一种可预防仔猪腹泻的多联融合重组蛋白构建方法与表达体系及应用与流程

技术特征：
1.一种多联融合重组蛋白lt
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lt
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st
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cp，其特征在于，所述重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
ⅱ‑
st
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cp的氨基酸序列如seq id no.1所示。2.根据权利要求1所述重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
ⅱ‑
st
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cp，其特征在于，编码所述重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
ⅱ‑
st
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cp的核苷酸序列如seq id no.2所示。3.权利要求1或2所述重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
ⅱ‑
st
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cp的编码基因的构建方法，包括以下步骤：利用soe
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pcr的方法，将源自产肠毒素大肠杆菌的耐热肠毒素基因的部分功能区、源自产肠毒素大肠杆菌的不耐热肠毒素基因的部分功能区、源自魏氏梭菌的α毒素基因的部分功能区和源自魏氏梭菌的β1毒素基因的部分功能区进行串联，得所述编码基因。4.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于，所述源自产肠毒素大肠杆菌的不耐热肠毒素基因的部分功能区包括：ltⅰa、ltⅰb、ltⅱaa、ltⅱab、ltⅱca和ltⅱcb；所述ltⅰa的cds序列如seq id no.2的1
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258bp所示，所述ltⅰb的cds序列如seq id no.2的259
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381bp所示，所述ltⅱaa的cds序列如seq id no.2的382
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627bp所示，所述ltⅱab的cds序列如seq id no.2的628
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753bp所示，所述ltⅱca的cds序列如seq id no.2额754
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846bp所示，所述ltⅱcb的cds序列如seq id no.2的847
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927bp所示；所述源自产肠毒素大肠杆菌的耐热肠毒素基因的部分功能区包括：st a和st b；所述st a的cds序列如seq id no.2的928
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1044bp所示，所述st b的cds序列如seq id no.2的1045
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1143bp所示；所述源自魏氏梭菌的α毒素基因的部分功能区包括cpα；所述cpα的cds序列如seq id no.2的1144
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1266bp所示；所述源自魏氏梭菌的β1毒素基因的部分功能区包括cpβ；所述cpβ的cds序列如seq id no.2的1267
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1524bp所示。5.权利要求1或2所述重组蛋白lt
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lt
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st
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cp的重组表达体系。6.根据权利要求5所述重组表达体系，其特征在于，所述重组表达体系包括真核表达体系或原核表达体系。7.表达权利要求1或2所述重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
ⅱ‑
st
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cp的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的基础载体包括pet
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28a，将编码所述重组蛋白lt
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lt
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st
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cp的核苷酸序列插入pet
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28a的ncoi和xhoi酶切位点之间。8.权利要求1或2所述重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
ⅱ‑
st
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cp的诱导表达方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求7所述重组表达载体转入大肠杆菌e.coli dh5α细胞中，提取质粒后转化大肠杆菌e.coli bl21(de3)感受态细胞，利用iptg诱导，得所述重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
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st
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cp。9.权利要求1或2所述重组蛋白lt
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cp或利用权利要求8所述诱导表达方法得到的重组蛋白lt
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cp在制备仔猪腹泻多联疫苗中的应用。10.一种仔猪腹泻多联亚单位基因工程疫苗，所述疫苗包括权利要求1或2所述重组蛋白lt
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lt
ⅱ‑
st
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cp或利用权利要求8所述诱导表达方法得到的重组蛋白lt
ⅰ‑
lt
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st
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cp和免疫佐剂。

技术总结
本发明提供了一种可预防仔猪腹泻的多联融合重组蛋白构建方法与表达体系及应用，涉及生物医药技术领域。本发明通过克隆ETEC的耐热肠毒素和不耐热肠毒素基因，以及魏氏梭菌α毒素和β1毒素基因，利用SOE


技术研发人员：王海波 刁鹏飞 谭双 邓红娟 李洪凌 马学东 曹旗 任洪林
受保护的技术使用者：潍坊峡山维泰生物科技有限公司
技术研发日：2021.09.13
技术公布日：2021/11/24