一种抗肿瘤枸杞薏米复合酵素的制作工艺的制作方法

1.本发明涉及复合酵素领域，具体是一种抗肿瘤枸杞薏米复合酵素的制作工艺。


背景技术：

2.复合酵素是在人身体内起反应作用的，除了先天性原因缺酵素，导致人的生理机能不正常外，人从年轻到衰老，体内的酵素也从旺盛到不足，摄入的养料不容易消化吸收，依靠摄取养料来合成酵素的能力下降，造成恶性循环，新陈代谢便趋于缓慢，容易疲劳，一旦患病就不易痊愈。为了延缓衰老，防病治病，增强体质，需要补充多种的酵素。
3.当今社会，肿瘤和癌症是最为致命的疾病之一，虽然市面上的复合酵素产品较多，但基本只起到基本的保健作用，并不能对肿瘤起到有效的抑制作用。
4.枸杞具有丰富的营养价值和特殊的医疗保健作用，具有抑制肿瘤作用的成分，枸杞中的枸杞多糖是一种水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分,能够调节机体免疫功能、有效抑制肿瘤生长和细胞突变。
5.薏仁中的薏仁油、薏仁酯等成分有抗肿瘤作用，如抑制癌细胞转移和增生、诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成且能提高放射时的敏感性等。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种抗肿瘤枸杞薏米复合酵素的制作工艺，它能制作出具有抑制肿瘤和癌细胞的枸杞薏米复合酵素，更加在满足人们日常保健需求的同时，还能降低人们罹患肿瘤和癌症的风险。
7.本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
8.一种抗肿瘤枸杞薏米复合酵素的制作工艺，包括以下步骤，
9.步骤一：将枸杞和薏米通过称重、打浆、酶解、过滤、杀菌的预处理得到发酵底物；
10.步骤二：采用一定菌种比例的益生菌对所述发酵底物进行接种发酵；
11.步骤三：以5％
‑
7％的所述益生菌接种量、8％
‑
10％的所述发酵底物浓度发酵6d
‑
8d的时间；
12.步骤四：发酵结束，发酵液经低温离心、过滤，得酵素原液；
13.步骤五：将所述酵素原液稀释一定的浓度得到复合酵素。
14.进一步的，所述步骤一中采用一定比例的纤维素酶和果胶酶对米浆进行酶解。
15.进一步的，所述益生菌的菌种组成为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌。
16.对比现有技术，本发明的有益效果在于：
17.通过本发明的制作工艺，以枸杞和薏米为原材料，利用枸杞具有抑制肿瘤作用的成分和枸杞中能够调节机体免疫功能、有效抑制肿瘤生长和细胞突变的活性成分，将枸杞和薏米这两种材料同时发酵制成的发酵底物再稀释一定浓度后得到枸杞薏米复合酵素，可利用枸杞薏米复合酵素开发具有抗肿瘤功能的保健食品，从而被大众长期食用后起到制癌
细胞转移和增生、诱导癌细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成且能提高放射时的敏感性等功效，降低人们罹患肿瘤和癌症的风险。
附图说明
18.附图1是本发明的接种量对胞外多糖含量影响的折线图。
19.附图2是本发明的底物浓度对胞外多糖含量影响的折线图。
20.附图3是本发明的菌种比例对胞外多糖影响的折线图。
21.附图4是本发明的发酵时间对残糖量影响的折线图。
22.附图5是本发明的发酵时间对胞外多糖含量影响的折线图。
23.附图6是本发明的底物浓度对残糖量影响的折线图。
24.附图7是本发明的枸杞薏米复合酵素抗肿瘤能力的折线图。
25.附图8是本发明的人非小细胞肺癌细胞图。
具体实施方式
26.下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所限定的范围。
27.本发明所述是一种抗肿瘤枸杞薏米复合酵素的制作工艺，包括以下步骤，
28.步骤一：将枸杞和薏米通过称重、打浆、酶解、过滤、杀菌的预处理得到发酵底物；
29.步骤二：采用一定菌种比例的益生菌对所述发酵底物进行接种发酵；
30.步骤三：以5％
