一种具有抗疲劳作用的参石草制备方法与流程

1.本发明涉及保健品技术领域，尤其涉及一种具有抗疲劳作用的参石草制备方法。


背景技术：

2.在人口老龄化是当今世界人口发展的趋势，我国已进入老龄化社会，人口年龄结构的变化正在广泛而深刻地影响着人类社会生活的各个方面，因而人口老龄化也日益成为世界各国关注的重大问题。老年人口的增加必然对医疗保健有更多的需求，尤其是慢病在老年人多见。
3.针对这一问题，不能光靠医疗进行解决，对付亚健康的问题不能靠药物去解决，而是要从预防和保健方面去解决，而保健产品是一个很好的选择，因此提出一种具有抗疲劳作用的参石草，可以有效利用药材进行保健护理。
4.疲劳是现代社会中人们经历的一个普遍的亚健康或健康问题。严重的一部分人是由于疲劳综合症引起的，至今病因不明并缺乏有效的治疗方法。参石草对这类患者也有部分治疗作用。


技术实现要素：

5.本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种具有抗疲劳作用的参石草制备方法。
6.为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
7.一种具有抗疲劳作用的参石草制备方法，该具有抗疲劳作用的参石草制备方法由以下原料制成：人参40％-50％、铁皮石斛35％-50％和北虫草8％-15％。
8.优选的，所述包括如下步骤：
9.s1、选选取材料进行晾晒，得到干燥原料；
10.s2、按照质量百分比称量各原料，分别进行粉碎，得到原料粉末；
11.s3、将原料粉末混合加入到60％无水乙醇溶剂中，投料至超声波萃取罐，开启冷却水循环，控制罐体内温度为23-27℃，超声萃取160-200min，收集萃取液，采用380-420目的滤袋过滤，收集混合溶液；
12.s4、将混合溶液进行减压加热浓缩，持续2小时至3小时，得到粘稠物料；
13.s5、将粘稠物料投入造粒机中进行造粒，然后制成片剂或颗粒制剂，即可完成制备。
14.优选的，所述人参为红参、生晒参或白参中的一种或多种混合物。
15.优选的，所述人参的标志性成分为人参皂甙。
16.优选的，所述铁皮石斛的标志性成分为多糖。
17.优选的，所述北虫草的标志性成分为腺苷和虫草素。
18.优选的，所述人参皂甙的测定方法包括如下步骤：
19.a1、称量人参粉末1克，在索氏提取器中加入三氯甲烷，加热回流三小时至四小时，
得到溶剂；
20.a2、弃去三氯甲烷溶液，在滤纸上药渣挥干溶剂，连通滤纸移入锥形瓶中；
21.a3、在锥形瓶中加入50毫升饱和正丁醇，放置过夜，然后超声处理30 分钟制40分钟，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液25毫升；
22.a4、将续滤液加入蒸发皿中蒸干，残渣加入甲醇溶解，转移至量瓶中，摇匀，过滤，即可得到试验品溶剂；
23.a5、在实验品溶剂中加入10％硫酸乙醇溶液，在105摄氏度加热至斑点显色清晰状态，分别在日光和紫外灯下检视；
24.a6、对照药材色谱和品色谱进行测定。
25.优选的，所述多糖的测定方法包括如下步骤：
26.b1、称量铁皮石斛1克，加入50毫升甲醇，超声处理30分钟至35分钟，过滤蒸干，残渣加水15毫升溶解，得到第一液体；
27.b2、用石油醚在60摄氏度至90摄氏度条件下，洗涤两侧，每次20毫升，弃去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗涤两次，每次20毫升，弃去洗液，得到第二溶液；
28.b3、将第二溶液用饱和正丁醇振摇提取两次，每次20毫升，合并正丁醇，蒸干，残渣加入1毫升甲醇溶解，得到实验品溶剂；
29.b4、照薄层色谱法试验，吸收实验品溶剂，点于聚酰胺薄膜上，形成条状，以乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水为展开剂，展开烘干；得到试验条；
30.b5、将试验条喷以三氯化铝溶液，在105摄氏度下烘干3分钟，至于紫外光灯下检视，进行色谱对比。
31.优选的，所述腺苷和虫草素的测定方法包括如下步骤：
