一种桃花细胞水的提取方法和得到的桃花细胞水的应用与流程

1.本发明涉及农产品处理技术领域，特别是涉及一种桃花细胞水的提取方法和得到的桃花细胞水的应用。


背景技术：

2.桃花，蔷薇科桃属植物的花朵，原产于中国中部、北部，现已在世界温带国家及地区广泛种植。桃花中含有山奈酚、香豆精、三叶豆甙和维生素a、b、c等营养物质。这些物质能扩张血管，疏通脉络，润泽肌肤，改善血液循环，促进皮肤营养和氧供给，使促进人体衰老的脂褐质素加快排泄，防止黑色素在皮肤内慢性沉积，从而能有效地预防黄褐斑、雀斑、黑斑、预防的同时令肌肤润白光泽；桃花中还富含植物蛋白和呈游离状态的氨基酸，容易被皮肤吸收，对防治皮肤干燥、粗糙及皱纹等有效，还可增强皮肤的抗病能力，从而防治皮肤病、脂溢性皮炎、化脓性皮炎、坏血病等，对皮肤大有裨益。
3.近年来对桃花提取物的研究主要集中在桃花精油、桃花多糖、桃花红色素以及山奈酚的提取。其中精油的提取现阶段多为水蒸气蒸馏法和溶剂浸提法，但水蒸气蒸馏由于温度高会破坏植物细胞的热敏感成份，影响产品品质，且提取率较低；而溶剂浸提法需使用有机溶剂而使产品应用受限。桃花多糖和山奈酚提取后则需纯化，提取率较低且耗时较长。因此，为使桃花得到有效利用，需开发出桃花提取的新工艺。
4.对于鲜花的提取，中国专利申请cn106562908a公开了一种玫瑰花细胞水的提取方法，具体是将玫瑰花在旋转蒸发仪中于58℃～62℃、0.08mpa～0.10mpa的条件下旋转干馏，玫瑰花中渗透出的细胞液一部分会蒸发出来被冷凝收集一部分保留在旋转蒸发瓶中需要过滤出来；重复上述步骤3次，收集全部的细胞水，得到干花。但是该方法提取率不高，单纯通过重复旋蒸无法充分提取出花朵中的芳香物质(得到的玫瑰干花与新鲜玫瑰花的香味相差不大，说明大部分芳香成分还留存在花朵中，无法被充分提取出来)，得到的玫瑰花细胞水中挥发性活性成分含量不高，芳香味不足。
5.中国专利申请cn109730948a公开了一种采用超声低温旋蒸法和酶法相结合制备牡丹鲜花细胞水的方法：首先通过压榨法得到榨汁和残渣1，再将残渣1旋蒸得到细胞水1和残渣2，最后将残渣2进行酶解后再旋蒸得到细胞水2。将榨汁、细胞水1和细胞水2混合后得到牡丹花细胞水。该方法具有较高的提取效率，但是具有如下缺陷：(1)采用压榨法，后与真空提取法得到的液体混合，这样会带入多糖、色素和刺激气味，导致防腐和脱色问题；(2)工艺后期配合其他植物一起蒸馏，解决防腐问题，但是容易改变原有的牡丹花细胞水成分和气味，后期生产也无法控制品质。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于，提供一种桃花细胞水的提取方法，工序简单，提取率高；提取得到的桃花细胞水富含挥发性活性成分，具有独特的杏仁芬芳，安全性高，利用价值高。
7.本发明是通过以下技术方案实现的：
真空(减压)提取得到桃花细胞水；整个提取过程不需加入任何溶剂，提取得到的桃花细胞水100％来源于植物细胞；工序简单，提取率高。相比于单一的低温-真空(减压)提取技术，细胞水的提取率更高且能提取出更多的挥发性活性成分；同时又避免了传统酶解法容易酶解过度使提取液具有杂味的问题。
20.通过本发明方法提取得到的桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁芬芳，富含90多种挥发性活性成分，对人体安全性高，同时具有一定的抑菌和美容效果；利用价值高，可以作为一种绿色天然的原料，应用于食品、保健品、药品及化妆品等领域。
附图说明
21.图1为实施例1桃花细胞水安全性测试数据柱状图。
具体实施方式
22.下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
23.实施例和对比例采用当日采摘的新鲜桃花(花瓣鲜嫩饱满、未腐烂和未霉变)，进行提取实验。
24.实施例1：
25.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在45℃，压力-90kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取2小时，得到初提细胞水和初提残渣，在初提细胞水中加入125g纤维素酶和20g果胶酶后再倒入初提残渣中，在45℃、压力-90kpa下再次提取5小时；全程搅拌为45转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到36.1kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁香味。
26.实施例2：
