治疗癌症的方法1.交叉引用2.本技术要求2019年1月7日提交的美国临时申请第62/789,164号的权益，该美国临时申请通过引用以其整体并入。3.背景4.针对许多癌症的治疗，正在评价各种免疫治疗方法。然而，仍然需要能够产生特异性针对癌细胞的稳健免疫反应的免疫疗法和方案。5.概述6.本文描述的方法的特征尤其在于通过施用溶瘤微生物的异源初免‑加强方案(heterologousprime‑boostregimen)来治疗癌症的方法，所述异源初免‑加强方案增强或引发对非由溶瘤微生物编码的肿瘤蛋白的免疫反应。7.一种实施方案提供了治疗受试者中的肿瘤的方法，所述方法包括：向受试者施用第一重组微生物，其中第一重组微生物在肿瘤细胞中复制而在非肿瘤细胞中不复制或者在非肿瘤细胞中表现出减弱的复制；向受试者施用第二重组微生物，其中第二重组微生物在肿瘤细胞中复制而在非肿瘤细胞中不复制或者在非肿瘤细胞中表现出减弱的复制，其中第一重组微生物和第二重组微生物是不同的，并且至少是下列其中之一：a)增强或引发对非由第一微生物和第二微生物编码或表达的肿瘤蛋白的免疫反应，b)增强或引发对非由第一重组微生物和第二重组微生物编码或表达的由肿瘤相关细胞表达的蛋白的免疫反应。在一些实施方案中，免疫反应表现为以下中的一种或更多种或者它们的任何组合：受试者中肿瘤体积的减小、受试者或来自受试者的样品中一种或更多种肿瘤蛋白的表达水平的下降、受试者中肿瘤部位数量的减少、受试者或来自受试者的样品中病毒载量的变化、受试者或来自受试者的样品中免疫细胞的群体的变化、受试者或来自受试者的样品中免疫细胞标志物表达水平的变化、受试者或来自受试者的样品中b细胞增殖的增强、受试者或来自受试者的样品中cd4 t细胞增殖的增强、受试者或来自受试者的样品中cd8 t细胞增殖的增强、受试者或来自受试者的样品中细胞因子的产生的增强、受试者或来自受试者的样品中抗原呈递细胞增殖的增强。在一些实施方案中，免疫反应表现为受试者或来自受试者的样品中一种或更多种肿瘤蛋白的表达水平的下降、免疫细胞的群体的变化、免疫细胞标志物表达水平的变化、b细胞增殖的增强、cd4 t细胞增殖的增强、cd8 t细胞增殖的增强、细胞因子的产生的增强、抗原呈递细胞增殖的增强或它们的任何组合，其中来自受试者的样品是血液、组织、尿液或唾液样品。8.在一些实施方案中，免疫反应可以在施用第一重组微生物或第二重组微生物时或之后的时间点检测到。在一些实施方案中，第一重组微生物在非肿瘤细胞中不复制。在一些实施方案中，第一重组微生物在非肿瘤细胞中显示出减弱的复制。在一些实施方案中，第一重组微生物在非肿瘤细胞中的感染性相对于肿瘤细胞至少低70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施方案中，第一重组微生物在非肿瘤细胞中的复制效率相对于肿瘤细胞至少低70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施方案中，第二重组微生物在非肿瘤细胞中不复制。在一些实施方案中，第二重组微生物在非肿瘤细胞中显示出减弱的复制。在一些实施方案中，第二重组微生物在非肿瘤细胞中的感染性相对于肿瘤细胞至少低70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施方案中，第二重组微生物在非肿瘤细胞中的复制效率相对于肿瘤细胞至少低70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％。在一些实施方案中，第一重组微生物是细菌、病毒或寄生虫。在一些实施方案中，第二重组微生物是细菌、病毒或寄生虫。在一些实施方案中，第一重组微生物是细菌。在一些实施方案中，第一重组微生物是肠杆菌、李斯特菌科细菌或链球菌科细菌。在一些实施方案中，细菌是肠杆菌。在一些实施方案中，肠杆菌是沙门氏菌属细菌。在一些实施方案中，沙门氏菌属细菌是邦戈尔沙门氏菌(s.bongori)或肠道沙门氏菌(s.enterica)。在一些实施方案中，细菌是李斯特菌科细菌。在一些实施方案中，李斯特菌科细菌是李斯特菌属细菌。在一些实施方案中，李斯特菌是单核细胞增生李斯特菌(l.monocytogenes)。在一些实施方案中，细菌是链球菌科细菌。在一些实施方案中，链球菌科细菌是乳球菌属细菌。在一些实施方案中，乳球菌属细菌是l.chungangensis、l.formosensis、富士山乳球菌(l.fujiensis)、格氏乳球菌(l.garvieae)、l.hircilactis、乳酸乳球菌(l.lactis)、l.laudensis、鼻白蚁乳球菌(l.nasutitermitis)、鱼乳球菌(l.piscium)、植物乳球菌(l.plantarum)、棉子糖乳球菌(l.raffinolactis)或台湾乳球菌(l.taiwanensis)。在一些实施方案中，第一重组微生物是寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫是肉孢子虫科寄生虫或锥体虫科寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫是肉孢子虫科寄生虫。在一些实施方案中，肉孢子虫科寄生虫是弓形体属寄生虫。在一些实施方案中，弓形体属寄生虫是刚地弓形虫(toxoplasmagondii)。在一些实施方案中，寄生虫是锥体虫科寄生虫。在一些实施方案中，锥体虫科寄生虫是利什曼原虫属寄生虫。在一些实施方案中，利什曼原虫属寄生虫是埃塞俄比亚利什曼原虫(l.aethiopica)、亚马逊利什曼原虫(l.amazonensis)、阿拉伯利什曼原虫(l.arabica)、l.aristedesi、巴西利什曼原虫(l.braziliensis)、恰氏利什曼原虫(l.chagasi)、哥伦比亚利什曼原虫(l.colombiensis)、l.deanei、杜氏利什曼原虫(l.donovani)、豚鼠利什曼原虫(l.enriettii)、l.forattinii、伽纳姆利什曼原虫(l.garnhami)、圭亚那利什曼原虫(l.guyanensis)、l.herreri、l.hertigi、婴儿利什曼原虫(l.infantum)、l.killicki、蓝氏利什曼原虫(l.lainsoni)、硕大利什曼原虫(l.major)、墨西哥利什曼原虫(l.mexicana)、奈氏利什曼原虫(l.naiffi)、巴拿马利什曼原虫(l.panamensis)、秘鲁利什曼原虫(l.peruviana)、皮凡诺利什曼原虫(l.pifanoi)、肖氏利什曼原虫(l.shawi)、蜥蜴利什曼原虫(l.tarentolae)、热带利什曼原虫(l.tropica)、都兰利什曼原虫(l.turanica)或委内瑞拉利什曼原虫(l.venezuelensis)。在一些实施方案中，第一重组微生物是病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物属于病毒科。在一些实施方案中，第一重组微生物是dna病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是rna病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物包括痘病毒、小rna病毒、腺病毒、细小病毒、疱疹病毒、呼肠孤病毒、副黏病毒、弹状病毒、正黏病毒或柯萨奇病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒是正痘病毒、副痘病毒、亚塔痘病毒(yatapoxvirus)、兔痘病毒(leporipoxvirus)、软疣痘病毒、乙型昆虫痘病毒、鹿痘病毒、丙型昆虫痘病毒、猪痘病毒、鳄鱼痘病毒、甲型昆虫痘病毒、山羊痘病毒或禽痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒是正痘病毒。在一些实施方案中，正痘病毒是痘苗病毒。在一些实施方案中，痘病毒是兔痘病毒。在一些实施方案中，兔痘病毒是黏液瘤病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是小rna病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是口蹄疫病毒、aquamavirus、禽肝炎病毒、avisivirus、心病毒、cosavirus、dicipivirus、肠道病毒、马鼻病毒、gallivirus、肝病毒、hunnivirus、嵴病毒、kunsagivirus、megrivirus、mischivirus、mosavirus、oscivirus、副肠孤病毒(parechovirus)、pasivirus、passerivirus、rosavirus、sakobuvirus、salivirus、萨佩罗病毒、塞内卡病毒、sicinivirus、捷申病毒(teschovirus)或震颤病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是肠道病毒。在一些实施方案中，肠道病毒是脊髓灰质炎病毒或柯萨奇病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是心病毒。在一些实施方案中，心病毒是门果病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是腺病毒。在一些实施方案中，腺病毒是富at腺病毒(atadenovirus)、禽腺病毒、鱼腺病毒、哺乳动物腺病毒或唾液酸酶腺病毒(siadenovirus)。在一些实施方案中，第一重组微生物是细小病毒。在一些实施方案中，细小病毒是阿留申细小病毒(amdoparvovirus)、aveparvovirus、博卡细小病毒、chapparvovirus、copiparvovirus、依赖性细小病毒(dependoparvovirus)、红细胞细小病毒(erythroparvovirus)、原细小病毒(protoparvovirus)或tetraparvovirus。在一些实施方案中，细小病毒是依赖性细小病毒。在一些实施方案中，依赖性细小病毒是腺相关病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒是α疱疹病毒、β疱疹病毒或γ疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒是α疱疹病毒。在一些实施方案中，α疱疹病毒是传染性喉气管炎病毒、马立克病毒、单纯疱疹病毒或水痘病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒是β疱疹病毒。在一些实施方案中，β疱疹病毒是巨细胞病毒、鼠巨细胞病毒、长鼻动物病毒或玫瑰疱疹病毒(roseolovirus)。在一些实施方案中，疱疹病毒是γ疱疹病毒。在一些实施方案中，γ疱疹病毒是淋巴潜隐病毒、玛卡病毒、马疱疹病毒或猴病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是弹状病毒。在一些实施方案中，弹状病毒是curiovirus、细胞质弹状病毒、dichorhavirus、暂时热病毒(ephemerovirus)、hapavirus、ledantevirus、丽沙病毒、粒外弹状病毒、细胞核弹状病毒、鲈鱼弹状病毒、sigmavirus、sprivivirus、sripuvirus、tibrovirus、tupavirus、叶脉曲张病毒或水疱性病毒。在一些实施方案中，弹状病毒是水疱性病毒。在一些实施方案中，水疱性病毒是水疱性口炎病毒或marba病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是呼肠孤病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒是光滑呼肠孤病毒(sedoreovirus)或刺突呼肠孤病毒(spinareovirus)。在一些实施方案中，呼肠孤病毒是光滑呼肠孤病毒。9.在一些实施方案中，光滑呼肠孤病毒是甲壳动物呼肠孤病毒(cardoreovirus)、微胞藻呼肠孤病毒(mimoreovirus)、环状病毒、植物呼肠弧病毒、轮状病毒或东南亚十二rna病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒是刺突呼肠孤病毒。在一些实施方案中，刺突呼肠孤病毒是水产呼肠孤病毒(aquareovirus)、科罗拉多壁虱热病毒(coltivirus)、质型多角体病毒、斐济病毒、正呼肠孤病毒、昆虫非包裹呼肠孤病毒(idnoreovirus)、迪诺维纳病毒、水稻病毒或真菌呼肠孤病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物是副黏病毒。在一些实施方案中，副黏病毒是aquaparamyxovirus、禽副黏病毒、蛇副黏病毒、亨尼巴病毒、麻疹病毒属(morbillivirus)、呼吸道病毒或腮腺炎病毒。在一些实施方案中，副黏病毒是麻疹病毒。在一些实施方案中，麻疹病毒属是麻疹病毒(measlesvirus)。在一些实施方案中，第一重组微生物是正黏病毒。在一些实施方案中，正黏病毒是流感病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是细菌。在一些实施方案中，第二重组微生物是肠杆菌、李斯特菌科细菌或链球菌科细菌。在一些实施方案中，细菌是肠杆菌。在一些实施方案中，肠杆菌是沙门氏菌属细菌。在一些实施方案中，沙门氏菌属细菌是邦戈尔沙门氏菌或肠道沙门氏菌。在一些实施方案中，细菌是李斯特菌科细菌。在一些实施方案中，李斯特菌科细菌是李斯特菌属细菌。在一些实施方案中，李斯特菌属细菌是单核细胞增生李斯特菌。在一些实施方案中，细菌是链球菌科细菌。在一些实施方案中，链球菌科细菌是乳球菌属细菌。在一些实施方案中，乳球菌属细菌是(l.chungangensis)、l.formosensis、富士山乳球菌、格氏乳球菌、l.hircilactis、乳酸乳球菌、l.laudensis、鼻白蚁乳球菌、鱼乳球菌、植物乳球菌、棉子糖乳球菌或台湾乳球菌。在一些实施方案中，第二重组微生物是寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫是肉孢子虫科寄生虫或锥体虫科寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫是肉孢子虫科寄生虫。在一些实施方案中，肉孢子虫科寄生虫是弓形体属寄生虫。在一些实施方案中，弓形体属寄生虫是刚地弓形虫。在一些实施方案中，寄生虫是锥体虫科寄生虫。在一些实施方案中，锥体虫科寄生虫是利什曼原虫属寄生虫。在一些实施方案中，利什曼原虫属寄生虫是埃塞俄比亚利什曼原虫、亚马逊利什曼原虫、阿拉伯利什曼原虫、l.aristedesi、巴西利什曼原虫、恰氏利什曼原虫、哥伦比亚利什曼原虫、l.deanei、杜氏利什曼原虫、豚鼠利什曼原虫、l.forattinii、伽纳姆利什曼原虫、圭亚那利什曼原虫、l.herreri、l.hertigi、婴儿利什曼原虫、l.killicki、蓝氏利什曼原虫、硕大利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫、奈氏利什曼原虫、巴拿马利什曼原虫、秘鲁利什曼原虫、皮凡诺利什曼原虫、肖氏利什曼原虫、蜥蜴利什曼原虫、热带利什曼原虫、都兰利什曼原虫或委内瑞拉利什曼原虫。在一些实施方案中，第二重组微生物是病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物属于病毒科。在一些实施方案中，第二重组微生物是dna病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是rna病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是痘病毒、小rna病毒、腺病毒、细小病毒、疱疹病毒、呼肠孤病毒、副黏病毒、弹状病毒、正黏病毒或柯萨奇病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒是正痘病毒、副痘病毒、亚塔痘病毒、兔痘病毒、软疣痘病毒、乙型昆虫痘病毒、鹿痘病毒、丙型昆虫痘病毒、猪痘病毒、鳄鱼痘病毒、甲型昆虫痘病毒、山羊痘病毒或禽痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒是正痘病毒。在一些实施方案中，正痘病毒是痘苗病毒。在一些实施方案中，痘病毒是兔痘病毒。在一些实施方案中，兔痘病毒是黏液瘤病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是小rna病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是口蹄疫病毒、aquamavirus、禽肝炎病毒、avisivirus、心病毒、cosavirus、dicipivirus、肠道病毒、马鼻病毒、gallivirus、肝病毒、hunnivirus、嵴病毒、kunsagivirus、megrivirus、mischivirus、mosavirus、oscivirus、副肠孤病毒、pasivirus、passerivirus、rosavirus、sakobuvirus、salivirus、萨佩罗病毒、塞内卡病毒、sicinivirus、捷申病毒或震颤病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是肠道病毒。在一些实施方案中，肠道病毒是脊髓灰质炎病毒或柯萨奇病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是心病毒。10.在一些实施方案，心病毒是门果病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是腺病毒。在一些实施方案中，腺病毒是富at腺病毒、禽腺病毒、鱼腺病毒、哺乳动物腺病毒或唾液酸酶腺病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是细小病毒。在一些实施方案中，细小病毒是阿留申细小病毒、aveparvovirus、博卡细小病毒、chapparvovirus、copiparvovirus、依赖性细小病毒、红细胞细小病毒、原细小病毒或tetraparvovirus。在一些实施方案中，细小病毒是依赖性细小病毒。在一些实施方案中，依赖性细小病毒是腺相关病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒是α疱疹病毒、β疱疹病毒或γ疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒是α疱疹病毒。在一些实施方案中，α疱疹病毒是传染性喉气管炎病毒、马立克病毒、单纯疱疹病毒或水痘病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒是β疱疹病毒。在一些实施方案中，β疱疹病毒是巨细胞病毒、鼠巨细胞病毒、长鼻动物病毒或玫瑰疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒是γ疱疹病毒。在一些实施方案中，γ疱疹病毒是淋巴潜隐病毒、玛卡病毒、马疱疹病毒或猴病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是弹状病毒。在一些实施方案中，弹状病毒是curiovirus、细胞质弹状病毒、dichorhavirus、暂时热病毒、hapavirus、ledantevirus、丽沙病毒、粒外弹状病毒、细胞核弹状病毒、鲈鱼弹状病毒、sigmavirus、sprivivirus、sripuvirus、tibrovirus、tupavirus、叶脉曲张病毒或水疱性病毒。在一些实施方案中，弹状病毒是水疱性病毒。在一些实施方案中，水疱性病毒是水疱性口炎病毒或marba病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是呼肠孤病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒是光滑呼肠孤病毒或刺突呼肠孤病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒是光滑呼肠孤病毒。在一些实施方案中，光滑呼肠孤病毒是甲壳动物呼肠孤病毒、微胞藻呼肠孤病毒、环状病毒、水稻呼肠弧病毒、轮状病毒或东南亚十二rna病毒。11.在一些实施方案中，呼肠孤病毒是刺突呼肠孤病毒。在一些实施方案中，刺突呼肠孤病毒是水产呼肠孤病毒、科罗拉多壁虱热病毒、质型多角体病毒、斐济病毒、正呼肠孤病毒、昆虫非包裹呼肠孤病毒、迪诺维纳病毒、水稻病毒或真菌呼肠孤病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是副黏病毒。在一些实施方案中，副黏病毒是aquaparamyxovirus、禽副黏病毒、蛇副黏病毒、亨尼巴病毒、麻疹病毒属、呼吸道病毒或腮腺炎病毒。在一些实施方案中，副黏病毒是麻疹病毒属。在一些实施方案中，麻疹病毒属是麻疹病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物是正黏病毒。在一些实施方案中，正黏病毒是流感病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物包含编码一种或更多种人类蛋白的外源核酸，并且第二重组微生物不包含编码一种或更多种人类蛋白的外源核酸。在一些实施方案中，人类蛋白是趋化因子或细胞因子。在一些实施方案中，第二重组微生物包含编码一种或更多种人类蛋白的外源核酸，并且第一重组微生物不包含编码一种或更多种人类蛋白的外源核酸。在一些实施方案中，人类蛋白是趋化因子或细胞因子。在一些实施方案中，受试者是人类。在一些实施方案中，肿瘤是实体肿瘤或血液肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤包括前列腺肿瘤、肺肿瘤、肾肿瘤、胃肿瘤、结肠肿瘤、卵巢肿瘤、膀胱肿瘤、乳腺肿瘤、颈肿瘤(cervicaltumor)、食管肿瘤、睾丸肿瘤、肝脏肿瘤、胰腺肿瘤、直肠肿瘤、甲状腺肿瘤、子宫肿瘤、皮肤肿瘤、肌肉肿瘤、软骨肿瘤、骨肿瘤、内皮肿瘤、上皮肿瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、真皮肿瘤(dermaltumor)、基底肿瘤(basaltumor)、视网膜肿瘤、皮肤肿瘤(skintumor)或脑肿瘤。在一些实施方案中，第一重组微生物和第二重组微生物被同时施用至受试者。在一些实施方案中，第一重组微生物被配制成延迟释放组合物、持续释放组合物、立即释放组合物、隐身释放组合物(stealthreleasecomposition)或它们的任何组合。在一些实施方案中，第二重组微生物被配制成延迟释放组合物。在一些实施方案中，在第一重组微生物被施用至受试者之后，第二重组微生物被施用至受试者。在一些实施方案中，在施用第一重组微生物后约1‑60天、1‑45天、1‑30天、1‑15天、1‑10天或1‑7天，第二重组微生物被施用。12.在一些实施方案中，在施用第一重组微生物后约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、14天、21天、28天、35天、56天或60天，第二重组微生物被施用。在一些实施方案中，第二重组微生物被施用至受试者一次、两次、三次、三次、四次、五次或更多次。在一些实施方案中，第二重组微生物被施用至受试者两次、三次、三次、四次、五次或更多次，其中每次施用之间为约1‑60天、1‑45天、1‑30天、1‑15天、1‑10天、1‑7天、1‑5天或1‑3天。在一些实施方案中，在第二重组微生物被施用至受试者之后，第一重组微生物被施用至受试者。13.在一些实施方案中，在施用第二重组微生物后约1‑60天、1‑45天、1‑30天、1‑15天、1‑10天或1‑7天，第一重组微生物被施用。14.在一些实施方案中，在施用第二重组微生物后约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、14天、21天、28天、35天、56天或60天，第一重组微生物被施用。在一些实施方案中，第一重组微生物被施用至受试者一次、两次、三次、三次、四次、五次或更多次。在一些实施方案中，第一重组微生物被施用至受试者两次、三次、三次、四次、五次或更多次，其中每次施用之间为约1‑60天、1‑45天、1‑30天、1‑15天、1‑10天、1‑7天、1‑5天或1‑3天。在一些实施方案中，第一重组微生物被肿瘤内、皮内、皮下、腹膜内、肌肉内或静脉内施用；并且第二重组微生物被肿瘤内、皮内、皮下、腹膜内、鞘内、肌肉内或静脉内施用。在一些实施方案中，第二重组微生物被肿瘤内、皮内、皮下、腹膜内、肌肉内施用；并且第一重组微生物被肿瘤内、皮内、皮下、腹膜内、鞘内、肌肉内或静脉内施用。15.在一些实施方案中，方法还包括施用抗癌疗法。在一些实施方案中，抗癌疗法包括化疗、放射、免疫调节剂或细胞疗法。在一些实施方案中，免疫调节剂包括免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括结合以下的蛋白：pd‑1、pd‑l1、ctla‑4、a2ar、b7‑h3、b7‑h4、btla、ido、kir、lag3、tim‑3、vista、cd160、tigit、psgl‑1或它们的任何组合。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括特异性结合以下的抗体：pd‑1、pd‑l1、ctla‑4、a2ar、b7‑h3、b7‑h4、btla、ido、kir、lag3、tim‑3、vista、cd160、tigit、psgl‑1或它们的任何组合。16.在一些实施方案中，免疫反应表现为免疫细胞的群体的变化，其中所述免疫细胞包括髓源性抑制细胞、调节性t细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞或它们的任何组合。在一些实施方案中，免疫反应表现为细胞因子的产生的增强，其中所述细胞因子包括ifn‑γ、il‑12、tnfα或它们的任何组合。在一些实施方案中，方法还包括向受试者施用其他重组微生物。在一些实施方案中，方法还包括向受试者施用第三重组微生物。在一些实施方案中，方法还包括向受试者施用第四重组微生物。17.一种实施方案提供了药盒，所述药盒包括至少第一容器和第二容器以及使用说明，其中所述第一容器包含第一重组微生物，并且所述第二容器包含第二重组微生物。在一些实施方案中，第一重组微生物在肿瘤细胞中复制而在非肿瘤细胞中不复制或者在非肿瘤细胞中显示出减弱的复制；并且其中第二重组微生物在肿瘤细胞中复制而在非肿瘤细胞中不复制或者在非肿瘤细胞中显示出减弱的复制。在一些实施方案中，药盒还包含含有第三重组微生物的第三容器。在一些实施方案中，药盒还包含含有第四重组微生物的第四容器。18.在一些实施方案中，第三重组微生物在肿瘤细胞中复制而在非肿瘤细胞中不复制或者在非肿瘤细胞中显示出减弱的复制；并且其中第四重组微生物在肿瘤细胞中复制而在非肿瘤细胞中不复制或者在非肿瘤细胞中显示出减弱的复制。19.通过引用并入20.本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文，其程度如同每一个单独的出版物、专利或专利申请被具体和单独地指明通过引用并入的程度。就通过引用并入的出版物和专利或专利申请与说明书中包含的本公开内容相矛盾的程度而言，本说明书意在取代和/或优先于任何这样的矛盾材料。21.附图简述22.本公开内容的各种特征在所附权利要求书中具体地阐述。通过参考以下详细描述和附图将获得对本公开内容的特征和优点的更好理解，该详细描述阐述了利用本发明的原理的说明性实施方案，并且在附图中：23.图1示出了沙门氏菌属细菌和痘苗病毒的异源初免‑加强方案在小鼠肾腺癌(renca)肿瘤模型中的治疗活性。24.图2a和图2b示出了痘苗病毒或单纯性疱疹病毒或水疱性口炎病毒的异源初免‑加强方案在小鼠renca肿瘤模型中的治疗活性。25.详细描述26.以下描述和实施例详细说明了本公开内容的实施方案。应当理解，本公开内容不限于本文描述的特定实施方案，并因此可以变化。本领域的技术人员将认识到，本公开内容有许多实施方案和修改，这些都包含在其范围内。27.所有术语意在按照将被本领域技术人员理解的方式理解。除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开内容所属
技术领域：
