双链复合物，其还包含通过第三靶结合部分结合至存在于所述关注的实体上的第三靶标的第三检测探针，其中所述第三检测探针包含所述第三靶结合部分和与所述第三靶结合部分偶联的第三寡核苷酸结构域，所述第三寡核苷酸结构域包含第三双链部分和从所述第三寡核苷酸结构域的至少一端延伸的第三单链悬突，并且其中所述第三单链悬突与所述第一单链悬突和/或所述第二单链悬突杂交；并且其中包含所述寡核苷酸结构域的链的所述双链复合物的一条链在核酸连接酶的存在下可连接，而包含所述寡核苷酸结构域的链的所述双链复合物的另一条链在核酸连接酶的存在下不可连接。72.如权利要求71所述的双链复合物，其中所述不可连接的链包含缺口。73.如权利要求72所述的双链复合物，其中所述缺口的长度为至少2个至8个核苷酸。74.如权利要求72所述的双链复合物，其中所述缺口的长度为至少6个核苷酸。75.如权利要求70至74中任一项所述的双链复合物，其中所述悬突的长度为8个核苷酸。76.一种提供用于检测关注的实体(例如，关注的生物实体)中的至少两个靶标的一组检测探针的方法，所述方法包括：a.提供针对第一靶标的第一候选检测探针，其中所述第一候选检测探针包含第一靶结合部分和偶联至所述第一靶结合部分的第一寡核苷酸结构域，所述第一寡核苷酸结构域包含第一双链部分和从所述第一寡核苷酸结构域的一端延伸的第一单链悬突，其中所述第一寡核苷酸结构域的长度为约20nm至约500nm；b.提供针对第二靶标的第二候选检测探针，其中所述第二候选检测探针包含第二靶结合部分和与所述第二靶结合部分偶联的第二寡核苷酸结构域，所述第二寡核苷酸结构域包含第二双链部分和从所述第二寡核苷酸结构域的一端延伸的第二单链悬突，其中所述第二单链悬突包含与所述第一单链悬突的至少一部分互补的核苷酸序列，并且可由此与所述第一单链悬突杂交，其中所述第二寡核苷酸结构域的长度为约20nm至约500nm；c.使包含所述第一靶标和所述第二靶标的关注的实体与所述第一候选检测探针和所
述第二候选检测探针接触；以及d.检测包含关注的实体、与所述关注的实体结合的第一候选检测探针和与所述关注的实体结合的第二候选检测探针的双链复合物的形成，其中所述第一单链悬突与所述双链复合物中的所述第二单链悬突杂交，从而基于所述双链复合物的存在选择所述第一寡核苷酸结构域和所述第二寡核苷酸结构域的长度，以提供包含针对第一靶标的第一检测探针和针对第二靶标的第二检测探针的一组检测探针。77.如权利要求76所述的方法，其还包括将所述第一寡核苷酸结构域偶联到所述第一靶结合部分。78.如权利要求76或77所述的方法，其还包括将所述第二寡核苷酸结构域偶联到所述第二靶结合部分。79.如权利要求76至78中任一项所述的方法，其中所述关注的实体是或包含细胞外囊泡。80.如权利要求79所述的方法，其中所述第一寡核苷酸结构域的长度为约20nm至约100nm；并且所述第二寡核苷酸结构域的长度为约20nm至约100nm。81.一种方法，其包括以下步骤：(a)提供或获得来自受试者的血液来源的样品；(b)在所述血液来源的样品中检测表达疾病、病症或病状的靶生物标志物特征的细胞外囊泡(“表达靶生物标志物特征的细胞外囊泡”)其中所述检测步骤包括检测测定，其包括：(a)使所述表达靶生物标志物特征的细胞外囊泡与一组检测探针接触，每个检测探针针对所述靶生物标志物特征的靶生物标志物，所述组包含至少两个检测探针，使得产生包含所述细胞外囊泡和所述检测探针组的组合，其中所述组中的所述至少两个检测探针中的每个包含：(i)针对所述靶生物标志物特征的靶生物标志物的靶结合部分；以及(ii)与所述靶结合部分偶联