用于增强β-肾上腺素能响应的方法与流程

用于增强
β
‑
肾上腺素能响应的方法
技术领域
1.本发明所属领域涉及处置泌尿系统状况(例如，膀胱过动症、夜尿症和尿失禁)以及为此所用的化合物。


背景技术：

2.蛇床子苷a(5,7
‑
二羟基
‑2‑
甲基
‑6‑
[(z)
‑3‑
甲基
‑4‑
[(2r,3r,4s,5s,6r)
‑
3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)氧杂环己烷
‑2‑
基]氧基丁
‑2‑
烯基]色烯
‑4‑
酮)是一种已知存在于蛇床属植物中的色酮(chromone)(植物化学(phytochemistry)，第35卷第1期，1993年12月，第221
‑
225页；植物疗法(fitoterapia)，第82卷第5期，2011年7月，第767
‑
771页)。其具有抗肿瘤性质(j.nat.med.，第62卷第3期，2008年7月，第308
‑
313页)以及抗成脂性质(bioorg.med.chem.lett.，第22卷第19期，2012年10月，第6267
‑
6271页)。
[0003][0004]
膀胱过动症(overactive bladder，oab)定义为一种症状综合征，包括尿急、有或无急迫性尿失禁(尿失禁)、尿频和夜尿症(夜间醒来一次或多次排尿)，且无其他可解释这些症状的局部或代谢因素(maturitas，第66卷，第3期，2010年7月，第257
‑
262页)。膀胱过动症会对人的生活造成严重负面影响，并且是尿失禁的主要原因。这种状况虽然不会危及生命，但会对个人造成长期的困扰。
[0005]
目前对oab的原因了解甚少(maturitas，第66卷，第3期，2010年7月，第257
‑
262页)。乙酰胆碱和去甲肾上腺素是控制逼尿肌(膀胱肌)活动的重要神经递质，前者通过毒蕈碱受体发出收缩信号，后者通过β
‑
肾上腺素能受体(βar)发出舒张信号。
[0006]
目前管理膀胱过动综合征的手段选择包括改变生活方式和用药。改变生活方式包括液量限制、避免咖啡因、膀胱再训练和骨盆锻炼。然而，这些手段的好处有限。已有一些药物用于处置膀胱过动症，包括抗毒蕈碱药物和β3肾上腺素能受体激动剂。然而，很少有个体能从这些药物处置中获得完全缓解，副作用相当严重，长期依从性令人担忧。
[0007]
因此，需要改进处置膀胱过动综合征的医药干预。


技术实现要素：

[0008]
本发明公开了一种通过给予蛇床子苷a来增强β
‑
肾上腺素能响应的方法，以处置期望增强β
‑
肾上腺素能响应的状况。本文证明蛇床子苷a通过抑制β
‑
肾上腺素能受体失敏
而增强β
‑
肾上腺能素响应，从而抵消响应减弱。
[0009]
本发明还公开了一种通过给予蛇床子苷a来增强β
‑
肾上腺素能响应以处置期望增强β
‑
肾上腺素能响应的状况的方法。
[0010]
在一个方面中，本发明涉及用于处置泌尿系统状况的方法的蛇床子苷a(5,7
‑
二羟基
‑2‑
甲基
‑6‑
[(z)
‑3‑
甲基
‑4‑
[(2r,3r,4s,5s,6r)
‑
3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)氧杂环己烷
‑2‑
基]氧基丁
‑2‑
烯基]色烯
‑4‑
酮)。
[0011]
在另一方面中，本发明涉及处置人对象的泌尿系统状况的方法，所述方法包括：向需要的人对象给予治疗活性剂量的蛇床子苷a。
[0012]
在另一方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含蛇床子苷a和一种或多种药学上可接受的赋形剂，所述药物组合物可用于处置人个体的泌尿系统状况。
[0013]
本发明的另一方面涉及一种来自蛇床属(cnidium)、当归属(angelica)或紫堇属(corydalis)的植物提取物，该提取物含有0.2mg至20mg蛇床子苷a/克植物材料(总植物提取物)，可用于处置泌尿系统疾病。