：的普通技术人员通常理解的相同含义。28.本文使用的章节标题仅用于组织目的，并且不被解释为限制所描述的主题。29.尽管本公开内容的各个特征可以在单个实施方案的上下文中被描述，但是该特征还可以单独地或以任何合适的组合被提供。相反，尽管本公开内容可以为了清楚起见在单独的实施方案的上下文中在本文描述，但是本公开内容还可以在单个实施方案中实现。30.i.某些定义31.以下定义针对的是当前的申请，并不归于任何相关或不相关的案件，例如任何共同拥有的专利或申请。尽管与本文描述的那些相似或等效的任何方法和材料都可用于实践对本公开内容的测试，但本文描述了优选的方法和材料。因此，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且不意图限制。32.本文使用的术语仅用于描述特定情况的目的，且不意图限制。如本文使用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”也包括复数形式，除非上下文另有清楚地指示。此外，就术语“含有(contains)”、“含有(containing)”、“包括(including)”、“包括(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变化形式在详细描述和/或权利要求书中使用的程度而言，这样的术语意图以类似于术语“包含(comprising)”的方式为包含性的。33.术语“约(about)”或“大约(approximately)”意指在如由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围以内，其将部分地取决于值如何被测量或确定，例如，测量系统的局限性。例如，“约(about)”根据给定值中的每次实践，可以意指在1个或多于1个标准偏差内。在本技术和权利要求书中描述特定值的情况下，除非另有说明，术语“约”应被假定为意指特定值的可接受误差范围，诸如由术语“约”修饰的值的±10％。34.术语“个体”、“患者”或“受试者”在本文中可互换使用。这些术语中没有一个要求或限于以医护工作者(例如，医生、注册护士、执业护士、医师助理、护理员或临终关怀工作者)的监督(例如持续性或间歇性)为特征的情况。在一些实施方案中，患者、受试者或个体可以在医护工作者的监督下。术语“受试者”可以指动物，包括但不限于灵长类动物(例如，人类)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠或小鼠。35.本文提到的术语“抑制(inhibiting)”、“减少(reducing)”或“预防(prevention)”或这些术语的任何变体包括任何可测量的减少或完全抑制以达到期望的结果。36.术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”包括减轻或消除病症、疾病或状况；或者与病症、疾病或状况相关的一种或更多种症状；或减轻或根除病症、疾病或状况本身的一种或更多种原因。期望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接病理结果、预防转移、降低疾病进展速度、改善或减轻疾病状态以及缓解或改善预后。37.术语“全身递送”和“全身施用”在本文中可互换使用，是指施用药物、重组微生物或其他物质至循环系统的途径。全身施用可以包括口服施用、胃肠外施用、鼻内施用、舌下施用、直肠施用、透皮施用或它们的任何组合。38.术语“治疗有效量”是指在施用时足以预防或在一定程度上减轻所治疗的病症、疾病或状况的一种或更多种症状的发展的剂(例如本文描述的重组微生物)的量。术语“治疗有效量”还可以指足以引发细胞、组织、系统、动物或人类的研究者、兽医、医学博士或临床医师正在寻找的生物学或医学反应的剂(例如，重组微生物)的量。39.术语“药学上可接受的载体”、“药学上可接受的赋形剂”、“生理学上可接受的载体”或“生理学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的材料、组合物或载体，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。组分在与药物制剂的其他成分相容的意义上为“药学上可接受的”。它也适用于与人类和动物的组织或器官接触使用，没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称。参见，remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第21版；lippincottwilliams&wilkins:philadelphia,pa,2005；handbookofpharmaceuticalexcipients,第5版；rowe等人,编著,thepharmaceuticalpressandtheamericanpharmaceuticalassociation:2005；和handbookofpharmaceuticaladditives,第3版；ash和ash编著,gowerpublishingcompany:2007；pharmaceuticalpreformulationandformulation,gibson编著,crcpressllc:bocaraton,fl,2004)。40.术语“药物组合物”是指本文公开的剂(例如，本文描述的重组微生物)与其他化学组分(诸如稀释剂或载体)的混合物。药物组合物可以有助于向生物体施用化合物。本领域存在施用化合物的多种技术，包括但不限于口服、注射、气雾剂、肠胃外和局部施用。药物组合物也可通过使化合物与无机酸或有机酸，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等反应来获得。41.本文中可互换使用的术语“重组微生物”是指通过实验干预进行遗传修饰的微生物，例如病毒。例如，重组微生物在其基因组中包含一种或更多种突变，包括但不限于缺失、异源核酸的插入、倒位、取代或它们的组合。42.如本文中提到微生物(例如病毒)使用的术语“天然存在的”，表示微生物可以在自然界中找到，即，它可以从自然界中的来源分离出来，并且没有被有意地修饰。43.本文使用的术语“减弱的”可以意指相对于重组微生物感染癌细胞的能力，重组微生物具有降低的感染非癌细胞的能力；相对于重组微生物在癌细胞中复制的能力，重组微生物具有降低的在非癌细胞中复制的能力；相对于在癌细胞中的复制效率，重组微生物具有降低的在非癌细胞中复制的效率；或者相对于裂解癌细胞的能力，重组微生物具有降低的裂解非癌细胞的能力。在一些情况下，癌细胞和非癌细胞可以是相同类型，例如，内皮细胞、上皮细胞。在一些情况下，癌细胞和非癌细胞可以是不同的类型，例如，在一些情况下，癌细胞可以是内皮细胞，并且非癌细胞可以是上皮细胞。44.如本文中提到两种或更多种不同微生物使用的术语“血清学上不同的”表示受试者针对两种或更多种不同微生物产生的抗体之间可能没有交叉反应性或存在降低的交叉反应性。45.本文使用的术语“肿瘤相关细胞”可以指存在于受试者中的实体肿瘤微环境内的非肿瘤细胞。这些细胞可以包括例如成纤维细胞、内皮细胞、基质细胞和免疫细胞。46.本文使用的术语“肿瘤蛋白”可以指在用本文描述的重组微生物感染之前，相对于非肿瘤性的相同类型的细胞的表达水平或所表达的形式，肿瘤细胞以增加的水平或突变的形式(或两者)表达的蛋白。47.ii.重组微生物48.本文描述的重组微生物包括但不限于病毒、细菌和寄生虫。在一些实施方案中，重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，重组微生物可以是寄生虫。49.在一些实施方案中，第一重组微生物可以是病毒，并且第二重组微生物可以是不同的病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物可以是病毒，并且第二重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第一重组微生物可以是病毒，并且第二重组微生物可以是寄生虫。50.在一些实施方案中，第二重组微生物可以是病毒，并且第一重组微生物可以是不同的病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物可以是病毒，并且第一重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第二重组微生物可以是病毒，并且第一重组微生物可以是寄生虫。51.在一些实施方案中，重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，重组微生物可以是肠杆菌、李斯特菌科细菌或链球菌科细菌。在一些实施方案中，细菌可以是肠杆菌。在一些实施方案中，肠杆菌可以是沙门氏菌属细菌。在一些实施方案中，沙门氏菌属细菌可以是减毒的鼠伤寒沙门氏菌，诸如营养缺陷型(aroa突变体)。在一些实施方案中，沙门氏菌属细菌可以是邦戈尔沙门氏菌或肠道沙门氏菌。在一些实施方案中，细菌可以是李斯特菌科细菌。在一些实施方案中，李斯特菌科细菌可以是李斯特菌属细菌。在一些实施方案中，李斯特菌属细菌可以是单核细胞增生李斯特菌。在一些实施方案中，细菌可以是链球菌科细菌。在一些实施方案中，链球菌科细菌可以是乳球菌属细菌。在一些实施方案中，乳球菌属细菌可以是l.chungangensis、l.formosensis、富士山乳球菌、格氏乳球菌、l.hircilactis、乳酸乳球菌、l.laudensis、鼻白蚁乳球菌、鱼乳球菌、植物乳球菌、棉子糖乳球菌或台湾乳球菌。52.在一些实施方案中，重组微生物可以是寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫可以是肉孢子虫科寄生虫或锥体虫科寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫可以是肉孢子虫科寄生虫。在一些实施方案中，肉孢子虫科寄生虫可以是弓形体属寄生虫。在一些实施方案中，弓形体属寄生虫可以是刚地弓形虫。在一些实施方案中，寄生虫可以是锥体虫科寄生虫。53.在一些实施方案中，锥体虫科寄生虫是利什曼原虫属寄生虫。在一些实施方案中，利什曼原虫属寄生虫可以是埃塞俄比亚利什曼原虫、亚马逊利什曼原虫、阿拉伯利什曼原虫、l.aristedesi、巴西利什曼原虫、恰氏利什曼原虫、哥伦比亚利什曼原虫、l.deanei、杜氏利什曼原虫、豚鼠利什曼原虫、l.forattinii、伽纳姆利什曼原虫、圭亚那利什曼原虫、l.herreri、l.hertigi、婴儿利什曼原虫、l.killicki、蓝氏利什曼原虫、硕大利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫、奈氏利什曼原虫、巴拿马利什曼原虫、秘鲁利什曼原虫、皮凡诺利什曼原虫、肖氏利什曼原虫、蜥蜴利什曼原虫、热带利什曼原虫、都兰利什曼原虫或委内瑞拉利什曼原虫。54.在一些实施方案中，重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物可以属于病毒科。在一些实施方案中，重组微生物可以是dna病毒。在一些实施方案中，重组微生物可以是rna病毒。55.在一些实施方案中，重组微生物可以是痘病毒、小rna病毒、腺病毒、细小病毒、疱疹病毒、呼肠孤病毒、副黏病毒、弹状病毒、正黏病毒或柯萨奇病毒。56.在一些实施方案中，重组微生物可以是痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒可以是正痘病毒、副痘病毒、亚塔痘病毒、兔痘病毒、软疣痘病毒、乙型昆虫痘病毒、鹿痘病毒、丙型昆虫痘病毒、猪痘病毒、鳄鱼痘病毒、甲型昆虫痘病毒、山羊痘病毒或禽痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒可以是正痘病毒。在一些实施方案中，正痘病毒可以是痘苗病毒。在一些实施方案中，痘病毒可以是兔痘病毒。在一些实施方案中，兔痘病毒可以是黏液瘤病毒。57.在一些实施方案中，重组微生物可以是小rna病毒。在一些实施方案中，小rna病毒可以是口蹄疫病毒、aquamavirus、禽肝炎病毒、avisivirus、心病毒、cosavirus、dicipivirus、肠道病毒、马鼻病毒、gallivirus、肝病毒、hunnivirus、嵴病毒、kunsagivirus、megrivirus、mischivirus、mosavirus、oscivirus、副肠孤病毒、pasivirus、passerivirus、rosavirus、sakobuvirus、salivirus、萨佩罗病毒、塞内卡病毒、sicinivirus、捷申病毒或震颤病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是肠道病毒。在一些实施方案中，肠道病毒可以是脊髓灰质炎病毒或柯萨奇病毒。在一些实施方案中，小rna病毒可以是心病毒。在一些实施方案中，心病毒可以是门果病毒。58.在一些实施方案中，微生物可以是腺病毒。在一些实施方案中，腺病毒可以是富at腺病毒、禽腺病毒、鱼腺病毒、哺乳动物腺病毒或唾液酸酶腺病毒。59.在一些实施方案中，重组微生物可以是细小病毒。在一些实施方案中，细小病毒可以是阿留申细小病毒、aveparvovirus、博卡细小病毒、chapparvovirus、copiparvovirus、依赖性细小病毒、红细胞细小病毒、原细小病毒或tetraparvovirus。在一些实施方案中，细小病毒可以是依赖性细小病毒。在一些实施方案中，依赖性细小病毒可以是腺相关病毒。60.在一些实施方案中，重组微生物可以是疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是α疱疹病毒、β疱疹病毒或γ疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是α疱疹病毒。在一些实施方案中，α疱疹病毒可以是传染性喉气管炎病毒、马立克病毒、单纯疱疹病毒或水痘病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是β疱疹病毒。在一些实施方案中，β疱疹病毒可以是巨细胞病毒、鼠巨细胞病毒、长鼻动物病毒或玫瑰疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是γ疱疹病毒。在一些实施方案中，γ疱疹病毒可以是淋巴潜隐病毒、玛卡病毒、马疱疹病毒或猴病毒。61.在一些实施方案中，重组微生物可以是弹状病毒。在一些实施方案中，弹状病毒可以是curiovirus、细胞质弹状病毒、dichorhavirus、暂时热病毒、hapavirus、ledantevirus、丽沙病毒、粒外弹状病毒、细胞核弹状病毒、鲈鱼弹状病毒、sigmavirus、sprivivirus、sripuvirus、tibrovirus、tupavirus、叶脉曲张病毒或水疱性病毒。在一些实施方案中，弹状病毒可以是水疱性病毒。在一些实施方案中，水疱性病毒可以是水疱性口炎病毒或marba病毒。62.在一些实施方案中，重组微生物可以是呼肠孤病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒可以是光滑呼肠孤病毒或刺突呼肠孤病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒可以是光滑呼肠孤病毒。在一些实施方案中，光滑呼肠孤病毒可以是甲壳动物呼肠孤病毒、微胞藻呼肠孤病毒、环状病毒、植物呼肠弧病毒、轮状病毒或东南亚十二rna病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒可以是刺突呼肠孤病毒。在一些实施方案中，刺突呼肠孤病毒可以是水产呼肠孤病毒、科罗拉多壁虱热病毒、质型多角体病毒、斐济病毒、正呼肠孤病毒、昆虫非包裹呼肠孤病毒、迪诺维纳病毒、水稻病毒或真菌呼肠孤病毒。63.在一些实施方案中，重组微生物可以是副黏病毒。在一些实施方案中，副黏病毒可以是aquaparamyxovirus、禽副黏病毒、蛇副黏病毒、亨尼巴病毒、麻疹病毒属、呼吸道病毒或腮腺炎病毒。在一些实施方案中，副黏病毒可以是麻疹病毒属。在一些实施方案中，麻疹病毒属可以是麻疹病毒。64.在一些实施方案中，重组微生物可以是正黏病毒。在一些实施方案中，正黏病毒是流感病毒。65.在一些实施方案中，重组微生物是溶瘤的。如本文使用的，术语“溶瘤微生物”是指相对于非癌细胞而言优先在癌细胞中复制、感染或杀伤癌细胞的微生物。在某些非限制性情况下，应理解，溶瘤微生物(例如溶瘤病毒)可以通过双重机制促进抗癌反应，所述双重机制不仅依赖于对肿瘤细胞的选择性杀伤，而且依赖于宿主抗肿瘤免疫反应的刺激。66.在一些实施方案中，重组微生物在癌细胞中复制，并且在非癌细胞中是减毒的或者不复制。在一些实施方案中，重组微生物在癌细胞中复制，并且在非癌细胞中不复制。在一些实施方案中，重组微生物在癌细胞中复制，并且在非癌细胞中是减毒的。在一些实施方案中，重组微生物介导体内多于一种癌细胞的裂解。在一些实施方案中，重组微生物介导体内多于一种癌细胞的裂解，并且在非癌细胞中不复制。在一些实施方案中，重组微生物介导体内多于一种癌细胞的裂解，并且在非癌细胞中是减毒的。67.在一些实施方案中，重组溶瘤微生物可以包括但不限于：(i)在癌细胞中优先自然复制，并且通常由于升高的对固有抗微生物信号传导的敏感性或对致癌信号通路的依赖性而在人类中是非致病性的重组微生物；和(ii)经遗传操作以供使用的重组微生物。68.本文描述的重组微生物的感染性可以使用本领域已知的标准方法来确定。例如，病毒感染性可以使用病毒噬斑测定、荧光聚焦测定(fluorescentfocusassay,ffa)、终点稀释测定(tcid50)、测定病毒rna或dna的水平的qpcr、检测特定病毒蛋白的elisa，以及对病毒颗粒进行计数的透射电子显微术来测量。69.本文描述的重组微生物的复制可以使用本领域已知的标准方法来确定。例如，病毒复制可以使用本领域已知的标准噬斑测定技术来确定。例如，一群细胞可能被病毒感染，并且收集上清液并分析感染后各个时间点时的病毒滴度。这些测定可以用于在非癌细胞(例如，本文描述的)对比癌细胞(例如，本文描述的癌细胞)中建立相对的病毒复制的半定量测量，即复制比率。更大的比率表明病毒在癌细胞中的复制比在非癌细胞中复制更有效。70.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码促炎蛋白或其功能结构域或其片段的外源核酸。在一些实施方案中，促炎蛋白可以是趋化因子或细胞因子。在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码促炎蛋白(例如促炎细胞因子或趋化因子)的受体的外源核酸。71.示例性促炎细胞因子和趋化因子可以包括但不限于肿瘤坏死因子(tnf)(例如tnf‑α、tnf‑β)、tnf超家族分子(例如fasl、cd27l、cd30l、cd40l、ox40l、4‑1bbl、trail、tweak、apo3l)、il‑1(例如il‑1α和il‑1β)、il‑2、干扰素‑γ(ifn‑γ)、ifn‑α/β、il‑6、il‑8、il‑12、il‑15、il‑17、il‑18、il‑21、lif、ccl5、groα、mcp‑1、mip‑1α、mip‑1β、mcsf、gm‑csf、cxcl2、ccl2和rantes。72.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码抗炎蛋白或其功能结构域或其片段的外源核酸。在一些实施方案中，抗炎蛋白可以是趋化因子或细胞因子。在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码抗炎蛋白(例如抗炎细胞因子或趋化因子)的受体的外源核酸。示例性抗炎细胞因子和趋化因子可以包括但不限于il‑4、il‑6、il‑10、il‑11、il‑13和tgfβ。73.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码细胞因子受体的外源核酸，该细胞因子受体的关联细胞因子可以在肿瘤微环境中表达(例如，il15‑r可以具有在肿瘤微环境中表达的关联细胞因子il15)。在一些实施方案中，重组微生物可以表达选定的趋化因子受体并且可以全身递送，所述选定的趋化因子受体的关联趋化因子可能在肿瘤上表达(例如，cxcr4可以具有在肿瘤上表达的关联趋化因子cxcl12；ccr2可以具有在肿瘤上表达的靶ccl2)。本文描述的趋化因子受体的非限制性实例可以包括但不限于cxc趋化因子受体、cc趋化因子受体、cx3c趋化因子受体和xc趋化因子受体，对应于它们所结合的4个不同的趋化因子亚家族。本公开内容的非限制性实施方案提供了可以包含编码趋化因子受体的外源核酸的重组微生物。在一些实施方案中，趋化因子受体是cxc趋化因子受体、cc趋化因子受体、cx3c趋化因子受体、xc趋化因子受体或它们的任何组合。在一些实施方案中，趋化因子受体可以是cxcr1、cxcr2、cxcr2、cxcr3、cxcr4、cxcr5、cxcr6、cxcr7、ccr1、ccr2、ccr3、ccr4、ccr5、ccr6、ccr7、cx3cr1、xcr1或它们的任何组合。74.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码趋化因子受体为嵌合蛋白的外源核酸。在一些实施方案中，其细胞外结构域的至少一部分可以来自促进重组微生物肿瘤靶向递送的趋化因子受体，并且其细胞内结构域的至少一部分来自促进肿瘤特异性复制、抑制免疫抑制活性或传递一些其他有益效果的趋化因子受体，或者反之亦然。例如，在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码具有ccr5的细胞内gtp酶结构域以及cxcr4或ccr2的细胞外趋化因子结合结构域的蛋白的核酸。在一些实施方案中，通过使具有不同功能的结构域组合，实现了重组微生物的治疗效能的进一步改善。75.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码至少一种趋化因子受体的一种或更多种外源核酸。在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码两种或更多种不同趋化因子受体的外源核酸，其可以由重组微生物同时表达。可由本文描述的重组微生物同时表达的示例性趋化因子受体包括cxcr4和ccr2。在表达多于一种趋化因子受体的重组微生物中，就重组微生物的治疗应用而言，可以获得针对肿瘤细胞的组合或协同效应。76.在一些实施方案中，与不包含修饰的在其他方面相同的重组微生物相比，重组微生物的修饰可以导致重组微生物的肿瘤靶向全身递送的效力的至少约1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、7.5x105倍、106倍、2.5x106倍、5x106倍、7.5x106倍、107倍、2.5x107倍、5x107倍、7.5x107倍、108倍、2.5x108倍、5x108倍、7.5x108倍、109倍、2.5x109倍、5x109倍、7.5x109倍、1010倍或更多倍增加。77.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码趋化因子受体的外源核酸，并且通过重组微生物强制表达趋化因子受体导致针对受感染肿瘤的加强免疫反应。感染肿瘤后，重组微生物可以在肿瘤细胞中复制，并且导致趋化因子受体在肿瘤细胞表面上的表达。这些膜受体可以作为诱饵受体(decoyreceptors)发挥功能，结合和隔离肿瘤内的免疫抑制趋化因子。因此，肿瘤中的免疫抑制微环境可以被改变，导致与不包含编码趋化因子受体的核酸的在其他方面相同的微生物相比，重组微生物的免疫治疗活性增强。在一些实施方案中，免疫治疗活性的增加为至少约1.1倍、1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、106倍或更高的倍数增加。不受限制地，增加的免疫治疗活性可以通过肿瘤中增加的b细胞累积、增加的对肿瘤相关免疫原的t细胞反应或两者来反映。b细胞累积可以例如通过定量肿瘤中的b细胞来测量，并且t细胞免疫活性可以通过例如在elispot测定、elisa、共培养测定、流式细胞术或它们的任何组合中的干扰素‑γ(干扰素‑gamma)分泌来测量。78.在一些实施方案中，重组微生物包含编码趋化因子受体的外源核酸，并且与不包含编码趋化因子受体的核酸的在其他方面相同的微生物相比，通过重组体强制表达趋化因子受体导致微生物在肿瘤细胞中的复制增加。在某些实施方案中，重组微生物包含表达ccr2的外源核酸，其增加了重组微生物的肿瘤特异性复制。在一些实施方案中，重组微生物包含表达ccr5的外源核酸，其增加了微生物的肿瘤特异性复制。在一些实施方案中，肿瘤特异性复制的增加为至少约1.1倍、1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、106倍或更高的倍数增加。用于测量肿瘤中的病毒递送和扩散的增加的示例性方法包括但不限于基于荧光或生物发光的报告物基因表达成像、用于检测微生物基因组(例如，病毒基因组)的肿瘤浓度的定量pcr，或噬斑形成单位的噬斑确定，或微生物蛋白(例如，病毒蛋白)的免疫组织化学。79.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码降解肿瘤ecm的蛋白的外源核酸。降解ecm的示例性蛋白可以包括但不限于膜相关蛋白。在一些实施方案中，膜相关蛋白可以包含糖基磷脂酰肌醇(gpi)锚。80.透明质酸酶是催化透明质酸(ha)降解的酶家族。在人类中至少鉴定出五种功能性透明质酸酶：hyal1、hyal2、hyal3、hyal4和hyal5(也称为ph‑20或spam1)，其中ph‑20是唯一已知在相对中性的ph具有功能的透明质酸酶。在本公开内容的一些实施方案中，将透明质酸酶与其他肿瘤靶向治疗剂(诸如转基因，在本文中也称为外源核酸)进行组合，可以至少通过减少ecm和增强治疗剂在肿瘤内部以及在肿瘤之间的转运来促进重组微生物的治疗效果。81.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码能够降解透明质酸的膜相关蛋白诸如透明质酸酶的外源核酸。本文使用的术语“透明质酸酶”是指催化肿瘤中ha降解的任何酶或其片段，包括但不限于ph20及其来自其他物种的同源物，以及具有类似酶功能的其他工程化的/设计蛋白。透明质酸酶包括透明质酸降解酶类。透明质酸酶包括细菌透明质酸酶(ec4.2.2.1或ec4.2.99.1)，来自水蛭、其他寄生虫和甲壳类动物的透明质酸酶(ec3.2.1.36)和哺乳动物型透明质酸酶(ec3.2.1.35)。透明质酸酶可以是任何非人类来源的，包括但不限于鼠、犬、猫、兔、禽、牛、羊、猪、马、鱼、蛙、细菌，和任何来自水蛭、其他寄生虫和甲壳类动物的透明质酸酶。典型的非人类透明质酸酶可以包括，来自牛、黄夹克胡蜂(yellowjacketwasp)、蜜蜂、白脸大黄蜂(white‑facehornet)、造纸胡蜂(paperwasp)、小鼠、猪、大鼠、兔、绵羊、黑猩猩、恒河猴(rhesusmonkey)、猩猩、食蟹猴、豚鼠、节杆菌的种(arthrobactersp.)(菌株fb24)、噬菌蛭弧菌(bdellovibriobacteriovorus)、痤疮丙酸杆菌(propionibacteriumacnes)、无乳链球菌(streptococcusagalactiae)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)；菌株mrsa252、肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)、化脓性链球菌(streptococcuspyogenes)、猪链球菌(streptococcussuis)、费氏弧菌(vibriofischeri)的透明质酸酶，以及streptomyceshyaluronolyticus透明质酸酶，其对透明质酸具有特异性且不裂解软骨素或硫酸软骨素。82.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码分泌的透明质酸酶的外源核酸。在一些实例中，分泌的透明质酸酶是微生物来源的，诸如来自金黄色葡萄球菌的hysa，lin，来自囊舌虫(saccoglossuskowalevskii)的sko，rv。在一些实施方案中，外源核酸hysa可以包含对应于genbank序列登录号u21221.1的基因组序列(seqidno:1)。在一些实施方案中，外源核酸hysa编码蛋白hysa，其包含seqidno:2(对应于uniprot登录号uniprotkb‑q59801(hysa_staa8))中列出的氨基酸序列。在一些实施方案中，分泌的透明质酸酶(诸如hysa)的表达增强了本文描述的重组微生物的复制、扩散(spread)、治疗活性(例如，癌细胞杀伤潜力)。83.此外，在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码透明质酸酶和基质金属蛋白酶两者的一种或更多种外源核酸。总的来说，基质金属蛋白酶能够降解所有种类的ecm蛋白。实例可以包括但不限于，mmp1、mmp2、mmp3、mmp7、mmp8、mmp9、mmp10、mmp11、mmp12、mmp13、mmp14、mmp15、mmp17、mmp18、mmp19、mmp20、mmp21、mmp23a、mmp23b、mmp24、mmp25、mmp26、mmp27和mmp28。84.在一些实施方案中，与不包含编码降解肿瘤ecm的蛋白的核酸的在其他方面相同的微生物相比，包含编码降解肿瘤ecm的蛋白的核酸的重组微生物增加了微生物在肿瘤内以及在肿瘤间的扩散。在一些实施方案中，这样的增加是至少约1.1倍、1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、106倍或者甚至更高的倍数。用于测量微生物扩散增加的示例性方法可以包括但不限于基于荧光或生物发光的报告物基因表达成像、用于检测微生物基因组(例如，病毒基因组)的肿瘤浓度的定量pcr，或噬斑形成单位的噬斑确定，或微生物蛋白(例如，病毒蛋白)的免疫组织化学。85.在一些实施方案中，重组微生物不包含编码本文描述的肿瘤蛋白的外源核酸。86.在一些实施方案中，肿瘤蛋白可以包括但不限于间皮素(mesothelin)、bcma、her2、gd2、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd123、cd38、cd44、cd70、cd274、cd45、cd123、cd138、cd171、ror1、egfr、epha2、fbp、fap、cea、egp2、egp40、tag72、psma、psa、pap、hsp70‑2、m‑csf、lage‑la、p53、nkg2d配体、b7‑h6、il‑13rα2、il‑11rα、muc1、muc16、ca9、gd3、hmw‑maa、cd171、lewisy、g250/caix、hla‑aimagea1、hla‑a2ny‑eso‑1、psc1、pcta‑1、mage、elf2m、igf‑i、igf‑ii、igf‑i受体、htert、wt1、muc1、lmp2、hpv16、hpv18、rgl4、melana、mart、ml‑iap、afp、bcr、abl、cyp1b1、plac1、boris、ny‑br‑1、rgs5、sart3、epha2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3、5t4、8h9、ανβ6整合蛋白、b7‑h3、b7‑h6、caix、ca9、cspg4、egp2、egp40、epcam、erbb3、erbb4、erbb3/4、fap、far、fbp、kdr、mcsp、mucl、mucl6、ncam、prame、ror1、cd44v7/8、8h9、ncam、vegf‑r、tag72、rage‑1、mn‑caix、ru1、ru2(as)、胚胎achr、tem1、tem8、pax5、oy‑tes1、lck、hmwmaa、akap‑4、ssx2、xage1、tie2、pdgfr‑β、激肽释放酶4、pbf、prame、hsdl1、ca125、tadg‑12、muc16、甘露聚糖‑mic‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑hn‑1、lage‑1、mage‑a4、sp17、ssx4、tag1、tag2、enah、乳腺珠蛋白‑a、ny‑br‑1、bage‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑kn‑1、lage1、mage1a、magea2、mucink、trag3、c‑myc、细胞周期蛋白b1、p62、dkk1、ru2as、k‑ras、me1、nfyc、steap1、fgf5、ru2as、hsp70‑2、artc1、b‑raf、β‑连环蛋白、cdc27、cdk4、cdk12、cdkn2a、clpp、csnk1a1、fn1、gas7、gpnmb、haus3、ldlr‑岩藻糖基转移酶、mart2、matn、mum1、mum2、mum3、neo‑pap、肌球蛋白、ppp1r3b、prdx5、ptprk、rbaf600、sirt2、snrpd1、磷酸丙糖异构酶、oa1、rab38、trp1、trp2、melan‑a、bage1、gage1、gage2、gage8、gage3、gage4、gage5、gage6、gage7、gntvf、ly6k、trag3、casp8、sage、dek‑can、eftud2、flt3‑itd、细胞周期蛋白a1、fndc3b、mageag、g250、hepsin、肠羧酸酯酶、pbf、casp5、coa1、ogt、os9、calca、mdm2、α辅肌动蛋白4、延伸因子2、fos‑相关抗原1、legumain、精子蛋白17、碳酸酐酶ix、叶酸受体‑α、中性粒细胞弹性蛋白酶、肝配蛋白b2、胶质瘤相关抗原、β‑人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、甲状腺球蛋白、端粒酶逆转录酶、肠羧酸酯酶、prostein、存活蛋白(survivin)，和它们的任何功能部分。