siponimod在制备抗肿瘤转移药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及siponimod在制备抗肿瘤转移药物中的应用。


背景技术：

2.癌症是恶性肿瘤中最常见的一类，具有细胞分化和增殖异常、生长失去控制、浸润性和转移性等生物学特征，其发生是一个多因子、多步骤的复杂过程，分为致癌、促癌、演进三个过程，与吸烟、感染、职业暴露、环境污染、不合理膳食、遗传因素等密切相关。结肠直肠癌(carcinoma of colon and rectum)是一种胃肠道中常见的恶性肿瘤，早期症状不明显，随着癌肿的增大而表现排便习惯改变、便血、腹泻、腹泻与便秘交替、局部腹痛等症状，晚期则表现贫血、体重减轻等全身症状。其发病率和病死率在消化系统恶性肿瘤中仅次于胃癌、食管癌和原发性肝癌。目前对肠癌的治疗局限于放疗、化疗等。虽然放化疗可以抑制大部分的癌细胞，但是在杀死癌细胞的同时也会将正常细胞杀死，还能导致胃肠功能紊乱、骨髓抑制等毒副作用，大大降低了患者的生存质量并且长期化疗，且恶性肿瘤细胞容易产生耐药性。而治疗癌症的药物大部分价格高昂，也限制了药物的应用。因此，寻找到一种毒副作用小，药效好、价格低的安全性抗癌药迫在眉睫。
3.siponimod(西尼莫德，代号为baf312)，化学名为1
‑
[[4
‑
[(1e)
‑1‑
[[[4
‑
环己基
‑3‑
(三氟甲基)苯基]甲氧基]亚氨基]乙基]
‑2‑
乙苯基]甲基]
‑3‑
氮杂环丁烷基羧酸，是新一代选择性磷酸鞘氨醇
‑
1(sphingosine 1
‑
phosphate,s1p)受体
‑
1调节药。s1p
‑
1受体存在于cns(自身免疫性中枢神经系统)特定细胞的表面，驱动ms(multiple sclerosis,多发性硬化症)患者cns功能损伤。西尼莫德透过血脑屏障，进入ms患者的脑部和cns，与s1p受体(s1p1和s1p5受体)结合，促进髓鞘再生，防止活化有害细胞，延迟患者残疾进展和保留认知功能。此前，瑞士诺华公司(novartis)宣布baf312(每日口服一次)已在iii期临床研究中获得成功，该研究在继发进展型多发性硬化(spms)患者中开展，数据显示，与安慰剂相比，baf312显著降低了残疾进展风险(3个月确证残疾进展风险)，显示出了较好的效果。且baf312毒副作用小，价格较为便宜。
[0004]
专利us7939519和cn1791395b分别为诺华公司针对siponimod化合物及其组合物申请的专利。专利wo 2012/093161a1和wo 2015/155711 a1中公开了含有西普尼莫德的片剂，wo 2007/021666 a2涉及s1p受体激动剂的口服液，专利cn111107837a则公开了一种包含siponimod的肠胃外制剂，均可用于治疗例如多发性硬化症(ms)等自身免疫性疾病及神经退行性疾病等。
[0005]
但尚未有研究表明siponimod与癌细胞的转移有关。