的寡核苷酸结构域，所述寡核苷酸结构域包含双链部分和从所述寡核苷酸结构域的一端延伸的单链悬突部分，其中所述至少两个检测探针的单链悬突部分的特征在于它们在所述至少两个检测探针结合至相同的细胞外囊泡时可彼此杂交，(b)将所述组合维持在允许所述至少两个检测探针与其在所述细胞外囊泡上的各自靶标结合的条件下，使得所述至少两个检测探针可结合至表达所述靶生物标志物特征的相同的细胞外囊泡以形成双链复合物；(c)使所述双链复合物与核酸连接酶接触以产生连接模板；以及(d)检测/测量所述连接模板，其中所述连接模板的存在指示所述表达靶生物标志物特征的细胞外囊泡在血液来源的样品中的存在和/或水平；(c)将从所述检测测定获得的样品信息与包括参考阈值水平的参考信息进行比较；(d)当所述血液来源的样品示出相对于所述参考阈值水平升高水平的表达靶生物标志物特征的细胞外囊泡时，将所述受试者分类为患有或易患疾病、病症或病状。82.如权利要求81所述的方法，其中所述检测测定不包括在与所述核酸连接酶接触之
前，使所述双链复合物与连接所述至少两个检测探针的寡核苷酸结构域的连接器寡核苷酸接触。83.如权利要求82所述的方法，其中所述连接器寡核苷酸与所述至少两个检测探针的寡核苷酸结构域中的每个的至少一部分杂交。84.如权利要求81至83中任一项所述的方法，其中所述组包含至少3个检测探针，每个检测探针针对所述靶生物标记特征的靶生物标记。85.如权利要求81至84中任一项所述的方法，其中所述组包含2个至50个检测探针或3个至50个检测探针，每个检测探针针对所述靶生物标记特征的靶生物标记。86.如权利要求81至85中任一项所述的方法，其中所述参考阈值水平通过在来自参考受试者群体的可比样品中观察到的表达靶生物标志物特征的细胞外囊泡的水平来确定。87.如权利要求86所述的方法，其中所述参考受试者群体包括以下受试者群体中的一个或多个：健康受试者、诊断为患有良性肿瘤或肿块的受试者以及患有非相关疾病、病症和/或病状的受试者。88.如权利要求81至87中任一项所述的方法，其中所述靶生物标志物特征包含：(1)第一靶生物标志物，其包含细胞外囊泡相关膜结合多肽；以及(2)第二靶生物标志物，其包含选自由以下组成的组的靶生物标志物：表面蛋白生物标志物、囊泡内蛋白生物标志物和囊泡内rna生物标志物，其中当所述第二靶生物标志物选自所述表面蛋白生物标志物中的一个或多个时，所述选定的一个或多个表面蛋白生物标志物和所述第一靶生物标志物的细胞外囊泡相关膜结合多肽是不同的。89.如权利要求81至88中任一项所述的方法，其中所述血液来源的样品已经受尺寸排阻色谱以分离(例如，直接从所述血液来源的样品)具有包括细胞外囊泡的关注的大小范围的纳米颗粒。90.如权利要求81至89中任一项所述的方法，其中所述检测步骤还包括捕获测定。91.如权利要求90所述的方法，其中在所述检测测定之前进行所述捕获测定。92.如权利要求90或91所述的方法，其中所述捕获测定涉及使所述血液来源的样品与包含结合到所述第一靶生物标志物的靶捕获部分的捕获剂接触，所述第一靶生物标志物包含细胞外囊泡相关膜结合多肽。93.如权利要求92所述的方法，其中所述捕获剂是或包含固体基底，所述固体基底包含与其缀合的靶捕获部分。94.如权利要求93所述的方法，其中所述固体基底包含磁珠。95.如权利要求92至94中任一项所述的方法，其中所述靶捕获部分是或包含抗体剂。96.如权利要求88至95中任一项所述的方法，其中所述检测探针的靶结合部分针对所述第二靶生物标志物。97.如权利要求88至96中任一项所述的方法，其中所述检测探针的靶结合部分是或包含针对所述第二靶生物标志物的至少一种抗体剂。98.如权利要求81至97中任一项所述的方法，其中所述至少两个检测探针的靶结合部分针对所述靶生物标志物特征的相同的靶生物标志物。99.如权利要求98所述的方法，其中所述至少两个检测探针的寡核苷酸结构域不同。100.如权利要求88至99中任一项所述的方法，其中当所述靶生物标志物特征包含至少