87.在一些实施方案中，重组微生物不包含编码以下人类蛋白或其抗原中的一种或更多种的一种或更多种外源核酸：间皮素、bcma、her2、gd2、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd123、cd38、cd44、cd70、cd274、cd45、cd123、cd138、cd171、ror1、egfr、epha2、fbp、fap、cea、egp2、egp40、tag72、psma、psa、pap、hsp70‑2、m‑csf、lage‑la、p53、nkg2d配体、b7‑h6、il‑13rα2、il‑11rα、muc1、muc16、ca9、gd3、hmw‑maa、cd171、lewisy、g250/caix、hla‑aimagea1、hla‑a2ny‑eso‑1、psc1、pcta‑1、mage、elf2m、igf‑i、igf‑ii、igf‑i受体、htert、wt1、muc1、lmp2、hpv16、hpv18、rgl4、melana、mart、ml‑iap、afp、bcr、abl、cyp1b1、plac1、boris、ny‑br‑1、rgs5、sart3、epha2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3、5t4、8h9、ανβ6整合蛋白、b7‑h3、b7‑h6、caix、ca9、cspg4、egp2、egp40、epcam、erbb3、erbb4、erbb3/4、fap、far、fbp、kdr、mcsp、mucl、mucl6、ncam、prame、ror1、cd44v7/8、8h9、ncam、vegf‑r、tag72、rage‑1、mn‑caix、ru1、ru2(as)、胚胎achr、tem1、tem8、pax5、oy‑tes1、lck、hmwmaa、akap‑4、ssx2、xage1、tie2、pdgfr‑β、激肽释放酶4、pbf、prame、hsdl1、ca125、tadg‑12、muc16、甘露聚糖‑mic‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑hn‑1、lage‑1、mage‑a4、sp17、ssx4、tag1、tag2、enah、乳腺珠蛋白‑a、ny‑br‑1、bage‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑kn‑1、lage1、mage1a、magea2、mucink、trag3、c‑myc、细胞周期蛋白b1、p62、dkk1、ru2as、k‑ras、me1、nfyc、steap1、fgf5、ru2as、hsp70‑2、artc1、b‑raf、β连环蛋白、cdc27、cdk4、cdk12、cdkn2a、clpp、csnk1a1、fn1、gas7、gpnmb、haus3、ldlr‑岩藻糖基转移酶、mart2、matn、mum1、mum2、mum3、neo‑pap、肌球蛋白、ppp1r3b、prdx5、ptprk、rbaf600、sirt2、snrpd1、磷酸丙糖异构酶、oa1、rab38、trp1、trp2、melan‑a、bage1、gage1、gage2、gage8、gage3、gage4、gage5、gage6、gage7、gntvf、ly6k、trag3、casp8、sage、dek‑can、eftud2、flt3‑itd、细胞周期蛋白a1、fndc3b、mageag、g250、hepsin、肠羧酸酯酶、pbf、casp5、coa1、ogt、os9、calca、mdm2、α辅肌动蛋白4、延伸因子2、fos‑相关抗原1、legumain、精子蛋白17、碳酸酐酶ix、叶酸受体‑α、中性粒细胞弹性蛋白酶、肝配蛋白b2、胶质瘤相关抗原、β‑人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、甲状腺球蛋白、端粒酶逆转录酶、肠羧酸酯酶、prostein和存活蛋白。88.本文描述的重组微生物可以通过技术人员已知的标准分子生物学和微生物学技术来产生。例如，本文描述的重组病毒可以在合适的宿主细胞中繁殖，例如在hela细胞、293细胞或vero细胞中繁殖，从宿主细胞中分离并储存在促进病毒稳定性和完整性的条件下，使得随时间的感染性损失最小化。在一些实施方案中，本文描述的重组病毒可以使用细胞堆(cellstacks)、滚瓶或灌注生物反应器在宿主细胞中繁殖。在一些实例中，用于纯化重组溶瘤病毒的下游方法可以包括过滤(例如深度过滤(depthfiltration)、切向流过滤或它们的组合)、超速离心或色谱捕获。在一些实施方案中，重组病毒可以通过例如冷冻或干燥来储存，诸如通过冻干来储存。在一些实施方案中，在施用之前，储存的重组病毒可以被重构(如果是干燥储存)，并且在药学上可接受的载体中稀释以进行施用。89.iii.治疗癌症的方法90.本文提供的方法包括治疗受试者中的癌症的方法。术语“癌症”和“肿瘤”在本文中可互换使用，其中如本文所用的术语“癌症”是指过度增生的状况。通过本文包含的组合物和方法治疗的癌症可以包括实体癌症或液体癌症。通过本文描述的方法治疗的癌症包括但不限于黑色素瘤、肝细胞癌、乳腺癌、肺癌、腹膜癌、前列腺癌(prostatecancer)、膀胱癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、肾癌、肾腺癌、胰腺癌(pancreaticcancer)、上皮癌、胃癌、结肠癌、十二指肠癌、胰腺腺癌(pancreaticadenocarcinoma)、间皮瘤、多形性胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、多发性骨髓瘤、前列腺上皮癌(prostatecarcinoma)、肝细胞癌、胆管肉瘤、胰腺腺癌、头颈鳞状细胞癌、结肠直肠癌、肠型胃腺癌、颈鳞状细胞癌、骨肉瘤、上皮性卵巢癌、急性淋巴母细胞性淋巴瘤、骨髓增生性肿瘤，以及肉瘤。91.通过本公开内容的方法治疗的癌细胞包括来自以下的细胞：膀胱、血液、骨、骨髓、脑、乳腺、结肠、食管、胃肠道、牙龈、头、肾、肝、肺、鼻咽、颈、卵巢、前列腺、皮肤、胃、睾丸、舌或子宫。此外，癌症具体地可能是以下组织学类型，尽管它不限于这些：赘生物，恶性；癌；未分化癌；巨细胞和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛基质癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；胃泌素瘤，恶性；胆管癌；肝细胞癌；混合性肝细胞癌和胆管癌；小梁腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉中的腺癌；腺癌，家族性结肠息肉病；实体癌；类癌瘤，恶性；细支气管肺泡腺癌(branchiolo‑alveolaradenocarcinoma)；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸性细胞癌；嗜酸性腺癌(oxyphilicadenocarcinoma)；嗜碱性细胞癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡状腺癌；乳头状和滤泡状腺癌；无包膜的硬化性癌(nonencapsulatingsclerosingcarcinoma)；肾上腺皮质癌；子宫内膜样癌(endometroidcarcinoma)；皮肤附属物癌(skinappendagecarcinoma)；大汗腺腺癌；皮脂腺癌；耵聍腺癌；黏液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；黏液性囊腺癌；黏液腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；佩吉特病，乳腺；腺泡细胞癌；腺鳞癌；具有鳞状化生的腺癌；胸腺瘤，恶性；卵巢间质瘤，恶性；卵泡膜细胞瘤，恶性；颗粒细胞瘤，恶性；性腺母细胞瘤，恶性；支持细胞癌；间质细胞瘤，恶性；脂质细胞瘤，恶性；副神经节瘤，恶性；乳腺外副神经节瘤，恶性；嗜铬细胞瘤；血管球肉瘤(glomangiosarcoma)；恶性黑色素瘤；无黑色素性黑色素瘤；浅表扩散性黑色素瘤；巨大色素痣中的恶性黑色素瘤；上皮样细胞黑色素瘤；蓝痣，恶性；肉瘤；纤维肉瘤；纤维组织细胞瘤，恶性；黏液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；腺泡状横纹肌肉瘤；间质肉瘤；混合瘤，恶性；mullerian混合瘤；肾母细胞瘤；肝母细胞癌；癌肉瘤；间叶瘤，恶性；brenner瘤，恶性；叶状肿瘤，恶性；滑膜肉瘤；间皮瘤，恶性；无性细胞瘤；胚胎性癌；畸胎瘤，恶性；卵巢甲状腺肿，恶性；绒毛膜癌；中肾瘤(mesonephroma)，恶性；血管肉瘤；血管内皮瘤，恶性；卡波西肉瘤；血管外皮瘤，恶性；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；近皮质骨肉瘤；软骨肉瘤；软骨母细胞瘤，恶性；间叶性软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤因肉瘤；牙源性肿瘤，恶性；成釉细胞牙肉瘤；成釉细胞瘤，恶性；成釉细胞纤维肉瘤；松果体瘤，恶性；脊索瘤；胶质瘤，恶性；室管膜瘤；星形细胞瘤；原浆性星形细胞瘤(protoplasmicastrocytoma)；纤维性星形细胞瘤(fibrillaryastrocytoma)；星形母细胞瘤；胶质母细胞瘤；少突胶质细胞瘤；少突神经胶质母细胞瘤；原始神经外胚叶瘤；小脑肉瘤；神经节神经母细胞瘤；神经母细胞瘤；视网膜母细胞瘤；嗅神经源性肿瘤；脑膜瘤，恶性；神经纤维肉瘤；神经鞘瘤，恶性；颗粒细胞瘤，恶性；恶性淋巴瘤；霍奇金病(hodgkin’sdisease)；霍奇金(hodgkin’s)；类肉芽肿；恶性淋巴瘤，小淋巴细胞性；恶性淋巴瘤，大细胞，弥漫性；恶性淋巴瘤，滤泡状；蕈样肉芽肿病；其他特殊的非霍奇金淋巴瘤；恶性组织细胞增生症；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增生性小肠病；白血病；淋巴性白血病；浆细胞白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞白血病；髓系白血病；嗜碱性粒细胞白血病(basophilicleukemia)；嗜酸性粒细胞白血病(eosinophilicleukemia)；单核细胞白血病；肥大细胞白血病；巨核母细胞白血病(megakaryoblasticleukemia)；髓系肉瘤和毛细胞白血病。在一些情况下，使用本文提供的方法治疗为转移性的实体癌。在一些情况下，诸如对于肿瘤内递送治疗剂的目的不可及或难及(inaccessibleordifficulttoaccess)的实体癌，使用本文描述的方法进行治疗。在一些实例中，可以使用本文描述的方法治疗与游离脂肪酸的表达增加相关的癌症。92.本文提供的方法包括抑制或预防任何类型的原发性癌症的局部侵袭或转移或者局部侵袭和转移两者的方法。例如，原发性癌症可以是黑色素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺癌、肝癌、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、牙龈癌、舌癌、白血病、神经母细胞瘤、头癌、颈癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、骨癌、睾丸癌、卵巢癌、间皮瘤、颈癌、胃肠癌、淋巴瘤、脑癌、结肠癌或膀胱癌。在一些实施方案中，原发性癌症是肺癌，例如非小细胞肺癌。93.本文提供的方法包括预防癌症的方法和治疗癌前(pre‑cancers)或癌前期细胞(premalignantcells)，包括化生、发育异常和增生的方法。本文提供的方法还包括抑制非期望但良性的细胞，诸如鳞状化生、发育异常、良性前列腺增生细胞、增生性病变等的方法。在一些实施方案中，通过本文提供的方法停止、破坏或延迟向癌症或更严重形式的癌症的进展。94.在一些实施方案中，癌症的治疗可以通过以下中的一种或更多种来检测：受试者中肿瘤体积的减小、受试者或来自受试者的样品中的一种或更多种肿瘤标志物的表达水平的降低，或受试者中的肿瘤部位的数量的减少。评价人类中实体瘤的体积和转移的方法是本领域已知的。这些可以包括，例如，正电子发射断层(pet)扫描、磁共振成像(mri)、超声、ct血管造影术和x射线。肿瘤蛋白可以在体内或来自受试者的离体样品中检测。在一些实施方案中，来自受试者的样品可以是血液、组织、尿液、骨髓、肿瘤活组织检查或唾液样品。肿瘤蛋白可以通过技术人员已知的标准测定来检测，所述标准测定包括但不限于例如标准免疫测定，诸如elisa、流式细胞术、免疫组织化学和ria。95.iv.增强免疫反应的方法96.本文提供的方法包括在受试者中体内诱导或增强免疫反应的方法。在一些实施方案中，诱导或增强的免疫反应针对从一种或更多种癌细胞释放的一种或更多种癌症相关抗原，所述癌细胞被本文描述的重组微生物在体内裂解。97.在一些实施方案中，免疫反应可以是细胞介导的反应或体液反应。在一些实施方案中，免疫反应可以通过测定以下的增强来检测：b细胞增殖、cd3 t细胞增殖、cd4 t细胞增殖、cd8 t细胞增殖或它们的任何组合。在一些实施方案中，免疫反应可以通过测定以下的产生的增强来检测：il‑2、ifn‑γ、il‑1、il‑4、il‑5、il‑6、il‑13、il‑17、il‑21、il‑22、tnfα、csf、tgfβ、颗粒酶等。在一些实施方案中，细胞因子释放可以使用elisa、流式细胞术、蛋白印迹或它们的任何组合来定量。在一些实施方案中，免疫反应可以通过以下的增强来检测：抗原呈递细胞增殖、功能或它们的任何组合。在一些实施方案中，免疫反应可以通过以26:119‑130；carine等人(2003)j.immunol.171:6466‑6477；penna等人(2002)j.immunol.69:6673‑6676；alferink等人(2003)j.exp.med.197:585‑599)。包括toll样受体(tlr)的小鼠固有免疫反应是用于人类固有免疫反应的模型，如所公开的(参见，例如，janssens和beyaert(2003)clinicalmicrob.revs.16:637‑646)。小鼠中性粒细胞是用于人类中性粒细胞的公认模型(参见，例如，kobayashi等人(2003)proc.natl.acad.sci.usa100:10948‑10953；torres等人(2004)72:2131‑2139；sibelius等人(1999)infectionimmunity67:1125‑1130；tvinnereim等人(2004)j.immunol.173:1994‑2002)。鼠对李斯特氏菌的免疫反应是人类对李斯特菌反应的公认模型(参见，例如，kolb‑maurer等人(2000)infectionimmunity68:3680‑3688；brzoza等人(2004)j.immunol.173:2641‑2651)。100.在一些实施方案中，免疫反应可以通过以下中的一种或更多种来测量：细胞内细胞因子染色(ics)、elispot、增殖测定、细胞毒性t细胞测定，包括铬释放或等效的测定，和基因表达分析(使用任何数量的基于聚合酶链反应(pcr)或rt‑pcr的试验，如本文描述的)，以及用于测量免疫反应的任何其他合适的测定。在一些情况下，细胞产物或单采血液成分术产物(apheresisproducts)的样品可以冷冻保存用于细胞表型和功能的回顾性分析。101.v.施用102.本文描述的方法包括以初免‑加强方案施用本文描述的至少两种重组微生物(例如，重组病毒)。初免‑加强方案是技术人员和本领域已知的。初免‑加强方案的特征通常在于施用第一次初免施用和一次或更多次随后的加强施用。103.在一些实施方案中，初免‑加强方案可以是异源的。本文描述的异源初免‑加强方案可以包括使用不同的手段来进行初免和加强免疫反应。本文描述的异源初免‑加强方案可以包括施用第一重组微生物(初免)和随后施用第二重组微生物(加强)，其中第一和第二重组微生物是不同的。104.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是病毒，并且第二(加强)重组微生物可以是病毒，其中第一(初免)和第二(加强)病毒是不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)病毒可以是血清学上不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)病毒可以被分类在不同的分类学上的科中。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)病毒可以被分类在不同的分类学上的物种中。在一些实施方案中，第一(初免)重组病毒可以是本文描述的病毒，并且第二(加强)重组病毒可以是本文描述的不同病毒。105.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是细菌，并且第二(加强)重组微生物可以是细菌，其中第一(初免)和第二(加强)细菌是不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)细菌可以是血清学上不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)细菌可以被分类在不同的分类学上的科中。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)细菌可以被分类在不同的分类学上的物种中。在一些实施方案中，第一(初免)重组细菌可以是本文描述的细菌，并且第二(加强)重组细菌可以是本文描述的不同的细菌。106.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是寄生虫，并且第二(加强)重组微生物可以是寄生虫，其中第一(初免)和第二(加强)寄生虫是不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)寄生虫可以是血清学上不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)寄生虫可以被分类在不同的分类学上的科中。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)寄生虫可以被分类在不同的分类学上的物种中。在一些实施方案中，第一(初免)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫，并且第二(加强)重组寄生虫可以是本文描述的不同寄生虫。107.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是病毒，并且第二(加强)重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第一(初免)重组病毒可以是本文描述的病毒，并且第二(加强)重组细菌可以是本文描述的细菌。在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是细菌，并且第二(加强)重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，第一(初免)重组细菌可以是本文描述的细菌，并且第二(加强)重组病毒可以是本文描述的病毒。108.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是病毒，并且第二(加强)重组微生物可以是寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组病毒可以是本文描述的病毒，并且第二(加强)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是寄生虫，并且第二(加强)重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，第一(初免)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫，并且第二(加强)重组病毒可以是本文描述的病毒。109.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是细菌，并且第二(加强)重组微生物可以是寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组细菌可以是本文描述的细菌，并且第二(加强)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是寄生虫，并且第二(加强)重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第一(初免)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫，并且第二(加强)重组细菌可以是本文描述的细菌。110.在一些实施方案中，初免‑加强方案可以包括施用单一初免重组微生物和一种或更多种(例如，2种、3种、4种、5种或更多种)随后的加强重组微生物。在一些实施方案中，异源初免‑加强方案可以包括施用单一初免重组微生物和两种或更多种(例如，3种、4种、5种或更多种)随后的加强重组微生物，其中两种或更多种随后的加强重组微生物彼此不同。在一些实施方案中，异源初免‑加强方案可以包括施用单一初免重组微生物和两种或更多种(例如，3种、4种、5种或更多种)随后的加强重组微生物，其中两种随后的加强重组微生物彼此相同。111.在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以几天、几周或几个月的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用在施用初免施用后以1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更多天的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周或更多周的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更多个月的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以间隔的任何组合施用(例如，1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更多天，1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周或更多周，或1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更多个月)。112.在一些实施方案中，第一次加强可以在初免施用的1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周内施用。在一些实施方案中，第二次加强可以在第一次加强施用后的1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周内施用。113.在实施方案中，一次或更多次加强施用可以经约1周至约2周、约2周至约3周、约3周至约4周、约4周至约5周、约6周至约7周、约7周至约8周、约8周至约9周、约9周至约10周、约10周至约11周、约11周至约12周、约12周至约24周、约24周至约48周、约48周或约52周或更长的时间段施用。114.初免施用和加强施用的时机可以由技术人员决定。一次或多于一次加强施用的施用可以由技术人员决定。在一些实施方案中，施用的初免剂量可以低于施用的加强剂量。在一些实施方案中，施用的初免剂量可以高于施用的加强剂量。施用的初免剂量和加强剂量可以由技术人员决定。115.在一些实施方案中，初免剂量可以以足以在肿瘤中至少约20％的细胞、肿瘤中至少约30％的细胞、肿瘤中至少约40％的细胞、肿瘤中至少约50％的细胞、肿瘤中至少约60％的细胞、肿瘤中至少约70％的细胞、肿瘤中至少约80％的细胞或肿瘤中至少约90％的细胞中诱导溶瘤的量施用。在一些实施方案中，初免剂量可以指经1小时、2小时、5小时、10小时、15小时、20小时或24小时的时间段向受试者或肿瘤施用的量。116.在一些实施方案中，加强剂量可以以足以在肿瘤中至少约20％的细胞、肿瘤中至少约30％的细胞、肿瘤中至少约40％的细胞、肿瘤中至少约50％的细胞、肿瘤中至少约60％的细胞、肿瘤中至少约70％的细胞、肿瘤中至少约80％的细胞或肿瘤中至少约90％的细胞中诱导溶瘤的量施用。在一些实施方案中，加强剂量可以指经1小时、2小时、5小时、10小时、15小时、20小时或24小时的时间段向受试者或肿瘤施用的量。117.在一些实施方案中，可以向受试者施用一剂本文描述的第一(初免)重组微生物和一剂本文描述的第二(加强)重组微生物。重组微生物的初免剂量和加强剂量的量可以由技术人员决定。118.在一些实施方案中，一剂第一(初免)重组微生物是营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌菌株，并且一剂第二(加强)重组微生物是痘苗病毒(wr.tk‑)。在一些实施方案中，一剂第一(初免)重组微生物来自痘苗病毒，并且一剂第二(加强)重组微生物来自单纯疱疹病毒毒株或水疱性口炎病毒(vsv)中的至少一种。在一方面，单纯疱疹病毒可以是修饰的。修饰可以包括添加、插入、截短、突变和它们的任何组合。在一方面，参与神经毒性(neurovirulence)、发病机理或复制的基因可以是修饰的。在一些实施方案中，hsv修饰可以是γ34.5或icp6缺失中的任何一种。119.在一些实施方案中，初免重组微生物可以是重组病毒，并且加强重组微生物可以是不同的重组病毒，并且施用的初免和/或加强的量可以是约103至1012个感染性病毒颗粒或噬斑形成单位(pfu)，或约105pfu至1010pfu，或约105pfu至108pfu，或约108pfu至1010pfu。在一些实施方案中，向受试者施用的本公开内容的重组病毒的量可以是约103至1012个病毒颗粒或噬斑形成单位(pfu)，或约105至1010pfu，或约105至108pfu，或约108至1010pfu。在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103pfu/剂量至约104pfu/剂量，约104pfu/剂量至约105pfu/剂量，约105pfu/剂量至约106pfu/剂量，约107pfu/剂量至约108pfu/剂量，约109pfu/剂量至约1010pfu/剂量，约1010pfu/剂量至约1011pfu/剂量，约1011pfu/剂量至约1012pfu/剂量，约1012pfu/剂量至约1013pfu/剂量，约1013pfu/剂量至约1014pfu/剂量，或约1014pfu/剂量至约1015pfu/剂量。在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约2×103pfu/剂量、3×103pfu/剂量、4×103pfu/剂量、5×103pfu/剂量、6×103pfu/剂量、7×103pfu/剂量、8×103pfu/剂量、9×103pfu/剂量、约104pfu/剂量、约2×104pfu/剂量、约3×104pfu/剂量、约4×104pfu/剂量、约5×104pfu/剂量、约6×104pfu/剂量、约7×104pfu/剂量、约8×104pfu/剂量、约9×104pfu/剂量、约105pfu/剂量、2×105pfu/剂量、3×105pfu/剂量、4×105pfu/剂量、5×105pfu/剂量、6×105pfu/剂量、7×105pfu/剂量、8×105pfu/剂量、9×105pfu/剂量、约106pfu/剂量、约2×106pfu/剂量、约3×106pfu/剂量、约4×106pfu/剂量、约5×106pfu/剂量、约6×106pfu/剂量、约7×106pfu/剂量、约8×106pfu/剂量、约9×106pfu/剂量、约107pfu/剂量、约2×107pfu/剂量、约3×107pfu/剂量、约4×107pfu/剂量、约5×107pfu/剂量、约6×107pfu/剂量、约7×107pfu/剂量、约8×107pfu/剂量、约9×107pfu/剂量、约108pfu/剂量、约2×108pfu/剂量、约3×108pfu/剂量、约4×108pfu/剂量、约5×108pfu/剂量、约6×108pfu/剂量、约7×108pfu/剂量、约8×108pfu/剂量、约9×108pfu/剂量、约109pfu/剂量、约2×109pfu/剂量、约3×109pfu/剂量、约4×109pfu/剂量、约5×109pfu/剂量、约6×109pfu/剂量、约7×109pfu/剂量、约8×109pfu/剂量、约9×109pfu/剂量、约1010pfu/剂量、约2×1010pfu/剂量、约3×1010pfu/剂量、约4×1010pfu/剂量、约5×1010pfu/剂量、约6×1010pfu/剂量、约7×1010pfu/剂量、约8×1010pfu/剂量、约9×1010pfu/剂量、约1010pfu/剂量、约2×1010pfu/剂量、约3×1010pfu/剂量、约4×1010pfu/剂量、约5×1010pfu/剂量、约6×1010pfu/剂量、约7×1010pfu/剂量、约8×1010pfu/剂量、约9×1010pfu/剂量、约1011pfu/剂量、约2×1011pfu/剂量、约3×1011pfu/剂量、约4×1011pfu/剂量、约5×1011pfu/剂量、约6×1011pfu/剂量、约7×1011pfu/剂量、约8×1011pfu/剂量、约9×1011pfu/剂量或约1012pfu/剂量、约1012pfu/剂量至约1013pfu/剂量、约1013pfu/剂量至约1014pfu/剂量或约1014pfu/剂量至约1015pfu/剂量。