甘油三(
β
‑
羟基丁酸酯)与神经元短暂性脑缺血发作
1.相关申请的交叉引用
2.不适用。
3.关于联邦赞助的研究或开发的声明
4.不适用。
技术领域
5.本技术涉及医疗食品、营养补剂和药剂领域。本发明还涉及甘油三(β
‑
羟基丁酸酯)(其也称为甘油三丁酸酯，但在下文中称为gtβhb)的用途。本发明还涉及帮助处理神经元短暂性脑缺血发作(下文中称为ntia)的后遗症的模态、用于预防性地处理ntia后遗症的营养补剂、医疗食品和药物，或在ntia的饮食管理中的上述任一个的领域。本发明进一步涉及用于帮助减少或消除与ntia相关的神经缺损和/或减少或消除由ntia引起的细胞死亡的模态，特别地在进一步ntia之前预防性肠内给药gtβhb。本发明涉及已知患有先前ntia或具有患有先前ntia的人的症状的受试者群体中的上述所有内容，并且旨在抵消或避免或最小化或减少这样的受试者中后续ntia的影响。
背景技术：
6.脑中ntia是重要的健康问题，尤其在老年群体中，且最尤其在患有影响神经功能的其他病症的那些群体中。经常地，受影响的人甚至没有意识到ntia已经发生，并且只有观察到该人的一种或多种神经缺损症状的另一个人才意识到这一事实。另外，据观察，一旦一个人患有初次ntia，该人很可能患有其他ntia，尤其在之后几个月内，更特别地在一个月或两个月内，其中高比例的这样的后续ntia在先前一次之后的接下来2
‑
3天内发生。重复的ntia也被认为是更严重的卒中的标志。ntia与更严重的缺血性发作有关，因为ntia被定义为通常持续时间少于约1小时，以及然后受影响的区域被再灌注，通常是通过引起缺血的阻塞物的自发溶解或通过松弛正在限制血流(限制通常是由于动脉痉挛和/或收缩，这可能是由一些其他特发性过程引起的，或由受试者所暴露的一些环境因素带来的，或由受试者正在服用的一些药物/营养补剂和/或食物或心理应激诱导的)的动脉，或其组合。因此，存在对于可以帮助缓和或预防已知患有先前ntia的受试者或表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中后续ntia的营养/膳食补剂中的医疗食品或治疗方案的需要。
7.与卒中类似，ntia具有直接受缺血事件影响的“核心”区域以及受次要影响的半暗带区域。每个区域中影响的严重程度部分取决于缺血事件持续多长时间，受影响的区域是否有足够的二次灌注，以及成问题的特定细胞是否经历了多次缺血事件以及最近如何。在时间上明显分开的独立且不同的ntia可能不会导致累积效应，特别地如果受影响的细胞已经能够愈合，但是在相对较短的时间段内(数天
‑
数周
‑
数月)的多次ntia可能并且经常导致累积效应。因此，存在对于有助于预防神经缺损和脑细胞的其他缺血效应累积的方法的需要。
8.发明目的
9.本发明的一些实施方式的目的是提供了通过预期其他ntia事件发生而肠内给药甘油三(β羟基丁酸酯)(下文称为“gtβhb”)来减少或预防已知患有先前ntia的受试者或者表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中重复的神经元短暂性脑缺血发作(ntia)的神经缺损效应的方法。
10.本发明的一些实施方式的另一目的是提供通过预期其他ntia事件发生而向所述受试者肠内给药gtβhb来减少或预防已知患有先前ntia的受试者或者表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中由于重复的ntia引起的缺血事件神经元细胞死亡的方法。
11.本发明的一些实施方式的另外目的是提供通过预期其他ntia事件发生而肠内给药gtβhb来预防或减少已知患有先前ntia的受试者或者表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中随后ntia的核心缺血区域中的缺血性神经元细胞死亡的方法。
12.在受益于本说明书之后，本发明的实施方式的甚至另外的目的对于本领域普通技术人员将变得显而易见。
技术实现要素：
13.简而言之，本发明的上述目的和其他可以通过以下获得：向已知患有先前神经元ntia的受试者群体或表现出患有先前ntia的人的症状(并因此怀疑患有先前ntia)的受试者给药gtβhb以减少或消除或预防后续ntia的神经元缺血效应。由于后续ntia通常在先前ntia之后数天到数周至两
–
三个月至长达一年之内发生，因此口服给予gtβhb通常在先前ntia事件之后持续最长达12个月(总gtβhb给药期)。由于典型口服给药gtβhb在24小时时间段内被身体清除，因此口服给药gtβhb通常按份量大小每天进行，其中每日量分成分量(份量大小)并在24小时期间多次给药(使得份量大小乘以给药次数等于每日量)，通常为2
‑
4份，优选2
‑
3份。尽管有上述规定，但是可以在需要时使用更频繁、更小的份量大小，但由于它们在更频繁的时间表上使用不方便，通常不使用每24小时超过4次给药。如果在总gtβhb给药期期间发生其他ntia事件，则给药周期时钟将重置为从识别后续ntia时开始。每天口服gtβhb的量应当是导致血浆组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和血浆乙酰乙酸酯部分浓度为约2mm至7mm的量。通过将gtβhb递送的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分的水平维持在这些范围内，当组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分血浆水平如此维持时，通常与随后发生的ntia相关的神经元缺损、细胞死亡等被减少、消除或预防。
附图说明
14.不适用。
具体实施方式
15.本发明涉及已知在前一年内患有或怀疑(由于表现出患有先前ntia的那些人的症状)患有先前ntia的受试者，更尤其涉及在先前三个月、先前两个月、先前一个月、先前三周、先前2周、先前一周内患有或怀疑患有先前ntia的那些受试者，最尤其涉及在先前2
‑
3天内患有或怀疑患有先前ntia的那些受试者。在识别出这样的先前ntia已经发生或可能发生后，每天口服给药gtβhb，优选地连续地(虽然如此，但是基本上连续，间歇性地打断给药也是可以的)选自以下范围的时间段，所述范围具有的最小时间段和最大时间段选自以下：2