[0014]
泌尿系统状况可以是膀胱过动症，或者表现为膀胱过动症。在一些实施方式中，泌尿系统疾病选自：膀胱过动症、夜尿症、尿失禁。
[0015]
蛇床子苷a可以纯物质或纯化形式提供，例如纯化自适当来源(例如植物)的化合物。或者，蛇床子苷a也可以一种或多种植物的植物提取物的形式提供，如后文所述。
[0016]
在纯物质或纯化形式时，蛇床子苷a可具有80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、96％或更高、97％或更高、98％或更高、或99％更高的纯度。
[0017]
在以下说明和实施例中进一步描述了上述特征以及本发明的其它细节，这些说明和实施例旨在对本发明进行进一步说明，但无意于以任何方式对其范围进行限制。
[0018]
附图的简要说明
[0019]
本领域技术人员将理解，下述附图仅用于说明目的。附图无意于以任何方式限制本公开的范围。
[0020]
图1显示实验i中器官浴槽中四条肌肉条的收缩记录。在时间7，钾使全部肌条收缩。在时间8，肌肉条接受不同剂量的蛇床子苷a，从上到下，接受112、38、13和0μm蛇床子苷给药，底部肌肉条为对照。在时间9，向全部肌肉条添加0.4μm肾上腺素，在时间10，各浴槽中的肾上腺素浓度增加至1.2μm。
[0021]
图2显示了实验ii中器官浴槽中四条肌肉条的收缩记录。钾使全部肌条收缩。在时间7
‑
10，蛇床子苷a的浓度在顶部3个浴槽中逐渐增加至200μm，底部浴槽中的肌肉条为对照。在时间11，在各浴槽中添加肾上腺素至2μm的浓度。
具体实施方式
[0022]
本发明基于蛇床子苷a对膀胱具有松弛作用的发现，如使用猪膀胱在动物模型中进行的实验所示(参见本文实施例1)。不囿于理论，据信，蛇床子苷a的生物学作用至少部分通过该化合物对膀胱中β
‑
肾上腺素能响应的影响来表现，即，通过抑制β
‑
肾上腺素能受体的失敏来表现。
[0023]
β
‑
肾上腺素能受体由天然激动剂肾上腺素(肾上腺素)和去甲肾上腺素(降肾上腺素)激活。其大量存在于心脏、平滑肌和脂肪组织中。受体有三个主要亚组，在心脏中β1占主
导但也有β2。β2在血管细胞平滑肌和支气管束中最多，而β3在逼尿肌(也有β2)和脂肪组织中最多。因此，β受体激动剂被用作处置多种症状的药物，如处置心绞痛(β1受体激动剂)，引起支气管通道扩张、肌肉和肝脏血管扩张(β2受体激动剂)以及松弛逼尿肌(例如在处置膀胱过动症时)(β3受体激动剂)。
[0024]
本文表明蛇床子苷a通过抑制猪逼尿肌(其中同时存在β2和β3受体)中β
‑
肾上腺素能受体失敏而增强β
‑
肾上腺素能响应，从而抵抗响应减弱。因此，该化合物的作用相当于β
‑
肾上腺素能激动剂——作用于β2和β3肾上腺素能受体之一或两者。
[0025]
本发明提供了一种通过给予蛇床子苷a(滨蛇床(cnidium japonicum)和蛇床(cnidium monnieri)的已知成分)处置需要增强β
‑
肾上腺素能响应的状况的方法。本发明人先前已经证明蛇床子苷a也存在于圆叶当归(angelica archangelica)的叶子中。该化合物还被发现存在于无亲缘的紫堇属(corydalis)植物中(食品与功能(food&function)，第7卷，第12期，2016年12月，第4823
‑
4829页)。因此，蛇床子苷a可能存在于蛇床属(cnidium)、当归属(angelica)和紫堇属(corydalis)的物种中。
[0026]
可获得纯的或纯化形式的蛇床子苷a，即获得纯的或纯化化合物，例如自蛇床属、当归属或紫堇属植物中纯化的化合物。例如，可从圆叶当归(angelica archangelica)中获得纯的或纯化形式的该化合物。
[0027]