一种囊泡内rna生物标志物时，所述检测测定还涉及逆转录pcr。101.如权利要求88至100中任一项所述的方法，其中当所述靶生物标志物特征包含至少一种囊泡内蛋白生物标志物时，在所述检测测定之前对所述表达靶生物标志物特征的细胞外囊泡进行涉及固定和/或透化的处理。102.如权利要求88至101中任一项所述的方法，其中当所述靶生物标志物特征包含至少一种表面蛋白生物标志物和/或囊泡内蛋白生物标志物时，所述检测测定还涉及免疫测定(包括例如免疫
‑
pcr和/或邻近连接测定)。103.如权利要求81至102中任一项所述的方法，其中所述疾病、病症或病状所针对的所述靶生物标志物特征对癌症具有特异性。104.如权利要求103所述的方法，其中进行所述方法以筛选所述受试者的早期癌症、晚期癌症或复发癌症。105.如权利要求103或104所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病、胆管癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、结直肠癌、子宫内膜癌、食道癌、胃肠癌、霍奇金淋巴瘤、肾癌、肝癌、肺癌、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤、皮肤癌和胃癌。106.如权利要求103至105中任一项所述的方法，其中所述受试者具有以下特征中的至少一个或多个：(i)易患癌症(例如，处于平均人群风险(即没有遗传风险)或具有癌症遗传风险)的无症状受试者；(ii)具有癌症家族史的受试者(例如，具有一个或多个有癌症史的一级亲属的受试者)；(iii)被确定在一个或多个癌症相关基因中具有一个或多个种系突变的受试者；(iv)老年受试者，例如65岁或以上；(v)具有癌症的一个或多个非特异性症状的受试者；以及(vi)推荐进行周期性癌症筛选的受试者；(vii)诊断为具有经成像证实的肿块的受试者；(viii)在经历降低风险的手术干预之前处于癌症遗传风险的受试者；(ix)患有良性肿瘤的受试者；以及(x)先前接受过癌症治疗的受试者。107.如权利要求103至106中任一项所述的方法，其中所述方法与以下诊断测定中的一种或多种组合使用：(i)受试者的年度体检；(ii)癌症筛选测试；(iii)筛选血浆中与癌症相关的循环肿瘤dna和/或蛋白生物标志物的基因突变的基因测定；(iv)涉及免疫荧光染色以鉴定细胞表型和标志物表达的测定，之后通过下一代测序进行扩增和分析；以及(v)种系和体细胞突变测定，或涉及无细胞肿瘤dna、液体活检、血清蛋白和无细胞dna和/或循环肿瘤细胞的测定。
108.如权利要求103至107中任一项所述的方法，其中进行所述方法以监测癌症患者对抗癌疗法的治疗的反应和/或癌症复发/转移。109.