‑
7％的所述益生菌接种量、8％
‑
10％的所述发酵底物浓度发酵6d
‑
8d的时间；
31.步骤四：发酵结束，发酵液经低温离心、过滤，得酵素原液；
32.步骤五：将所述酵素原液稀释一定的浓度得到复合酵素。
33.优选的，所述步骤一中采用一定比例的纤维素酶和果胶酶对米浆进行酶解。
34.优选的，所述益生菌的菌种组成为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌。
35.实施例：(一)枸杞薏米复合酵素最佳制作工艺的确定
36.1.实验预处理，
37.(1)称重、打浆：将枸杞和薏米称重，按料水质量比1：10加水，100℃浸泡30min后用高速组织捣碎机打浆。
38.(2)酶解：采用纤维素酶和果胶酶(酶活比1:1)对枸杞薏米浆进行酶解，酶添加量800u/g，酶解温度55℃，酶解时间120min，酶解结束后90℃灭酶10min，酶解液经400目筛网过滤即得枸杞提液。
39.(2)杀菌：枸杞薏米水提液分装后经95℃杀菌15min作为发酵底物。
40.2.枸杞薏米复合酵素最佳工艺的制备，
41.采用益生菌(保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌)进行接种发酵，以胞外多糖含量、残糖量作为评价指标。通过设置菌种比例和发酵底物浓度，将益生菌按照不同的总接种量接种到发酵底物中，在37℃下静置发酵后确定最佳接种量；制备不
同浓度的发酵底物，将益生菌按照总接种量10％等比例添加到发酵底物中，静置发酵后确定最佳底物浓度；调整发酵底物浓度为10％，总接种量10％，将益生菌按照不同菌种比例接种到发酵底物中，在37℃下静置发酵后确定最佳菌种比例；设发酵底物浓度10％，将4种益生菌按照总接种量10％的比例接种到发酵底物中，37℃条件下静置发酵，考察不同发酵时间对发酵液中胞外多糖含量和残糖量的影响，确定最佳发酵时间。在单因素试验的基础上，采用正交试验的方法，研究益生菌发酵枸杞薏米酵素最佳发酵工艺。选取接种量、发酵底物、菌种比例和发酵时间4个因素，每个因素取3个水平，采用l9(34)正交试验表，以胞外多糖含量为评价指标。发酵结束，发酵液经低温离心，过滤，得酵素原液。
42.(二)对枸杞薏米酵素抗肿瘤的能力进行分析
43.依据抑制率＝(对照组平均吸光度值
‑
加药组平均吸光度值))/对照组平均吸光度值
×
100％这个公式，对细胞存活率进行测定。将样品组分别按浓度梯度为0.2mg/ml，2mg/ml，20mg/ml从左至右，从上至下依次加入，对照组(即只加细胞不加药物)也如此，并于加mtt前取样镜检。
44.将各项实验数据统计到下列表格中，
45.(一)单因素结果
46.1.接种量
[0047][0048]
2.发酵底物浓度
[0049][0050]
3.菌种比例
[0051][0052]
4.发酵时间
[0053][0054]
(二)正交试验
[0055]
1.l9(34)正交实验表
[0056][0057]
2.枸杞薏米复合酵素发酵工艺正交实验结果
[0058][0059]
3.正交试验方差分析表(α＝0.05)
[0060][0061]
通过上述实验数据表格，并结合附图1
‑
6，以胞外多糖的含量为评价指标，通过单因素实验和正交试验确定发酵底物浓度9％、接种量6％、菌种比例(保加利亚乳杆菌：嗜热链球菌：嗜酸乳杆菌：青春双歧杆菌)为1：1：2：2、发酵时间为6d为最佳发酵工艺条件，在此条件下制备的枸杞薏米复合酵素原液胞外多糖含量为0.472mg/ml。
[0062]
(三)枸杞薏米复合酵素抗肿瘤活性测定
[0063]
平行组：
[0064][0065][0066][0067]
根据上述枸杞薏米复合酵素抗肿瘤活性测定的数据得出发酵底物稀释不同浓度的抗肿瘤能力，研究结果表明，表明枸杞薏米复合酵素原液具有抗肿瘤的能力且在稀释浓度梯度为10
‑3时，其抗肿瘤能力最大。
[0068]
本实施例为最佳制作工艺，并不是唯一制作工艺，即使在材料配比上有所偏差，只要是采用本发明的方法制备枸杞薏米复合酵素的，均属于本发明的保护范围。