27.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在35℃，压力-90kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取2小时，得到初提细胞水和初提残渣，在初提细胞水中加入125g纤维素酶和20g果胶酶后再倒入初提残渣中，在35℃、压力-90kpa下再次提取5小时；全程搅拌为45转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到34.7kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁香味。
28.实施例3：
29.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在45℃，压力-80kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取2小时，得到初提细胞水和初提残渣，在初提细胞水中加入125g纤维素酶和20g果胶酶后再倒入初提残渣中，在45℃、压力-80kpa下再次提取5小时；全程搅拌为45转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到31.4kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁香味。
30.实施例4：
31.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在45℃，压力-90kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取2小时，得到初提细胞水和初提残渣，在
初提细胞水中加入170g纤维素酶和30g果胶酶后再倒入初提残渣中，在45℃、压力-90kpa下再次提取5小时；全程搅拌为45转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到36.6kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁香味。
32.实施例5：
33.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在50℃，压力-85kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取2.5小时，得到初提细胞水和初提残渣，在初提细胞水中加入175g纤维素酶和15g果胶酶后再倒入初提残渣中，在40℃、压力-95kpa下再次提取6小时；全程搅拌为45转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到35.1kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁香味。
34.实施例6：
35.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在65℃，压力-70kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取1.5小时，得到初提细胞水和初提残渣，在初提细胞水中加入100g纤维素酶和30g果胶酶后再倒入初提残渣中，在55℃、压力-80kpa下再次提取6小时；全程搅拌为60转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到31.8kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁香味。
36.实施例7：
37.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在30℃，压力-100kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取1.5小时，得到初提细胞水和初提残渣，在初提细胞水中加入125g纤维素酶和20g果胶酶后再倒入初提残渣中，在35℃、压力-100kpa下再次提取4小时；全程搅拌为30转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到36.8kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香浓郁，具有独特的杏仁香味。
38.对比例1：
39.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在45℃、-90kpa下提取，桃花细胞水形成蒸气后冷凝收集液体，提取7小时，全程搅拌为45转/分，冷凝温度-8℃，得到29.7kg桃花细胞水，无色澄清透明，香味淡。
40.对比例2：
41.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，与5kg水、125g纤维素酶和20g果胶酶混合后在45℃下搅拌7小时，搅拌速度为45转/分，提取结束后先离心机过滤，再采用0.22μm滤膜过滤，得到35.8kg桃花细胞水(含有额外添加的5kg水)，液体为浅黄色，香味淡且有很重的异味。