天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、35天、42天、49天、56天、58天、59天、60天、61天、62天、63天、70天、77天、84天、90天、91天、92天、98天、105天、112天、119天、120天、126天、133天、140天、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月和1年，前提是最大值大于最小值。如果在一个或多个中断部分的时间期间受试者没有遭受进一步ntia，则每天给药连续性的中断是可以适应的并且仍然在本发明内。虽然在中断期进一步ntia发生后立即重新给药gtβhb可能仍然有益，但缺乏给药连续性导致在这样的中断期ntia发生时缺乏组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分的存在，并且因此，本发明关于这样的中断期ntia的首要益处被丢失。尽管如此，当这样的中断期ntia发生时，用于gtβhb给药的时钟重新开始。此外，虽然在第一次ntia发生后立即开始gtβhb方案最有益，但延迟开始gtβhb给药也是可以的，并且被视为如同延迟是上述的“中断期”。因此，如果ntia在第零天发生，并且gtβhb给药直到第3天才开始，但在第1
‑
3天没有发生随后ntia，则给药期将继续计数，接下来的一天为第4天。然而，如果在第2天也发生ntia(第二次ntia)，那么本发明对于这样的第2天ntia的益处已经丧失，但是天数计数被重置为从第2天ntia开始作为第零天，其中现在的目的是对又另外的ntia(或第三次ntia)进行饮食管理。
16.不受理论的束缚，本发明的前提是gtβhb的给药导致在组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分中神经元细胞的灌注，导致当葡萄糖处于供应短缺时可以被利用的非常富含能源的环境。在健康的神经元细胞中，当葡萄糖和酮体两者都存在时，葡萄糖优先用作能量。当ntia发生时，灌注下降，使得神经元细胞只具有已存在浓度的能源。神经元细胞首先耗尽可用的葡萄糖(作为优选的能源)，并且在很短的时间后，该葡萄糖基本上被耗完。在受影响的细胞存在替代能量酮体的情况下，细胞可以继续存活，直到那些酮体也被消耗尽。在酮体存在的情况下，与当不存在酮体时相比，它们的存在使细胞有机会存活更长的时间段。由于ntia本质上只是暂时的，为受影响的细胞提供的额外存活时间可以足以足够长地避免细胞死亡，以进行再灌注并恢复受影响的细胞。因为，来自gtβhb的β
‑
羟基丁酸酯和乙酰乙酸酯的半衰期相对短(在单次肠内给药之后约24小时内恢复到给药前水平)，gtβhb的给药是按每日分量(份)给药，每天2
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4次，优选地每天3
‑
4次，且最优选地每天3次。
17.gtβhb是甘油的三酯，并且甘油的每个羟基基团都被β
‑
羟基丁酸酯部分酯化。每个分子中的每个β
‑
羟基丁酸酯部分基团独立地为d或l型，并且所给药的主体化合物可以是主体化合物中的任何或所有的混合物(即具有以下的化合物的混合物：(a)所有基团都为d型，(b)所有基团都为l型，(c)一些为d型且一些为l型，(d)以及选自(1)a和b、(2)a和c以及(3)a、b和c的化合物的混合物)。3
‑
羟基丁酰基基团的d和l型两者都是活性的，然而，l型的利用更慢，并且因此，优选3
‑
羟基丁酰基基团基本上全部或全部为d型。在特别优选的实施方式中，约90％至98％，更优选约96％的3
‑
羟基丁酰基基团为d型。尽管如此，其他量的d相比于l型的利用在本发明范围内，并且可以选自100％d至100％l，以及d和l型以任何比例的任何混合物。高度优选的实施方式是其中用于本发明的化合物甘油三(3
‑
羟基丁酸酯)的形式是甘油三(dl 3
‑
羟基丁酸酯)的那一个，dl是指主体化合物并且不一定是特定分子的混合物。这些化合物及其制造方法在us7,807,718中更充分地描述，其关于化合物及其制造的描述并入本文中；其相关部分在本文中于本实施例之前的第0019
‑
0025段中被重新详述。
18.gtβhb通常以通常在每天0.5g/kg至每天2.6g/kg体重的范围内的量(更特定地
0.5g/kg、0.55g/kg、0.6g/kg、0.65g/kg、0.7g/kg、0.75g/kg、0.8g/kg、0.85g/kg、0.9g/kg、0.95g/kg、1g/kg、1.1g/kg、1.2g/kg、1.3g/kg、1.4g/kg、1.5g/kg、1.6g/kg、1.7g/kg、1.8g/kg、1.9g/kg、2.0g/kg、2.1g/kg、2.3g/kg、2.4g/kg、2.5g/kg或2.6g/kg，以及介于这些特定列举的量中的任何量之间的中间量)，以2
‑
3个分开剂量口服/肠内给药，其对于60kg的女性来说，为约10
‑
52g/份(更特定地10g/份、12.5g/份、15g/份、17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份、50g/份或52g/份，以及介于这些特定列举的量中的任何量之间的中间量)，每天三次(大约每8小时一次)至约15
‑
72g/份(更特定地为15g/份、17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、27.5g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份，50g/份、55g/份、60g/份、65g/份、70g/份、75g/份或78g/份，以及介于这些特别列举的量中的任何量之间的中间量)，每天两次(大约每12小时一次)，并且对于70kg的男性来说，为约12
‑
60.7g/份(更特定地12g/份、15g/份、17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份、50g/份、55g/份、60g/份、55g/份、60g/份或60.7g/份，以及介于这些特定列举的量的任何量之间的中间量)，每天三次(大约每8小时一次)至约17.5
‑
91g/份(更特定地17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、27.5g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份、50g/份、55g/份、60g/份、65g/份、70g/份、75g/份、80g/份、85g/份、90g/份或91g/份，以及介于这些特定列举的量的任何量之间的中间量)，每天两次(大约每12小时一次)。这些剂量和份量大小旨在被给药这些化合物的平均典型受试者中导致总酮体(组合的β