120.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103个病毒颗粒/剂量至约104个病毒颗粒/剂量、约104个病毒颗粒/剂量至约105个病毒颗粒/剂量、约105个病毒颗粒/剂量至约106个病毒颗粒/剂量、约107个病毒颗粒/剂量至约108个病毒颗粒/剂量、约109个病毒颗粒/剂量至约1010个病毒颗粒/剂量、约1010个病毒颗粒/剂量至约1011个病毒颗粒/剂量、约1011个病毒颗粒/剂量至约1012个病毒颗粒/剂量、约1012个病毒颗粒/剂量至约1013个病毒颗粒/剂量、约1013个病毒颗粒/剂量至约1014个病毒颗粒/剂量，或约1014个病毒颗粒/剂量至约1015个病毒颗粒/剂量。121.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103pfu/kg至约104pfu/kg、约104pfu/kg至约105pfu/kg、约105pfu/kg至约106pfu/kg、约107pfu/kg至约108pfu/kg、约109pfu/kg至约1010pfu/kg、约1010pfu/kg至约1011pfu/kg、约1011pfu/kg至约1012pfu/kg、约1012pfu/kg至约1013pfu/kg、约1013pfu/kg至约1014pfu/kg，或约1014pfu/kg至约1015pfu/kg。在一些实施方案中，本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如溶瘤痘苗病毒，以包括以下的剂量施用：约2×103pfu/kg、3×103pfu/kg、4×103pfu/kg、5×103pfu/kg、6×103pfu/kg、7×103pfu/kg、8×103pfu/kg、9×103pfu/kg、约104pfu/kg、约2×104pfu/kg、约3×104pfu/kg、约4×104pfu/kg、约5×104pfu/kg、约6×104pfu/kg、约7×104pfu/kg、约8×104pfu/kg、约9×104pfu/kg、约105pfu/kg、2×105pfu/kg、3×105pfu/kg、4×105pfu/kg、5×105pfu/kg、6×105pfu/kg、7×105pfu/kg、8×105pfu/kg、9×105pfu/kg、约106pfu/kg、约2×106pfu/kg、约3×106pfu/kg、约4×106pfu/kg、约5×106pfu/kg、约6×106pfu/kg、约7×106pfu/kg、约8×106pfu/kg、约9×106pfu/kg、约107pfu/kg、约2×107pfu/kg、约3×107pfu/kg、约4×107pfu/kg、约5×107pfu/kg、约6×107pfu/kg、约7×107pfu/kg、约8×107pfu/kg、约9×107pfu/kg、约108pfu/kg、约2×108pfu/kg、约3×108pfu/kg、约4×108pfu/kg、约5×108pfu/kg、约6×108pfu/kg、约7×108pfu/kg、约8×108pfu/kg、约9×108pfu/kg、约109pfu/kg、约2×109pfu/kg、约3×109pfu/kg、约4×109pfu/kg、约5×109pfu/kg、约6×109pfu/kg、约7×109pfu/kg、约8×109pfu/kg、约9×109pfu/kg、约1010pfu/kg、约2×1010pfu/kg、约3×1010pfu/kg、约4×1010pfu/kg、约5×1010pfu/kg、约6×1010pfu/kg、约7×1010pfu/kg、约8×1010pfu/kg、约9×1010pfu/kg、约1010pfu/kg、约2×1010pfu/kg、约3×1010pfu/kg、约4×1010pfu/kg、约5×1010pfu/kg、约6×1010pfu/kg、约7×1010pfu/kg、约8×1010pfu/kg、约9×1010pfu/kg、约1011pfu/kg、约2×1011pfu/kg、约3×1011pfu/kg、约4×1011pfu/kg、约5×1011pfu/kg、约6×1011pfu/kg、约7×1011pfu/kg、约8×1011pfu/kg、约9×1011pfu/kg或约1012pfu/kg、约1012pfu/kg至约1013pfu/kg、约1013pfu/kg至约1014pfu/kg或约1014pfu/kg至约1015pfu/kg。在一些实施方案中，本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如溶瘤痘苗病毒，以包括5×109pfu/kg的剂量施用。在一些实施方案中，本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如溶瘤痘苗病毒，以包括最高5×109pfu/kg的剂量施用。122.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103个病毒颗粒/kg至约104个病毒颗粒/kg、约104个病毒颗粒/kg至约105个病毒颗粒/kg、约105个病毒颗粒/kg至约106个病毒颗粒/kg、约107个病毒颗粒/kg至约108个病毒颗粒/kg、约109个病毒颗粒/kg至约1010个病毒颗粒/kg、约1010个病毒颗粒/kg至约1011个病毒颗粒/kg、约1011个病毒颗粒/kg至约1012个病毒颗粒/kg、约1012个病毒颗粒/kg至约1013个病毒颗粒/kg、约1013个病毒颗粒/kg至约1014个病毒颗粒/kg，或约1014个病毒颗粒/kg至约1015个病毒颗粒/kg。123.在一些实施方案中，本文描述的重组病毒的液体剂型可以包含以下病毒剂量：约103pfu/ml至约104pfu/ml、约104pfu/ml至约105pfu/ml、约105pfu/ml至约106pfu/ml、约107pfu/ml至约108pfu/ml、约109pfu/ml至约1010pfu/ml、约1010pfu/ml至约1011pfu/ml、约1011pfu/ml至约1012pfu/ml、约1012pfu/ml至约1013pfu/ml、约1013pfu/ml至约1014pfu/ml或约1014pfu/ml至约1015pfu/ml。124.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约2×103pfu/ml、3×103pfu/ml、4×103pfu/ml、5×103pfu/ml、6×103pfu/ml、7×103pfu/ml、8×103pfu/ml、9×103pfu/ml、约104pfu/ml、约2×104pfu/ml、约3×104pfu/ml、约4×104pfu/ml、约5×104pfu/ml、约6×104pfu/ml、约7×104pfu/ml、约8×104pfu/ml、约9×104pfu/ml、约105pfu/ml、2×105pfu/ml、3×105pfu/ml、4×105pfu/ml、5×105pfu/ml、6×105pfu/ml、7×105pfu/ml、8×105pfu/ml、9×105pfu/ml、约106pfu/ml、约2×106pfu/ml、约3×106pfu/ml、约4×106pfu/ml、约5×106pfu/ml、约6×106pfu/ml、约7×106pfu/ml、约8×106pfu/ml、约9×106pfu/ml、约107pfu/ml、约2×107pfu/ml、约3×107pfu/ml、约4×107pfu/ml、约5×107pfu/ml、约6×107pfu/ml、约7×107pfu/ml、约8×107pfu/ml、约9×107pfu/ml、约108pfu/ml、约2×108pfu/ml、约3×108pfu/ml、约4×108pfu/ml、约5×108pfu/ml、约6×108pfu/ml、约7×108pfu/ml、约8×108pfu/ml、约9×108pfu/ml、约109pfu/ml、约2×109pfu/ml、约3×109pfu/ml、约4×109pfu/ml、约5×109pfu/ml、约6×109pfu/ml、约7×109pfu/ml、约8×109pfu/ml、约9×109pfu/ml、约1010pfu/ml、约2×1010pfu/ml、约3×1010pfu/ml、约4×1010pfu/ml、约5×1010pfu/ml、约6×1010pfu/ml、约7×1010pfu/ml、约8×1010pfu/ml、约9×1010pfu/ml、约1010pfu/ml、约2×1010pfu/ml、约3×1010pfu/ml、约4×1010pfu/ml、约5×1010pfu/ml、约6×1010pfu/ml、约7×1010pfu/ml、约8×1010pfu/ml、约9×1010pfu/ml、约1010pfu/ml、约2×1010pfu/ml、约3×1010pfu/ml、约4×1010pfu/ml、约5×1010pfu/ml、约6×1010pfu/ml、约7×1010pfu/ml、约8×1010pfu/ml、约9×1010pfu/ml、约1011pfu/ml、约2×1011pfu/ml、约3×1011pfu/ml、约4×1011pfu/ml、约5×1011pfu/ml、约6×1011pfu/ml、约7×1011pfu/ml、约8×1011pfu/ml、约9×1011pfu/ml或约1012pfu/ml、约1012pfu/ml至约1013pfu/ml、约1013pfu/ml至约1014pfu/ml，或约1014pfu/ml至约1015pfu/ml。125.在一些实施方案中，重组病毒通过注射施用。在一些实施方案中，剂量可以包括约103个病毒颗粒/注射、104个病毒颗粒/注射、105个病毒颗粒/注射、106个病毒颗粒/注射、107个病毒颗粒/注射、108个病毒颗粒/注射、109个病毒颗粒/注射、1010个病毒颗粒/注射、1011个病毒颗粒/注射、1012个病毒颗粒/注射、2x1012个病毒颗粒/注射、1013个病毒颗粒/注射、1014个病毒颗粒/注射或1015个病毒颗粒/注射。在一些实施方案中，剂量可以包括约103个感染性病毒颗粒/注射、104个感染性病毒颗粒/注射、105个感染性病毒颗粒/注射、106个感染性病毒颗粒/注射、107个感染性病毒颗粒/注射、108个感染性病毒颗粒/注射、109个感染性病毒颗粒/注射、1010个感染性病毒颗粒/注射、1011个感染性病毒颗粒/注射、1012个感染性病毒颗粒/注射、2x1012个感染性病毒颗粒/注射、1013个感染性病毒颗粒/注射、1014个感染性病毒颗粒/注射或1015个感染性病毒颗粒/注射。在另外的实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以以下剂量施用：约103组织培养抑制剂量50％(tissuecultureinhibitordose50％,tcid50)/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、3x108tcid50/kg、4x108tcid50/kg、5x108tcid50/kg、3x109tcid50/kg、4x109tcid50/kg、5x109tcid50/kg、3x1010tcid50/kg、4x1010tcid50/kg或4x1010tcid50/kg。126.施用途径可以因肿瘤的位置和性质而异。在某些实施方案中，施用途径为经皮(transdermal)、胃肠外、肌肉内、皮下、局部(例如，在肿瘤附近，特别是肿瘤的血管或邻近血管)、经皮(percutaneous)、鞘内、鼻内、气管内、腹膜内、动脉内、膀胱内、肿瘤内、吸入、灌注、通过灌洗或口服。127.在一些实施方案中，药物组合物的可注射剂量可以以团注(bolusinjection)或以缓慢输注施用。在一些实施方案中，药物组合物可以从植入受试者中的来源向受试者施用。在某些实施方案中，药物组合物的施用可以通过经选定的时间段连续输注来进行。在一些实施方案中，药物组合物可以以治疗有效量经约15分钟、约30分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约60分钟、约75分钟、约90分钟、约100分钟或约120分钟或更长的时间段通过输注来施用。在一些实施方案中，药物组合物可以以液体剂量施用，其中施用的总体积为约1ml至约5ml、约5ml至10ml、约15ml至约20ml、约25ml至约30ml、约30ml至约50ml、约50ml至约100ml、约100ml至150ml、约150ml至约200ml、约200ml至约250ml、约250ml至约300ml、约300ml至约350ml、约350ml至约400ml、约400ml至约450ml、约450ml至500ml、约500ml至750ml，或约750ml至1000ml。128.在一些实施方案中，方法可以包括施用如本文公开的初免‑加强方案，随后施用其他重组微生物，诸如第三重组微生物、第四重组微生物或它们的任何组合。在一些实施方案中，方法可以包括施用如本文公开的初免‑加强方案，随后是一种或更多种其他疗法，以及之前是一种或更多种其他疗法，或与一种或更多种其他疗法进行组合。其他疗法的实例可以包括但不限于化疗、放射、用另外的病毒进行的溶瘤病毒疗法、用免疫调节蛋白的治疗、抗癌剂或它们的任何组合。其他疗法可以相对于初免、加强施用或初免‑加强施用并行或依次施用。在一些实施方案中，方法可以包括施用如本文公开的初免、加强或初免‑加强方案，随后是一种或更多种抗癌剂或癌症疗法，之前是一种或更多种抗癌剂或癌症疗法，或与一种或更多种抗癌剂或癌症疗法进行组合。抗癌剂可以包括但不限于化疗剂、放疗剂、细胞因子、免疫检查点抑制剂、抗血管生成剂、凋亡诱导剂、抗癌抗体和抗细胞周期蛋白依赖性激酶剂。在一些实施方案中，癌症疗法包括化疗、生物疗法、放射疗法、免疫疗法、激素疗法、抗血管疗法、冷冻疗法、毒素疗法、手术或它们的组合。129.在某些实施方案中，方法可以包括施用与一种或更多种免疫调节剂组合的本文描述的初免‑加强方案。免疫调节剂可以包括能够抑制与肿瘤或癌症相关的抗重组微生物免疫(例如，抗病毒免疫)的任何化合物、分子或物质。在一些实施方案中，免疫调节剂能够抑制对重组微生物(例如，重组病毒)的固有免疫或适应性免疫。免疫调节剂的非限制性实例包括抗cd33抗体或其可变区，抗cd11b抗体或其可变区，cox2抑制剂(例如，塞来昔布(celecoxib))，细胞因子(诸如il‑12、gm‑csf、il‑2、ifn3和ifnγ)，和趋化因子(诸如mip‑1、mcp‑1和il‑8)。在一些实施方案中，免疫调节剂可以包括免疫检查点调节剂，诸如但不限于抗ctla4、抗pd‑1以及抗pd‑l1和tlr激动剂(例如，聚i:c)。在一些实例中，免疫调节剂可以包括免疫检查点抑制剂，诸如pd‑1的拮抗剂(例如，结合pd‑1的拮抗剂抗体)、pd‑l1的拮抗剂(例如，结合pd‑l1的拮抗剂抗体)、ctla‑4的拮抗剂(例如，结合ctla‑4的拮抗剂抗体)、a2ar的拮抗剂(例如，结合a2ar的拮抗剂抗体)、b7‑h3的拮抗剂(例如，结合b7‑h3的拮抗剂抗体)、b7‑h4的拮抗剂(例如，结合b7‑h4的拮抗剂抗体)、btla的拮抗剂(例如，结合btla的拮抗剂抗体)、ido的拮抗剂(例如，结合ido的拮抗剂抗体)、kir的拮抗剂(例如，结合kir的拮抗剂抗体)、lag3的拮抗剂(例如，结合lag3的拮抗剂抗体)、tim‑3的拮抗剂(例如，结合tim‑3的拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂可以包含结合以下的蛋白：pd‑1、pd‑l1、ctla‑4、a2ar、b7‑h3、b7‑h4、btla、ido、kir、lag3、tim‑3、vista、cd160、tigit、psgl‑1或它们的任何组合。130.在一些实施方案中，其他疗法可以包括施用免疫检查点调节剂。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是tgn1412。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是nktr‑214。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi0562。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi6469。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi6383。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是jtx‑2011。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是keyturda(派姆单抗(pembrolizumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是opdivo(纳武单抗(nivolumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是yervoy(伊匹单抗(ipilimumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是曲美木单抗(tremelimumab)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是tecentriq(阿特珠单抗(atezolizumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是mga271。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是indoximod。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是epacadostat。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是lirilumab。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是bms‑986016。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是mpdl3280a。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是阿维单抗(avelumab)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是德瓦鲁单抗(durvalumab)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi4736。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi4737。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是trx518。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是mk‑4166。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是乌瑞芦单抗(urelumab)(bms‑663513)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是pf‑05082566(pf‑2566)。131.在一些实施方案中，其他疗法可以是放射。示例性剂量包括但不限于5,000rad(50gy)至100,000rad(1000gy)，或50,000rad(500gy)，或所陈述范围内的其他适当剂量。在一些实施方案中，放射剂量可以是约30gy至60gy、约40gy至约50gy、约40gy至48gy，或约44gy，或所陈述范围内的其他适当剂量，其中剂量例如通过上文描述的剂量学研究的手段来确定。本文使用的“gy”可以指等于100rad的特定吸收放射剂量的单位。gy是“gray”的缩写。132.在一些实施方案中，其他疗法可以是化疗。示例性化疗剂可以包括但不限于烷化剂(例如，氮芥衍生物、乙烯亚胺、烷基磺酸盐、肼和三嗪、亚硝基脲(nitrosureas)和金属盐)、植物生物碱(例如，长春花生物碱、紫杉烷类、鬼臼毒素和喜树碱类似物)、抗肿瘤抗生素(例如，蒽环类、色霉素类等)、抗代谢物(例如，叶酸拮抗剂、嘧啶拮抗剂、嘌呤拮抗剂和腺苷脱氨酶抑制剂)、拓扑异构酶i抑制剂、拓扑异构酶ii抑制剂和其他抗赘生物剂(miscellaneousantineoplastics)(例如，核糖核苷酸还原酶抑制剂、肾上腺皮质类固醇抑制剂、酶、抗微管剂和类视黄醇)。示例性化疗剂可以包括但不限于阿那曲唑比卡鲁胺硫酸博莱霉素白消安白消安注射液卡培他滨n4‑戊氧基羰基‑5‑脱氧‑5‑氟胞苷、卡铂卡莫司汀苯丁酸氮芥顺铂克拉屈滨环磷酰胺(或)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷(cytosinearabinoside)阿糖胞苷脂质体注射液达卡巴嗪更生霉素(放线菌素d，cosmegan)、盐酸柔红霉素枸橼酸柔红霉素脂质体注射液地塞米松、多西他赛盐酸阿霉素依托泊苷磷酸氟达拉滨5‑氟尿嘧啶氟尿嘧啶氟他胺tezacitibine、吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、羟基脲伊达比星异环磷酰胺伊立替康l‑天冬酰胺酶亚叶酸钙、美法仑6‑巯基嘌呤甲氨蝶呤米托蒽醌吉妥单抗(mylotarg)、紫杉醇phoenix(yttrium90/mx‑dtpa)、喷司他丁、伴随卡莫司汀植入的聚苯丙生20枸橼酸他莫昔芬替尼泊苷6‑硫代鸟嘌呤、塞替派(thiotepa)、替拉扎明注射用盐酸拓扑替康长春碱长春新碱和长春瑞滨依鲁替尼(ibrutinib)、idelalisib和本妥昔单抗(brentuximabvedotin)。133.示例性烷化剂可以包括但不限于氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)：尿嘧啶氮芥(uracilmustard)(aminouracilmustard)(aminouracilmustard)(aminouraciluracilnitrogennitrogen)、氮芥(chlormethine)环磷酰胺(revimmunetm)、异环磷酰胺美法仑苯丁酸氮芥哌泊溴烷三亚乙基蜜胺三亚乙基硫代磷酰胺、替莫唑胺塞替派白消安卡莫司汀洛莫司汀链脲佐菌素和达卡巴嗪另外的示例性烷化剂包括但不限于奥沙利铂替莫唑胺(和)；更生霉素(又名放线菌素‑d，)；美法仑(又名l‑pam、l‑溶肉瘤素(l‑sarcolysin)和苯丙氨酸氮芥，)；六甲蜜胺(又名六甲三聚氰胺(hmm)，)；卡莫司汀苯达莫司汀白消安(和)；卡铂洛莫司汀(又名ccnu，)；顺铂(又名cddp，和‑aq)；苯丁酸氮芥环磷酰胺(和)；达卡巴嗪(又名dtic、dic和咪唑甲酰胺，)；六甲蜜胺(又名六甲三聚氰胺(hmm)，)；异环磷酰胺prednumustine、普鲁卡因二氯甲基二乙胺(又名氮芥(nitrogenmustard)、氮芥(mustine)和盐酸甲氯乙胺(mechloroethaminehydrochloride)，)；链脲佐菌素塞替派(又名硫代磷酰胺(thiophosphoamide)、tespa和tspa，)；环磷酰胺和苯达莫司汀hcl134.示例性蒽环类包括但不限于，例如，阿霉素(和)；博莱霉素柔红霉素(盐酸柔红霉素、道诺霉素(daunomycin)和盐酸柔红霉素，)；柔红霉素脂质体(柔红霉素柠檬酸脂质体，)；米托蒽醌(dhad，)；表阿霉素(ellencetm)；伊达比星(idamycin)；丝裂霉素c格尔德霉素；除莠霉素；拉维霉素(ravidomycin)和去乙酰基拉维霉素。135.示例性长春花生物碱可以包括但不限于酒石酸长春瑞滨长春新碱和长春地辛长春碱(也称为硫酸长春碱、长春花碱(vincaleukoblastine)和vlb，和)和长春瑞滨136.示例性蛋白酶体抑制剂可以包括但不限于硼替佐米卡非佐米(carfilzomib)(px‑171‑007、(s)‑4‑甲基‑n‑((s)‑1‑(((s)‑4‑甲基‑1‑((r)‑2‑甲基环氧乙烷‑2‑基)‑1‑氧代戊‑2‑基)氨基)‑1‑氧代‑3‑苯基丙‑2‑基)‑2‑((s)‑2‑(2‑吗啉代乙酰氨基)‑4‑苯基丁酰胺)‑戊酰胺)；marizomib(npi‑0052)；枸橼酸艾沙佐米(ixazomibcitrate)(mln‑9708)；delanzomib(cep‑18770)；和o‑甲基‑n‑[(2‑甲基‑5‑噻唑基)羰基]‑l‑丝氨酸‑o‑甲基‑n‑[(1s)‑2‑[(2r)‑2‑甲基‑2‑环氧乙烷基]‑2‑氧代‑1‑(苯基甲基)乙基]‑l‑丝氨酰胺(onx‑0912)。[0137]在各种实施方案中，其他疗法可以以液体剂型、固体剂型、栓剂、可吸入剂型、鼻内剂型，以脂质体制剂、包含纳米颗粒的剂型、包含微粒的剂型、多聚剂型或它们的任何组合施用。在某些实施方案中，其他疗法可以经约1周至约2周、约2周至约3周、约3周至约4周、约4周至约5周、约6周至约7周、约7周至约8周、约8周至约9周、约9周至约10周、约10周至约11周，约11周至约12周、约12周至约24周、约24周至约48周、约48周或约52周或更长的时间段施用。在某些情况下，其他疗法的施用频率可以是每天一次、每天两次、每周一次、每三周一次、每四周一次(或每月一次)、每八周一次(或每两个月一次)、每十二周一次(或每三个月一次)，或每二十四周一次(每六个月一次)。[0138]在一些实施方案中，其他疗法可以包括疫苗、集落刺激剂、干扰素、白细胞介素、病毒、抗血管生成剂、抗原、共刺激剂、免疫原性剂、免疫调节剂或免疫治疗剂。[0139]vi.药物组合物[0140]本文描述的组合物包括含有一种或更多种本文描述重组微生物的药物组合物。在一些实施方案中，本文的药物组合物可以是单位剂量形式。药物组合物可以制备成在甘油、液体聚乙二醇以及其任何组合中，在油中，在固体剂型中的溶液、分散体；制备成可吸入剂型、鼻内剂型、脂质体制剂、包含纳米颗粒的剂型、包含微粒的剂型、多聚剂型或它们的任何组合。在一些实施方案中，药物组合物包含增溶剂，诸如无菌水、tris缓冲剂。[0141]在一些实施方案中，药物组合物包含赋形剂。示例性赋形剂在本领域中是已知的，例如，如美国药物协会(1986)的handbookofpharmaceuticalexcipients中所描述的。赋形剂的实例包括但不限于缓冲剂、防腐剂、稳定剂、粘合剂、压缩剂、润滑剂、螯合剂、分散增强剂、崩解剂、调味剂、甜味剂和着色剂。[0142]在一些实施方案中，赋形剂可以是缓冲剂。缓冲剂的非限制性实例可以包括柠檬酸钠、碳酸镁、碳酸氢镁、碳酸钙和碳酸氢钙。作为缓冲剂，碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化镁、乳酸镁、葡糖酸镁、氢氧化铝、柠檬酸钠、酒石酸钠、乙酸钠、碳酸钠、多磷酸钠、多磷酸钾、焦磷酸钠、焦磷酸钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸三钠、磷酸三钾、偏磷酸钾、氧化镁、氢氧化镁、碳酸镁、硅酸镁、醋酸钙、甘油磷酸钙、氯化钙、氢氧化钙和其他钙盐或它们的组合可以用于药物制剂中。[0143]在一些实施方案中，赋形剂可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例可以包括抗氧化剂，诸如α‑生育酚和抗坏血酸盐，以及抗微生物剂，诸如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇和苯酚。抗氧化剂还可以包括但不限于edta、柠檬酸、抗坏血酸、丁基羟基甲苯(bht)、丁基羟基茴香醚(bha)、亚硫酸钠、对氨基苯甲酸、谷胱甘肽、没食子酸丙酯、半胱氨酸、甲硫氨酸、乙醇和n‑乙酰半胱氨酸。在一些情况下，防腐剂包括井冈霉素a、tl‑3、原钒酸钠、氟化钠、n‑a‑甲苯磺酰‑苯丙氨酸‑氯甲基酮(n‑a‑tosyl‑phe‑chloromethylketone)、n‑a‑甲苯磺酰‑赖氨酸‑氯甲基酮(n‑a‑tosyl‑lys‑chloromethylketone)、抑肽酶、苯甲基磺酰氟、二异丙基氟磷酸、激酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、颗粒酶抑制剂、细胞黏附抑制剂、细胞分裂抑制剂、细胞周期抑制剂、脂质信号传导抑制剂、蛋白酶抑制剂、还原剂、烷化剂、抗微生物剂、氧化酶抑制剂或其他抑制剂。[0144]在一些实施方案中，药物组合物可以包含作为赋形剂的粘合剂。粘合剂的非限制性实例可以包括淀粉、预糊化淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚丙烯酰胺、聚乙烯基噁唑烷酮(polyvinyloxoazolidone)、聚乙烯醇、c12‑c18脂肪酸醇、聚乙二醇、多元醇、糖、寡糖和它们的组合。药物制剂中使用的粘合剂选自淀粉，诸如马铃薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉；糖，诸如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖、麦芽糖糊精；天然和合成树胶；明胶；纤维素衍生物，诸如微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)；聚乙二醇(peg)；蜡；碳酸钙；磷酸钙；醇，诸如山梨醇、木糖醇、甘露醇，和水，或它们的组合。[0145]在一些实施方案中，药物组合物可以包含润滑剂作为赋形剂。润滑剂的非限制性实例可以包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、氢化植物油(hydrogenatedvegetableoils)、氢化植物油(sterotex)、聚氧乙烯单硬脂酸酯、滑石、聚乙二醇、苯甲酸钠、月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁和轻质矿物油。