32.c1、精确称取25mg虫草素和25mg腺苷,用提取液定容至100.00ml，即得虫草素和腺苷标准储备溶液；
33.c2、将标准储备溶液稀释10倍，得到虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液。
34.c3、处理固体样品，称取0.2g于50ml容量瓶中，加入40ml提取液，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50ml，摇匀经0.45μm滤膜过滤，清液待分析；
35.c4、处理液体样品，取均匀试样10ml置于50ml容量瓶中，加入甲醇10 ml，混匀，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50ml摇匀经0.45μm 滤膜过滤，清液待分析；
36.c5、制作标准工作曲线，精密吸取虫草素和腺苷混合标准溶液1.0ml， 10.0ml分别置于100ml容量瓶中，用提取液定容到100ml，摇匀，得到 0.25μg/ml，2.50μg/ml虫草素和腺苷混合标准溶液。分别取10μl0.25μg/ml， 2.50μg/ml，25.0μg/ml标准工作系列溶液进样分析，以测得的虫草素和腺苷的峰面积，分别对虫草素和腺苷的浓度绘制标准曲线；
37.c6、测定样品，取样品滤液10μl进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量；
38.c7、根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中虫草素和腺苷含量，计算出样品中的含量，计算公式：
[0039][0040]
式中：
[0041]
x——试样中虫草素和腺苷含量，单位为毫克每一百克(毫升)(mg/100g 或mg/100ml)；
[0042]
c——样液的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
[0043]
v——样品的定容体积，单位为毫升(ml)；
[0044]
m——样品的取样量，单位为克(g)；
[0045]
计算结果保留三位有效数字。
[0046]
本发明提供的一种具有抗疲劳作用的参石草制备方法，通过结合人参、铁皮石斛和北虫草的功能特点、采用新颖提取技术，有效提取有效成分，进一步开拓抗疲劳作用，从药理学和中医学的传统理论为指导，通过实验研究，得出三者的配伍应用能取长补短，取得更好的效果，有效提高抗疲劳作用，利于推广使用。
附图说明
[0047]
图1为本发明的负重游泳试验表；
[0048]
图2为本发明的负重游泳时间统计表；
[0049]
图3为本发明的全血乳酸统计表；
[0050]
图4为本发明的肝糖原统计表；
[0051]
图5为本发明的血浆、尿素和氮统计表。
具体实施方式
[0052]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0053]
一种具有抗疲劳作用的参石草制备方法，该具有抗疲劳作用的参石草制备方法由以下原料制成：人参40％-50％、铁皮石斛35％-50％和北虫草8％-15％。
[0054]
作为优选的，所述包括如下步骤：
[0055]
s1、选选取材料进行晾晒，得到干燥原料；
[0056]
s2、按照质量百分比称量各原料，分别进行粉碎，得到原料粉末；
[0057]
s3、将原料粉末混合加入到60％无水乙醇溶剂中，投料至超声波萃取罐，开启冷却水循环，控制罐体内温度为23-27℃，超声萃取160-200min，收集萃取液，采用380-420目的滤袋过滤，收集混合溶液；
[0058]
s4、将混合溶液进行减压加热浓缩，持续2小时至3小时，得到粘稠物料；
[0059]
s5、将粘稠物料投入造粒机中进行造粒，然后制成片剂或颗粒制剂，即可完成制备。
[0060]
作为优选的，所述人参为红参、生晒参或白参中的一种或多种混合物。
[0061]
作为优选的，所述人参的标志性成分为人参皂甙。
[0062]
作为优选的，所述铁皮石斛的标志性成分为多糖。
[0063]