‑
羟基丁酸酯和乙酰乙酸酯)血浆水平为2
‑
10mm(更特定地2mm、2.25mm、2.5mm、2.75mm、3mm、3.25mm、3.5mm、4mm、4.25mm、4.5mm、4.6mm、4.7mm、4.8mm、4.9mm、5.0mm、5.1mm、5.2mm、5.3mm、5.4mm、5.5mm、5.6mm、5.7mm、5.8mm、5.9mm、6.0mm、6.1mm、6.2mm、6.3mm、6.4mm、6.5mm、6.6mm、6.7mm、6.8mm、6.9mm、7.0mm，以及在这些特定列举的水平中的任何水平之间的中间水平，并且这些中的任何一个都可以作为范围的下限或范围的上限，前提是该范围的上限大于该范围的下限)。(乙酰乙酸酯是β
‑
羟基丁酸酯的氧化形式，其中β
‑
羟基基团被β
‑
氧亚基基团取代
19.(乙酰乙酸酯)。
20.当本发明中使用的gtβhb口服摄入时，酯主要在肠道中由于胰脂肪酶而被水解，释放出被吸收的β
‑
羟基丁酸酯部分，并且身体通过将其转化为乙酰乙酸酯(其转而实际上被细胞使用)来利用β
‑
羟基丁酸酯。本领域普通技术人员将知道如何在呈现非典型分布和/或代谢的受试者中调整这些份量大小，使得上述份量大小不会导致血液水平在正确范围内。(如果它们将组合的β
‑
羟基丁酸酯和乙酰乙酸酯的血浆水平提高到2mm至7mm的范围内，这样的修改的给药量被认为在本发明的范围内，尽管它们在本说明书中别处列出的给药的化合物的“份量大小”范围或主体g之外。)
21.gtβhb可以以任何可肠内给药的合适制剂形式给药，但在可肠内给药的合适载体中的溶液或混悬剂是优选的。由于涉及的份量大小相对大，传统的胶囊或片剂通常不实用，但是如果有人希望使用那些递送形式，没有理由不使用它们。
22.在本说明书中，在给出特定参数值的范围并给出这样的范围内的更特定的叙述值的任何情况下，每个特定值都可以作为新范围界限的基础，只要下限实际上小于上限。例如，在上一段落中，剂量范围被给出为“0.5g/kg至2.6g/kg”，其中更特定的表述为“0.5g/kg、0.55g/kg、0.6g/kg、0.65g/kg、0.7g/kg、0.75g/kg、0.8g/kg、0.85g/kg、0.9g/kg、0.95g/
kg、1g/kg、1.1g/kg、1.2g/kg、1.3g/kg、1.4g/kg、1.5g/kg、1.6g/kg、1.7g/kg、1.8g/kg、1.9g/kg、2.0g/kg、2.1g/kg、2.2g/kg、2.3g/kg、2.3g/kg、2.4g/kg、2.5g/kg或2.6g/kg”。基于此，任何更特定的列举量可以是新范围的下限，并且任何更大的特定列举量可以是该新范围的上限，并且每个这样构建的范围应当被视为本说明书中具体列举的。因此，作为实例而非限制，0.5至0.6；0.55至1.9、0.75至1.7、1.8至1.9的范围等均视为在本文中列举。这同样也适用于与基于体重、份量大小等的剂量相关的其他参数。
23.在对术语“包括(comprising)”的所有提及中，其旨在同样公开术语“基本上由
……
组成(consisting essentially of)”和“由
……
组成(consisting of)”。本说明书中对任何专利或专利申请的所有引用均应当被解释为包括通过援引以其整体并入这样的专利和这样的专利申请，但仅限于它们补充但不与本说明书中的特定陈述相矛盾的程度。与本说明书的任何部分相矛盾的任何通过援引并入本文中的任何陈述都应当被视为通过援引该矛盾的陈述并入而无效。术语“约”的任何使用应当被解释为意指数字后紧跟的最近的数位，如在以下非限制性实例中：(a)“约0.54”应当被视为涵盖至少0.535至<0.545的范围，以及(b)“约24”应当解释为意指至少23.5至<24.5的范围。对于任何在“约”后的数字，绝对数应当被视为公开，并且在“约0.54”中应当视为特定公开“0.54”以及上一句中的范围。
24.化合物及其一些制造过程的描述大体上如us 7,807,718所陈述，其为示例性的但非限制性公开，在下述6个段落中陈述。
25.当前描述的技术的酯可以以膳食补充剂和/或营养组合物的形式提供。本领域技术人员应当理解，本技术的这样的膳食补充剂或营养组合物可以利用常规方法(means)配制。膳食补充剂或营养组合物可以制成任何适合于向人体或动物给药的形式。例如，本技术的甘油酯酯类的口服给药可以是但不限于以下形式：胶囊、丸剂、液体、片剂、食用棒、饮料、凝胶、薄膜、口香糖(gums)等，尽管液体诸如溶液或混悬剂是优选的。
26.本技术的甘油酯可以通过任何可用的技术产生。例如，在一种非限制性方法中，它可以通过(a)甘油和/或甘油酯与(b)β
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羟基丁酸的酯化、转酯基作用或酯交换来产生。酯化、转酯基作用或酯交换可以使用化学或酶催化进行。
27.上述酯化反应(酯化/酯交换/转酯基作用)中合适的化学催化剂包括例如但不限于碱金属、碱土金属和过渡金属的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐和醇盐。碱金属或碱土金属的实例包括但不限于钠、锂、钾、镁、钙、钡、铁、锌和铜。当使用化学催化剂时，反应优选在约90℃至约200℃，替代地约120℃至约190℃，替代地约140℃至约180℃的温度下进行。
28.在上述酯化反应(酯化/酯交换/转酯基作用)中合适的示例性酶催化剂包括，例如但不限于，南极假丝酵母(candida antarctica)、皱褶假丝酵母(candida rugosa)、米曲霉(aspergillus oryzae)、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)、绵毛嗜热丝孢菌(thermomyces lanuginosa)、洋葱假单胞菌(pseudomonas cepacia)、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)、戴尔根霉(rhizopus delemar)和假单胞菌(pseudomonas sp)脂肪酶。当使用化学催化剂时，反应可以在有或没有溶剂的情况下，在约30℃至约75℃，替代地约35℃至约55℃的温度下进行。溶剂可以是例如己烷、庚烷、丙酮、乙酰乙酸乙酯、β