已知蛇床子苷a没有任何毒性作用，本文实施例3中的结果也为此提供了佐证。圆叶当归(angelica archangelica)的干叶平均每克植物材料含有2mg蛇床子苷a。《英国草药药典》(british herbal pharmacopoei)建议每天最多输注15克圆叶当归(angelica archangelica)(《英国草药药典》，英国草药协会，1983年，第25
‑
26页)。由于蛇床子苷a是高度水溶性的，该剂量将获得高达每天30mg蛇床子苷a。
[0028]
本发明中可用的植物提取物通常可以是包含蛇床子苷a的任意植物提取物。示例性植物提取物包括来自选自蛇床属(cnidium)、当归属(angelica)和紫堇属(corydalis)的一种或多种植物的提取物。因此，蛇床子苷a可作为植物提取物给予，例如作为蛇床属(cnidium)植物提取物、当归属(angelica)植物提取物(例如圆叶当归(angelica archangelica)提取物)或紫堇属(corydalis)植物提取物。该化合物也可以这些提取物的混合物的形式提供。
[0029]
本文所述方法中使用的植物提取物通常包含蛇床子苷a的量可为每克植物材料(即总的提取植物材料，干重)至少0.1mg蛇床子苷a，例如每克植物材料至少0.2mg、0.5mg或至少1.0mg。植物提取物可包含高达每克植物材料100mg的蛇床子苷a、高达每克植物材料50mg的蛇床子苷a、高达每克植物材料30mg的蛇床子苷a或高达每克植物材料20mg的蛇床子苷a。植物提取物可包含0.2至30mg蛇床子苷a/克植物材料，0.2至20mg蛇床子苷a/克植物材料，优选0.5至15mg蛇床子苷a/克植物材料，甚至更优选1.0至10mg蛇床子苷a/克植物材料，例如，在1.0至5mg蛇床子苷a/克植物材料。
[0030]
植物提取物可使用本领域已知的方法制备，例如通过使用温水或热水进行提取。该类提取物随后可进行干燥以提供包含蛇床子苷a的干燥植物提取物。
[0031]
对膀胱的生物学研究包括使用从膀胱中分离的细胞和肌肉条。还报告了猪膀胱的全膀胱研究，并开发了研究膀胱过动症的啮齿动物模型(br j pharmacol.，171(4):995
‑
1006)。总的来说，据研究报道显示，动物模型可以为膀胱的生物学机制提供有价值的深入
了解，并可用于膀胱过动症的临床研究。
[0032]
乙酰胆碱和去甲肾上腺素是控制逼尿肌活动的重要神经递质，前者通过毒蕈碱受体发出收缩信号，后者通过β
‑
肾上腺素能受体(βar)发出舒张信号。因此，oab对症处置的主要口服手段是采用毒蕈碱受体拮抗剂减少收缩和采用βar激动剂促进舒张(investig.clin.urol.，第58卷，第4期，2017年7月，第261
‑
266页)。βar在暴露于激动剂后会失敏，从而降低其对激动剂的敏感性，导致响应减弱(细胞信号(cell signal)，第38卷，2017年10月，第127
‑
133页)。
[0033]
因此，oab对症处置的主要口服手段是采用毒蕈碱受体拮抗剂减少收缩和采用βar激动剂促进舒张(investig.clin.urol.，第58卷，第4期，2017年7月，第261
‑
266页)。夜尿症是指患者因排尿(即小便)不得不在夜间醒来一次或多次(eur.urol.，第62卷，第5期，2012年7月，第877
‑
890页)。夜尿症的潜在原因多种多样，而且常常不得而知，但oab是其中之一(eur.urol.，第62卷，第5期，2012年7月，第877
‑
890页)。βar在暴露于激动剂后会失敏，从而降低其对激动剂的敏感性，导致响应减弱(细胞信号(cell signal)，第38卷，2017年10月，第127
‑
133页)。
[0034]
据信，通过降低失敏来增强β
‑
肾上腺素能响应的化合物具有类似于β
‑
