一种水柏枝蒙药材的质量检测方法与流程

技术特征：
1.一种水柏枝蒙药材的质量检测方法，包含取水柏枝药材样品，经性状鉴别、显微鉴别、理化检测、没食子酸定性检测、没食子酸含量测定、水分和灰分检查、浸出物检查、重金属检查步骤完成鉴别，其特征在于：所述的显微鉴别包括粉末纤维鉴别和茎横切显微鉴别中的至少一种；a.粉末显微鉴别：将水柏枝药材样品制成粒径250～270μm的粉末，取粉末置于载玻片上，滴加甘油醋酸试液或水合氯醛试液，盖上盖玻片，加热透化，在显微镜下观察；符合以下特征的样本是水柏枝蒙药材：表皮细胞呈不规则状，壁厚内陷，与细胞接触位置凸起；非腺毛，多为单细胞，内含不均匀分枝状腺，成丝状，壁稍厚，具有壁疣；导管多为具缘纹孔导管，宽铁链条状，螺纹状，少见网纹导管和螺纹导管；韧皮纤维，散在或成束，多碎断，不木化；薄壁细胞，不规则多边形，有时周围盾圆，壁稍厚鲜亮；木纤维成束存在；b.茎横切显微鉴别：a软化：将水柏枝样品的茎放入水中浸泡4～5天，使其变软，优选地，可用温水加快速度，需要每天换水；b固定：将软化好的水柏枝茎切成2～3mm的小段，浸泡于faa固定液12h以上；所述faa固定液为浓度65～75％乙醇15～20重量份，加入冰醋酸和甲醛各1重量份；c脱水：将水柏枝茎小段从固定液中取出，用流水冲洗24h以上，从45～55％浓度的乙醇开始进行浸泡1～2h进行级次脱水，即，首次为从45～55％浓度的乙醇中进行浸泡1～2h，之后每次将乙醇的浓度提升8～10度，直至达到无水乙醇，每次时间为1～2h，如不能及时进行各级脱水的，从固定液中取出水柏枝茎小段放在70％乙醇中保存；d透明：先经1重量份二甲苯兑1.8～2.2重量份乙醇的混合液浸渍0.4～0.6h，再依次转入1重量份二甲苯兑1重量份乙醇的混合液1.8～2.2重量份二甲苯兑1重量份乙醇的混合液中浸渍0.4～0.6h，最后转入纯二甲苯中浸渍0.4～0.6h；e浸蜡：把组织材料块放入熔化的石蜡液中浸渍2～3次，每次0.5～1.5h，放置8～15h，浸蜡时温度控制在高于石蜡熔点2～5℃；f包埋、切片、贴片、烤片处理；g染色：取已经干燥的切片，放于盛有二甲苯的染缸内脱蜡6～10min，脱完蜡后的切片可依次用纯乙醇1重量份与二甲苯0.8～1.2重量份的混合液，纯乙醇，浓度94～96％乙醇溶液、78～82％乙醇溶液、68～72％乙醇溶液分别洗4～6min，之后进行番红染液染色3～5h，水洗2～4s，之后依次用30～40％乙醇、45～55％乙醇、65～75％乙醇、75～85％乙醇、90％以上乙醇洗1.5～3min，固绿染色4～6s，染色后的切片用纯乙醇洗2～3次，每次10～20s，再用纯乙醇1重量份与二甲苯0.8～1.2重量份比例的混合液洗4～6min，纯二甲苯洗8～12min，洗去多余染料；h封片：擦去材料周围多余液体，在洁净盖玻片上滴加1～2ml中性树胶，再将洁净盖玻片倾斜放下，以免出现气泡，封片后即制成永久性玻片标本，在显微镜下观察，以确定水柏枝蒙药材的真伪和品质；所述的水分、灰分检查为：水分检查方法按照2020年版《中国药典》(四部)通则0832(烘干法)测定，不得超过8.49％，所述总灰分和酸不溶灰分检查方法按照2020年版《中国药典》(四部)通则2302测定，总灰分不得超过4.94％，样品中酸不溶灰分含量不得超过0.50％；