‑
羟基丁酸乙酯等。
29.为了制备根据本技术的至少一种实施方式的β
‑
羟基丁酸的甘油三酯，可以在约110℃至约120℃，替代地约60℃至约180℃的温度下，将甘油用β
‑
羟基丁酸叔丁酯处理大约
14至21小时，替代地3至21小时。该反应优选在惰性(例如，氮气)气氛中提供。在反应期间，可以例如通过蒸馏去除叔丁醇副产物。在反应结束时，剩余的β
‑
羟基丁酸叔丁酯可以通过蒸馏(例如，在约59至约75℃下，1mmhg)去除。所获得的产物可以例如通过在约50℃至约80℃的温度范围下在真空(例如，1mmhg)下添加水来除臭。可以通过例如核磁共振(nmr)、元素分析(c、h、n)和/或气相色谱法(gc)来证实结构。
30.根据本技术的至少一种其他的实施方式，可以在约55℃至约70℃，替代地约20至约75下，在脂肪酶存在下，将甘油用β
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羟基丁酸乙酯处理大约14至48小时，替代地20至36小时。脂肪酶可以是例如不限于435、rm im或tl im，其均可从novozymes a/s,franklinton，北卡罗来纳州(n.c.)获得。反应可以在惰性(例如，氮气)气氛中进行。在反应期间，可以例如通过蒸馏去除乙醇副产物。在反应结束时，剩余的β
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羟基丁酸乙酯可以通过蒸馏(例如，在60℃下，1mmhg)去除。可以通过例如不限于nmr分析、元素分析(c、h、n)和/或gc来确认产生的甘油三(β
‑
羟基丁酸酯)的结构。
31.实施例
32.以下实施例例示但不限制本发明。
33.实施例1发明实施方式
34.发现第一名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，并开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第1天)开始每天3次。2天后(第3天)，受试者患有进一步ntia并在接下来的55天内继续服用gtβhb。
35.实施例2非本发明的比较实施例
36.还发现第二名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，但没有开始任何gtβhb给药。在第3天(2天后)发生进一步ntia。受试者未开始任何gtβhb给药。
37.实施例3发明实施方式
38.还发现第三名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，但没有开始任何gtβhb给药。在第3天(2天后)发生进一步ntia。然后受试者开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第4天)开始每天3次，并在接下来的54天(直至第60天)继续该方案。
39.实施例4发明实施方式
40.发现第四名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，并开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第1天)开始每天3次。2天后(第3天)，受试者患有进一步ntia并在接下来的28天内继续服用gtβhb。然后受试者在第29天停止服用gtβhb，并在第35天重新开始服用gtβhb并在第60天停止服用gtβhb。
41.实施例5发明实施方式
42.发现第五名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，并开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第1天)开始每天3次。2天后(第3天)，受试者患有进一步ntia并在接下来的28天内继续服用gtβhb。然后受试者在第29天停止服用gtβhb，在第33天发生ntia并且受试者在从第一次ntia第35天(并且从第二次tia第2天)重新开始服用gtβhb并在从第一次ntia第60天(从第二次tia第27天)停止服用gtβhb。
43.实施例6
44.重复实施例1和3
‑
5，除了当受试者接受gtβhb时，受试者接受30ggtβhb/份，每天4份之外。
45.实施例7
46.重复实施例1
‑
5，除了所讨论的受试者是70kg男性，并且当受试者接受gtβhb时，受试者接受约47g/份，每天3次之外。
47.实施例8
48.重复实施例7，除了当受试者接受gtβhb时，受试者接受70g/份，每天两次之外。
49.实施例9
50.重复实施例1和3
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7，除了接受gtβhb的受试者的每日总量给出为1g/kg/天，而不是实施例1和3
‑
7的2g/kg/天之外，使得对于本实施例，将实施例1和3
‑
7中提到的份量大小减半。
51.实施例10
–
支持本发明的体外实施例
52.将啮齿动物脑细胞浸泡在营养培养基中并分成多个子部分。第一小组像以前一样继续接受营养培养基并作为对照。第二小组停止补充营养培养基，并在停止补充后1小时取样。第三小组在30分钟的时间段内缓慢过滤掉营养培养基并在30分钟结束时对这个小组进行取样并且在过滤开始后1小时时再次取样。第二和第三小组模拟与ntia事件中发生的状况类似的第一次缺血状况。然后，第二和第三小组恢复和补充最初提供的营养培养基2天。第二和第三小组中的每一个进一步分为每个3个另外的小组，2a、2b、2c、3a、3b和3c。2a和3a小组中的每一个都经受了如上所述的它们各自的模拟缺血事件方案。小组2b和3b中的每一个都经受如对于小组2a和3a所述的它们各自的模拟缺血事件，除了在第二次模拟缺血事件后营养培养基恢复时营养培养基中包括gtβhb之外。小组3a和3b与小组2a和2b平行，除了在第一次模拟缺血事件后一天将gtβhb添加到营养培养基中并维持在营养培养基中直到开始第二次缺血事件之外。对各个组中的每一个进行取样以确定细胞死亡和存活的相对量。特别相关的是组2b相比于3b以及2c相比于3c之间的差异，这是在随后的缺血事件后才具有gtβhb与在缺血事件之前和缺血事件时细胞环境中存在gtβhb之间的比较。这些比较将表明gtβhb的缺血事件前给药以便当缺血事件发生时细胞环境中存在gtβhb优于在所讨论的缺血事件后才给药gtβhb的益处。