肾上腺素能激动剂的作用。因此，提出的蛇床子苷a的机制可以解释该化合物在生物学研究中观察到的效果(见实施例)。
[0035]
包含蛇床子苷a的药物组合物可配制成用于非侵入性或侵入性递送。例如，所述组合物可配制成用于口服递送、局部递送、跨粘膜递送、阴道递送、眼部递送、直肠递送或吸入递送。或者，所述组合物还可配制成用于注射。药物组合物还可配制用于立即或持续递送。
[0036]
用于口服递送的药物组合物通常可以片剂或胶囊形式提供。片剂或胶囊可包含纯的或纯化的蛇床子苷a，或可包含含有蛇床子苷a的植物提取物。
[0037]
具有治疗活性的蛇床子苷a的各单个剂量通常为0.01至100mg/天。优选地，日剂量可为0.05至50mg/天、0.1至50mg/天、0.1至10mg/天或0.1至5mg/天。
[0038]
在所述方法中可用的植物提取物可包括使用5至5000mg/天的植物叶，例如10至1000mg/天的植物叶，例如50至500mg/天的植物叶，例如100至300mg/天的植物叶。
[0039]
一个示例性实施方式包括含有纯化的或含于草药或植物提取物中的0.1至5mg蛇床子苷的口服片剂，例如0.1至1mg蛇床子苷a的口服片剂，例如0.1至0.5mg蛇床子苷a的口服片剂，可供日用一片或多片。
[0040]
在另一示例性实施方式中，蛇床子苷a以口服片剂形式提供，该片剂含有10
‑
1000mg由植物叶获得的干植物提取物，例如20
‑
500mg干植物提取物，例如50
‑
200mg干植物提取物，例如100
‑
200mg干植物提取物，例如圆叶当归叶的植物提取物。蛇床子苷a可以是片剂中0.1
‑
5mg，如0.1
‑
1mg，或0.1
‑
0.5mg的植物提取物。提取物优选自植物材料水性萃取获得且水性提取物随后经干燥提供用于口服的干植物提取物。
[0041]
日剂量可以单剂次提供。或者，日剂量可以两个、三个或更多个日剂次来提供，这些日剂次优选是相等的。例如，10mg蛇床子苷a的日剂量为可分两次5mg剂量或一次10mg剂量来提供。可以理解，含蛇床子苷a的植物提取物的剂量也可以每日一次，或两次或更多次优选相等的日剂量来提供。
[0042]
含蛇床子a(包括植物提取物)的药物组合物可包含一种或多种药学上可接受的载
剂、赋形剂或稀释剂。
[0043]
药物赋形剂是本领域已知的，并且通常用于使得到的组合物具备更高的长期稳定性、促进吸附、提高溶解度、提供流动性或非粘着性质，还能防止随时间降解或聚集。
[0044]
示例性赋形剂包括填料、粘合剂、崩解剂、包衣剂、吸收剂、抗粘附剂、润滑剂、助流剂、防腐剂、抗氧化剂、调味剂(flavouring agent)、甜味剂、着色剂、溶剂、缓冲剂、螯合剂、增粘剂、表面活性剂和保湿剂。
[0045]
可用的稀释剂、赋形剂或载剂是制剂领域众所周知的，并且，为任一特定处置方案选择的形式将取决于具体情境和药剂师的选择。
[0046]
蛇床子苷a(包括含蛇床子苷a的药物制剂)可与一种或多种其它药物活性成分(例如用于处置膀胱过动症等泌尿系统状况的药物活性化合物)共同(concurrently)给予。此类化合物的示例包括抗毒蕈碱药物(例如达利非那新(darifenacin)、天仙子胺(hyoscyamine)、奥昔布宁(oxybutynin)、托特罗定(tolterodine)、索利那新(solifenacin)、曲斯宾(trospium)、弗斯特罗定(fesoterodine))和β3肾上腺素能受体激动剂(如米拉贝隆(mirabegron))。
[0047]
本文(包括权利要求书)中，除非上下文另有说明，单数形式的术语应被解释为也包括复数含意，反之亦可。因此，应注意，如本文所用，单数形式的“一”、“一”以及“该/所述”包括复数引用，除非上下文明确地另有别解。
[0048]
在整个说明书和权利要求中，术语“包括”、“包含”、“具有”和“含有”及其变体应被理解为“包括但不限于”，无意于排除其他组件/成分。