一种用于检测疾病、病症或病状(例如，癌症)的药盒，其包含：(a)捕获剂，其包含针对细胞外囊泡相关膜结合多肽的靶捕获部分；以及(b)一组检测探针，所述组包含至少两个检测探针，每个检测探针针对疾病、病症或病状(例如，癌症)的靶生物标志物特征的靶生物标志物，其中所述至少两个检测探针中的每个包含：(i)针对所述靶生物标志物特征的靶生物标志物的靶结合部分；以及(ii)与所述靶结合部分偶联的寡核苷酸结构域，所述寡核苷酸结构域包含双链部分和从所述寡核苷酸结构域的一端延伸的单链悬突部分，其中所述至少两个检测探针的单链悬突部分的特征在于它们在所述至少两个检测探针结合至相同的细胞外囊泡时可彼此杂交；其中疾病、病症或病状(例如，癌症)的所述靶生物标志物特征包含：至少一种细胞外囊泡相关膜结合多肽和选自由以下组成的组的至少一个靶生物标志物：表面蛋白生物标志物、囊泡内蛋白生物标志物和囊泡内rna生物标志物，其中当所述至少一个靶生物标志物选自所述表面蛋白生物标志物中的一个或多个时，所述选定的一个或多个表面蛋白生物标志物和所述至少一种细胞外囊泡相关膜结合多肽是不同的。110.如权利要求109所述的药盒，其中所述至少两个检测探针的靶结合部分各自针对所述靶生物标志物特征的相同的靶生物标志物。111.如权利要求110所述的药盒，其中所述至少两个检测探针的寡核苷酸结构域不同。112.如权利要求109至111中任一项所述的药盒，其中所述至少两个检测探针的靶结合部分各自针对所述靶生物标志物特征的不同的靶生物标志物。113.如权利要求109至112中任一项所述的药盒，其还包含至少一种另外的试剂(例如，连接酶、固定剂和/或透化剂)。114.一种复合物，其包含：(a)表达疾病、病症或病状(例如，癌症)的靶生物标志物特征的细胞外囊泡，其中所述靶生物标志物特征包含：(1)第一靶生物标志物，其包含至少一种细胞外囊泡相关膜结合多肽；以及(2)第二靶生物标志物，其包含选自由以下组成的组的至少一种靶生物标志物：表面蛋白生物标志物、囊泡内蛋白生物标志物和囊泡内rna生物标志物，其中当所述至少一个靶生物标志物选自所述表面蛋白生物标志物中的一个或多个时，所述选定的一个或多个表面蛋白生物标志物和所述至少一种细胞外囊泡相关膜结合多肽是不同的；其中所述细胞外囊泡固定在固体基底上，所述固体基底包含针对所述细胞外囊泡相关膜结合多肽的靶捕获部分；(b)各自结合到所述细胞外囊泡的第一检测探针和第二检测探针，其中所述第一检测探针和所述第二检测探针中的每个包含：(i)针对所述靶生物标志物特征的第二靶生物标志物的靶结合部分；以及
(ii)与所述靶结合部分偶联的寡核苷酸结构域，所述寡核苷酸结构域包含双链部分和从所述寡核苷酸结构域的一端延伸的单链悬突部分，其中所述第一检测探针和所述第二检测探针的单链悬突部分彼此杂交。115.如权利要求114所述的复合物，其中所述至少两个检测探针的靶结合部分各自针对所述靶生物标志物特征的相同的靶生物标志物。116.如权利要求115所述的复合物，其中所述至少两个检测探针的寡核苷酸结构域不同。117.如权利要求114所述的复合物，其中所述至少两个检测探针的靶结合部分各自针对所述靶生物标志物特征的不同的靶生物标志物。118.如权利要求114至117中任一项所述的复合物，其中所述固体基底包含磁珠。119.如权利要求114至118中任一项所述的复合物，其中所述靶捕获部分是或包含抗体剂。

技术总结
本公开提供了用于靶实体检测的技术。本公开的一个方面提供用于检测(例如，早期检测)疾病、病症或病状(例如，癌症)的技术。在另一方面，本文提供的技术可用于选择和/或监测和/或评估施用于有需要的受试者(例如，确定患有或易患癌症的受试者)的治疗的功效。在一些实施方案中，本文提供的技术可用于开发伴随诊断，例如，通过结合治疗测量肿瘤负荷和肿瘤负荷的变化。变化。变化。


技术研发人员：J
受保护的技术使用者：仁慈生物分析公司
技术研发日：2020.02.28
技术公布日：2021/12/3