β
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羟基丁酸酯)与神经元短暂性脑缺血发作
1.相关申请的交叉引用
2.不适用。
3.关于联邦赞助的研究或开发的声明
4.不适用。
技术领域
5.本技术涉及医疗食品、营养补剂和药剂领域。本发明还涉及甘油三(β
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羟基丁酸酯)(其也称为甘油三丁酸酯，但在下文中称为gtβhb)的用途。本发明还涉及帮助处理神经元短暂性脑缺血发作(下文中称为ntia)的后遗症的模态、用于预防性地处理ntia后遗症的营养补剂、医疗食品和药物，或在ntia的饮食管理中的上述任一个的领域。本发明进一步涉及用于帮助减少或消除与ntia相关的神经缺损和/或减少或消除由ntia引起的细胞死亡的模态，特别地在进一步ntia之前预防性肠内给药gtβhb。本发明涉及已知患有先前ntia或具有患有先前ntia的人的症状的受试者群体中的上述所有内容，并且旨在抵消或避免或最小化或减少这样的受试者中后续ntia的影响。
背景技术：
6.脑中ntia是重要的健康问题，尤其在老年群体中，且最尤其在患有影响神经功能的其他病症的那些群体中。经常地，受影响的人甚至没有意识到ntia已经发生，并且只有观察到该人的一种或多种神经缺损症状的另一个人才意识到这一事实。另外，据观察，一旦一个人患有初次ntia，该人很可能患有其他ntia，尤其在之后几个月内，更特别地在一个月或两个月内，其中高比例的这样的后续ntia在先前一次之后的接下来2
‑
3天内发生。重复的ntia也被认为是更严重的卒中的标志。ntia与更严重的缺血性发作有关，因为ntia被定义为通常持续时间少于约1小时，以及然后受影响的区域被再灌注，通常是通过引起缺血的阻塞物的自发溶解或通过松弛正在限制血流(限制通常是由于动脉痉挛和/或收缩，这可能是由一些其他特发性过程引起的，或由受试者所暴露的一些环境因素带来的，或由受试者正在服用的一些药物/营养补剂和/或食物或心理应激诱导的)的动脉，或其组合。因此，存在对于可以帮助缓和或预防已知患有先前ntia的受试者或表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中后续ntia的营养/膳食补剂中的医疗食品或治疗方案的需要。
7.与卒中类似，ntia具有直接受缺血事件影响的“核心”区域以及受次要影响的半暗带区域。每个区域中影响的严重程度部分取决于缺血事件持续多长时间，受影响的区域是否有足够的二次灌注，以及成问题的特定细胞是否经历了多次缺血事件以及最近如何。在时间上明显分开的独立且不同的ntia可能不会导致累积效应，特别地如果受影响的细胞已经能够愈合，但是在相对较短的时间段内(数天
‑
数周
‑
数月)的多次ntia可能并且经常导致累积效应。因此，存在对于有助于预防神经缺损和脑细胞的其他缺血效应累积的方法的需要。
8.发明目的
9.本发明的一些实施方式的目的是提供了通过预期其他ntia事件发生而肠内给药甘油三(β羟基丁酸酯)(下文称为“gtβhb”)来减少或预防已知患有先前ntia的受试者或者表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中重复的神经元短暂性脑缺血发作(ntia)的神经缺损效应的方法。
10.本发明的一些实施方式的另一目的是提供通过预期其他ntia事件发生而向所述受试者肠内给药gtβhb来减少或预防已知患有先前ntia的受试者或者表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中由于重复的ntia引起的缺血事件神经元细胞死亡的方法。
11.本发明的一些实施方式的另外目的是提供通过预期其他ntia事件发生而肠内给药gtβhb来预防或减少已知患有先前ntia的受试者或者表现出患有先前ntia的人的症状的受试者中随后ntia的核心缺血区域中的缺血性神经元细胞死亡的方法。
12.在受益于本说明书之后，本发明的实施方式的甚至另外的目的对于本领域普通技术人员将变得显而易见。
技术实现要素：
13.简而言之，本发明的上述目的和其他可以通过以下获得：向已知患有先前神经元ntia的受试者群体或表现出患有先前ntia的人的症状(并因此怀疑患有先前ntia)的受试者给药gtβhb以减少或消除或预防后续ntia的神经元缺血效应。由于后续ntia通常在先前ntia之后数天到数周至两
–
三个月至长达一年之内发生，因此口服给予gtβhb通常在先前ntia事件之后持续最长达12个月(总gtβhb给药期)。由于典型口服给药gtβhb在24小时时间段内被身体清除，因此口服给药gtβhb通常按份量大小每天进行，其中每日量分成分量(份量大小)并在24小时期间多次给药(使得份量大小乘以给药次数等于每日量)，通常为2
‑
4份，优选2
‑
3份。尽管有上述规定，但是可以在需要时使用更频繁、更小的份量大小，但由于它们在更频繁的时间表上使用不方便，通常不使用每24小时超过4次给药。如果在总gtβhb给药期期间发生其他ntia事件，则给药周期时钟将重置为从识别后续ntia时开始。每天口服gtβhb的量应当是导致血浆组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和血浆乙酰乙酸酯部分浓度为约2mm至7mm的量。通过将gtβhb递送的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分的水平维持在这些范围内，当组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分血浆水平如此维持时，通常与随后发生的ntia相关的神经元缺损、细胞死亡等被减少、消除或预防。
附图说明
14.不适用。
具体实施方式
15.本发明涉及已知在前一年内患有或怀疑(由于表现出患有先前ntia的那些人的症状)患有先前ntia的受试者，更尤其涉及在先前三个月、先前两个月、先前一个月、先前三周、先前2周、先前一周内患有或怀疑患有先前ntia的那些受试者，最尤其涉及在先前2
‑
3天内患有或怀疑患有先前ntia的那些受试者。在识别出这样的先前ntia已经发生或可能发生后，每天口服给药gtβhb，优选地连续地(虽然如此，但是基本上连续，间歇性地打断给药也是可以的)选自以下范围的时间段，所述范围具有的最小时间段和最大时间段选自以下：2
