一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其生产方法与流程

技术特征：
1.一种猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗的生产方法，其包括向悬浮培养的bhk
‑
21细胞中接种猪伪狂犬毒株js
‑
2012株的ge基因缺失毒株js
‑
2012δge种毒获得病毒液，和对获得的病毒液进行澄清、先灭活后浓缩纯化以及乳化配苗处理生产获得猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗；其中所述灭活处理中采用bei作为灭活剂。2.根据权利要求1所述的生产方法，其中所述灭活处理的具体操作为：向经澄清的病毒液中加入bei，使bei的终浓度为0.002～0.004mol/l，待温度升至30～35℃时开始计时，灭活24～35小时，期间每隔60～120分钟搅拌一次，计时结束后，使用终浓度为2％～4％的硫代硫酸钠阻断灭活。3.根据权利要求1或2所述的生产方法，其中所述js
‑
2012δge种毒的获得方式为：在bhk
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21悬浮细胞中连续悬浮培养毒株js
‑
2012δge至传代12代次以上获得；其中所述培养的条件为：在36.5℃
±
0.5℃，ph值6.5～7.5，搅拌转速80rpm～150rpm，溶解氧浓度30％～60％下培养至细胞活率小于50％或培养48～60小时。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的生产方法，其中所述悬浮培养的bhk
‑
21细胞的密度为1.8～3.0
×
106个/ml。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的生产方法，其中所述获得病毒液的具体操作为：按体积百分比为0.5％～1％向悬浮培养的bhk
‑
21细胞中接种js
‑
2012δge种毒，在36.5℃
±
0.5℃，ph值6.5～7.5，搅拌转速80rpm～150rpm，溶解氧浓度30％～60％下悬浮培养，待细胞活率小于50％时或培养48～60小时收获病毒液。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的生产方法，其中对病毒液进行澄清、先灭活后浓缩纯化以及乳化配苗处理的具体操作为：澄清：将获得的病毒液用已灭菌澄清过滤器(0.45μm)预处理病毒液或用连续流离心机离心，获得病毒澄清液；灭活：向病毒澄清液中加入bei作为灭活剂，使bei的终浓度为0.002～0.004mol/l，待温度升至30～35℃时开始计时，灭活24～35小时，期间每隔60～120分钟搅拌一次，计时结束后，使用终浓度为2％～4％的硫代硫酸钠阻断灭活，获得灭活病毒液；浓缩纯化：用450kd～550kd的中空纤维柱或膜包系统将灭活病毒液进行5～10倍浓缩，再用等体积pbs进行洗滤，取浓缩并洗滤后的病毒液，加入体积浓度为9％～13％的peg6000后于3～5℃振荡2～6h后静置过夜，经高速冷冻离心(4℃，6000～10000r/min离心20～40min)后，弃掉离心上清，将沉淀用pbs(ph为7.2～7.4，浓度为0.04mol/l)按浓缩后体积重悬，获得配苗用病毒抗原液；乳化配苗：将配苗用病毒抗原液作为水相，加入油相中进行混合乳化操作，分装获得猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗。7.根据权利要求6所述的产方法，其中在乳化配苗步骤中，所述油相为isa201佐剂，所述油相和水相按照质量比为1:1或者按照体积比为54:46的比例配比。8.一种猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其由权利要求1
‑
7中任一项所述的生产方法获得，配苗用病毒抗原液中病毒含量为10
7.0
tcid
50
/0.1ml以上，所述猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗在2～8℃条件下的保存期为18个月以上。9.根据权利要求8所述的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，其使用的疫苗株为毒株js
‑
2012δge。
10.根据权利要求8或9所述的猪伪狂犬ge基因缺失灭活疫苗，制苗中使用的灭活剂为bei。

技术总结
本发明公开一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其生产方法，属于疫苗生产技术领域。本发明提供的生产方法包括猪伪狂犬gE基因缺失病毒悬浮培养、病毒抗原液澄清、灭活后浓缩纯化和乳化配苗步骤，该方法能够实现猪伪狂犬gE基因缺失病毒大量增殖，提高病毒抗原含量和产量，且有效对病毒液进行灭活处理并降低配苗用抗原液中的杂蛋白含量，各步骤协作可以共同提高疫苗的稳定性、安全性和免疫效力，可以为猪伪狂犬病疫情的防控提供一种安全且免疫效力更强的疫苗产品。更强的疫苗产品。更强的疫苗产品。


技术研发人员：李超 宋庆庆 赵丽霞 陈坚 王岩 闫聪 杨波 刘东霞 田志辉 李晓艳 俎红丽 王玉雯
受保护的技术使用者：金宇保灵生物药品有限公司
技术研发日：2021.08.03
技术公布日：2021/11/14