用于药物制剂的润滑剂选自金属硬脂酸盐(诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸铝)、脂肪酸酯(诸如硬脂酰富马酸钠)、脂肪酸(诸如硬脂酸)、脂肪醇、甘油山嵛酸酯、矿物油、石蜡、氢化植物油、亮氨酸、聚乙二醇(peg)、金属月桂基硫酸盐(诸如月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁)、氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠和滑石，或它们的组合。[0146]在一些实施方案中，药物制剂可以包含分散增强剂作为赋形剂。分散剂的非限制性实例可以包括淀粉、藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、瓜尔胶、高岭土、膨润土、纯化的木质纤维素、羟基乙酸淀粉钠(sodiumstarchglycolate)、isoamorphous硅酸盐和微晶纤维素作为高hlb乳化剂表面活性剂。[0147]在一些实施方案中，药物组合物可以包含作为赋形剂的崩解剂。在一些实施方案中，崩解剂可以是非泡腾崩解剂。非泡腾崩解剂的非限制性实例可以包括淀粉诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、它们的预糊化和改性淀粉，甜味剂，粘土，诸如膨润土，微晶纤维素，藻酸盐，羟基乙酸淀粉钠，树胶诸如琼脂、瓜尔胶、刺槐豆胶、刺梧桐胶、果胶和黄芪胶。在一些实施方案中，崩解剂可以是泡腾崩解剂。合适的泡腾崩解剂的非限制性实例可以包括碳酸氢钠与柠檬酸的组合，以及碳酸氢钠与酒石酸的组合。[0148]在一些实施方案中，药物组合物可以包含螯合剂。在一些实施方案中，螯合剂可以是杀真菌螯合剂。实例可以包括但不限于：乙二胺‑n,n,n’,n’‑四乙酸(edta)；edta的二钠、三钠、四钠、二钾、三钾、二锂和二铵盐；edta的钡、钙、钴、铜、镝、铕、铁、铟、镧、镁、锰、镍、钐、锶或锌螯合物；反式‑1,2‑二氨基环己烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸一水合物；n,n‑二(2‑羟乙基)甘氨酸；1,3‑二氨基‑2‑羟基丙烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸；1,3‑二氨基丙烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸；乙二胺‑n,n’‑二乙酸；乙二胺‑n,n’‑二丙酸二盐酸盐；乙二胺‑n,n’‑二(亚甲基膦酸)半水合物；n‑(2‑羟乙基)乙二胺‑n,n’,n’‑三乙酸；乙二胺‑n,n,n’,n’‑四(亚甲基膦酸)；o,o’‑二(2‑氨基乙基)乙二醇‑n,n,n’,n’‑四乙酸；n,n‑二(2‑羟基苄基)乙二胺‑n,n‑二乙酸；1,6‑六亚甲基二胺‑n,n,n’,n’‑四乙酸；n‑(2‑羟乙基)亚氨基二乙酸；亚氨基二乙酸；1,2‑二氨基丙烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸；次氨基三乙酸；次氨基三丙酸；次氨基三(亚甲基磷酸)的三钠盐；7,19,30‑三氧杂‑1,4,10,13,16,22,27,33‑八氮杂二环[11,11,11]三十五烷六氢溴化物；或三亚乙基四胺‑n,n,n’,n”,n”’,n”’‑六乙酸。[0149]本文还考虑了可以包括本文公开的一种或更多种重组微生物和一种或更多种其他抗微生物剂或抗真菌剂的组合产品，所述抗微生物剂或抗真菌剂例如多烯类诸如两性霉素b、两性霉素b脂质复合物(abcd)、脂质体两性霉素b(l‑amb)和脂质体制霉菌素，唑类和三唑类诸如伏立康唑、氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、pozaconazole等；葡聚糖合成酶抑制剂诸如卡泊芬净、米卡芬净(fk463)和v‑棘白菌素(ly303366)；灰黄霉素；烯丙胺类，诸如特比萘芬；氟胞嘧啶或其他抗真菌剂，包括本文描述的那些。此外，还考虑了将肽与局部抗真菌剂组合，诸如与环吡酮胺、卤苯炔醚(haloprogin)、托萘酯、十一碳烯酸盐、局部制霉菌素、阿莫罗芬、布替萘芬、萘替芬、特比萘芬和其他局部剂组合。在一些实施方案中，药物组合物包含另外的剂。在一些实施方案中，另外的剂可以以治疗有效量存在于药物组合物中。[0150]在一些实施方案中，本文描述的药物组合物可以包含防腐剂，例如以防止微生物生长。在一些实施方案中，药物组合物可以包含防腐剂。在一些实施方案中，药物组合物不包含防腐剂。适合于可注射使用的药物形式包括无菌水性溶液或分散体以及用于临时制备可注射无菌溶液或分散体的无菌粉末。药物组合物可以包含载体，该载体是包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，和/或植物油，或它们的任何组合的溶剂或分散介质。适当的流动性可以例如通过使用包衣诸如卵磷脂，在分散剂的情况下通过维持要求的粒径，以及通过使用表面活性剂来维持。防止微生物作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来产生，所述抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，可优选地包含等渗剂，例如糖或氯化钠。可注射的组合物的延长吸收可以通过使用延迟吸收的剂(例如单硬脂酸铝和明胶)的组合物来产生。[0151]例如，对于以水性溶液的肠胃外施用，如果需要，液体剂型可以被合适地缓冲，并且使液体稀释剂与足够的盐水或葡萄糖等渗。液体剂型特别适用于静脉内、肌肉内、皮下、肿瘤内和腹膜内施用。在这方面，根据本公开内容，可以使用的无菌水性介质是本领域技术人员已知的。例如，一个剂量可以溶解在1ml至20ml的等渗nacl溶液中，并且要么添加到100ml至1000ml的液体(例如碳酸氢钠缓冲盐水)中，要么注射到建议的输注部位。[0152]在某些实施方案中，可注射无菌溶液可以通过将根据本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如本文描述的溶瘤痘苗病毒或包含该病毒的药物组合物以所需的量掺入适当的溶剂(所述溶剂按需要具有上文列举的各种其他成分)中，然后过滤灭菌。通常，通过将各种经灭菌的活性成分掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述无菌媒介物包含碱性分散介质和所需的来自上文列举的那些的其他成分。本文公开的组合物可以以中性或盐的形式配制。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白的游离氨基基团形成的酸加成盐)，并且其是用无机酸诸如例如盐酸或磷酸，或用有机酸诸如乙酸、草酸、酒石酸或扁桃酸等形成的酸加成盐。用游离羧基基团形成的盐还可以来源于无机碱，诸如例如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物；和有机碱，诸如异丙胺、三甲胺、组氨酸或普鲁卡因等。在配制后，药物组合物可以以与剂量制剂相容的方式且以诸如治疗有效的量进行施用。[0153]在某些实施方案中，本公开的药物组合物可以包含有效量的本文公开的经修饰的病毒，与药学上可接受的载体组合。本文所用的“药学上可接受的”包括不干扰活性成分的生物活性的有效性和/或对其所施用的患者无毒的任何载体。合适的药物载体的非限制性实例可以包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液，诸如油/水乳液，各种类型的润湿剂和无菌溶液。药学上相容的载体的另外的非限制性实例包括凝胶、生物可吸收的基质材料、包含经修饰的溶瘤病毒的植入元件或任何其他合适的媒介物、递送或分散工具或材料。这样的载体可以通过常规方法配制，并以有效量向受试者施用。[0154]vii.药盒[0155]本文提供了一种药盒，所述药盒包含本文描述的初免组合物、一种或更多种加强组合物，或者初免组合物和一种或更多种加强组合物。在一些实施方案中，药盒可以包含用于初免施用的重组微生物组合物。在一些实施方案中，药盒可以包含用于一次或更多次加强施用的一种或更多种重组微生物组合物。在一些实施方案中，药盒可以包含用于初免施用的重组微生物组合物和用于一次或更多次加强施用的一种或更多种重组微生物组合物。[0156]在某些实施方案中，药盒可以包括含有用于初免施用的重组微生物组合物的一个或更多个容器。在某些实施方案中，药盒可以包括含有用于加强施用的重组微生物组合物的一个或更多个容器。在某些实施方案中，药盒可以包括含有用于初免施用的重组微生物组合物的一个或多个容器和含有用于一次或更多次加强施用的重组微生物组合物的一个或更多个容器。[0157]在一些实施方案中，药盒包括使用说明、用于向受试者施用重组微生物组合物的装置，或用于向受试者施用另外的剂或化合物的装置。在一些实施方案中，说明书可以包括对以下的描述：经修饰的重组微生物和任选地药盒中包括的其他组分，以及施用方法，包括用于确定受试者的合适状态的方法、用于施用重组微生物的合适剂量和合适施用方法。说明还可以包括在治疗时间持续期间对受试者进行监测的指南。在一些实施方案中，药盒可以包含一种或更多种剂，例如，与本文描述的重组微生物组合物组合施用的抗癌剂、免疫调节剂或它们的任何组合中的至少一种。[0158]在一些实施方案中，药盒包括用于向受试者施用重组微生物组合物的装置。本文提供的药盒中包括用于施用药物和药物组合物的本领域已知的各种装置中的任何一种。例如，但不作为限制，这样的装置包括皮下注射针、静脉内注射针、导管、无针注射装置、吸入器和液体分配器，诸如滴眼器。在某些实施方案中，通过例如静脉内注射、肿瘤内注射、腹膜内注射进行全身递送的重组微生物包含在具有皮下注射针和注射器的药盒中。实施例[0159]以下实施例进一步说明了所述的实施方案，而不限制本公开内容的范围。[0160]实施例1：小鼠肾腺癌肿瘤模型中沙门氏菌属细菌或痘苗病毒的异源初免‑加强方案[0161]如以下使用具有renca肿瘤的balb/c小鼠研究了异源初免加强方案。该方案使用具有tk缺失的肿瘤选择性痘苗病毒毒株以及减毒营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌菌株，通过以次优剂量对小鼠进行肿瘤内注射来给予。用1x105个renca细胞对小鼠进行皮下注射，并且在肿瘤达到50‑100mm3后开始治疗。将小鼠分配到表1所示的四个组中的一个组。[0162]表1：用沙门氏菌或痘苗病毒给药的renca‑肿瘤小鼠的治疗组[0163]组组名初免‑加强方案1对照(媒介物)‑2wr.tk‑痘苗病毒(第1天)3沙门氏菌 tk‑沙门氏菌(第1天)；痘苗病毒(第7天)4tk‑ 沙门氏菌痘苗病毒(第1天)；沙门氏菌(第7天)[0164]如图1所示，与对照和单一剂施用相比，评价了两种初免加强方案的治疗活性。第一组balb/c小鼠为对照组。第二组balb/c小鼠在第一天被注射单一剂痘苗病毒(wr.tk‑)。第三组小鼠在第1天被注射营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌株(初免)并且在第7天被施用痘苗病毒(wr.tk‑)(加强)。第四组小鼠在第1天被注射痘苗病毒(wr.tk‑)(初免)并且在第7天被施用营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌株(加强)。然后在治疗后第14天评价各组的肿瘤体积，并且结果显示在图1中。[0165]图1中示出的结果显示，在沙门氏菌作为初免而给予并且痘苗病毒作为加强而给予的第三组中，治疗活性增强。然而，当以相反的顺序施用相同的重组微生物时，治疗活性降低(如第四组所示)。因此，这些结果表明，增强的治疗活性并不完全是由于加性效应。[0166]实施例2：小鼠renca肿瘤模型中痘苗病毒或单纯疱疹病毒(hsv)或水疱性口炎病毒(vsv)的异源初免‑加强方案[0167]与单一剂施用相比，测试了异源初免加强方案的治疗效果。每组均使用具有renca肿瘤(50‑100mm3)的balb/c小鼠。[0168]用具有tk缺失的肿瘤选择性痘苗病毒毒株(标记为wo0001)、具有γ34.5和icp6基因缺失的单纯疱疹病毒株、水疱性口炎病毒(vsv)mδ51毒株或对照(vfb)对小鼠进行肿瘤内给药。将小鼠分配到表2所示的六个组中的一个组。[0169]表2：用痘苗病毒、单纯疱疹病毒(hsv)或水疱性口炎病毒(vsv)给药的renca‑肿瘤小鼠的治疗组[0170]组组名初免‑加强方案1对照(vfb)‑2wo0001痘苗病毒(第1天)3hsv wo0001痘苗病毒(第1天)；hsv(第7天)4vsv wo0001痘苗病毒(第1天)；vsv(第7天)5仅hsvhsv(第1天)6仅vsvvsv(第一天)[0171]如图2a和图2b所示，与对照和三种单一剂施用相比，评价了两种异源初免加强组合的治疗活性。第一组balb/c小鼠作为对照。第二组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射单一剂痘苗病毒(wr.tk‑)。第三组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射痘苗病毒(wr.tk‑)毒株，并且在第7天以约3×106pfu/小鼠的剂量注射单纯疱疹病毒(γ34.5和icp6缺失)毒株。第四组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射痘苗病毒(wr.tk‑)毒株，并且在第7天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射水疱性口炎病毒(mδ51)毒株。第五组在第1天以约3×106pfu/小鼠的剂量注射单一剂单纯疱疹病毒(γ34.5和icp6缺失)毒株。第六组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射单一剂水疱性口炎病毒(mδ51)毒株。然后在治疗后第18天(并且结果显示在图2a中)和治疗后第21天(并且结果显示在图2b中)对各组的肿瘤体积进行评价(注意，在第21天，肿瘤负荷>1400mm3或先前因肿瘤负荷>1400mm3而被处死的小鼠记录为肿瘤负荷1400mm3)。[0172]图2a和图2b所示的结果展示了协同治疗活性仅在第三组和第四组的初免‑加强方案中观察到，在第三组和第四组中痘苗病毒作为初免而给予并且hsv或vsv毒株作为加强而给予。[0173]表3：序列[0174][0175]当前第1页12当前第1页12
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：的普通技术人员通常理解的相同含义。28.本文使用的章节标题仅用于组织目的，并且不被解释为限制所描述的主题。29.尽管本公开内容的各个特征可以在单个实施方案的上下文中被描述，但是该特征还可以单独地或以任何合适的组合被提供。相反，尽管本公开内容可以为了清楚起见在单独的实施方案的上下文中在本文描述，但是本公开内容还可以在单个实施方案中实现。30.i.某些定义31.以下定义针对的是当前的申请，并不归于任何相关或不相关的案件，例如任何共同拥有的专利或申请。尽管与本文描述的那些相似或等效的任何方法和材料都可用于实践对本公开内容的测试，但本文描述了优选的方法和材料。因此，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并且不意图限制。32.本文使用的术语仅用于描述特定情况的目的，且不意图限制。如本文使用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”也包括复数形式，除非上下文另有清楚地指示。此外，就术语“含有(contains)”、“含有(containing)”、“包括(including)”、“包括(includes)”、“具有(having)”、“具有(has)”、“具有(with)”或其变化形式在详细描述和/或权利要求书中使用的程度而言，这样的术语意图以类似于术语“包含(comprising)”的方式为包含性的。33.术语“约(about)”或“大约(approximately)”意指在如由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围以内，其将部分地取决于值如何被测量或确定，例如，测量系统的局限性。例如，“约(about)”根据给定值中的每次实践，可以意指在1个或多于1个标准偏差内。在本技术和权利要求书中描述特定值的情况下，除非另有说明，术语“约”应被假定为意指特定值的可接受误差范围，诸如由术语“约”修饰的值的±10％。34.术语“个体”、“患者”或“受试者”在本文中可互换使用。这些术语中没有一个要求或限于以医护工作者(例如，医生、注册护士、执业护士、医师助理、护理员或临终关怀工作者)的监督(例如持续性或间歇性)为特征的情况。在一些实施方案中，患者、受试者或个体可以在医护工作者的监督下。术语“受试者”可以指动物，包括但不限于灵长类动物(例如，人类)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠或小鼠。35.本文提到的术语“抑制(inhibiting)”、“减少(reducing)”或“预防(prevention)”或这些术语的任何变体包括任何可测量的减少或完全抑制以达到期望的结果。36.术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”包括减轻或消除病症、疾病或状况；或者与病症、疾病或状况相关的一种或更多种症状；或减轻或根除病症、疾病或状况本身的一种或更多种原因。期望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接病理结果、预防转移、降低疾病进展速度、改善或减轻疾病状态以及缓解或改善预后。37.术语“全身递送”和“全身施用”在本文中可互换使用，是指施用药物、重组微生物或其他物质至循环系统的途径。全身施用可以包括口服施用、胃肠外施用、鼻内施用、舌下施用、直肠施用、透皮施用或它们的任何组合。38.术语“治疗有效量”是指在施用时足以预防或在一定程度上减轻所治疗的病症、疾病或状况的一种或更多种症状的发展的剂(例如本文描述的重组微生物)的量。术语“治疗有效量”还可以指足以引发细胞、组织、系统、动物或人类的研究者、兽医、医学博士或临床医师正在寻找的生物学或医学反应的剂(例如，重组微生物)的量。39.术语“药学上可接受的载体”、“药学上可接受的赋形剂”、“生理学上可接受的载体”或“生理学上可接受的赋形剂”是指药学上可接受的材料、组合物或载体，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。组分在与药物制剂的其他成分相容的意义上为“药学上可接受的”。它也适用于与人类和动物的组织或器官接触使用，没有过度的毒性、刺激、过敏反应、免疫原性或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称。参见，remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第21版；lippincottwilliams&wilkins:philadelphia,pa,2005；handbookofpharmaceuticalexcipients,第5版；rowe等人,编著,thepharmaceuticalpressandtheamericanpharmaceuticalassociation:2005；和handbookofpharmaceuticaladditives,第3版；ash和ash编著,gowerpublishingcompany:2007；pharmaceuticalpreformulationandformulation,gibson编著,crcpressllc:bocaraton,fl,2004)。40.术语“药物组合物”是指本文公开的剂(例如，本文描述的重组微生物)与其他化学组分(诸如稀释剂或载体)的混合物。药物组合物可以有助于向生物体施用化合物。本领域存在施用化合物的多种技术，包括但不限于口服、注射、气雾剂、肠胃外和局部施用。药物组合物也可通过使化合物与无机酸或有机酸，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等反应来获得。41.本文中可互换使用的术语“重组微生物”是指通过实验干预进行遗传修饰的微生物，例如病毒。例如，重组微生物在其基因组中包含一种或更多种突变，包括但不限于缺失、异源核酸的插入、倒位、取代或它们的组合。42.如本文中提到微生物(例如病毒)使用的术语“天然存在的”，表示微生物可以在自然界中找到，即，它可以从自然界中的来源分离出来，并且没有被有意地修饰。43.本文使用的术语“减弱的”可以意指相对于重组微生物感染癌细胞的能力，重组微生物具有降低的感染非癌细胞的能力；相对于重组微生物在癌细胞中复制的能力，重组微生物具有降低的在非癌细胞中复制的能力；相对于在癌细胞中的复制效率，重组微生物具有降低的在非癌细胞中复制的效率；或者相对于裂解癌细胞的能力，重组微生物具有降低的裂解非癌细胞的能力。在一些情况下，癌细胞和非癌细胞可以是相同类型，例如，内皮细胞、上皮细胞。在一些情况下，癌细胞和非癌细胞可以是不同的类型，例如，在一些情况下，癌细胞可以是内皮细胞，并且非癌细胞可以是上皮细胞。44.如本文中提到两种或更多种不同微生物使用的术语“血清学上不同的”表示受试者针对两种或更多种不同微生物产生的抗体之间可能没有交叉反应性或存在降低的交叉反应性。45.本文使用的术语“肿瘤相关细胞”可以指存在于受试者中的实体肿瘤微环境内的非肿瘤细胞。这些细胞可以包括例如成纤维细胞、内皮细胞、基质细胞和免疫细胞。46.本文使用的术语“肿瘤蛋白”可以指在用本文描述的重组微生物感染之前，相对于非肿瘤性的相同类型的细胞的表达水平或所表达的形式，肿瘤细胞以增加的水平或突变的形式(或两者)表达的蛋白。47.ii.重组微生物48.本文描述的重组微生物包括但不限于病毒、细菌和寄生虫。在一些实施方案中，重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，重组微生物可以是寄生虫。49.在一些实施方案中，第一重组微生物可以是病毒，并且第二重组微生物可以是不同的病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物可以是病毒，并且第二重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第一重组微生物可以是病毒，并且第二重组微生物可以是寄生虫。50.在一些实施方案中，第二重组微生物可以是病毒，并且第一重组微生物可以是不同的病毒。在一些实施方案中，第二重组微生物可以是病毒，并且第一重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第二重组微生物可以是病毒，并且第一重组微生物可以是寄生虫。51.在一些实施方案中，重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，重组微生物可以是肠杆菌、李斯特菌科细菌或链球菌科细菌。在一些实施方案中，细菌可以是肠杆菌。在一些实施方案中，肠杆菌可以是沙门氏菌属细菌。在一些实施方案中，沙门氏菌属细菌可以是减毒的鼠伤寒沙门氏菌，诸如营养缺陷型(aroa突变体)。在一些实施方案中，沙门氏菌属细菌可以是邦戈尔沙门氏菌或肠道沙门氏菌。在一些实施方案中，细菌可以是李斯特菌科细菌。在一些实施方案中，李斯特菌科细菌可以是李斯特菌属细菌。在一些实施方案中，李斯特菌属细菌可以是单核细胞增生李斯特菌。在一些实施方案中，细菌可以是链球菌科细菌。在一些实施方案中，链球菌科细菌可以是乳球菌属细菌。在一些实施方案中，乳球菌属细菌可以是l.chungangensis、l.formosensis、富士山乳球菌、格氏乳球菌、l.hircilactis、乳酸乳球菌、l.laudensis、鼻白蚁乳球菌、鱼乳球菌、植物乳球菌、棉子糖乳球菌或台湾乳球菌。52.在一些实施方案中，重组微生物可以是寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫可以是肉孢子虫科寄生虫或锥体虫科寄生虫。在一些实施方案中，寄生虫可以是肉孢子虫科寄生虫。在一些实施方案中，肉孢子虫科寄生虫可以是弓形体属寄生虫。在一些实施方案中，弓形体属寄生虫可以是刚地弓形虫。在一些实施方案中，寄生虫可以是锥体虫科寄生虫。53.在一些实施方案中，锥体虫科寄生虫是利什曼原虫属寄生虫。在一些实施方案中，利什曼原虫属寄生虫可以是埃塞俄比亚利什曼原虫、亚马逊利什曼原虫、阿拉伯利什曼原虫、l.aristedesi、巴西利什曼原虫、恰氏利什曼原虫、哥伦比亚利什曼原虫、l.deanei、杜氏利什曼原虫、豚鼠利什曼原虫、l.forattinii、伽纳姆利什曼原虫、圭亚那利什曼原虫、l.herreri、l.hertigi、婴儿利什曼原虫、l.killicki、蓝氏利什曼原虫、硕大利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫、奈氏利什曼原虫、巴拿马利什曼原虫、秘鲁利什曼原虫、皮凡诺利什曼原虫、肖氏利什曼原虫、蜥蜴利什曼原虫、热带利什曼原虫、都兰利什曼原虫或委内瑞拉利什曼原虫。54.在一些实施方案中，重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，第一重组微生物可以属于病毒科。在一些实施方案中，重组微生物可以是dna病毒。在一些实施方案中，重组微生物可以是rna病毒。55.在一些实施方案中，重组微生物可以是痘病毒、小rna病毒、腺病毒、细小病毒、疱疹病毒、呼肠孤病毒、副黏病毒、弹状病毒、正黏病毒或柯萨奇病毒。56.在一些实施方案中，重组微生物可以是痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒可以是正痘病毒、副痘病毒、亚塔痘病毒、兔痘病毒、软疣痘病毒、乙型昆虫痘病毒、鹿痘病毒、丙型昆虫痘病毒、猪痘病毒、鳄鱼痘病毒、甲型昆虫痘病毒、山羊痘病毒或禽痘病毒。在一些实施方案中，痘病毒可以是正痘病毒。在一些实施方案中，正痘病毒可以是痘苗病毒。在一些实施方案中，痘病毒可以是兔痘病毒。在一些实施方案中，兔痘病毒可以是黏液瘤病毒。57.在一些实施方案中，重组微生物可以是小rna病毒。在一些实施方案中，小rna病毒可以是口蹄疫病毒、aquamavirus、禽肝炎病毒、avisivirus、心病毒、cosavirus、dicipivirus、肠道病毒、马鼻病毒、gallivirus、肝病毒、hunnivirus、嵴病毒、kunsagivirus、megrivirus、mischivirus、mosavirus、oscivirus、副肠孤病毒、pasivirus、passerivirus、rosavirus、sakobuvirus、salivirus、萨佩罗病毒、塞内卡病毒、sicinivirus、捷申病毒或震颤病毒。在一些实施方案中，小rna病毒是肠道病毒。在一些实施方案中，肠道病毒可以是脊髓灰质炎病毒或柯萨奇病毒。在一些实施方案中，小rna病毒可以是心病毒。在一些实施方案中，心病毒可以是门果病毒。58.在一些实施方案中，微生物可以是腺病毒。在一些实施方案中，腺病毒可以是富at腺病毒、禽腺病毒、鱼腺病毒、哺乳动物腺病毒或唾液酸酶腺病毒。59.在一些实施方案中，重组微生物可以是细小病毒。在一些实施方案中，细小病毒可以是阿留申细小病毒、aveparvovirus、博卡细小病毒、chapparvovirus、copiparvovirus、依赖性细小病毒、红细胞细小病毒、原细小病毒或tetraparvovirus。在一些实施方案中，细小病毒可以是依赖性细小病毒。在一些实施方案中，依赖性细小病毒可以是腺相关病毒。60.在一些实施方案中，重组微生物可以是疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是α疱疹病毒、β疱疹病毒或γ疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是α疱疹病毒。在一些实施方案中，α疱疹病毒可以是传染性喉气管炎病毒、马立克病毒、单纯疱疹病毒或水痘病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是β疱疹病毒。在一些实施方案中，β疱疹病毒可以是巨细胞病毒、鼠巨细胞病毒、长鼻动物病毒或玫瑰疱疹病毒。在一些实施方案中，疱疹病毒可以是γ疱疹病毒。在一些实施方案中，γ疱疹病毒可以是淋巴潜隐病毒、玛卡病毒、马疱疹病毒或猴病毒。61.在一些实施方案中，重组微生物可以是弹状病毒。在一些实施方案中，弹状病毒可以是curiovirus、细胞质弹状病毒、dichorhavirus、暂时热病毒、hapavirus、ledantevirus、丽沙病毒、粒外弹状病毒、细胞核弹状病毒、鲈鱼弹状病毒、sigmavirus、sprivivirus、sripuvirus、tibrovirus、tupavirus、叶脉曲张病毒或水疱性病毒。在一些实施方案中，弹状病毒可以是水疱性病毒。在一些实施方案中，水疱性病毒可以是水疱性口炎病毒或marba病毒。62.在一些实施方案中，重组微生物可以是呼肠孤病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒可以是光滑呼肠孤病毒或刺突呼肠孤病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒可以是光滑呼肠孤病毒。在一些实施方案中，光滑呼肠孤病毒可以是甲壳动物呼肠孤病毒、微胞藻呼肠孤病毒、环状病毒、植物呼肠弧病毒、轮状病毒或东南亚十二rna病毒。在一些实施方案中，呼肠孤病毒可以是刺突呼肠孤病毒。在一些实施方案中，刺突呼肠孤病毒可以是水产呼肠孤病毒、科罗拉多壁虱热病毒、质型多角体病毒、斐济病毒、正呼肠孤病毒、昆虫非包裹呼肠孤病毒、迪诺维纳病毒、水稻病毒或真菌呼肠孤病毒。63.在一些实施方案中，重组微生物可以是副黏病毒。在一些实施方案中，副黏病毒可以是aquaparamyxovirus、禽副黏病毒、蛇副黏病毒、亨尼巴病毒、麻疹病毒属、呼吸道病毒或腮腺炎病毒。在一些实施方案中，副黏病毒可以是麻疹病毒属。在一些实施方案中，麻疹病毒属可以是麻疹病毒。64.在一些实施方案中，重组微生物可以是正黏病毒。在一些实施方案中，正黏病毒是流感病毒。65.在一些实施方案中，重组微生物是溶瘤的。如本文使用的，术语“溶瘤微生物”是指相对于非癌细胞而言优先在癌细胞中复制、感染或杀伤癌细胞的微生物。在某些非限制性情况下，应理解，溶瘤微生物(例如溶瘤病毒)可以通过双重机制促进抗癌反应，所述双重机制不仅依赖于对肿瘤细胞的选择性杀伤，而且依赖于宿主抗肿瘤免疫反应的刺激。