天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、35天、42天、49天、56天、58天、59天、60天、61天、62天、63天、70天、77天、84天、90天、91天、92天、98天、105天、112天、119天、120天、126天、133天、140天、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月和1年，前提是最大值大于最小值。如果在一个或多个中断部分的时间期间受试者没有遭受进一步ntia，则每天给药连续性的中断是可以适应的并且仍然在本发明内。虽然在中断期进一步ntia发生后立即重新给药gtβhb可能仍然有益，但缺乏给药连续性导致在这样的中断期ntia发生时缺乏组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分的存在，并且因此，本发明关于这样的中断期ntia的首要益处被丢失。尽管如此，当这样的中断期ntia发生时，用于gtβhb给药的时钟重新开始。此外，虽然在第一次ntia发生后立即开始gtβhb方案最有益，但延迟开始gtβhb给药也是可以的，并且被视为如同延迟是上述的“中断期”。因此，如果ntia在第零天发生，并且gtβhb给药直到第3天才开始，但在第1
‑
3天没有发生随后ntia，则给药期将继续计数，接下来的一天为第4天。然而，如果在第2天也发生ntia(第二次ntia)，那么本发明对于这样的第2天ntia的益处已经丧失，但是天数计数被重置为从第2天ntia开始作为第零天，其中现在的目的是对又另外的ntia(或第三次ntia)进行饮食管理。
16.不受理论的束缚，本发明的前提是gtβhb的给药导致在组合的β
‑
羟基丁酸酯部分和乙酰乙酸酯部分中神经元细胞的灌注，导致当葡萄糖处于供应短缺时可以被利用的非常富含能源的环境。在健康的神经元细胞中，当葡萄糖和酮体两者都存在时，葡萄糖优先用作能量。当ntia发生时，灌注下降，使得神经元细胞只具有已存在浓度的能源。神经元细胞首先耗尽可用的葡萄糖(作为优选的能源)，并且在很短的时间后，该葡萄糖基本上被耗完。在受影响的细胞存在替代能量酮体的情况下，细胞可以继续存活，直到那些酮体也被消耗尽。在酮体存在的情况下，与当不存在酮体时相比，它们的存在使细胞有机会存活更长的时间段。由于ntia本质上只是暂时的，为受影响的细胞提供的额外存活时间可以足以足够长地避免细胞死亡，以进行再灌注并恢复受影响的细胞。因为，来自gtβhb的β
‑
羟基丁酸酯和乙酰乙酸酯的半衰期相对短(在单次肠内给药之后约24小时内恢复到给药前水平)，gtβhb的给药是按每日分量(份)给药，每天2
‑
4次，优选地每天3
‑
4次，且最优选地每天3次。
17.gtβhb是甘油的三酯，并且甘油的每个羟基基团都被β
‑
羟基丁酸酯部分酯化。每个分子中的每个β
‑
羟基丁酸酯部分基团独立地为d或l型，并且所给药的主体化合物可以是主体化合物中的任何或所有的混合物(即具有以下的化合物的混合物：(a)所有基团都为d型，(b)所有基团都为l型，(c)一些为d型且一些为l型，(d)以及选自(1)a和b、(2)a和c以及(3)a、b和c的化合物的混合物)。3
‑
羟基丁酰基基团的d和l型两者都是活性的，然而，l型的利用更慢，并且因此，优选3
‑
羟基丁酰基基团基本上全部或全部为d型。在特别优选的实施方式中，约90％至98％，更优选约96％的3
‑
羟基丁酰基基团为d型。尽管如此，其他量的d相比于l型的利用在本发明范围内，并且可以选自100％d至100％l，以及d和l型以任何比例的任何混合物。高度优选的实施方式是其中用于本发明的化合物甘油三(3
‑
羟基丁酸酯)的形式是甘油三(dl 3
‑
羟基丁酸酯)的那一个，dl是指主体化合物并且不一定是特定分子的混合物。这些化合物及其制造方法在us7,807,718中更充分地描述，其关于化合物及其制造的描述并入本文中；其相关部分在本文中于本实施例之前的第0019
‑
0025段中被重新详述。
18.gtβhb通常以通常在每天0.5g/kg至每天2.6g/kg体重的范围内的量(更特定地
0.5g/kg、0.55g/kg、0.6g/kg、0.65g/kg、0.7g/kg、0.75g/kg、0.8g/kg、0.85g/kg、0.9g/kg、0.95g/kg、1g/kg、1.1g/kg、1.2g/kg、1.3g/kg、1.4g/kg、1.5g/kg、1.6g/kg、1.7g/kg、1.8g/kg、1.9g/kg、2.0g/kg、2.1g/kg、2.3g/kg、2.4g/kg、2.5g/kg或2.6g/kg，以及介于这些特定列举的量中的任何量之间的中间量)，以2
‑
3个分开剂量口服/肠内给药，其对于60kg的女性来说，为约10
‑
52g/份(更特定地10g/份、12.5g/份、15g/份、17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份、50g/份或52g/份，以及介于这些特定列举的量中的任何量之间的中间量)，每天三次(大约每8小时一次)至约15
‑
72g/份(更特定地为15g/份、17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、27.5g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份，50g/份、55g/份、60g/份、65g/份、70g/份、75g/份或78g/份，以及介于这些特别列举的量中的任何量之间的中间量)，每天两次(大约每12小时一次)，并且对于70kg的男性来说，为约12
‑
60.7g/份(更特定地12g/份、15g/份、17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份、50g/份、55g/份、60g/份、55g/份、60g/份或60.7g/份，以及介于这些特定列举的量的任何量之间的中间量)，每天三次(大约每8小时一次)至约17.5
‑
91g/份(更特定地17.5g/份、20g/份、22.5g/份、25g/份、27.5g/份、30g/份、35g/份、40g/份、45g/份、50g/份、55g/份、60g/份、65g/份、70g/份、75g/份、80g/份、85g/份、90g/份或91g/份，以及介于这些特定列举的量的任何量之间的中间量)，每天两次(大约每12小时一次)。这些剂量和份量大小旨在被给药这些化合物的平均典型受试者中导致总酮体(组合的β
