基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法与流程

技术特征：
1.基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述多重定位检测多种靶标的方法通过将待测靶标分别直接或间接连接特异性寡核苷酸，将与靶标连接的寡核苷酸特异性地连接对应的荧光探针，通过对荧光探针的定位检测实现对应靶标的定位分析，然后使用绿色溶剂去除已经检测过的荧光探针，然后再将其它未分析靶标上的寡核苷酸特异性地连接上对应荧光探针，进而再次通过对荧光探针的定位检测实现其它对应靶标的定位分析。2.根据权利要求1所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述靶标是指存在于待测样本中的分析物，其中所述待测样本为细胞、组织、细胞提取物、组织提取物或细胞分泌物中的一种或多种；所述分析物为核酸、蛋白质、多肽、脂蛋白、糖蛋白中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，每种靶标只与特定序列的寡核苷酸直接或间接地相互作用，其中所述间接作用是指靶标与特定的中间分子直接作用，而该中间分子连接有特定序列的寡核苷酸，其中所述中间分子是至少一种抗体、抗体片段、寡核苷酸、适配体或小分子。4.根据权利要求1所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述荧光探针至少包含核酸部分以及荧光信号发射部分；所述荧光探针通过直接或间接的方式杂交在所述寡核苷酸上，其中所述直接的方式是指所述荧光探针与所述寡核苷酸根据碱基互补配对原理直接杂交；所述间接的方式是指所述寡核苷酸先杂交一个中间核酸分子，该中间核酸分子再与所述荧光探针杂交，其中所述中间核酸分子是具有多段序列能与所述荧光探针杂交的一个或多个核酸分子。5.根据权利要求1所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述绿色溶剂是指能够破坏碱基互补配对氢键的甘油水溶液或甘油缓冲液。6.根据权利要求1所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述寡核苷酸探针为可编程寡核苷酸探针，所有寡核苷酸探针能进行基于靶标种类的不同序列正交设计，并且能够通过核酸序列的设计增加每个所述靶标特异性寡核苷酸上可连接的荧光探针数量，以达到荧光信号增强。7.根据权利要求1所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述靶标连接的寡核苷酸特异性地连接对应的荧光探针是分批次完成的，分批次通过特异性荧光探针杂交寡核苷酸完成荧光检测中，每批次分析的靶标数不大于荧光检测设备的检测通道数，其中需要完成的检测批次数由所有待分析靶标数和荧光检测设备的检测通道数共同决定，并且其中在相同批次所使用的不同荧光探针的荧光标记不同。8.根据权利要求7所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述分批次通过特异性荧光探针杂交寡核苷酸完成荧光检测中的荧光检测是指利用荧光检测设备对荧光探针发射出的荧光进行检测，并根据荧光的位置和数目对相应靶标进行定位分析。9.根据权利要求8所述的基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标的方法，其特征在于，所述荧光检测设备是落射荧光显微镜或共聚焦显微镜。

技术总结
本发明公开基于绿色溶剂及可编程寡核苷酸探针的多重定位检测多种靶标（例如细胞内的蛋白质或其它靶标）的方法，所述方法将靶标特异性寡核苷酸与靶标直接或间接相连，将其中一个或几个靶标连接的寡核苷酸特异性地连接对应荧光探针，通过对荧光探针的定位检测实现对应靶标的定位分析。为了实现更多重靶标定位分析，所述方法使用绿色溶剂去除已经检测过的荧光探针，然后再将其它未分析靶标上的寡核苷酸特异性地连接上对应荧光探针，进而再次通过对荧光探针的定位检测实现其它对应靶标的定位分析。因此，该方法不会受到不同特异性荧光探针信号交叉的影响，也不会受到荧光检测设备检测通道数有限的阻碍，可实现多重靶标定位分析。析。析。


技术研发人员：王琛 邹秉杰 宋沁馨
受保护的技术使用者：中国药科大学
技术研发日：2021.08.30
技术公布日：2021/11/23