[0049]
在这些术语、特征、值和范围等与诸“约”、“左右”、“一般”、“基本”、“基本上”、“至少”等术语结合使用的情况下，本发明还涵盖精确的术语、特征、值和范围等(即，“约3”包括精确的3，或者“基本恒定”包括精确恒定)。
[0050]
术语“至少一个”应理解为表示“一个或多个”，因此包括含有一个或多个组件/成分这两种实施方式。此外，当从属权利要求引用的独立权利要求用“至少一个/种”来描述特征而该从属权利要求用“所述”和“所述至少一个/种”来指示相应特征时都具有与独立权利要求中相同的含义。
[0051]
应当理解，本发明的前述实施方式存在本发明范围内的变型。除非另有说明，否则说明书中所公开的特征可以由用于相同、等效或相似目的的替代性特征替换。因此，除非另有说明，所公开的各特征仅仅是一系列等同或相似特征的一个示例。
[0052]
示例性的语言(例如，“如”、“例如”、“比如”)的使用仅旨在更好地阐述本发明，而不是表示对本发明范围的限制，除非另有说明。说明书中描述的任意步骤可以任意顺序实施或同时实施，除非上下文另有明确说明。
[0053]
说明书中所公开的所有特征和/或步骤可以任意组合，除了其中至少一些特征和/或步骤相互排斥的组合。尤其，本发明的优选特征适用于本发明的所有方面并且可以任意组合使用。
[0054]
下列非限制性实施例进一步说明了本发明。
[0055]
实施例1
[0056]
从新鲜屠宰的猪身上获取膀胱，并将其置于冷krebs溶液中，冷krebs溶液(组成，以mm计：氯化钠119、氯化钾4.6、碳酸氢钠15、氯化钙1.5、氯化镁1.2、磷酸二氢钠1.2、葡萄
oabqol和ipss)和参与者在两次询访之间持续记录的周一上午8点到周四上午8点的3天排尿每日记录进行。合格参与者在第2次询访时随机分组，接受蛇床子苷a或安慰剂(各性别组1:1)处置6周。第三次询访是在蛇床子苷a/安慰剂使用约6周后。参与者按要求在研究的6周内持续记录周一上午8点开始到周四上午8点的为期3天的排尿每日记录，并根据研究问卷(oabss、iciq oabqol和ipss)评估症状。安全性和耐受性根据不良事件、生命体征和尿液分析的报告进行评估。随访时间为最后一次给药后3周。
[0068]
研究群体
[0069]
将总体健康、怀疑或确诊为患有尿频的oab的100名男性和100名女性参与者纳入研究，年龄为30
‑
70岁，并据筛查期间参与者日记确定平均≥1.5夜尿/晚和/或至少一半时间的排尿间隔小于2小时。
[0070]
研究产品、剂量和给药方式：
[0071]
参与者每天服用两粒胶囊，其中或者含有100mg圆叶当归(angelica archangelica)叶提取物(水萃取)中的0.3mg蛇床子苷a，或者是匹配的安慰剂。
[0072]
参与者随机接受蛇床子苷a或匹配的安慰剂。各性别组都进行随机分配以确保两组内分配比例相等。参与者按要求每天服用两次研究产品，一次在早上服用，一次在晚上睡前服用。
[0073]
研究持续期间：
[0074]
各参与者的持续参与时间约为10
‑
11周，包括7
‑
14天的筛选期、6周的蛇床子苷a/安慰剂使用和3周随访。
[0075]
实施例3
[0076]
蛇床子苷a的毒性研究
[0077]
实验i
[0078]
在小鼠实验中，我们每天给小鼠喂食约77mg的圆叶当归(angelica archangelica)水提取物(混合在食物中)，为期6个月。假设小鼠平均为23克，提取物中蛇床子苷a的含量为0.15％，这意味着蛇床子苷a的日摄入量为3.35mg/kg。未观察到毒性作用。
[0079]
实验ii
[0080]
此外，还进行了30天每天服用100mg/kg蛇床子苷a的小鼠实验，未影响肝脏、脾脏、胸腺或体重(《自然化学杂志》(journal of natural chemistry)，第62卷，第3期，第308
‑
313页)。