‑
羟基丁酸酯和乙酰乙酸酯)血浆水平为2
‑
10mm(更特定地2mm、2.25mm、2.5mm、2.75mm、3mm、3.25mm、3.5mm、4mm、4.25mm、4.5mm、4.6mm、4.7mm、4.8mm、4.9mm、5.0mm、5.1mm、5.2mm、5.3mm、5.4mm、5.5mm、5.6mm、5.7mm、5.8mm、5.9mm、6.0mm、6.1mm、6.2mm、6.3mm、6.4mm、6.5mm、6.6mm、6.7mm、6.8mm、6.9mm、7.0mm，以及在这些特定列举的水平中的任何水平之间的中间水平，并且这些中的任何一个都可以作为范围的下限或范围的上限，前提是该范围的上限大于该范围的下限)。(乙酰乙酸酯是β
‑
羟基丁酸酯的氧化形式，其中β
‑
羟基基团被β
‑
氧亚基基团取代
19.(乙酰乙酸酯)。
20.当本发明中使用的gtβhb口服摄入时，酯主要在肠道中由于胰脂肪酶而被水解，释放出被吸收的β
‑
羟基丁酸酯部分，并且身体通过将其转化为乙酰乙酸酯(其转而实际上被细胞使用)来利用β
‑
羟基丁酸酯。本领域普通技术人员将知道如何在呈现非典型分布和/或代谢的受试者中调整这些份量大小，使得上述份量大小不会导致血液水平在正确范围内。(如果它们将组合的β
‑
羟基丁酸酯和乙酰乙酸酯的血浆水平提高到2mm至7mm的范围内，这样的修改的给药量被认为在本发明的范围内，尽管它们在本说明书中别处列出的给药的化合物的“份量大小”范围或主体g之外。)
21.gtβhb可以以任何可肠内给药的合适制剂形式给药，但在可肠内给药的合适载体中的溶液或混悬剂是优选的。由于涉及的份量大小相对大，传统的胶囊或片剂通常不实用，但是如果有人希望使用那些递送形式，没有理由不使用它们。
22.在本说明书中，在给出特定参数值的范围并给出这样的范围内的更特定的叙述值的任何情况下，每个特定值都可以作为新范围界限的基础，只要下限实际上小于上限。例如，在上一段落中，剂量范围被给出为“0.5g/kg至2.6g/kg”，其中更特定的表述为“0.5g/kg、0.55g/kg、0.6g/kg、0.65g/kg、0.7g/kg、0.75g/kg、0.8g/kg、0.85g/kg、0.9g/kg、0.95g/
kg、1g/kg、1.1g/kg、1.2g/kg、1.3g/kg、1.4g/kg、1.5g/kg、1.6g/kg、1.7g/kg、1.8g/kg、1.9g/kg、2.0g/kg、2.1g/kg、2.2g/kg、2.3g/kg、2.3g/kg、2.4g/kg、2.5g/kg或2.6g/kg”。基于此，任何更特定的列举量可以是新范围的下限，并且任何更大的特定列举量可以是该新范围的上限，并且每个这样构建的范围应当被视为本说明书中具体列举的。因此，作为实例而非限制，0.5至0.6；0.55至1.9、0.75至1.7、1.8至1.9的范围等均视为在本文中列举。这同样也适用于与基于体重、份量大小等的剂量相关的其他参数。
23.在对术语“包括(comprising)”的所有提及中，其旨在同样公开术语“基本上由
……
组成(consisting essentially of)”和“由
……
组成(consisting of)”。本说明书中对任何专利或专利申请的所有引用均应当被解释为包括通过援引以其整体并入这样的专利和这样的专利申请，但仅限于它们补充但不与本说明书中的特定陈述相矛盾的程度。与本说明书的任何部分相矛盾的任何通过援引并入本文中的任何陈述都应当被视为通过援引该矛盾的陈述并入而无效。术语“约”的任何使用应当被解释为意指数字后紧跟的最近的数位，如在以下非限制性实例中：(a)“约0.54”应当被视为涵盖至少0.535至<0.545的范围，以及(b)“约24”应当解释为意指至少23.5至<24.5的范围。对于任何在“约”后的数字，绝对数应当被视为公开，并且在“约0.54”中应当视为特定公开“0.54”以及上一句中的范围。
24.化合物及其一些制造过程的描述大体上如us 7,807,718所陈述，其为示例性的但非限制性公开，在下述6个段落中陈述。
25.当前描述的技术的酯可以以膳食补充剂和/或营养组合物的形式提供。本领域技术人员应当理解，本技术的这样的膳食补充剂或营养组合物可以利用常规方法(means)配制。膳食补充剂或营养组合物可以制成任何适合于向人体或动物给药的形式。例如，本技术的甘油酯酯类的口服给药可以是但不限于以下形式：胶囊、丸剂、液体、片剂、食用棒、饮料、凝胶、薄膜、口香糖(gums)等，尽管液体诸如溶液或混悬剂是优选的。
26.本技术的甘油酯可以通过任何可用的技术产生。例如，在一种非限制性方法中，它可以通过(a)甘油和/或甘油酯与(b)β
‑
羟基丁酸的酯化、转酯基作用或酯交换来产生。酯化、转酯基作用或酯交换可以使用化学或酶催化进行。
27.上述酯化反应(酯化/酯交换/转酯基作用)中合适的化学催化剂包括例如但不限于碱金属、碱土金属和过渡金属的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐和醇盐。碱金属或碱土金属的实例包括但不限于钠、锂、钾、镁、钙、钡、铁、锌和铜。当使用化学催化剂时，反应优选在约90℃至约200℃，替代地约120℃至约190℃，替代地约140℃至约180℃的温度下进行。
28.在上述酯化反应(酯化/酯交换/转酯基作用)中合适的示例性酶催化剂包括，例如但不限于，南极假丝酵母(candida antarctica)、皱褶假丝酵母(candida rugosa)、米曲霉(aspergillus oryzae)、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)、绵毛嗜热丝孢菌(thermomyces lanuginosa)、洋葱假单胞菌(pseudomonas cepacia)、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)、戴尔根霉(rhizopus delemar)和假单胞菌(pseudomonas sp)脂肪酶。当使用化学催化剂时，反应可以在有或没有溶剂的情况下，在约30℃至约75℃，替代地约35℃至约55℃的温度下进行。溶剂可以是例如己烷、庚烷、丙酮、乙酰乙酸乙酯、β
‑
羟基丁酸乙酯等。
29.为了制备根据本技术的至少一种实施方式的β
‑
羟基丁酸的甘油三酯，可以在约110℃至约120℃，替代地约60℃至约180℃的温度下，将甘油用β