作为优选的，所述北虫草的标志性成分为腺苷和虫草素。
[0064]
作为优选的，所述人参皂甙的测定方法包括如下步骤：
[0065]
a1、称量人参粉末1克，在索氏提取器中加入三氯甲烷，加热回流三小时至四小时，
得到溶剂；
[0066]
a2、弃去三氯甲烷溶液，在滤纸上药渣挥干溶剂，连通滤纸移入锥形瓶中；
[0067]
a3、在锥形瓶中加入50毫升饱和正丁醇，放置过夜，然后超声处理30 分钟制40分钟，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液25毫升；
[0068]
a4、将续滤液加入蒸发皿中蒸干，残渣加入甲醇溶解，转移至量瓶中，摇匀，过滤，即可得到试验品溶剂；
[0069]
a5、在实验品溶剂中加入10％硫酸乙醇溶液，在105摄氏度加热至斑点显色清晰状态，分别在日光和紫外灯下检视；
[0070]
a6、对照药材色谱和品色谱进行测定。
[0071]
作为优选的，所述多糖的测定方法包括如下步骤：
[0072]
b1、称量铁皮石斛1克，加入50毫升甲醇，超声处理30分钟至35分钟，过滤蒸干，残渣加水15毫升溶解，得到第一液体；
[0073]
b2、用石油醚在60摄氏度至90摄氏度条件下，洗涤两侧，每次20毫升，弃去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗涤两次，每次20毫升，弃去洗液，得到第二溶液；
[0074]
b3、将第二溶液用饱和正丁醇振摇提取两次，每次20毫升，合并正丁醇，蒸干，残渣加入1毫升甲醇溶解，得到实验品溶剂；
[0075]
b4、照薄层色谱法试验，吸收实验品溶剂，点于聚酰胺薄膜上，形成条状，以乙醇-丁酮-乙酰丙酮-水为展开剂，展开烘干；得到试验条；
[0076]
b5、将试验条喷以三氯化铝溶液，在105摄氏度下烘干3分钟，至于紫外光灯下检视，进行色谱对比。
[0077]
作为优选的，所述腺苷和虫草素的测定方法包括如下步骤：
[0078]
c1、精确称取25mg虫草素和25mg腺苷,用提取液定容至100.00ml，即得虫草素和腺苷标准储备溶液；
[0079]
c2、将标准储备溶液稀释10倍，得到虫草素标准溶液和腺苷混合标准溶液。
[0080]
c3、处理固体样品，称取0.2g于50ml容量瓶中，加入40ml提取液，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50ml，摇匀经0.45μm滤膜过滤，清液待分析；
[0081]
c4、处理液体样品，取均匀试样10ml置于50ml容量瓶中，加入甲醇10 ml，混匀，超声30min，取出，冷却后用提取液定容到50ml摇匀经0.45μm 滤膜过滤，清液待分析；
[0082]
c5、制作标准工作曲线，精密吸取虫草素和腺苷混合标准溶液1.0ml， 10.0ml分别置于100ml容量瓶中，用提取液定容到100ml，摇匀，得到 0.25μg/ml，2.50μg/ml虫草素和腺苷混合标准溶液。分别取10μl0.25μg/ml， 2.50μg/ml，25.0μg/ml标准工作系列溶液进样分析，以测得的虫草素和腺苷的峰面积，分别对虫草素和腺苷的浓度绘制标准曲线；
[0083]
c6、测定样品，取样品滤液10μl进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量；
[0084]
c7、根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中虫草素和腺苷含量，计算出样品中的含量，计算公式：
[0085][0086]
式中：
[0087]
x——试样中虫草素和腺苷含量，单位为毫克每一百克(毫升)(mg/100g 或mg/100ml)；
[0088]
c——样液的浓度，单位为微克每毫升(μg/ml)；
[0089]
v——样品的定容体积，单位为毫升(ml)；
[0090]
m——样品的取样量，单位为克(g)；
[0091]
计算结果保留三位有效数字。
[0092]