所述的浸出物检查为：按照2020年版《中国药典》(四部)通则2201，采用50％乙醇为溶剂以热浸法测定，样品中浸出物不得低于14.11％；所述的重金属检查为：按照2020年版《中国药典》(四部)通则2321第一法原子吸收分光光度法和第二法电感耦合等离子体质谱法测定重金属铅、镉、砷、汞、铜含量，铅不得过5mg/kg；镉不得过0.3mg/kg；砷不得过2mg/kg；汞不得过0.2mg/kg；铜不得过20mg/kg；水柏枝药材的质量达到以上标准时，水柏枝样本为合格的药材。2.根据权利要求1所述的水柏枝蒙药材的质量检测方法，其特征在于,所述的没食子酸定性检测为：a.供试品溶液制备：取本品粉末过30目筛将水柏枝药材样品制成350～800μm的粉末，按重量取0.4～0.6g药材，加入10～30ml水，加热80～100℃回流提取3～5h，冷却至常温，过滤，即得；b.对照品溶液制备：取没食子酸对照品适量，精密称定，加入甲醇制成质量浓度分别为2.0～2.5mg/ml的单一成分对照品贮备液，即得；c.没食子酸薄层色谱定性鉴别：按照2020年版《中国药典》(四部)tlc法(通则0502)实验操作要求，分别吸取各单一成分对照品贮备液5μl和供试品溶液10μl，点于同一硅胶g薄层板上，在常温下饱和后展开，取出，晾干，检视，展开剂为氯仿：乙酸乙酯：甲酸(5:4:1，v/v/v)，喷3％三氯化铁溶液显色后，105℃加热，日光灯下检视；供试品与各对照品在相应的位置上，显相同颜色的斑点，薄层展开斑点清晰，证明样品中含有没食子酸成分。3.根据权利要求1或2所述的水柏枝蒙药材的质量检测方法，其特征在于：所述的没食子酸含量测定为：a.色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为210nmnm，柱温为28～32℃，进样体积4～6μl，流动相:以乙腈(a)－(0.1～0.2)％磷酸水溶液(b)为流动相，梯度洗脱(0～10min，10％
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8％a)，流速为0.8～1ml/min；在该色谱条件下，理论塔板数按没食子酸计算不低于6000，各峰与相邻峰的分离度均大于1.3，各成分测定不受其他组分的干扰；b.对照品溶液制备：分别取没食子酸和对照品，精密称定，加入甲醇制成质量浓度分别为2.0～2.5mg/ml的单一成分对照品贮备液，取没食子酸对照品贮备液适量用甲醇逐步稀释至刻度，混匀，制备成4～8个系列对照品溶液，备用；c.供试品溶液制备：取颗粒度350～800μm的水柏枝样品0.3～0.8g，精密称定质量，置于250ml圆底烧瓶中，加水15～30ml，加热回流提取3～5h，取出，冷却至常温，再次称质量，用水补足减失的质量，先后以滤纸、0.4～0.5μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；d.阴性对照溶液制备：取水15～30ml，置于250ml圆底烧瓶中，按c步骤所述制备供试品方法制备得阴性对照溶液；e.测定：分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各4～6μl，注入液相色谱仪，注入，即得；样品中没食子酸c7h6o5不得少于2.23mg/g。

技术总结
本发明属于药材检测领域，具体是一种水柏枝蒙药材的质量检测方法，包括：(1)性状鉴别；(2)显微鉴别：粉末显微鉴别和茎横切显微鉴别；(3)理化检测：采用乙醇和三氯化铁试液检识酚酸类化合物；(4)没食子酸定性检测；(5)高效液相色谱法测定没食子酸定量；(6)水分、灰分检查：按照2020年《中国药典》(四部)通则0832和2302测定水分和灰分；(7)浸出物检查：按照2020年《中国药典》(四部)通则2201测定浸出物；(8)重金属检查：按照2020年《中国药典》(四部)通则2321测定重金属含量。本发明的水柏枝蒙药材质量检测方法，能全方面、系统化地进行质量控制，为水柏枝开发提供了科学依据。为水柏枝开发提供了科学依据。为水柏枝开发提供了科学依据。


技术研发人员：唐辉 李乐 袁小红 孙亚坤
受保护的技术使用者：石河子大学
技术研发日：2021.09.07
技术公布日：2021/11/14