‑
羟基丁酸叔丁酯处理大约
14至21小时，替代地3至21小时。该反应优选在惰性(例如，氮气)气氛中提供。在反应期间，可以例如通过蒸馏去除叔丁醇副产物。在反应结束时，剩余的β
‑
羟基丁酸叔丁酯可以通过蒸馏(例如，在约59至约75℃下，1mmhg)去除。所获得的产物可以例如通过在约50℃至约80℃的温度范围下在真空(例如，1mmhg)下添加水来除臭。可以通过例如核磁共振(nmr)、元素分析(c、h、n)和/或气相色谱法(gc)来证实结构。
30.根据本技术的至少一种其他的实施方式，可以在约55℃至约70℃，替代地约20至约75下，在脂肪酶存在下，将甘油用β
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羟基丁酸乙酯处理大约14至48小时，替代地20至36小时。脂肪酶可以是例如不限于435、rm im或tl im，其均可从novozymes a/s,franklinton，北卡罗来纳州(n.c.)获得。反应可以在惰性(例如，氮气)气氛中进行。在反应期间，可以例如通过蒸馏去除乙醇副产物。在反应结束时，剩余的β
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羟基丁酸乙酯可以通过蒸馏(例如，在60℃下，1mmhg)去除。可以通过例如不限于nmr分析、元素分析(c、h、n)和/或gc来确认产生的甘油三(β
‑
羟基丁酸酯)的结构。
31.实施例
32.以下实施例例示但不限制本发明。
33.实施例1发明实施方式
34.发现第一名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，并开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第1天)开始每天3次。2天后(第3天)，受试者患有进一步ntia并在接下来的55天内继续服用gtβhb。
35.实施例2非本发明的比较实施例
36.还发现第二名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，但没有开始任何gtβhb给药。在第3天(2天后)发生进一步ntia。受试者未开始任何gtβhb给药。
37.实施例3发明实施方式
38.还发现第三名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，但没有开始任何gtβhb给药。在第3天(2天后)发生进一步ntia。然后受试者开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第4天)开始每天3次，并在接下来的54天(直至第60天)继续该方案。
39.实施例4发明实施方式
40.发现第四名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，并开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第1天)开始每天3次。2天后(第3天)，受试者患有进一步ntia并在接下来的28天内继续服用gtβhb。然后受试者在第29天停止服用gtβhb，并在第35天重新开始服用gtβhb并在第60天停止服用gtβhb。
41.实施例5发明实施方式
42.发现第五名60kg的女性受试者(第零天)患有ntia，并开始gtβhb40g/给药的口服方案，在接下来的一天(第1天)开始每天3次。2天后(第3天)，受试者患有进一步ntia并在接下来的28天内继续服用gtβhb。然后受试者在第29天停止服用gtβhb，在第33天发生ntia并且受试者在从第一次ntia第35天(并且从第二次tia第2天)重新开始服用gtβhb并在从第一次ntia第60天(从第二次tia第27天)停止服用gtβhb。
43.实施例6
44.重复实施例1和3
‑
5，除了当受试者接受gtβhb时，受试者接受30ggtβhb/份，每天4份之外。
45.实施例7
46.重复实施例1
‑
5，除了所讨论的受试者是70kg男性，并且当受试者接受gtβhb时，受试者接受约47g/份，每天3次之外。
47.实施例8
48.重复实施例7，除了当受试者接受gtβhb时，受试者接受70g/份，每天两次之外。
49.实施例9
50.重复实施例1和3
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7，除了接受gtβhb的受试者的每日总量给出为1g/kg/天，而不是实施例1和3
‑
7的2g/kg/天之外，使得对于本实施例，将实施例1和3
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7中提到的份量大小减半。
51.实施例10
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支持本发明的体外实施例
52.将啮齿动物脑细胞浸泡在营养培养基中并分成多个子部分。第一小组像以前一样继续接受营养培养基并作为对照。第二小组停止补充营养培养基，并在停止补充后1小时取样。第三小组在30分钟的时间段内缓慢过滤掉营养培养基并在30分钟结束时对这个小组进行取样并且在过滤开始后1小时时再次取样。第二和第三小组模拟与ntia事件中发生的状况类似的第一次缺血状况。然后，第二和第三小组恢复和补充最初提供的营养培养基2天。第二和第三小组中的每一个进一步分为每个3个另外的小组，2a、2b、2c、3a、3b和3c。2a和3a小组中的每一个都经受了如上所述的它们各自的模拟缺血事件方案。小组2b和3b中的每一个都经受如对于小组2a和3a所述的它们各自的模拟缺血事件，除了在第二次模拟缺血事件后营养培养基恢复时营养培养基中包括gtβhb之外。小组3a和3b与小组2a和2b平行，除了在第一次模拟缺血事件后一天将gtβhb添加到营养培养基中并维持在营养培养基中直到开始第二次缺血事件之外。对各个组中的每一个进行取样以确定细胞死亡和存活的相对量。特别相关的是组2b相比于3b以及2c相比于3c之间的差异，这是在随后的缺血事件后才具有gtβhb与在缺血事件之前和缺血事件时细胞环境中存在gtβhb之间的比较。这些比较将表明gtβhb的缺血事件前给药以便当缺血事件发生时细胞环境中存在gtβhb优于在所讨论的缺血事件后才给药gtβhb的益处。
再多了解一些
本文用于企业家、创业者技术爱好者查询，结果仅供参考。