66.在一些实施方案中，重组微生物在癌细胞中复制，并且在非癌细胞中是减毒的或者不复制。在一些实施方案中，重组微生物在癌细胞中复制，并且在非癌细胞中不复制。在一些实施方案中，重组微生物在癌细胞中复制，并且在非癌细胞中是减毒的。在一些实施方案中，重组微生物介导体内多于一种癌细胞的裂解。在一些实施方案中，重组微生物介导体内多于一种癌细胞的裂解，并且在非癌细胞中不复制。在一些实施方案中，重组微生物介导体内多于一种癌细胞的裂解，并且在非癌细胞中是减毒的。67.在一些实施方案中，重组溶瘤微生物可以包括但不限于：(i)在癌细胞中优先自然复制，并且通常由于升高的对固有抗微生物信号传导的敏感性或对致癌信号通路的依赖性而在人类中是非致病性的重组微生物；和(ii)经遗传操作以供使用的重组微生物。68.本文描述的重组微生物的感染性可以使用本领域已知的标准方法来确定。例如，病毒感染性可以使用病毒噬斑测定、荧光聚焦测定(fluorescentfocusassay,ffa)、终点稀释测定(tcid50)、测定病毒rna或dna的水平的qpcr、检测特定病毒蛋白的elisa，以及对病毒颗粒进行计数的透射电子显微术来测量。69.本文描述的重组微生物的复制可以使用本领域已知的标准方法来确定。例如，病毒复制可以使用本领域已知的标准噬斑测定技术来确定。例如，一群细胞可能被病毒感染，并且收集上清液并分析感染后各个时间点时的病毒滴度。这些测定可以用于在非癌细胞(例如，本文描述的)对比癌细胞(例如，本文描述的癌细胞)中建立相对的病毒复制的半定量测量，即复制比率。更大的比率表明病毒在癌细胞中的复制比在非癌细胞中复制更有效。70.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码促炎蛋白或其功能结构域或其片段的外源核酸。在一些实施方案中，促炎蛋白可以是趋化因子或细胞因子。在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码促炎蛋白(例如促炎细胞因子或趋化因子)的受体的外源核酸。71.示例性促炎细胞因子和趋化因子可以包括但不限于肿瘤坏死因子(tnf)(例如tnf‑α、tnf‑β)、tnf超家族分子(例如fasl、cd27l、cd30l、cd40l、ox40l、4‑1bbl、trail、tweak、apo3l)、il‑1(例如il‑1α和il‑1β)、il‑2、干扰素‑γ(ifn‑γ)、ifn‑α/β、il‑6、il‑8、il‑12、il‑15、il‑17、il‑18、il‑21、lif、ccl5、groα、mcp‑1、mip‑1α、mip‑1β、mcsf、gm‑csf、cxcl2、ccl2和rantes。72.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码抗炎蛋白或其功能结构域或其片段的外源核酸。在一些实施方案中，抗炎蛋白可以是趋化因子或细胞因子。在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码抗炎蛋白(例如抗炎细胞因子或趋化因子)的受体的外源核酸。示例性抗炎细胞因子和趋化因子可以包括但不限于il‑4、il‑6、il‑10、il‑11、il‑13和tgfβ。73.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码细胞因子受体的外源核酸，该细胞因子受体的关联细胞因子可以在肿瘤微环境中表达(例如，il15‑r可以具有在肿瘤微环境中表达的关联细胞因子il15)。在一些实施方案中，重组微生物可以表达选定的趋化因子受体并且可以全身递送，所述选定的趋化因子受体的关联趋化因子可能在肿瘤上表达(例如，cxcr4可以具有在肿瘤上表达的关联趋化因子cxcl12；ccr2可以具有在肿瘤上表达的靶ccl2)。本文描述的趋化因子受体的非限制性实例可以包括但不限于cxc趋化因子受体、cc趋化因子受体、cx3c趋化因子受体和xc趋化因子受体，对应于它们所结合的4个不同的趋化因子亚家族。本公开内容的非限制性实施方案提供了可以包含编码趋化因子受体的外源核酸的重组微生物。在一些实施方案中，趋化因子受体是cxc趋化因子受体、cc趋化因子受体、cx3c趋化因子受体、xc趋化因子受体或它们的任何组合。在一些实施方案中，趋化因子受体可以是cxcr1、cxcr2、cxcr2、cxcr3、cxcr4、cxcr5、cxcr6、cxcr7、ccr1、ccr2、ccr3、ccr4、ccr5、ccr6、ccr7、cx3cr1、xcr1或它们的任何组合。74.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码趋化因子受体为嵌合蛋白的外源核酸。在一些实施方案中，其细胞外结构域的至少一部分可以来自促进重组微生物肿瘤靶向递送的趋化因子受体，并且其细胞内结构域的至少一部分来自促进肿瘤特异性复制、抑制免疫抑制活性或传递一些其他有益效果的趋化因子受体，或者反之亦然。例如，在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码具有ccr5的细胞内gtp酶结构域以及cxcr4或ccr2的细胞外趋化因子结合结构域的蛋白的核酸。在一些实施方案中，通过使具有不同功能的结构域组合，实现了重组微生物的治疗效能的进一步改善。75.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码至少一种趋化因子受体的一种或更多种外源核酸。在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码两种或更多种不同趋化因子受体的外源核酸，其可以由重组微生物同时表达。可由本文描述的重组微生物同时表达的示例性趋化因子受体包括cxcr4和ccr2。在表达多于一种趋化因子受体的重组微生物中，就重组微生物的治疗应用而言，可以获得针对肿瘤细胞的组合或协同效应。76.在一些实施方案中，与不包含修饰的在其他方面相同的重组微生物相比，重组微生物的修饰可以导致重组微生物的肿瘤靶向全身递送的效力的至少约1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、7.5x105倍、106倍、2.5x106倍、5x106倍、7.5x106倍、107倍、2.5x107倍、5x107倍、7.5x107倍、108倍、2.5x108倍、5x108倍、7.5x108倍、109倍、2.5x109倍、5x109倍、7.5x109倍、1010倍或更多倍增加。77.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码趋化因子受体的外源核酸，并且通过重组微生物强制表达趋化因子受体导致针对受感染肿瘤的加强免疫反应。感染肿瘤后，重组微生物可以在肿瘤细胞中复制，并且导致趋化因子受体在肿瘤细胞表面上的表达。这些膜受体可以作为诱饵受体(decoyreceptors)发挥功能，结合和隔离肿瘤内的免疫抑制趋化因子。因此，肿瘤中的免疫抑制微环境可以被改变，导致与不包含编码趋化因子受体的核酸的在其他方面相同的微生物相比，重组微生物的免疫治疗活性增强。在一些实施方案中，免疫治疗活性的增加为至少约1.1倍、1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、106倍或更高的倍数增加。不受限制地，增加的免疫治疗活性可以通过肿瘤中增加的b细胞累积、增加的对肿瘤相关免疫原的t细胞反应或两者来反映。b细胞累积可以例如通过定量肿瘤中的b细胞来测量，并且t细胞免疫活性可以通过例如在elispot测定、elisa、共培养测定、流式细胞术或它们的任何组合中的干扰素‑γ(干扰素‑gamma)分泌来测量。78.在一些实施方案中，重组微生物包含编码趋化因子受体的外源核酸，并且与不包含编码趋化因子受体的核酸的在其他方面相同的微生物相比，通过重组体强制表达趋化因子受体导致微生物在肿瘤细胞中的复制增加。在某些实施方案中，重组微生物包含表达ccr2的外源核酸，其增加了重组微生物的肿瘤特异性复制。在一些实施方案中，重组微生物包含表达ccr5的外源核酸，其增加了微生物的肿瘤特异性复制。在一些实施方案中，肿瘤特异性复制的增加为至少约1.1倍、1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、106倍或更高的倍数增加。用于测量肿瘤中的病毒递送和扩散的增加的示例性方法包括但不限于基于荧光或生物发光的报告物基因表达成像、用于检测微生物基因组(例如，病毒基因组)的肿瘤浓度的定量pcr，或噬斑形成单位的噬斑确定，或微生物蛋白(例如，病毒蛋白)的免疫组织化学。79.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码降解肿瘤ecm的蛋白的外源核酸。降解ecm的示例性蛋白可以包括但不限于膜相关蛋白。在一些实施方案中，膜相关蛋白可以包含糖基磷脂酰肌醇(gpi)锚。80.透明质酸酶是催化透明质酸(ha)降解的酶家族。在人类中至少鉴定出五种功能性透明质酸酶：hyal1、hyal2、hyal3、hyal4和hyal5(也称为ph‑20或spam1)，其中ph‑20是唯一已知在相对中性的ph具有功能的透明质酸酶。在本公开内容的一些实施方案中，将透明质酸酶与其他肿瘤靶向治疗剂(诸如转基因，在本文中也称为外源核酸)进行组合，可以至少通过减少ecm和增强治疗剂在肿瘤内部以及在肿瘤之间的转运来促进重组微生物的治疗效果。81.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码能够降解透明质酸的膜相关蛋白诸如透明质酸酶的外源核酸。本文使用的术语“透明质酸酶”是指催化肿瘤中ha降解的任何酶或其片段，包括但不限于ph20及其来自其他物种的同源物，以及具有类似酶功能的其他工程化的/设计蛋白。透明质酸酶包括透明质酸降解酶类。透明质酸酶包括细菌透明质酸酶(ec4.2.2.1或ec4.2.99.1)，来自水蛭、其他寄生虫和甲壳类动物的透明质酸酶(ec3.2.1.36)和哺乳动物型透明质酸酶(ec3.2.1.35)。透明质酸酶可以是任何非人类来源的，包括但不限于鼠、犬、猫、兔、禽、牛、羊、猪、马、鱼、蛙、细菌，和任何来自水蛭、其他寄生虫和甲壳类动物的透明质酸酶。典型的非人类透明质酸酶可以包括，来自牛、黄夹克胡蜂(yellowjacketwasp)、蜜蜂、白脸大黄蜂(white‑facehornet)、造纸胡蜂(paperwasp)、小鼠、猪、大鼠、兔、绵羊、黑猩猩、恒河猴(rhesusmonkey)、猩猩、食蟹猴、豚鼠、节杆菌的种(arthrobactersp.)(菌株fb24)、噬菌蛭弧菌(bdellovibriobacteriovorus)、痤疮丙酸杆菌(propionibacteriumacnes)、无乳链球菌(streptococcusagalactiae)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)；菌株mrsa252、肺炎链球菌(streptococcuspneumoniae)、化脓性链球菌(streptococcuspyogenes)、猪链球菌(streptococcussuis)、费氏弧菌(vibriofischeri)的透明质酸酶，以及streptomyceshyaluronolyticus透明质酸酶，其对透明质酸具有特异性且不裂解软骨素或硫酸软骨素。82.在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码分泌的透明质酸酶的外源核酸。在一些实例中，分泌的透明质酸酶是微生物来源的，诸如来自金黄色葡萄球菌的hysa，lin，来自囊舌虫(saccoglossuskowalevskii)的sko，rv。在一些实施方案中，外源核酸hysa可以包含对应于genbank序列登录号u21221.1的基因组序列(seqidno:1)。在一些实施方案中，外源核酸hysa编码蛋白hysa，其包含seqidno:2(对应于uniprot登录号uniprotkb‑q59801(hysa_staa8))中列出的氨基酸序列。在一些实施方案中，分泌的透明质酸酶(诸如hysa)的表达增强了本文描述的重组微生物的复制、扩散(spread)、治疗活性(例如，癌细胞杀伤潜力)。83.此外，在一些实施方案中，重组微生物可以包含编码透明质酸酶和基质金属蛋白酶两者的一种或更多种外源核酸。总的来说，基质金属蛋白酶能够降解所有种类的ecm蛋白。实例可以包括但不限于，mmp1、mmp2、mmp3、mmp7、mmp8、mmp9、mmp10、mmp11、mmp12、mmp13、mmp14、mmp15、mmp17、mmp18、mmp19、mmp20、mmp21、mmp23a、mmp23b、mmp24、mmp25、mmp26、mmp27和mmp28。84.在一些实施方案中，与不包含编码降解肿瘤ecm的蛋白的核酸的在其他方面相同的微生物相比，包含编码降解肿瘤ecm的蛋白的核酸的重组微生物增加了微生物在肿瘤内以及在肿瘤间的扩散。在一些实施方案中，这样的增加是至少约1.1倍、1.1倍、1.2倍、1.5倍、1.8倍、2倍、2.2倍、2.5倍、2.8倍、3倍、3.2倍、3.5倍、3.8倍、4倍、4.2倍、4.5倍、4.8倍、5倍、5.2倍、5.5倍、5.8倍、6倍、6.2倍、6.5倍、6.8倍、7倍、7.2倍、7.5倍、7.8倍、8倍、8.2倍、8.5倍、8.8倍、9倍、9.2倍、9.5倍、9.8倍、10倍、12倍、14倍、15倍、16倍、18倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、90倍、95倍、100倍、150倍、200倍、250倍、500倍、800倍、1000倍、2500倍、5000倍、104倍、2.5x104倍、5x104倍、7.5x104倍、2.5x105倍、5x105倍、106倍或者甚至更高的倍数。用于测量微生物扩散增加的示例性方法可以包括但不限于基于荧光或生物发光的报告物基因表达成像、用于检测微生物基因组(例如，病毒基因组)的肿瘤浓度的定量pcr，或噬斑形成单位的噬斑确定，或微生物蛋白(例如，病毒蛋白)的免疫组织化学。85.在一些实施方案中，重组微生物不包含编码本文描述的肿瘤蛋白的外源核酸。86.在一些实施方案中，肿瘤蛋白可以包括但不限于间皮素(mesothelin)、bcma、her2、gd2、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd123、cd38、cd44、cd70、cd274、cd45、cd123、cd138、cd171、ror1、egfr、epha2、fbp、fap、cea、egp2、egp40、tag72、psma、psa、pap、hsp70‑2、m‑csf、lage‑la、p53、nkg2d配体、b7‑h6、il‑13rα2、il‑11rα、muc1、muc16、ca9、gd3、hmw‑maa、cd171、lewisy、g250/caix、hla‑aimagea1、hla‑a2ny‑eso‑1、psc1、pcta‑1、mage、elf2m、igf‑i、igf‑ii、igf‑i受体、htert、wt1、muc1、lmp2、hpv16、hpv18、rgl4、melana、mart、ml‑iap、afp、bcr、abl、cyp1b1、plac1、boris、ny‑br‑1、rgs5、sart3、epha2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3、5t4、8h9、ανβ6整合蛋白、b7‑h3、b7‑h6、caix、ca9、cspg4、egp2、egp40、epcam、erbb3、erbb4、erbb3/4、fap、far、fbp、kdr、mcsp、mucl、mucl6、ncam、prame、ror1、cd44v7/8、8h9、ncam、vegf‑r、tag72、rage‑1、mn‑caix、ru1、ru2(as)、胚胎achr、tem1、tem8、pax5、oy‑tes1、lck、hmwmaa、akap‑4、ssx2、xage1、tie2、pdgfr‑β、激肽释放酶4、pbf、prame、hsdl1、ca125、tadg‑12、muc16、甘露聚糖‑mic‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑hn‑1、lage‑1、mage‑a4、sp17、ssx4、tag1、tag2、enah、乳腺珠蛋白‑a、ny‑br‑1、bage‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑kn‑1、lage1、mage1a、magea2、mucink、trag3、c‑myc、细胞周期蛋白b1、p62、dkk1、ru2as、k‑ras、me1、nfyc、steap1、fgf5、ru2as、hsp70‑2、artc1、b‑raf、β‑连环蛋白、cdc27、cdk4、cdk12、cdkn2a、clpp、csnk1a1、fn1、gas7、gpnmb、haus3、ldlr‑岩藻糖基转移酶、mart2、matn、mum1、mum2、mum3、neo‑pap、肌球蛋白、ppp1r3b、prdx5、ptprk、rbaf600、sirt2、snrpd1、磷酸丙糖异构酶、oa1、rab38、trp1、trp2、melan‑a、bage1、gage1、gage2、gage8、gage3、gage4、gage5、gage6、gage7、gntvf、ly6k、trag3、casp8、sage、dek‑can、eftud2、flt3‑itd、细胞周期蛋白a1、fndc3b、mageag、g250、hepsin、肠羧酸酯酶、pbf、casp5、coa1、ogt、os9、calca、mdm2、α辅肌动蛋白4、延伸因子2、fos‑相关抗原1、legumain、精子蛋白17、碳酸酐酶ix、叶酸受体‑α、中性粒细胞弹性蛋白酶、肝配蛋白b2、胶质瘤相关抗原、β‑人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、甲状腺球蛋白、端粒酶逆转录酶、肠羧酸酯酶、prostein、存活蛋白(survivin)，和它们的任何功能部分。87.在一些实施方案中，重组微生物不包含编码以下人类蛋白或其抗原中的一种或更多种的一种或更多种外源核酸：间皮素、bcma、her2、gd2、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd123、cd38、cd44、cd70、cd274、cd45、cd123、cd138、cd171、ror1、egfr、epha2、fbp、fap、cea、egp2、egp40、tag72、psma、psa、pap、hsp70‑2、m‑csf、lage‑la、p53、nkg2d配体、b7‑h6、il‑13rα2、il‑11rα、muc1、muc16、ca9、gd3、hmw‑maa、cd171、lewisy、g250/caix、hla‑aimagea1、hla‑a2ny‑eso‑1、psc1、pcta‑1、mage、elf2m、igf‑i、igf‑ii、igf‑i受体、htert、wt1、muc1、lmp2、hpv16、hpv18、rgl4、melana、mart、ml‑iap、afp、bcr、abl、cyp1b1、plac1、boris、ny‑br‑1、rgs5、sart3、epha2、磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3、5t4、8h9、ανβ6整合蛋白、b7‑h3、b7‑h6、caix、ca9、cspg4、egp2、egp40、epcam、erbb3、erbb4、erbb3/4、fap、far、fbp、kdr、mcsp、mucl、mucl6、ncam、prame、ror1、cd44v7/8、8h9、ncam、vegf‑r、tag72、rage‑1、mn‑caix、ru1、ru2(as)、胚胎achr、tem1、tem8、pax5、oy‑tes1、lck、hmwmaa、akap‑4、ssx2、xage1、tie2、pdgfr‑β、激肽释放酶4、pbf、prame、hsdl1、ca125、tadg‑12、muc16、甘露聚糖‑mic‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑hn‑1、lage‑1、mage‑a4、sp17、ssx4、tag1、tag2、enah、乳腺珠蛋白‑a、ny‑br‑1、bage‑1、herv‑k‑mel、kk‑lc‑1、km‑kn‑1、lage1、mage1a、magea2、mucink、trag3、c‑myc、细胞周期蛋白b1、p62、dkk1、ru2as、k‑ras、me1、nfyc、steap1、fgf5、ru2as、hsp70‑2、artc1、b‑raf、β连环蛋白、cdc27、cdk4、cdk12、cdkn2a、clpp、csnk1a1、fn1、gas7、gpnmb、haus3、ldlr‑岩藻糖基转移酶、mart2、matn、mum1、mum2、mum3、neo‑pap、肌球蛋白、ppp1r3b、prdx5、ptprk、rbaf600、sirt2、snrpd1、磷酸丙糖异构酶、oa1、rab38、trp1、trp2、melan‑a、bage1、gage1、gage2、gage8、gage3、gage4、gage5、gage6、gage7、gntvf、ly6k、trag3、casp8、sage、dek‑can、eftud2、flt3‑itd、细胞周期蛋白a1、fndc3b、mageag、g250、hepsin、肠羧酸酯酶、pbf、casp5、coa1、ogt、os9、calca、mdm2、α辅肌动蛋白4、延伸因子2、fos‑相关抗原1、legumain、精子蛋白17、碳酸酐酶ix、叶酸受体‑α、中性粒细胞弹性蛋白酶、肝配蛋白b2、胶质瘤相关抗原、β‑人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、甲状腺球蛋白、端粒酶逆转录酶、肠羧酸酯酶、prostein和存活蛋白。88.本文描述的重组微生物可以通过技术人员已知的标准分子生物学和微生物学技术来产生。例如，本文描述的重组病毒可以在合适的宿主细胞中繁殖，例如在hela细胞、293细胞或vero细胞中繁殖，从宿主细胞中分离并储存在促进病毒稳定性和完整性的条件下，使得随时间的感染性损失最小化。在一些实施方案中，本文描述的重组病毒可以使用细胞堆(cellstacks)、滚瓶或灌注生物反应器在宿主细胞中繁殖。在一些实例中，用于纯化重组溶瘤病毒的下游方法可以包括过滤(例如深度过滤(depthfiltration)、切向流过滤或它们的组合)、超速离心或色谱捕获。在一些实施方案中，重组病毒可以通过例如冷冻或干燥来储存，诸如通过冻干来储存。在一些实施方案中，在施用之前，储存的重组病毒可以被重构(如果是干燥储存)，并且在药学上可接受的载体中稀释以进行施用。89.iii.治疗癌症的方法90.本文提供的方法包括治疗受试者中的癌症的方法。术语“癌症”和“肿瘤”在本文中可互换使用，其中如本文所用的术语“癌症”是指过度增生的状况。通过本文包含的组合物和方法治疗的癌症可以包括实体癌症或液体癌症。通过本文描述的方法治疗的癌症包括但不限于黑色素瘤、肝细胞癌、乳腺癌、肺癌、腹膜癌、前列腺癌(prostatecancer)、膀胱癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、肾癌、肾腺癌、胰腺癌(pancreaticcancer)、上皮癌、胃癌、结肠癌、十二指肠癌、胰腺腺癌(pancreaticadenocarcinoma)、间皮瘤、多形性胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、多发性骨髓瘤、前列腺上皮癌(prostatecarcinoma)、肝细胞癌、胆管肉瘤、胰腺腺癌、头颈鳞状细胞癌、结肠直肠癌、肠型胃腺癌、颈鳞状细胞癌、骨肉瘤、上皮性卵巢癌、急性淋巴母细胞性淋巴瘤、骨髓增生性肿瘤，以及肉瘤。91.通过本公开内容的方法治疗的癌细胞包括来自以下的细胞：膀胱、血液、骨、骨髓、脑、乳腺、结肠、食管、胃肠道、牙龈、头、肾、肝、肺、鼻咽、颈、卵巢、前列腺、皮肤、胃、睾丸、舌或子宫。此外，癌症具体地可能是以下组织学类型，尽管它不限于这些：赘生物，恶性；癌；未分化癌；巨细胞和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛基质癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；胃泌素瘤，恶性；胆管癌；肝细胞癌；混合性肝细胞癌和胆管癌；小梁腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉中的腺癌；腺癌，家族性结肠息肉病；实体癌；类癌瘤，恶性；细支气管肺泡腺癌(branchiolo‑alveolaradenocarcinoma)；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸性细胞癌；嗜酸性腺癌(oxyphilicadenocarcinoma)；嗜碱性细胞癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡状腺癌；乳头状和滤泡状腺癌；无包膜的硬化性癌(nonencapsulatingsclerosingcarcinoma)；肾上腺皮质癌；子宫内膜样癌(endometroidcarcinoma)；皮肤附属物癌(skinappendagecarcinoma)；大汗腺腺癌；皮脂腺癌；耵聍腺癌；黏液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；黏液性囊腺癌；黏液腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；佩吉特病，乳腺；腺泡细胞癌；腺鳞癌；具有鳞状化生的腺癌；胸腺瘤，恶性；卵巢间质瘤，恶性；卵泡膜细胞瘤，恶性；颗粒细胞瘤，恶性；性腺母细胞瘤，恶性；支持细胞癌；间质细胞瘤，恶性；脂质细胞瘤，恶性；副神经节瘤，恶性；乳腺外副神经节瘤，恶性；嗜铬细胞瘤；血管球肉瘤(glomangiosarcoma)；恶性黑色素瘤；无黑色素性黑色素瘤；浅表扩散性黑色素瘤；巨大色素痣中的恶性黑色素瘤；上皮样细胞黑色素瘤；蓝痣，恶性；肉瘤；纤维肉瘤；纤维组织细胞瘤，恶性；黏液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；腺泡状横纹肌肉瘤；间质肉瘤；混合瘤，恶性；mullerian混合瘤；肾母细胞瘤；肝母细胞癌；癌肉瘤；间叶瘤，恶性；brenner瘤，恶性；叶状肿瘤，恶性；滑膜肉瘤；间皮瘤，恶性；无性细胞瘤；胚胎性癌；畸胎瘤，恶性；卵巢甲状腺肿，恶性；绒毛膜癌；中肾瘤(mesonephroma)，恶性；血管肉瘤；血管内皮瘤，恶性；卡波西肉瘤；血管外皮瘤，恶性；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；近皮质骨肉瘤；软骨肉瘤；软骨母细胞瘤，恶性；间叶性软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤因肉瘤；牙源性肿瘤，恶性；成釉细胞牙肉瘤；成釉细胞瘤，恶性；成釉细胞纤维肉瘤；松果体瘤，恶性；脊索瘤；胶质瘤，恶性；室管膜瘤；星形细胞瘤；原浆性星形细胞瘤(protoplasmicastrocytoma)；纤维性星形细胞瘤(fibrillaryastrocytoma)；星形母细胞瘤；胶质母细胞瘤；少突胶质细胞瘤；少突神经胶质母细胞瘤；原始神经外胚叶瘤；小脑肉瘤；神经节神经母细胞瘤；神经母细胞瘤；视网膜母细胞瘤；嗅神经源性肿瘤；脑膜瘤，恶性；神经纤维肉瘤；神经鞘瘤，恶性；颗粒细胞瘤，恶性；恶性淋巴瘤；霍奇金病(hodgkin’sdisease)；霍奇金(hodgkin’s)；类肉芽肿；恶性淋巴瘤，小淋巴细胞性；恶性淋巴瘤，大细胞，弥漫性；恶性淋巴瘤，滤泡状；蕈样肉芽肿病；其他特殊的非霍奇金淋巴瘤；恶性组织细胞增生症；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增生性小肠病；白血病；淋巴性白血病；浆细胞白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞白血病；髓系白血病；嗜碱性粒细胞白血病(basophilicleukemia)；嗜酸性粒细胞白血病(eosinophilicleukemia)；单核细胞白血病；肥大细胞白血病；巨核母细胞白血病(megakaryoblasticleukemia)；髓系肉瘤和毛细胞白血病。在一些情况下，使用本文提供的方法治疗为转移性的实体癌。在一些情况下，诸如对于肿瘤内递送治疗剂的目的不可及或难及(inaccessibleordifficulttoaccess)的实体癌，使用本文描述的方法进行治疗。在一些实例中，可以使用本文描述的方法治疗与游离脂肪酸的表达增加相关的癌症。92.本文提供的方法包括抑制或预防任何类型的原发性癌症的局部侵袭或转移或者局部侵袭和转移两者的方法。例如，原发性癌症可以是黑色素瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺癌、肝癌、视网膜母细胞瘤、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、牙龈癌、舌癌、白血病、神经母细胞瘤、头癌、颈癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、肾癌、骨癌、睾丸癌、卵巢癌、间皮瘤、颈癌、胃肠癌、淋巴瘤、脑癌、结肠癌或膀胱癌。在一些实施方案中，原发性癌症是肺癌，例如非小细胞肺癌。93.本文提供的方法包括预防癌症的方法和治疗癌前(pre‑cancers)或癌前期细胞(premalignantcells)，包括化生、发育异常和增生的方法。本文提供的方法还包括抑制非期望但良性的细胞，诸如鳞状化生、发育异常、良性前列腺增生细胞、增生性病变等的方法。在一些实施方案中，通过本文提供的方法停止、破坏或延迟向癌症或更严重形式的癌症的进展。94.在一些实施方案中，癌症的治疗可以通过以下中的一种或更多种来检测：受试者中肿瘤体积的减小、受试者或来自受试者的样品中的一种或更多种肿瘤标志物的表达水平的降低，或受试者中的肿瘤部位的数量的减少。评价人类中实体瘤的体积和转移的方法是本领域已知的。这些可以包括，例如，正电子发射断层(pet)扫描、磁共振成像(mri)、超声、ct血管造影术和x射线。肿瘤蛋白可以在体内或来自受试者的离体样品中检测。在一些实施方案中，来自受试者的样品可以是血液、组织、尿液、骨髓、肿瘤活组织检查或唾液样品。