一种利用β-谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法与流程

技术特征：
1.一种利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：将mac
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t细胞接种在含生长培养基的培养皿中，于37℃细胞培养箱中培养；步骤2：将mac
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t细胞进行分化诱导三天，同时加入不同浓度β
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谷甾醇，三天后提取收集rna及蛋白；步骤3：通过qpcr、western blot方法检测β
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谷甾醇对乳腺上皮细胞β
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酪蛋白、信号通路pi3k/akt/mtor、jak2
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stat5以及乳脂合成相关酶的调控作用；步骤4：通过qpcr、western blot方法初步探讨β
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谷甾醇对乳腺上皮细胞泌乳功能的调控机理。2.根据权利要求1所述的利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，在步骤1中，奶牛乳腺上皮细胞的培养具体步骤为：将mac
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t细胞置于生长培养基中进行培养，生长培养基为dmem，10�s，5μg/ml胰岛素，1μg/ml氢化可的松，1%青霉素
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链霉素，传代2
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3次后，将mac
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t细胞接种于含有2ml分化培养基的六孔板中进行分化诱导3天，分化培养基为dmem，10�s，5μg/ml胰岛素，1μg/ml 氢化可的松，5μg/ml催乳素，1%青霉素
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链霉素，同时加入不同浓度β
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谷甾醇进行培养，β
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谷甾醇的浓度分别为0.01μm、0.1μm、1μm、5μm、10μm、20μm、30μm、40μm。3.根据权利要求2所述的利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，在步骤2中，所述含有分化培养基的六孔板，进行如下分组处理：处理组：吸弃培养液，用pbs清洗后加入含不同浓度β
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谷甾醇的分化培养液，置于37℃细胞培养箱中培养3天；对照组：吸弃培养液, 用pbs清洗后加入分化培养液，置于37℃细胞培养箱中培养3天；将各组培养3d后收集奶牛乳腺上皮细胞，提取rna以及蛋白，利用qpcr、western blot检测β
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酪蛋白的表达。4.根据权利要求3所述的利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，在步骤3中，β
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谷甾醇对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成相关通路的影响包括：mac
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t细胞泌乳信号通路jak2
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stat5的qpcr及western blot检测和mac
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t细胞泌乳信号通路pi3k/akt1/mtor的qpcr及western blot检测的方法均为将细胞接种于六孔板，分为5组，分别为对照组、β
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谷甾醇药物组，处理3d，β
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谷甾醇药物组的浓度分别选取0.1μm、1μm、10μm、30μm。5.根据权利要求1
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4任一项所述的利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，在步骤4中，β
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谷甾醇对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成相关细胞因子的影响包括：mac
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t细胞乳脂合成相关细胞因子的qpcr检测和western blot检测的方法均为将细胞接种于六孔板，分为5组，分别为对照组、β
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谷甾醇药物组，处理3d，β
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谷甾醇药物组的浓度分别选取0.1μm、1μm、10μm、30μm。6.根据权利要求5所述的利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，在步骤4中，β
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谷甾醇对乳蛋白相关基因表达的影响包括：β
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谷甾醇调控gh
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igf1轴激活jak2
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stat5从而影响乳蛋白相关基因表达，检测方法为将细胞接种于六孔板，分为5组，分别为对照组、β
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谷甾醇药物组，处理3d，β
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谷甾醇药物组
的浓度分别选取0.1μm、1μm、10μm、30μm。7.根据权利要求6所述的利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，在步骤4中，β
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谷甾醇对乳脂肪合成相关因子表达的影响包括：β
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谷甾醇作用于hif
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1a、上调其下游靶基因epo表达，继而促进mtor信号通路表达影响乳脂肪合成相关因子表达，检测方法为将细胞接种于六孔板，分为5组，分别为对照组、β
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谷甾醇药物组，处理3d，β
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谷甾醇药物组的浓度分别选取0.1μm、1μm、10μm、30μm。8.根据权利要求7所述的利用β
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谷甾醇调节牛乳腺合成乳蛋白和乳脂的方法，其特征在于，在步骤4中，β
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谷甾醇对乳脂乳蛋白合成的影响包括：β
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谷甾醇通过抑制socs从而调控细胞因子影响乳脂乳蛋白合成，检测方法为将细胞接种于六孔板，分为5组，分别为对照组、β
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谷甾醇药物组，处理3d，β
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谷甾醇药物组的浓度分别选取0.1μm、1μm、10μm、30μm。

技术总结
本发明涉及奶牛乳腺上皮细胞中乳蛋白和乳脂合成的技术领域，具体是一种利用β


技术研发人员：金永成 刘馨璐 沈景林 宗金鑫 刘浃怡
受保护的技术使用者：吉林大学
技术研发日：2021.07.19
技术公布日：2021/11/14