本发明提供的一种具有抗疲劳作用的参石草制备方法，通过结合人参、铁皮石斛和北虫草的功能特点，进一步开拓抗疲劳作用，以现代药理学和传统中医学的理论为指导，通过实验研究，得出三者的配伍应用能取长补短，取得确实可靠的抗疲劳效果，有效提高保健作用，利于推广使用。
[0093]
实施例
[0094]
进行抗疲劳药理实验，采用灌胃法，对60只小鼠进行小剂量组50mg/ kg、中剂量组100mg/kg、大剂量组200mg/kg处理，以灌胃去离子水为对照组(cg)，连续灌15d，对小鼠负重力竭游泳时间、血乳酸、肝糖原的含量及血浆尿素氮进行测定，以研究药品的抗疲劳作用。
[0095]
具体包括如下步骤：
[0096]
1.药品成分:45％北虫草(蛹虫草)、40％人参、15％石斛。
[0097]
2.实验动物：3月龄雄性icr小鼠(体重36
±
3)。
[0098]
3.组别设置及给药剂量：将60只雄性3月龄icr小鼠(体重36
±
3)随即分为4组，每组15只。小剂量组灌胃50mg/kg的药品，中剂量灌胃100mg/kg 的药品，大剂量灌胃200mg/kg的药品。control组给与同体积的水。每天上午在10：00至11：00灌胃给药1次，连续灌胃15天。
[0099]
4.实验结果：
[0100]
第一，负重游泳试验：
[0101]
负重游泳时间的长短反应了动物运动疲劳的程度，运动耐力的提高表明了实验动物抗疲劳能力的加强。
[0102]
连续给小鼠灌胃15d后，进行负重游泳试验。末次灌胃30min后，给小鼠尾部负其体重的4％质量的铅丝。将小鼠放于水深为35cm，水温为21
±
1℃的游泳箱内游泳，直到力竭力竭判定的标准是小鼠至头部沉入水中10s内不能浮出水面，记录力竭时间。
[0103]
结果如图1和图2。
[0104]
实验结果表明：与对照组相比，各治疗组小鼠负重力竭游泳时间明显延长，大剂量组与对照组差异显著，有统计意义。各组游泳时间与灌胃剂量呈正相关，表明参石草产品可以起到抗疲劳的效果。
[0105]
第二，全血乳酸含量的测定：
[0106]
乳酸在机体供能体系中占有重要的地位，它是糖酵解供能的最终产物，又是有氧代谢供能系统中的重要氧代谢基质，并且乳酸可在肝脏内通过糖的异生作用转变为葡萄糖供能。但是如果机体内产生过量的乳酸.会使肌肉中 h 浓度上升.ph下降，进而引起一系列生化变化，就会引起疲劳。
[0107]
小鼠负重游泳后，休息10分钟，摘除眼球采血，用edta钠盐抗凝，按试剂盒说明书进行全血乳酸的测定，结果如图3。
[0108]
实验结果表明：与对照组相比较，参石草中剂量组与大剂量组小鼠血乳酸含量明显降低，大剂量组的全血乳酸含量与对照组差异显著，有统计意义。各组的全血乳酸含量与给药剂量呈正相关，表明参石草产品可起到延缓疲劳的效果。
[0109]
第三，肝糖原的测定：
[0110]
糖原是运动中重要的能源物质.机体剧烈运动需要消耗大量糖原，因此糖原储备也是评价机体抗疲劳的一个重要指标。
[0111]
小鼠负重游泳后，休息10分钟，在眼球采血后将小鼠处死.取出肝脏，生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取重量，每只小鼠取50mg肝脏按试剂盒说明书进肝糖原的测定，结果如图4。
[0112]
实验结果表明：与对照组(cg)相比较，参动各剂量组小鼠肝糖原含量均有明显增加，中剂量组与对照组差异均达显著水平，有统计意义，表明.参石草产品能增加运动小鼠肝糖原的储备.对提高运动能力和抗疲劳能力起到了一定的作用。
[0113]
第四，血浆尿素氮含量的测定
[0114]
研究显示，尿素氮(bun)的增加与机体对负荷适应能力呈负相关，机体 bun含量随运动负荷的增加而增加，所以bun是较为理想、灵敏的疲劳指标。
[0115]
小鼠负重游泳后，休息10分钟，眼球采血，用edta钠盐抗凝后3500转离心10分钟分离出血浆，那试剂盒说明书进行血浆尿素氮的测定(试剂盒购于南京建成，货号c013-1)，结果如图5。
[0116]
实验结果表明：与对照组相比较，参动产品各剂量组小鼠血浆尿素氮含量明显降低，差异显著，均有统计意义。且各组的全血乳酸含量与给药剂量呈正相关，说明参石草产品灌胃可以清除小鼠运动中产生的bun，产品可以起到抗疲劳的效果。