肿瘤蛋白可以通过技术人员已知的标准测定来检测，所述标准测定包括但不限于例如标准免疫测定，诸如elisa、流式细胞术、免疫组织化学和ria。95.iv.增强免疫反应的方法96.本文提供的方法包括在受试者中体内诱导或增强免疫反应的方法。在一些实施方案中，诱导或增强的免疫反应针对从一种或更多种癌细胞释放的一种或更多种癌症相关抗原，所述癌细胞被本文描述的重组微生物在体内裂解。97.在一些实施方案中，免疫反应可以是细胞介导的反应或体液反应。在一些实施方案中，免疫反应可以通过测定以下的增强来检测：b细胞增殖、cd3 t细胞增殖、cd4 t细胞增殖、cd8 t细胞增殖或它们的任何组合。在一些实施方案中，免疫反应可以通过测定以下的产生的增强来检测：il‑2、ifn‑γ、il‑1、il‑4、il‑5、il‑6、il‑13、il‑17、il‑21、il‑22、tnfα、csf、tgfβ、颗粒酶等。在一些实施方案中，细胞因子释放可以使用elisa、流式细胞术、蛋白印迹或它们的任何组合来定量。在一些实施方案中，免疫反应可以通过以下的增强来检测：抗原呈递细胞增殖、功能或它们的任何组合。在一些实施方案中，免疫反应可以通过以26:119‑130；carine等人(2003)j.immunol.171:6466‑6477；penna等人(2002)j.immunol.69:6673‑6676；alferink等人(2003)j.exp.med.197:585‑599)。包括toll样受体(tlr)的小鼠固有免疫反应是用于人类固有免疫反应的模型，如所公开的(参见，例如，janssens和beyaert(2003)clinicalmicrob.revs.16:637‑646)。小鼠中性粒细胞是用于人类中性粒细胞的公认模型(参见，例如，kobayashi等人(2003)proc.natl.acad.sci.usa100:10948‑10953；torres等人(2004)72:2131‑2139；sibelius等人(1999)infectionimmunity67:1125‑1130；tvinnereim等人(2004)j.immunol.173:1994‑2002)。鼠对李斯特氏菌的免疫反应是人类对李斯特菌反应的公认模型(参见，例如，kolb‑maurer等人(2000)infectionimmunity68:3680‑3688；brzoza等人(2004)j.immunol.173:2641‑2651)。100.在一些实施方案中，免疫反应可以通过以下中的一种或更多种来测量：细胞内细胞因子染色(ics)、elispot、增殖测定、细胞毒性t细胞测定，包括铬释放或等效的测定，和基因表达分析(使用任何数量的基于聚合酶链反应(pcr)或rt‑pcr的试验，如本文描述的)，以及用于测量免疫反应的任何其他合适的测定。在一些情况下，细胞产物或单采血液成分术产物(apheresisproducts)的样品可以冷冻保存用于细胞表型和功能的回顾性分析。101.v.施用102.本文描述的方法包括以初免‑加强方案施用本文描述的至少两种重组微生物(例如，重组病毒)。初免‑加强方案是技术人员和本领域已知的。初免‑加强方案的特征通常在于施用第一次初免施用和一次或更多次随后的加强施用。103.在一些实施方案中，初免‑加强方案可以是异源的。本文描述的异源初免‑加强方案可以包括使用不同的手段来进行初免和加强免疫反应。本文描述的异源初免‑加强方案可以包括施用第一重组微生物(初免)和随后施用第二重组微生物(加强)，其中第一和第二重组微生物是不同的。104.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是病毒，并且第二(加强)重组微生物可以是病毒，其中第一(初免)和第二(加强)病毒是不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)病毒可以是血清学上不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)病毒可以被分类在不同的分类学上的科中。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)病毒可以被分类在不同的分类学上的物种中。在一些实施方案中，第一(初免)重组病毒可以是本文描述的病毒，并且第二(加强)重组病毒可以是本文描述的不同病毒。105.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是细菌，并且第二(加强)重组微生物可以是细菌，其中第一(初免)和第二(加强)细菌是不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)细菌可以是血清学上不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)细菌可以被分类在不同的分类学上的科中。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)细菌可以被分类在不同的分类学上的物种中。在一些实施方案中，第一(初免)重组细菌可以是本文描述的细菌，并且第二(加强)重组细菌可以是本文描述的不同的细菌。106.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是寄生虫，并且第二(加强)重组微生物可以是寄生虫，其中第一(初免)和第二(加强)寄生虫是不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)寄生虫可以是血清学上不同的。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)寄生虫可以被分类在不同的分类学上的科中。在一些实施方案中，第一(初免)和第二(加强)寄生虫可以被分类在不同的分类学上的物种中。在一些实施方案中，第一(初免)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫，并且第二(加强)重组寄生虫可以是本文描述的不同寄生虫。107.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是病毒，并且第二(加强)重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第一(初免)重组病毒可以是本文描述的病毒，并且第二(加强)重组细菌可以是本文描述的细菌。在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是细菌，并且第二(加强)重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，第一(初免)重组细菌可以是本文描述的细菌，并且第二(加强)重组病毒可以是本文描述的病毒。108.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是病毒，并且第二(加强)重组微生物可以是寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组病毒可以是本文描述的病毒，并且第二(加强)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是寄生虫，并且第二(加强)重组微生物可以是病毒。在一些实施方案中，第一(初免)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫，并且第二(加强)重组病毒可以是本文描述的病毒。109.在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是细菌，并且第二(加强)重组微生物可以是寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组细菌可以是本文描述的细菌，并且第二(加强)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫。在一些实施方案中，第一(初免)重组微生物可以是寄生虫，并且第二(加强)重组微生物可以是细菌。在一些实施方案中，第一(初免)重组寄生虫可以是本文描述的寄生虫，并且第二(加强)重组细菌可以是本文描述的细菌。110.在一些实施方案中，初免‑加强方案可以包括施用单一初免重组微生物和一种或更多种(例如，2种、3种、4种、5种或更多种)随后的加强重组微生物。在一些实施方案中，异源初免‑加强方案可以包括施用单一初免重组微生物和两种或更多种(例如，3种、4种、5种或更多种)随后的加强重组微生物，其中两种或更多种随后的加强重组微生物彼此不同。在一些实施方案中，异源初免‑加强方案可以包括施用单一初免重组微生物和两种或更多种(例如，3种、4种、5种或更多种)随后的加强重组微生物，其中两种随后的加强重组微生物彼此相同。111.在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以几天、几周或几个月的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用在施用初免施用后以1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更多天的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周或更多周的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更多个月的间隔施用。在一些实施方案中，一次或更多次加强施用可以在施用最初的初免施用后以间隔的任何组合施用(例如，1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更多天，1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周或更多周，或1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月或更多个月)。112.在一些实施方案中，第一次加强可以在初免施用的1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周内施用。在一些实施方案中，第二次加强可以在第一次加强施用后的1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天或1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周内施用。113.在实施方案中，一次或更多次加强施用可以经约1周至约2周、约2周至约3周、约3周至约4周、约4周至约5周、约6周至约7周、约7周至约8周、约8周至约9周、约9周至约10周、约10周至约11周、约11周至约12周、约12周至约24周、约24周至约48周、约48周或约52周或更长的时间段施用。114.初免施用和加强施用的时机可以由技术人员决定。一次或多于一次加强施用的施用可以由技术人员决定。在一些实施方案中，施用的初免剂量可以低于施用的加强剂量。在一些实施方案中，施用的初免剂量可以高于施用的加强剂量。施用的初免剂量和加强剂量可以由技术人员决定。115.在一些实施方案中，初免剂量可以以足以在肿瘤中至少约20％的细胞、肿瘤中至少约30％的细胞、肿瘤中至少约40％的细胞、肿瘤中至少约50％的细胞、肿瘤中至少约60％的细胞、肿瘤中至少约70％的细胞、肿瘤中至少约80％的细胞或肿瘤中至少约90％的细胞中诱导溶瘤的量施用。在一些实施方案中，初免剂量可以指经1小时、2小时、5小时、10小时、15小时、20小时或24小时的时间段向受试者或肿瘤施用的量。116.在一些实施方案中，加强剂量可以以足以在肿瘤中至少约20％的细胞、肿瘤中至少约30％的细胞、肿瘤中至少约40％的细胞、肿瘤中至少约50％的细胞、肿瘤中至少约60％的细胞、肿瘤中至少约70％的细胞、肿瘤中至少约80％的细胞或肿瘤中至少约90％的细胞中诱导溶瘤的量施用。在一些实施方案中，加强剂量可以指经1小时、2小时、5小时、10小时、15小时、20小时或24小时的时间段向受试者或肿瘤施用的量。117.在一些实施方案中，可以向受试者施用一剂本文描述的第一(初免)重组微生物和一剂本文描述的第二(加强)重组微生物。重组微生物的初免剂量和加强剂量的量可以由技术人员决定。118.在一些实施方案中，一剂第一(初免)重组微生物是营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌菌株，并且一剂第二(加强)重组微生物是痘苗病毒(wr.tk‑)。在一些实施方案中，一剂第一(初免)重组微生物来自痘苗病毒，并且一剂第二(加强)重组微生物来自单纯疱疹病毒毒株或水疱性口炎病毒(vsv)中的至少一种。在一方面，单纯疱疹病毒可以是修饰的。修饰可以包括添加、插入、截短、突变和它们的任何组合。在一方面，参与神经毒性(neurovirulence)、发病机理或复制的基因可以是修饰的。在一些实施方案中，hsv修饰可以是γ34.5或icp6缺失中的任何一种。119.在一些实施方案中，初免重组微生物可以是重组病毒，并且加强重组微生物可以是不同的重组病毒，并且施用的初免和/或加强的量可以是约103至1012个感染性病毒颗粒或噬斑形成单位(pfu)，或约105pfu至1010pfu，或约105pfu至108pfu，或约108pfu至1010pfu。在一些实施方案中，向受试者施用的本公开内容的重组病毒的量可以是约103至1012个病毒颗粒或噬斑形成单位(pfu)，或约105至1010pfu，或约105至108pfu，或约108至1010pfu。在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103pfu/剂量至约104pfu/剂量，约104pfu/剂量至约105pfu/剂量，约105pfu/剂量至约106pfu/剂量，约107pfu/剂量至约108pfu/剂量，约109pfu/剂量至约1010pfu/剂量，约1010pfu/剂量至约1011pfu/剂量，约1011pfu/剂量至约1012pfu/剂量，约1012pfu/剂量至约1013pfu/剂量，约1013pfu/剂量至约1014pfu/剂量，或约1014pfu/剂量至约1015pfu/剂量。在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约2×103pfu/剂量、3×103pfu/剂量、4×103pfu/剂量、5×103pfu/剂量、6×103pfu/剂量、7×103pfu/剂量、8×103pfu/剂量、9×103pfu/剂量、约104pfu/剂量、约2×104pfu/剂量、约3×104pfu/剂量、约4×104pfu/剂量、约5×104pfu/剂量、约6×104pfu/剂量、约7×104pfu/剂量、约8×104pfu/剂量、约9×104pfu/剂量、约105pfu/剂量、2×105pfu/剂量、3×105pfu/剂量、4×105pfu/剂量、5×105pfu/剂量、6×105pfu/剂量、7×105pfu/剂量、8×105pfu/剂量、9×105pfu/剂量、约106pfu/剂量、约2×106pfu/剂量、约3×106pfu/剂量、约4×106pfu/剂量、约5×106pfu/剂量、约6×106pfu/剂量、约7×106pfu/剂量、约8×106pfu/剂量、约9×106pfu/剂量、约107pfu/剂量、约2×107pfu/剂量、约3×107pfu/剂量、约4×107pfu/剂量、约5×107pfu/剂量、约6×107pfu/剂量、约7×107pfu/剂量、约8×107pfu/剂量、约9×107pfu/剂量、约108pfu/剂量、约2×108pfu/剂量、约3×108pfu/剂量、约4×108pfu/剂量、约5×108pfu/剂量、约6×108pfu/剂量、约7×108pfu/剂量、约8×108pfu/剂量、约9×108pfu/剂量、约109pfu/剂量、约2×109pfu/剂量、约3×109pfu/剂量、约4×109pfu/剂量、约5×109pfu/剂量、约6×109pfu/剂量、约7×109pfu/剂量、约8×109pfu/剂量、约9×109pfu/剂量、约1010pfu/剂量、约2×1010pfu/剂量、约3×1010pfu/剂量、约4×1010pfu/剂量、约5×1010pfu/剂量、约6×1010pfu/剂量、约7×1010pfu/剂量、约8×1010pfu/剂量、约9×1010pfu/剂量、约1010pfu/剂量、约2×1010pfu/剂量、约3×1010pfu/剂量、约4×1010pfu/剂量、约5×1010pfu/剂量、约6×1010pfu/剂量、约7×1010pfu/剂量、约8×1010pfu/剂量、约9×1010pfu/剂量、约1011pfu/剂量、约2×1011pfu/剂量、约3×1011pfu/剂量、约4×1011pfu/剂量、约5×1011pfu/剂量、约6×1011pfu/剂量、约7×1011pfu/剂量、约8×1011pfu/剂量、约9×1011pfu/剂量或约1012pfu/剂量、约1012pfu/剂量至约1013pfu/剂量、约1013pfu/剂量至约1014pfu/剂量或约1014pfu/剂量至约1015pfu/剂量。120.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103个病毒颗粒/剂量至约104个病毒颗粒/剂量、约104个病毒颗粒/剂量至约105个病毒颗粒/剂量、约105个病毒颗粒/剂量至约106个病毒颗粒/剂量、约107个病毒颗粒/剂量至约108个病毒颗粒/剂量、约109个病毒颗粒/剂量至约1010个病毒颗粒/剂量、约1010个病毒颗粒/剂量至约1011个病毒颗粒/剂量、约1011个病毒颗粒/剂量至约1012个病毒颗粒/剂量、约1012个病毒颗粒/剂量至约1013个病毒颗粒/剂量、约1013个病毒颗粒/剂量至约1014个病毒颗粒/剂量，或约1014个病毒颗粒/剂量至约1015个病毒颗粒/剂量。121.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103pfu/kg至约104pfu/kg、约104pfu/kg至约105pfu/kg、约105pfu/kg至约106pfu/kg、约107pfu/kg至约108pfu/kg、约109pfu/kg至约1010pfu/kg、约1010pfu/kg至约1011pfu/kg、约1011pfu/kg至约1012pfu/kg、约1012pfu/kg至约1013pfu/kg、约1013pfu/kg至约1014pfu/kg，或约1014pfu/kg至约1015pfu/kg。在一些实施方案中，本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如溶瘤痘苗病毒，以包括以下的剂量施用：约2×103pfu/kg、3×103pfu/kg、4×103pfu/kg、5×103pfu/kg、6×103pfu/kg、7×103pfu/kg、8×103pfu/kg、9×103pfu/kg、约104pfu/kg、约2×104pfu/kg、约3×104pfu/kg、约4×104pfu/kg、约5×104pfu/kg、约6×104pfu/kg、约7×104pfu/kg、约8×104pfu/kg、约9×104pfu/kg、约105pfu/kg、2×105pfu/kg、3×105pfu/kg、4×105pfu/kg、5×105pfu/kg、6×105pfu/kg、7×105pfu/kg、8×105pfu/kg、9×105pfu/kg、约106pfu/kg、约2×106pfu/kg、约3×106pfu/kg、约4×106pfu/kg、约5×106pfu/kg、约6×106pfu/kg、约7×106pfu/kg、约8×106pfu/kg、约9×106pfu/kg、约107pfu/kg、约2×107pfu/kg、约3×107pfu/kg、约4×107pfu/kg、约5×107pfu/kg、约6×107pfu/kg、约7×107pfu/kg、约8×107pfu/kg、约9×107pfu/kg、约108pfu/kg、约2×108pfu/kg、约3×108pfu/kg、约4×108pfu/kg、约5×108pfu/kg、约6×108pfu/kg、约7×108pfu/kg、约8×108pfu/kg、约9×108pfu/kg、约109pfu/kg、约2×109pfu/kg、约3×109pfu/kg、约4×109pfu/kg、约5×109pfu/kg、约6×109pfu/kg、约7×109pfu/kg、约8×109pfu/kg、约9×109pfu/kg、约1010pfu/kg、约2×1010pfu/kg、约3×1010pfu/kg、约4×1010pfu/kg、约5×1010pfu/kg、约6×1010pfu/kg、约7×1010pfu/kg、约8×1010pfu/kg、约9×1010pfu/kg、约1010pfu/kg、约2×1010pfu/kg、约3×1010pfu/kg、约4×1010pfu/kg、约5×1010pfu/kg、约6×1010pfu/kg、约7×1010pfu/kg、约8×1010pfu/kg、约9×1010pfu/kg、约1011pfu/kg、约2×1011pfu/kg、约3×1011pfu/kg、约4×1011pfu/kg、约5×1011pfu/kg、约6×1011pfu/kg、约7×1011pfu/kg、约8×1011pfu/kg、约9×1011pfu/kg或约1012pfu/kg、约1012pfu/kg至约1013pfu/kg、约1013pfu/kg至约1014pfu/kg或约1014pfu/kg至约1015pfu/kg。在一些实施方案中，本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如溶瘤痘苗病毒，以包括5×109pfu/kg的剂量施用。在一些实施方案中，本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如溶瘤痘苗病毒，以包括最高5×109pfu/kg的剂量施用。122.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约103个病毒颗粒/kg至约104个病毒颗粒/kg、约104个病毒颗粒/kg至约105个病毒颗粒/kg、约105个病毒颗粒/kg至约106个病毒颗粒/kg、约107个病毒颗粒/kg至约108个病毒颗粒/kg、约109个病毒颗粒/kg至约1010个病毒颗粒/kg、约1010个病毒颗粒/kg至约1011个病毒颗粒/kg、约1011个病毒颗粒/kg至约1012个病毒颗粒/kg、约1012个病毒颗粒/kg至约1013个病毒颗粒/kg、约1013个病毒颗粒/kg至约1014个病毒颗粒/kg，或约1014个病毒颗粒/kg至约1015个病毒颗粒/kg。123.在一些实施方案中，本文描述的重组病毒的液体剂型可以包含以下病毒剂量：约103pfu/ml至约104pfu/ml、约104pfu/ml至约105pfu/ml、约105pfu/ml至约106pfu/ml、约107pfu/ml至约108pfu/ml、约109pfu/ml至约1010pfu/ml、约1010pfu/ml至约1011pfu/ml、约1011pfu/ml至约1012pfu/ml、约1012pfu/ml至约1013pfu/ml、约1013pfu/ml至约1014pfu/ml或约1014pfu/ml至约1015pfu/ml。124.在一些实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以包括以下的剂量施用：约2×103pfu/ml、3×103pfu/ml、4×103pfu/ml、5×103pfu/ml、6×103pfu/ml、7×103pfu/ml、8×103pfu/ml、9×103pfu/ml、约104pfu/ml、约2×104pfu/ml、约3×104pfu/ml、约4×104pfu/ml、约5×104pfu/ml、约6×104pfu/ml、约7×104pfu/ml、约8×104pfu/ml、约9×104pfu/ml、约105pfu/ml、2×105pfu/ml、3×105pfu/ml、4×105pfu/ml、5×105pfu/ml、6×105pfu/ml、7×105pfu/ml、8×105pfu/ml、9×105pfu/ml、约106pfu/ml、约2×106pfu/ml、约3×106pfu/ml、约4×106pfu/ml、约5×106pfu/ml、约6×106pfu/ml、约7×106pfu/ml、约8×106pfu/ml、约9×106pfu/ml、约107pfu/ml、约2×107pfu/ml、约3×107pfu/ml、约4×107pfu/ml、约5×107pfu/ml、约6×107pfu/ml、约7×107pfu/ml、约8×107pfu/ml、约9×107pfu/ml、约108pfu/ml、约2×108pfu/ml、约3×108pfu/ml、约4×108pfu/ml、约5×108pfu/ml、约6×108pfu/ml、约7×108pfu/ml、约8×108pfu/ml、约9×108pfu/ml、约109pfu/ml、约2×109pfu/ml、约3×109pfu/ml、约4×109pfu/ml、约5×109pfu/ml、约6×109pfu/ml、约7×109pfu/ml、约8×109pfu/ml、约9×109pfu/ml、约1010pfu/ml、约2×1010pfu/ml、约3×1010pfu/ml、约4×1010pfu/ml、约5×1010pfu/ml、约6×1010pfu/ml、约7×1010pfu/ml、约8×1010pfu/ml、约9×1010pfu/ml、约1010pfu/ml、约2×1010pfu/ml、约3×1010pfu/ml、约4×1010pfu/ml、约5×1010pfu/ml、约6×1010pfu/ml、约7×1010pfu/ml、约8×1010pfu/ml、约9×1010pfu/ml、约1010pfu/ml、约2×1010pfu/ml、约3×1010pfu/ml、约4×1010pfu/ml、约5×1010pfu/ml、约6×1010pfu/ml、约7×1010pfu/ml、约8×1010pfu/ml、约9×1010pfu/ml、约1011pfu/ml、约2×1011pfu/ml、约3×1011pfu/ml、约4×1011pfu/ml、约5×1011pfu/ml、约6×1011pfu/ml、约7×1011pfu/ml、约8×1011pfu/ml、约9×1011pfu/ml或约1012pfu/ml、约1012pfu/ml至约1013pfu/ml、约1013pfu/ml至约1014pfu/ml，或约1014pfu/ml至约1015pfu/ml。125.在一些实施方案中，重组病毒通过注射施用。在一些实施方案中，剂量可以包括约103个病毒颗粒/注射、104个病毒颗粒/注射、105个病毒颗粒/注射、106个病毒颗粒/注射、107个病毒颗粒/注射、108个病毒颗粒/注射、109个病毒颗粒/注射、1010个病毒颗粒/注射、1011个病毒颗粒/注射、1012个病毒颗粒/注射、2x1012个病毒颗粒/注射、1013个病毒颗粒/注射、1014个病毒颗粒/注射或1015个病毒颗粒/注射。在一些实施方案中，剂量可以包括约103个感染性病毒颗粒/注射、104个感染性病毒颗粒/注射、105个感染性病毒颗粒/注射、106个感染性病毒颗粒/注射、107个感染性病毒颗粒/注射、108个感染性病毒颗粒/注射、109个感染性病毒颗粒/注射、1010个感染性病毒颗粒/注射、1011个感染性病毒颗粒/注射、1012个感染性病毒颗粒/注射、2x1012个感染性病毒颗粒/注射、1013个感染性病毒颗粒/注射、1014个感染性病毒颗粒/注射或1015个感染性病毒颗粒/注射。在另外的实施方案中，本公开内容的重组病毒可以以以下剂量施用：约103组织培养抑制剂量50％(tissuecultureinhibitordose50％,tcid50)/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、104tcid50/kg、3x108tcid50/kg、4x108tcid50/kg、5x108tcid50/kg、3x109tcid50/kg、4x109tcid50/kg、5x109tcid50/kg、3x1010tcid50/kg、4x1010tcid50/kg或4x1010tcid50/kg。126.施用途径可以因肿瘤的位置和性质而异。在某些实施方案中，施用途径为经皮(transdermal)、胃肠外、肌肉内、皮下、局部(例如，在肿瘤附近，特别是肿瘤的血管或邻近血管)、经皮(percutaneous)、鞘内、鼻内、气管内、腹膜内、动脉内、膀胱内、肿瘤内、吸入、灌注、通过灌洗或口服。127.在一些实施方案中，药物组合物的可注射剂量可以以团注(bolusinjection)或以缓慢输注施用。在一些实施方案中，药物组合物可以从植入受试者中的来源向受试者施用。在某些实施方案中，药物组合物的施用可以通过经选定的时间段连续输注来进行。在一些实施方案中，药物组合物可以以治疗有效量经约15分钟、约30分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约60分钟、约75分钟、约90分钟、约100分钟或约120分钟或更长的时间段通过输注来施用。在一些实施方案中，药物组合物可以以液体剂量施用，其中施用的总体积为约1ml至约5ml、约5ml至10ml、约15ml至约20ml、约25ml至约30ml、约30ml至约50ml、约50ml至约100ml、约100ml至150ml、约150ml至约200ml、约200ml至约250ml、约250ml至约300ml、约300ml至约350ml、约350ml至约400ml、约400ml至约450ml、约450ml至500ml、约500ml至750ml，或约750ml至1000ml。128.在一些实施方案中，方法可以包括施用如本文公开的初免‑加强方案，随后施用其他重组微生物，诸如第三重组微生物、第四重组微生物或它们的任何组合。在一些实施方案中，方法可以包括施用如本文公开的初免‑加强方案，随后是一种或更多种其他疗法，以及之前是一种或更多种其他疗法，或与一种或更多种其他疗法进行组合。其他疗法的实例可以包括但不限于化疗、放射、用另外的病毒进行的溶瘤病毒疗法、用免疫调节蛋白的治疗、抗癌剂或它们的任何组合。其他疗法可以相对于初免、加强施用或初免‑加强施用并行或依次施用。在一些实施方案中，方法可以包括施用如本文公开的初免、加强或初免‑加强方案，随后是一种或更多种抗癌剂或癌症疗法，之前是一种或更多种抗癌剂或癌症疗法，或与一种或更多种抗癌剂或癌症疗法进行组合。