技术实现要素：

[0006]
针对上述不足，本发明提供了一种siponimod在制备抗肿瘤转移药物中的应用。本发明通过实验研究，首次发现siponimod可抑制癌细胞的转移，提供了一种siponimod的新应用，同时为癌症的辅助治疗提供了一种新的思路与方法。
[0007]
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
[0008]
一方面，本发明提供了siponimod在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
[0009]
具体地，所述的siponimod的浓度为2.5
‑
5μm。
[0010]
具体地，所述的肿瘤包括但不限于肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、食管癌或原发性肝癌，优选为结肠直肠癌。
[0011]
另一方面，本发明提供了一种抗肿瘤转移药物，所述的抗肿瘤转移药物包括siponimod。
[0012]
具体地，所述的siponimod的浓度为2.5
‑
5μm。
[0013]
具体地，所述的抗肿瘤转移药物还包括药学上可接受的载体，所述的载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂中的任意一种或多种。
[0014]
具体地，所述的抗肿瘤转移药物为外用制剂、口服制剂或注射制剂中的任意一种。
[0015]
进一步具体地，所述的外用制剂为喷雾剂或气雾剂。
[0016]
进一步具体地，所述的口服制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂或囊泡剂中的任意一种。
[0017]
进一步具体地，所述的注射制剂采用皮内、皮下、肌内、局部或静脉内注射作为给药方式。
[0018]
具体地，所述的肿瘤包括但不限于肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、食管癌或原发性肝癌，优选为结肠直肠癌。
[0019]
又一方面，本发明提供了siponimod联合奥沙利铂在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
[0020]
具体地，所述的siponimod的浓度为2.5μm，所述的奥沙利铂的浓度为5μm。
[0021]
具体地，所述的肿瘤包括但不限于肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、食管癌或原发性肝癌，优选为结肠直肠癌。
[0022]
又一方面，本发明提供了一种抗肿瘤转移药物，所述的抗肿瘤转移药物包括siponimod和奥沙利铂。
[0023]
具体地，所述的siponimod的浓度为2.5μm，所述的奥沙利铂的浓度为5μm。
[0024]
具体地，所述的抗肿瘤转移药物还包括药学上可接受的载体，所述的载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂中的任意一种或多种。
[0025]
具体地，所述的肿瘤包括但不限于肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、食管癌或原发性肝癌，优选为结肠直肠癌。
[0026]
与现有技术相比，本发明的积极和有益效果在于：
[0027]
本发明首次发现siponimod可用于抑制肠癌细胞的侵袭和转移，siponimod安全性高，开发利用的前景好，价格便宜。同时，本发明还发现siponimod可以增加肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性，两者联用可以达到更好的抑制肠癌转移的效果。本发明既提供了一种siponimod的新应用，同时为癌症的辅助治疗提供了一种新的思路与方法。
附图说明
[0028]
图1为siponimod体外抑制肿瘤细胞的侵袭检测结果图。
[0029]
图2为siponimod体内抑制肿瘤细胞的转移检测结果图。
[0030]
图3为siponimod和奥沙利铂联合用药抑制肿瘤细胞的侵袭检测结果图。
具体实施方式
[0031]
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0032]
实施例中未注明具体技术或条件者，均按照本领域内的文献所描述的技术或条件(如参考j.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。
[0033]
本发明采用spss 19.0统计学软件，计量资料使用表示，采用单因素方差分析及t检验进行统计学分析。
[0034]
1.实验所用试剂或材料
[0035]
(1)人结肠癌细胞hct116/rko：购自atcc(rockville,md)。
[0036]
(2)baf312(siponimod)/奥沙利铂：selleck chemicals(huston,tx)。
[0037]
(3)ncg小鼠：购自于江苏集萃药康，饲养于暨南大学动物管理中心。
[0038]
实施例1.siponimod体外抑制肿瘤细胞的侵袭
[0039]
将hct116和rko细胞以密度为60％接种于孔板中，置于37℃、5％co2培养箱中培养过夜。分别用不同浓度的baf312(siponimod)(加药浓度为2.5μm、5μm)，处理24h后，进行transwell实验检测细胞侵袭的能力。
[0040]
同时进一步检测细胞的增殖能力。将细胞以3000个/每孔的密度铺入96孔板中；细胞贴壁后用不同浓度的baf312(siponimod)(加药浓度为2.5μm、5μm)处理24h；移除96孔板中培养基，用pbs清洗两遍，加入含10％wst
‑
1(购自碧云天/beyotimebiotechnology,shanghai,china)的培养基37℃放置2h；用酶标仪测定在450nm波长处的吸光度，计算细胞增殖抑制率。
[0041]
检测结果如图1所示。
[0042]
根据图1结果可知，siponimod在24h内对肠癌细胞增殖抑制效果并不显著，但可明显抑制肿瘤细胞的侵袭。
[0043]
实施例2.siponimod体内抑制肿瘤细胞的转移
[0044]
选取12只6周龄、雌性小鼠(ncg)，对照组6只和实验组6只，构建肿瘤转移模型，为尾静脉注射hct116
‑
luc细胞后进行灌胃给药用来检测药物在体内对癌细胞转移的影响。
[0045]
具体实验步骤如下：
[0046]
a.扩大培养细胞hct116
‑
luc；
[0047]
b.用胰酶消化细胞并进行细胞计数，按每只小鼠静脉注射量为105个细胞，取对应量的细胞数，用pbs清洗2遍；
[0048]
c.按每只小鼠注射100μl的细胞悬液用相应体积的pbs重悬细胞沉淀，对小鼠进行尾静脉注射；
[0049]
d.2周后将小鼠随机分为对照组(药物溶剂)与实验组(siponimod)，以灌胃方式进
行给药，实验组每周2次灌胃给药siponimod(10mg/kg)，对照组每周2次灌胃给予相同剂量药物溶剂。给药4周。
[0050]
e.1个月后对小鼠进行动物活体成像观察小鼠转移情况。
[0051]
检测结果如图2所示，体内实验表明siponimod能够明显抑制肿瘤细胞的转移。
[0052]
实施例3.siponimod和奥沙利铂联合用药检测
[0053]
将hct116和rko细胞以密度为60％接种于孔板中，置于37℃、5％co2培养箱中培养过夜。分为对照组(dmso)和baf312(siponimod)加药组(加药浓度为2.5μm)，奥沙利铂加药组(加药浓度为5μm)，baf312(siponimod) 奥沙利铂联合用药组(其中，siponimod加药浓度为2.5μm，奥沙利铂加药浓度为5μm)，加药处理24h后，进行transwell实验检测细胞侵袭的能力。检测结果如图3所示。
[0054]
根据图3结果可知，siponimod可以增加肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性，两者联用可以达到更好的抑制肠癌转移的效果。
[0055]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。