一种黑牛肝菌菌株PJ1208与应用的制作方法

一种黑牛肝菌菌株pj1208与应用
技术领域
1.本发明属于食用菌人工育种技术领域，具体是涉及一种黑牛肝菌菌株与应用。


背景技术：

2.黑牛肝菌(phlebopus portentosus)是牛肝菌目(boletales)小牛肝菌科(boletinellaceae)脉柄牛肝菌属(phlebopus)的一种大型真菌，暗褐网柄牛肝菌的俗称。目前黑牛肝菌是全球唯一一种实现了工厂化人工栽培的牛肝菌种类，市场前景广阔。
3.食用菌中单核和双核菌丝体共同培养时，双核菌丝体中细胞核向单核菌丝迁移，形成新双核菌丝，即双单杂交。双单杂交通过选择具备多种优良性状的菌株，进一步进行遗传改良。该方法只需将改良亲本性状的亲本单核化与需要改良的菌株配对即可，是一种更为简便有效的杂交育种手段。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明实施例提供一种具有优良生物学特性的黑牛肝菌菌株pj1208，并提供该pj1208菌株在生产黑牛肝菌中的应用。
5.为达到上述目的，本发明主要提供如下技术方案：
6.一方面，本发明的实施例提供一种黑牛肝菌菌株，分类命名为：黑牛肝菌(phlebopus portentosus)pj1208，已于2021年03月03日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，保藏编号cgmcc no.21925。
7.该pj1208菌株，其亲本1：由黑牛肝菌双核菌株yl01中分离获得的原生质体单核菌株01ps
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12，亲本2：野生黑牛肝菌双核菌株hz18072。本发明通过亲本1与亲本2进行双单杂交获得。
8.本发明菌株是以来源于菌株yl01的原生质体单核菌株01ps
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12为受体，以野生菌株hz18072为供体，经过双单杂交的方法获得。该菌株具有遗传稳定，活力强，生长速度快，出菇整齐，子实体颜色均一，呈橄榄褐色，菇型好，肉质软糯，伤后无变色，无土腥味等特点，属于优良菌株，具有较高的商业价值。
9.另一方面，本发明的实施例提供上述黑牛肝菌pj1208菌株在产黑牛肝菌中的应用。
10.本发明的优点在于：
11.本发明的菌株通过双单杂交育种选育后获得，经ssr分子检测显示其区别于亲本1：单核菌株01ps
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12及亲本2：野生菌株hz18072，是新的菌株。
12.本发明菌株与现有黑牛肝菌生产菌株的区别：子实体菌盖菌柄颜色均一，为橄榄褐色，肉质软糯伤后无变色，无土腥味。
附图说明
13.图1为实施例3所述的非加权配对算术平均法(upgma)聚类分析结果图。
具体实施方式
14.以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定，所有基于本发明教导所作出的等同替换或变化，均应该属于本发明的保护范围。
15.本发明中所用原料等均为可以通过市售购买获得的常规产品。
16.本发明所述的一种黑牛肝菌菌株pj1208，由黑牛肝菌菌株亲本1：黑牛肝菌双核菌株yl01中分离获得的原生质体单核菌株01ps
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12，亲本2：野生黑牛肝菌双核菌株hz18072，通过双单杂交获得，分类命名为：黑牛肝菌pj1208，已于2021年3月3日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心cgmcc，保藏编号cgmcc no.21925。
17.下面将结合具体的实施例，对本发明一种黑牛肝菌菌株及应用做进一步的详细介绍：
18.实施例1：
19.本发明菌株pj1208的亲本菌株形态特征
20.1.1亲本1来源菌株yl01子实体形态特征
21.菌盖灰褐色，菌柄暗黄色，菌盖直径45
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51mm，菌柄圆柱形，菇型好，平均菇重115g，出菇整齐，出菇率92％
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96％，产量稳定，肉质紧实，伤后无变色，无土腥味。
22.1.2亲本2菌株hz18072子实体形态特征
23.菌盖暗褐色，菌柄暗褐色，菌盖直径50
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85mm，菌柄圆柱形，菇型好，平均菇重：75g，出菇率70％
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78.5％，肉质软糯，有伤后变色现象，有土腥味。
24.1.3菌株pj1208子实体形态特征
25.菌盖和菌柄均为橄榄褐色，菌盖直径45.08
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88.04mm，菌柄圆柱形，菇型好，平均菇重：97.23g，出菇整齐，出菇率96％
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98.5％，产量稳定，肉质软糯，伤后无变色，无土腥味。
26.本发明的黑牛肝菌pj1208菌株应用于生产黑牛肝菌，通过pj1208菌株产出的黑牛肝菌产量高，出菇整齐，子实体颜色均一，呈橄榄褐色，菇型好，肉质软糯，伤后无变色，无土腥味等特点，适合用于黑牛肝菌工厂化生产。
27.实施例2
28.黑牛肝菌pj1208菌株的选育制作方法：采用双单杂交的方法得到本发明。
29.2.1黑牛肝菌yl1701原生质体制备
30.以m1液体培养基培养菌株yl1701，获得菌球经过滤洗涤后，用1.5％溶壁酶，30℃，185r/min条件下溶解3h以8层10g无纺布过滤，滤液在4℃下，以3000r/min离心10min，并以稳渗液洗涤2次后，进行稀释，涂布于再生培养基，29℃培养箱暗培养。其中，m1培养基组成包括马铃薯200g(煮水)、葡萄糖20g、酵母膏2g、mgso
4 1g、kh2po
4 1g、琼脂16g、定容至1000ml。
31.2.2黑牛肝菌yl1701原生质体单核菌丝鉴定
32.原生质体菌落萌发至肉眼可见时，挑取单菌落转接于平板上，培养15天后显微镜下检查，无锁状联合即为原生质体单核菌丝。
33.2.3野生黑牛肝菌菌株hz18072的培养
34.将野生黑牛肝菌菌株hz18072转接于m1培养基，于29℃培养箱暗培养20天。
35.2.4双单杂交
36.将菌株yl1701中通过原生质体分离获得的单核菌株01ps
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12与菌株hz18072进行
配对培养，并挑取01ps
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12菌落一侧，产生锁状联合的菌丝体，转接于m1培养基试管进行保存，即为双单杂交所获得的新菌株pj1208。
37.实施例3
38.ssr分子标记鉴别。
39.收集菌株pj1208，其亲本双核菌株yl1701、单核菌株01ps
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12、双核菌株hz18072，及其他6个黑牛肝菌菌株的菌丝，提取dna后，以文中的21对引物对dna样品进行pcr扩增，合成引物时在正向引物末端加上fam或hex荧光标记。pcr产物使用abi 3730测序仪进行基因分型。使用软件gene mapper4.1(applied biosystems co.，ltd.，usa)，参照引物对应关系的核心碱基重复数进行数据准确位点的分析。采用popgene 32计算等位基因数、有效等位基因数、shannon's信息指数、期望杂合度、观测杂合度。应用ntsyspc
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2.10软件计算遗传相似系数，用非加权配对算术平均法(upgma)进行聚类分析。upgma聚类分析结果如图1所示。
40.所使用的21对ssr引物信息如下表所示。
41.表3用于菌株鉴别的ssr引物信息
42.[0043][0044]
分析结果显示，菌株pj1208在用于鉴别的ssr位点上，与包括其亲本yl1701、01ps
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12、hz18072在内的其他菌株均有遗传差异，是全新的菌株。
[0045]
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。