抗癌剂可以包括但不限于化疗剂、放疗剂、细胞因子、免疫检查点抑制剂、抗血管生成剂、凋亡诱导剂、抗癌抗体和抗细胞周期蛋白依赖性激酶剂。在一些实施方案中，癌症疗法包括化疗、生物疗法、放射疗法、免疫疗法、激素疗法、抗血管疗法、冷冻疗法、毒素疗法、手术或它们的组合。129.在某些实施方案中，方法可以包括施用与一种或更多种免疫调节剂组合的本文描述的初免‑加强方案。免疫调节剂可以包括能够抑制与肿瘤或癌症相关的抗重组微生物免疫(例如，抗病毒免疫)的任何化合物、分子或物质。在一些实施方案中，免疫调节剂能够抑制对重组微生物(例如，重组病毒)的固有免疫或适应性免疫。免疫调节剂的非限制性实例包括抗cd33抗体或其可变区，抗cd11b抗体或其可变区，cox2抑制剂(例如，塞来昔布(celecoxib))，细胞因子(诸如il‑12、gm‑csf、il‑2、ifn3和ifnγ)，和趋化因子(诸如mip‑1、mcp‑1和il‑8)。在一些实施方案中，免疫调节剂可以包括免疫检查点调节剂，诸如但不限于抗ctla4、抗pd‑1以及抗pd‑l1和tlr激动剂(例如，聚i:c)。在一些实例中，免疫调节剂可以包括免疫检查点抑制剂，诸如pd‑1的拮抗剂(例如，结合pd‑1的拮抗剂抗体)、pd‑l1的拮抗剂(例如，结合pd‑l1的拮抗剂抗体)、ctla‑4的拮抗剂(例如，结合ctla‑4的拮抗剂抗体)、a2ar的拮抗剂(例如，结合a2ar的拮抗剂抗体)、b7‑h3的拮抗剂(例如，结合b7‑h3的拮抗剂抗体)、b7‑h4的拮抗剂(例如，结合b7‑h4的拮抗剂抗体)、btla的拮抗剂(例如，结合btla的拮抗剂抗体)、ido的拮抗剂(例如，结合ido的拮抗剂抗体)、kir的拮抗剂(例如，结合kir的拮抗剂抗体)、lag3的拮抗剂(例如，结合lag3的拮抗剂抗体)、tim‑3的拮抗剂(例如，结合tim‑3的拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂可以包含结合以下的蛋白：pd‑1、pd‑l1、ctla‑4、a2ar、b7‑h3、b7‑h4、btla、ido、kir、lag3、tim‑3、vista、cd160、tigit、psgl‑1或它们的任何组合。130.在一些实施方案中，其他疗法可以包括施用免疫检查点调节剂。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是tgn1412。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是nktr‑214。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi0562。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi6469。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi6383。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是jtx‑2011。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是keyturda(派姆单抗(pembrolizumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是opdivo(纳武单抗(nivolumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是yervoy(伊匹单抗(ipilimumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是曲美木单抗(tremelimumab)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是tecentriq(阿特珠单抗(atezolizumab))。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是mga271。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是indoximod。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是epacadostat。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是lirilumab。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是bms‑986016。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是mpdl3280a。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是阿维单抗(avelumab)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是德瓦鲁单抗(durvalumab)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi4736。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是medi4737。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是trx518。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是mk‑4166。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是乌瑞芦单抗(urelumab)(bms‑663513)。在一些实施方案中，免疫检查点调节剂可以是pf‑05082566(pf‑2566)。131.在一些实施方案中，其他疗法可以是放射。示例性剂量包括但不限于5,000rad(50gy)至100,000rad(1000gy)，或50,000rad(500gy)，或所陈述范围内的其他适当剂量。在一些实施方案中，放射剂量可以是约30gy至60gy、约40gy至约50gy、约40gy至48gy，或约44gy，或所陈述范围内的其他适当剂量，其中剂量例如通过上文描述的剂量学研究的手段来确定。本文使用的“gy”可以指等于100rad的特定吸收放射剂量的单位。gy是“gray”的缩写。132.在一些实施方案中，其他疗法可以是化疗。示例性化疗剂可以包括但不限于烷化剂(例如，氮芥衍生物、乙烯亚胺、烷基磺酸盐、肼和三嗪、亚硝基脲(nitrosureas)和金属盐)、植物生物碱(例如，长春花生物碱、紫杉烷类、鬼臼毒素和喜树碱类似物)、抗肿瘤抗生素(例如，蒽环类、色霉素类等)、抗代谢物(例如，叶酸拮抗剂、嘧啶拮抗剂、嘌呤拮抗剂和腺苷脱氨酶抑制剂)、拓扑异构酶i抑制剂、拓扑异构酶ii抑制剂和其他抗赘生物剂(miscellaneousantineoplastics)(例如，核糖核苷酸还原酶抑制剂、肾上腺皮质类固醇抑制剂、酶、抗微管剂和类视黄醇)。示例性化疗剂可以包括但不限于阿那曲唑比卡鲁胺硫酸博莱霉素白消安白消安注射液卡培他滨n4‑戊氧基羰基‑5‑脱氧‑5‑氟胞苷、卡铂卡莫司汀苯丁酸氮芥顺铂克拉屈滨环磷酰胺(或)、阿糖胞苷(cytarabine)、阿糖胞苷(cytosinearabinoside)阿糖胞苷脂质体注射液达卡巴嗪更生霉素(放线菌素d，cosmegan)、盐酸柔红霉素枸橼酸柔红霉素脂质体注射液地塞米松、多西他赛盐酸阿霉素依托泊苷磷酸氟达拉滨5‑氟尿嘧啶氟尿嘧啶氟他胺tezacitibine、吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、羟基脲伊达比星异环磷酰胺伊立替康l‑天冬酰胺酶亚叶酸钙、美法仑6‑巯基嘌呤甲氨蝶呤米托蒽醌吉妥单抗(mylotarg)、紫杉醇phoenix(yttrium90/mx‑dtpa)、喷司他丁、伴随卡莫司汀植入的聚苯丙生20枸橼酸他莫昔芬替尼泊苷6‑硫代鸟嘌呤、塞替派(thiotepa)、替拉扎明注射用盐酸拓扑替康长春碱长春新碱和长春瑞滨依鲁替尼(ibrutinib)、idelalisib和本妥昔单抗(brentuximabvedotin)。133.示例性烷化剂可以包括但不限于氮芥、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三氮烯)：尿嘧啶氮芥(uracilmustard)(aminouracilmustard)(aminouracilmustard)(aminouraciluracilnitrogennitrogen)、氮芥(chlormethine)环磷酰胺(revimmunetm)、异环磷酰胺美法仑苯丁酸氮芥哌泊溴烷三亚乙基蜜胺三亚乙基硫代磷酰胺、替莫唑胺塞替派白消安卡莫司汀洛莫司汀链脲佐菌素和达卡巴嗪另外的示例性烷化剂包括但不限于奥沙利铂替莫唑胺(和)；更生霉素(又名放线菌素‑d，)；美法仑(又名l‑pam、l‑溶肉瘤素(l‑sarcolysin)和苯丙氨酸氮芥，)；六甲蜜胺(又名六甲三聚氰胺(hmm)，)；卡莫司汀苯达莫司汀白消安(和)；卡铂洛莫司汀(又名ccnu，)；顺铂(又名cddp，和‑aq)；苯丁酸氮芥环磷酰胺(和)；达卡巴嗪(又名dtic、dic和咪唑甲酰胺，)；六甲蜜胺(又名六甲三聚氰胺(hmm)，)；异环磷酰胺prednumustine、普鲁卡因二氯甲基二乙胺(又名氮芥(nitrogenmustard)、氮芥(mustine)和盐酸甲氯乙胺(mechloroethaminehydrochloride)，)；链脲佐菌素塞替派(又名硫代磷酰胺(thiophosphoamide)、tespa和tspa，)；环磷酰胺和苯达莫司汀hcl134.示例性蒽环类包括但不限于，例如，阿霉素(和)；博莱霉素柔红霉素(盐酸柔红霉素、道诺霉素(daunomycin)和盐酸柔红霉素，)；柔红霉素脂质体(柔红霉素柠檬酸脂质体，)；米托蒽醌(dhad，)；表阿霉素(ellencetm)；伊达比星(idamycin)；丝裂霉素c格尔德霉素；除莠霉素；拉维霉素(ravidomycin)和去乙酰基拉维霉素。135.示例性长春花生物碱可以包括但不限于酒石酸长春瑞滨长春新碱和长春地辛长春碱(也称为硫酸长春碱、长春花碱(vincaleukoblastine)和vlb，和)和长春瑞滨136.示例性蛋白酶体抑制剂可以包括但不限于硼替佐米卡非佐米(carfilzomib)(px‑171‑007、(s)‑4‑甲基‑n‑((s)‑1‑(((s)‑4‑甲基‑1‑((r)‑2‑甲基环氧乙烷‑2‑基)‑1‑氧代戊‑2‑基)氨基)‑1‑氧代‑3‑苯基丙‑2‑基)‑2‑((s)‑2‑(2‑吗啉代乙酰氨基)‑4‑苯基丁酰胺)‑戊酰胺)；marizomib(npi‑0052)；枸橼酸艾沙佐米(ixazomibcitrate)(mln‑9708)；delanzomib(cep‑18770)；和o‑甲基‑n‑[(2‑甲基‑5‑噻唑基)羰基]‑l‑丝氨酸‑o‑甲基‑n‑[(1s)‑2‑[(2r)‑2‑甲基‑2‑环氧乙烷基]‑2‑氧代‑1‑(苯基甲基)乙基]‑l‑丝氨酰胺(onx‑0912)。[0137]在各种实施方案中，其他疗法可以以液体剂型、固体剂型、栓剂、可吸入剂型、鼻内剂型，以脂质体制剂、包含纳米颗粒的剂型、包含微粒的剂型、多聚剂型或它们的任何组合施用。在某些实施方案中，其他疗法可以经约1周至约2周、约2周至约3周、约3周至约4周、约4周至约5周、约6周至约7周、约7周至约8周、约8周至约9周、约9周至约10周、约10周至约11周，约11周至约12周、约12周至约24周、约24周至约48周、约48周或约52周或更长的时间段施用。在某些情况下，其他疗法的施用频率可以是每天一次、每天两次、每周一次、每三周一次、每四周一次(或每月一次)、每八周一次(或每两个月一次)、每十二周一次(或每三个月一次)，或每二十四周一次(每六个月一次)。[0138]在一些实施方案中，其他疗法可以包括疫苗、集落刺激剂、干扰素、白细胞介素、病毒、抗血管生成剂、抗原、共刺激剂、免疫原性剂、免疫调节剂或免疫治疗剂。[0139]vi.药物组合物[0140]本文描述的组合物包括含有一种或更多种本文描述重组微生物的药物组合物。在一些实施方案中，本文的药物组合物可以是单位剂量形式。药物组合物可以制备成在甘油、液体聚乙二醇以及其任何组合中，在油中，在固体剂型中的溶液、分散体；制备成可吸入剂型、鼻内剂型、脂质体制剂、包含纳米颗粒的剂型、包含微粒的剂型、多聚剂型或它们的任何组合。在一些实施方案中，药物组合物包含增溶剂，诸如无菌水、tris缓冲剂。[0141]在一些实施方案中，药物组合物包含赋形剂。示例性赋形剂在本领域中是已知的，例如，如美国药物协会(1986)的handbookofpharmaceuticalexcipients中所描述的。赋形剂的实例包括但不限于缓冲剂、防腐剂、稳定剂、粘合剂、压缩剂、润滑剂、螯合剂、分散增强剂、崩解剂、调味剂、甜味剂和着色剂。[0142]在一些实施方案中，赋形剂可以是缓冲剂。缓冲剂的非限制性实例可以包括柠檬酸钠、碳酸镁、碳酸氢镁、碳酸钙和碳酸氢钙。作为缓冲剂，碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化镁、乳酸镁、葡糖酸镁、氢氧化铝、柠檬酸钠、酒石酸钠、乙酸钠、碳酸钠、多磷酸钠、多磷酸钾、焦磷酸钠、焦磷酸钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸三钠、磷酸三钾、偏磷酸钾、氧化镁、氢氧化镁、碳酸镁、硅酸镁、醋酸钙、甘油磷酸钙、氯化钙、氢氧化钙和其他钙盐或它们的组合可以用于药物制剂中。[0143]在一些实施方案中，赋形剂可以包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例可以包括抗氧化剂，诸如α‑生育酚和抗坏血酸盐，以及抗微生物剂，诸如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇和苯酚。抗氧化剂还可以包括但不限于edta、柠檬酸、抗坏血酸、丁基羟基甲苯(bht)、丁基羟基茴香醚(bha)、亚硫酸钠、对氨基苯甲酸、谷胱甘肽、没食子酸丙酯、半胱氨酸、甲硫氨酸、乙醇和n‑乙酰半胱氨酸。在一些情况下，防腐剂包括井冈霉素a、tl‑3、原钒酸钠、氟化钠、n‑a‑甲苯磺酰‑苯丙氨酸‑氯甲基酮(n‑a‑tosyl‑phe‑chloromethylketone)、n‑a‑甲苯磺酰‑赖氨酸‑氯甲基酮(n‑a‑tosyl‑lys‑chloromethylketone)、抑肽酶、苯甲基磺酰氟、二异丙基氟磷酸、激酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、颗粒酶抑制剂、细胞黏附抑制剂、细胞分裂抑制剂、细胞周期抑制剂、脂质信号传导抑制剂、蛋白酶抑制剂、还原剂、烷化剂、抗微生物剂、氧化酶抑制剂或其他抑制剂。[0144]在一些实施方案中，药物组合物可以包含作为赋形剂的粘合剂。粘合剂的非限制性实例可以包括淀粉、预糊化淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚丙烯酰胺、聚乙烯基噁唑烷酮(polyvinyloxoazolidone)、聚乙烯醇、c12‑c18脂肪酸醇、聚乙二醇、多元醇、糖、寡糖和它们的组合。药物制剂中使用的粘合剂选自淀粉，诸如马铃薯淀粉、玉米淀粉、小麦淀粉；糖，诸如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖、麦芽糖糊精；天然和合成树胶；明胶；纤维素衍生物，诸如微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)；聚乙二醇(peg)；蜡；碳酸钙；磷酸钙；醇，诸如山梨醇、木糖醇、甘露醇，和水，或它们的组合。[0145]在一些实施方案中，药物组合物可以包含润滑剂作为赋形剂。润滑剂的非限制性实例可以包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、氢化植物油(hydrogenatedvegetableoils)、氢化植物油(sterotex)、聚氧乙烯单硬脂酸酯、滑石、聚乙二醇、苯甲酸钠、月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁和轻质矿物油。用于药物制剂的润滑剂选自金属硬脂酸盐(诸如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸铝)、脂肪酸酯(诸如硬脂酰富马酸钠)、脂肪酸(诸如硬脂酸)、脂肪醇、甘油山嵛酸酯、矿物油、石蜡、氢化植物油、亮氨酸、聚乙二醇(peg)、金属月桂基硫酸盐(诸如月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁)、氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠和滑石，或它们的组合。[0146]在一些实施方案中，药物制剂可以包含分散增强剂作为赋形剂。分散剂的非限制性实例可以包括淀粉、藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、瓜尔胶、高岭土、膨润土、纯化的木质纤维素、羟基乙酸淀粉钠(sodiumstarchglycolate)、isoamorphous硅酸盐和微晶纤维素作为高hlb乳化剂表面活性剂。[0147]在一些实施方案中，药物组合物可以包含作为赋形剂的崩解剂。在一些实施方案中，崩解剂可以是非泡腾崩解剂。非泡腾崩解剂的非限制性实例可以包括淀粉诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、它们的预糊化和改性淀粉，甜味剂，粘土，诸如膨润土，微晶纤维素，藻酸盐，羟基乙酸淀粉钠，树胶诸如琼脂、瓜尔胶、刺槐豆胶、刺梧桐胶、果胶和黄芪胶。在一些实施方案中，崩解剂可以是泡腾崩解剂。合适的泡腾崩解剂的非限制性实例可以包括碳酸氢钠与柠檬酸的组合，以及碳酸氢钠与酒石酸的组合。[0148]在一些实施方案中，药物组合物可以包含螯合剂。在一些实施方案中，螯合剂可以是杀真菌螯合剂。实例可以包括但不限于：乙二胺‑n,n,n’,n’‑四乙酸(edta)；edta的二钠、三钠、四钠、二钾、三钾、二锂和二铵盐；edta的钡、钙、钴、铜、镝、铕、铁、铟、镧、镁、锰、镍、钐、锶或锌螯合物；反式‑1,2‑二氨基环己烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸一水合物；n,n‑二(2‑羟乙基)甘氨酸；1,3‑二氨基‑2‑羟基丙烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸；1,3‑二氨基丙烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸；乙二胺‑n,n’‑二乙酸；乙二胺‑n,n’‑二丙酸二盐酸盐；乙二胺‑n,n’‑二(亚甲基膦酸)半水合物；n‑(2‑羟乙基)乙二胺‑n,n’,n’‑三乙酸；乙二胺‑n,n,n’,n’‑四(亚甲基膦酸)；o,o’‑二(2‑氨基乙基)乙二醇‑n,n,n’,n’‑四乙酸；n,n‑二(2‑羟基苄基)乙二胺‑n,n‑二乙酸；1,6‑六亚甲基二胺‑n,n,n’,n’‑四乙酸；n‑(2‑羟乙基)亚氨基二乙酸；亚氨基二乙酸；1,2‑二氨基丙烷‑n,n,n’,n’‑四乙酸；次氨基三乙酸；次氨基三丙酸；次氨基三(亚甲基磷酸)的三钠盐；7,19,30‑三氧杂‑1,4,10,13,16,22,27,33‑八氮杂二环[11,11,11]三十五烷六氢溴化物；或三亚乙基四胺‑n,n,n’,n”,n”’,n”’‑六乙酸。[0149]本文还考虑了可以包括本文公开的一种或更多种重组微生物和一种或更多种其他抗微生物剂或抗真菌剂的组合产品，所述抗微生物剂或抗真菌剂例如多烯类诸如两性霉素b、两性霉素b脂质复合物(abcd)、脂质体两性霉素b(l‑amb)和脂质体制霉菌素，唑类和三唑类诸如伏立康唑、氟康唑、酮康唑、伊曲康唑、pozaconazole等；葡聚糖合成酶抑制剂诸如卡泊芬净、米卡芬净(fk463)和v‑棘白菌素(ly303366)；灰黄霉素；烯丙胺类，诸如特比萘芬；氟胞嘧啶或其他抗真菌剂，包括本文描述的那些。此外，还考虑了将肽与局部抗真菌剂组合，诸如与环吡酮胺、卤苯炔醚(haloprogin)、托萘酯、十一碳烯酸盐、局部制霉菌素、阿莫罗芬、布替萘芬、萘替芬、特比萘芬和其他局部剂组合。在一些实施方案中，药物组合物包含另外的剂。在一些实施方案中，另外的剂可以以治疗有效量存在于药物组合物中。[0150]在一些实施方案中，本文描述的药物组合物可以包含防腐剂，例如以防止微生物生长。在一些实施方案中，药物组合物可以包含防腐剂。在一些实施方案中，药物组合物不包含防腐剂。适合于可注射使用的药物形式包括无菌水性溶液或分散体以及用于临时制备可注射无菌溶液或分散体的无菌粉末。药物组合物可以包含载体，该载体是包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，和/或植物油，或它们的任何组合的溶剂或分散介质。适当的流动性可以例如通过使用包衣诸如卵磷脂，在分散剂的情况下通过维持要求的粒径，以及通过使用表面活性剂来维持。防止微生物作用可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来产生，所述抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，可优选地包含等渗剂，例如糖或氯化钠。可注射的组合物的延长吸收可以通过使用延迟吸收的剂(例如单硬脂酸铝和明胶)的组合物来产生。[0151]例如，对于以水性溶液的肠胃外施用，如果需要，液体剂型可以被合适地缓冲，并且使液体稀释剂与足够的盐水或葡萄糖等渗。液体剂型特别适用于静脉内、肌肉内、皮下、肿瘤内和腹膜内施用。在这方面，根据本公开内容，可以使用的无菌水性介质是本领域技术人员已知的。例如，一个剂量可以溶解在1ml至20ml的等渗nacl溶液中，并且要么添加到100ml至1000ml的液体(例如碳酸氢钠缓冲盐水)中，要么注射到建议的输注部位。[0152]在某些实施方案中，可注射无菌溶液可以通过将根据本公开内容的经修饰的溶瘤病毒，诸如本文描述的溶瘤痘苗病毒或包含该病毒的药物组合物以所需的量掺入适当的溶剂(所述溶剂按需要具有上文列举的各种其他成分)中，然后过滤灭菌。通常，通过将各种经灭菌的活性成分掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述无菌媒介物包含碱性分散介质和所需的来自上文列举的那些的其他成分。本文公开的组合物可以以中性或盐的形式配制。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白的游离氨基基团形成的酸加成盐)，并且其是用无机酸诸如例如盐酸或磷酸，或用有机酸诸如乙酸、草酸、酒石酸或扁桃酸等形成的酸加成盐。用游离羧基基团形成的盐还可以来源于无机碱，诸如例如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物；和有机碱，诸如异丙胺、三甲胺、组氨酸或普鲁卡因等。在配制后，药物组合物可以以与剂量制剂相容的方式且以诸如治疗有效的量进行施用。[0153]在某些实施方案中，本公开的药物组合物可以包含有效量的本文公开的经修饰的病毒，与药学上可接受的载体组合。本文所用的“药学上可接受的”包括不干扰活性成分的生物活性的有效性和/或对其所施用的患者无毒的任何载体。合适的药物载体的非限制性实例可以包括磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液，诸如油/水乳液，各种类型的润湿剂和无菌溶液。药学上相容的载体的另外的非限制性实例包括凝胶、生物可吸收的基质材料、包含经修饰的溶瘤病毒的植入元件或任何其他合适的媒介物、递送或分散工具或材料。这样的载体可以通过常规方法配制，并以有效量向受试者施用。[0154]vii.药盒[0155]本文提供了一种药盒，所述药盒包含本文描述的初免组合物、一种或更多种加强组合物，或者初免组合物和一种或更多种加强组合物。在一些实施方案中，药盒可以包含用于初免施用的重组微生物组合物。在一些实施方案中，药盒可以包含用于一次或更多次加强施用的一种或更多种重组微生物组合物。在一些实施方案中，药盒可以包含用于初免施用的重组微生物组合物和用于一次或更多次加强施用的一种或更多种重组微生物组合物。[0156]在某些实施方案中，药盒可以包括含有用于初免施用的重组微生物组合物的一个或更多个容器。在某些实施方案中，药盒可以包括含有用于加强施用的重组微生物组合物的一个或更多个容器。在某些实施方案中，药盒可以包括含有用于初免施用的重组微生物组合物的一个或多个容器和含有用于一次或更多次加强施用的重组微生物组合物的一个或更多个容器。[0157]在一些实施方案中，药盒包括使用说明、用于向受试者施用重组微生物组合物的装置，或用于向受试者施用另外的剂或化合物的装置。在一些实施方案中，说明书可以包括对以下的描述：经修饰的重组微生物和任选地药盒中包括的其他组分，以及施用方法，包括用于确定受试者的合适状态的方法、用于施用重组微生物的合适剂量和合适施用方法。说明还可以包括在治疗时间持续期间对受试者进行监测的指南。在一些实施方案中，药盒可以包含一种或更多种剂，例如，与本文描述的重组微生物组合物组合施用的抗癌剂、免疫调节剂或它们的任何组合中的至少一种。[0158]在一些实施方案中，药盒包括用于向受试者施用重组微生物组合物的装置。本文提供的药盒中包括用于施用药物和药物组合物的本领域已知的各种装置中的任何一种。例如，但不作为限制，这样的装置包括皮下注射针、静脉内注射针、导管、无针注射装置、吸入器和液体分配器，诸如滴眼器。在某些实施方案中，通过例如静脉内注射、肿瘤内注射、腹膜内注射进行全身递送的重组微生物包含在具有皮下注射针和注射器的药盒中。实施例[0159]以下实施例进一步说明了所述的实施方案，而不限制本公开内容的范围。[0160]实施例1：小鼠肾腺癌肿瘤模型中沙门氏菌属细菌或痘苗病毒的异源初免‑加强方案[0161]如以下使用具有renca肿瘤的balb/c小鼠研究了异源初免加强方案。该方案使用具有tk缺失的肿瘤选择性痘苗病毒毒株以及减毒营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌菌株，通过以次优剂量对小鼠进行肿瘤内注射来给予。用1x105个renca细胞对小鼠进行皮下注射，并且在肿瘤达到50‑100mm3后开始治疗。将小鼠分配到表1所示的四个组中的一个组。[0162]表1：用沙门氏菌或痘苗病毒给药的renca‑肿瘤小鼠的治疗组[0163]组组名初免‑加强方案1对照(媒介物)‑2wr.tk‑痘苗病毒(第1天)3沙门氏菌 tk‑沙门氏菌(第1天)；痘苗病毒(第7天)4tk‑ 沙门氏菌痘苗病毒(第1天)；沙门氏菌(第7天)[0164]如图1所示，与对照和单一剂施用相比，评价了两种初免加强方案的治疗活性。第一组balb/c小鼠为对照组。第二组balb/c小鼠在第一天被注射单一剂痘苗病毒(wr.tk‑)。第三组小鼠在第1天被注射营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌株(初免)并且在第7天被施用痘苗病毒(wr.tk‑)(加强)。第四组小鼠在第1天被注射痘苗病毒(wr.tk‑)(初免)并且在第7天被施用营养缺陷型(aroa突变体)鼠伤寒沙门氏菌株(加强)。然后在治疗后第14天评价各组的肿瘤体积，并且结果显示在图1中。[0165]图1中示出的结果显示，在沙门氏菌作为初免而给予并且痘苗病毒作为加强而给予的第三组中，治疗活性增强。然而，当以相反的顺序施用相同的重组微生物时，治疗活性降低(如第四组所示)。因此，这些结果表明，增强的治疗活性并不完全是由于加性效应。[0166]实施例2：小鼠renca肿瘤模型中痘苗病毒或单纯疱疹病毒(hsv)或水疱性口炎病毒(vsv)的异源初免‑加强方案[0167]与单一剂施用相比，测试了异源初免加强方案的治疗效果。每组均使用具有renca肿瘤(50‑100mm3)的balb/c小鼠。[0168]用具有tk缺失的肿瘤选择性痘苗病毒毒株(标记为wo0001)、具有γ34.5和icp6基因缺失的单纯疱疹病毒株、水疱性口炎病毒(vsv)mδ51毒株或对照(vfb)对小鼠进行肿瘤内给药。将小鼠分配到表2所示的六个组中的一个组。[0169]表2：用痘苗病毒、单纯疱疹病毒(hsv)或水疱性口炎病毒(vsv)给药的renca‑肿瘤小鼠的治疗组[0170]组组名初免‑加强方案1对照(vfb)‑2wo0001痘苗病毒(第1天)3hsv wo0001痘苗病毒(第1天)；hsv(第7天)4vsv wo0001痘苗病毒(第1天)；vsv(第7天)5仅hsvhsv(第1天)6仅vsvvsv(第一天)[0171]如图2a和图2b所示，与对照和三种单一剂施用相比，评价了两种异源初免加强组合的治疗活性。第一组balb/c小鼠作为对照。第二组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射单一剂痘苗病毒(wr.tk‑)。第三组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射痘苗病毒(wr.tk‑)毒株，并且在第7天以约3×106pfu/小鼠的剂量注射单纯疱疹病毒(γ34.5和icp6缺失)毒株。第四组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射痘苗病毒(wr.tk‑)毒株，并且在第7天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射水疱性口炎病毒(mδ51)毒株。第五组在第1天以约3×106pfu/小鼠的剂量注射单一剂单纯疱疹病毒(γ34.5和icp6缺失)毒株。第六组balb/c小鼠在第1天以约1×107pfu/小鼠的剂量注射单一剂水疱性口炎病毒(mδ51)毒株。然后在治疗后第18天(并且结果显示在图2a中)和治疗后第21天(并且结果显示在图2b中)对各组的肿瘤体积进行评价(注意，在第21天，肿瘤负荷>1400mm3或先前因肿瘤负荷>1400mm3而被处死的小鼠记录为肿瘤负荷1400mm3)。[0172]图2a和图2b所示的结果展示了协同治疗活性仅在第三组和第四组的初免‑加强方案中观察到，在第三组和第四组中痘苗病毒作为初免而给予并且hsv或vsv毒株作为加强而给予。[0173]表3：序列[0174][0175]当前第1页12当前第1页12
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