42.对比例3：
43.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，与5kg水、125g纤维素酶和20g果胶酶混合后在45℃下搅拌50分钟，后在45℃、-90kpa下提取5小时，桃花细胞水形成蒸气后冷凝收集液体，全程搅拌为45转/分，冷凝温度-8℃，收集得到39.6kg桃花细胞水(含有额外添加的5kg水)，无色澄清透明，香味清淡，有杂味。
44.对比例4：
45.称取50kg桃花投入150l低温提取设备，不加入任何溶剂，在45℃，压力-90kpa下初步提取，桃花细胞水形成蒸气并冷凝收集液体，提取0.5小时，得到初提细胞水和初提残渣，在初提细胞水中加入125g纤维素酶和20g果胶酶后再倒入初提残渣中，在45℃、压力-90kpa
下再次提取5小时；全程搅拌为45转/分，冷凝温度为-8℃；收集得到32.3kg桃花细胞水，无色澄清透明，花香清淡，具有淡淡的杏仁香味。
46.各项测试方法：
47.1、桃花细胞水挥发性活性成分分析：将实施例和对比例的桃花细胞水在80℃进样温度下进行顶空气质检测。
48.(1)仪器信息：agilent 7980a gc；ms:5975c；50/30μm car/pdms/dvb萃取纤维头，美国supelco公司。
49.(2)gc-ms条件：色谱柱为hp-innowax毛细管柱子(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)；载气为he，流速1ml/min，分离比5:1；进样温度为250℃；升温程序为起始温度为40℃，保持5min，以8℃/min，升至250℃，保持5min。
50.质谱条件：ei电离源，能量70ev；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，接口温度250℃，扫描范围30-400m/z。
51.(3)样品前处理：将5ml样品、1g nacl置于20ml顶空瓶中，拧紧瓶盖。于搅拌模式80℃下平衡5min后，用固相微萃取针80℃下萃取5min，然后于进样口解析5min。
52.2、桃花细胞水喷雾防腐挑战测试
53.将实施例和对比例的桃花细胞水，添加到如下喷雾配方中(见表:1)。接种一定数量的细菌和真菌，间隔0天、7天、14天、21天、28天按照美国药典usp32<51>微生物防腐功效测试的检测方法检测微生物数量变化情况。同时做空白对照，将桃花细胞水换成去离子水。
54.表1：实验喷雾配方
55.原料含量丁二醇2.5％甜菜碱0.05％甘草酸二钾0.03％可溶性蛋白多糖0.03％蜂王浆提取物0.03％桃花细胞水余量柠檬酸调节ph＝6-7
56.3、桃花细胞水安全性测试
57.hacat细胞为人永生表皮细胞系，对hacat细胞的细胞毒性，可作为对皮肤安全性的参考数据。正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质还原为带颜色的结晶状物质，沉积在细胞周围，该变化可通过酶标仪读取od值，通过od值与空白对照组的比较，可以得知细胞的相对生长情况。以上述方法测试桃花细胞水的安全性。
58.测试结果：
59.1、实施例1的桃花细胞水挥发性活性成分分析结果
60.表2：实施例1桃花细胞水挥发性活性成分表
61.62.63.[0064][0065]
2、实施例1的桃花细胞水防腐挑战测试结果
[0066]
表3：实施例1桃花细胞水的防腐挑战测试数据
[0067][0068]
由测试数据可以看出，细菌总数从初始到14天的细菌数对数减少值大于2.0，并且从14天到28天细菌和真菌数量不再增加；测试28天后，其中的活菌浓度小于10cfu/g，实施例1的桃花细胞水通过了喷雾配方的防腐挑战，说明其具有一定的抑菌功效。
[0069]
3、实施例1的桃花细胞水安全性测试结果
[0070]
测试结果如图1所示，由图1数据说明了桃花细胞水对人体表皮细胞基本无毒性，安全性高。
[0071]
4、实施例和对比例的桃花细胞水挥发性活性成分分析及防腐挑战测试结果：
[0072]
表4：实施例1～7和对比例1～4的桃花细胞水的主要挥发性活性成分含量表及防腐挑战测试结果
[0073][0074]
续表4：
[0075][0076]
结果分析：对比例1采用单一的低温真空提取技术，提取不充分，得到的桃花细胞水活性成分含量低，香味淡。对比例2采用传统的纯酶解法会有酶解过度的问题：得到的桃花细胞水含有杂质，异味重，且防腐性差；而且需额外加入水作为酶解溶剂，稀释了提取液，香味淡，利用价值不高。对比例3先酶解，再采用低温-真空(减压)技术提取，同样会有酶解过度产生杂味的问题；而且采用水作为酶解溶剂，由于水的渗透性差，且外加的水会稀释提取液，导致了提取率较低、细胞水香味淡等缺陷。对比例4由于初提时间过短，初提细胞水太少，导致酶解程度过低，相对于实施例1提取率较低，并且活性成分含量较少导致香味较淡。