(S)-N-羟基-2-(2-(4-甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑-5-甲酰胺及其药学上可接受的盐的制作方法

(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺及其药学上可接受的盐
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2018年12月10日提交的美国临时专利申请第62/777,600号的权益，其内容通过引用整体并入本文。
技术领域
3.本发明涉及噻唑类化合物、药物组合物以及所述化合物和药物组合物抑制组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，hdac)和治疗hdac相关疾病的用途。


背景技术：

4.癌症是美国的第二大死因。尽管取得了一些突破性进展，降低了死亡率，但是许多癌症仍然难以治疗。此外，随着时间的推移，许多癌症通常对现行的化学疗法产生耐受。典型的疗法如化疗、放疗和手术还引起广泛的不期望的副作用。
5.组蛋白去乙酰化酶(hdac)是一个酶家族，其使已知调节基因转录的组蛋白和非组蛋白去乙酰化。hdac与各种细胞类型的增殖和分化以及疾病的发病机理有关，所述疾病包括癌症、间质纤维化、自身免疫和炎症疾病以及代谢紊乱。需要新的hdac抑制剂，和使用这种新的hdac抑制剂(单独或与其他治疗方式组合)治疗癌症和其他组蛋白去乙酰化酶相关疾病的方法。
6.新型hdac抑制剂的外消旋混合物的手性拆分可能增加抑制剂抑制hdac的能力，改善抑制剂的药代动力学，或两者兼有。然而，获得光学纯对映异构体的手性色谱法存在不确定性，如产率低，并且某些对映异构体在某些溶剂系统中不稳定。手性柱的类型、溶剂系统的组合和梯度等是方法开发过程中的关键变量。需要克服技术挑战并拆分新型hdac抑制剂的外消旋体。


技术实现要素：

7.在某些方面，本发明提供(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺
[0008][0009]
或其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0010]
本发明还提供一种用于治疗组蛋白去乙酰化酶(hdac)相关疾病的药物组合物，其包含：活性成分，其中所述活性成分至少包含第一活性成分，所述第一活性成分选自(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺、n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物；和药学
上可接受的载体。
[0011]
在其他方面，本发明提供一种制备用于治疗组蛋白去乙酰化酶(hdac)相关疾病的药物组合物的方法，其包括将活性成分与药学上可接受的载体在低于约250℃的热动力学混合器中混合少于300秒，其中所述活性成分至少包含第一活性成分，所述第一活性成分选自(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺、n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0012]
在一个方面，(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺或其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物以重量计为第一活性成分的80至100％。
[0013]
在某些方面，所述活性成分进一步包含第二活性成分。在一个方面，第二活性成分包含dna甲基转移酶抑制剂、溴结构域抑制剂或两者兼有。
[0014]
在某些实施方案中，第一活性成分、第二活性成分或两者的量为治疗有效量。
[0015]
在其他实施方案中，药学上可接受的载体选自药学聚合物载体、加工剂、表面活性剂及其组合。药学聚合物载体的非限制性示例包括纤维素药学聚合物、交联药学聚合物、高熔体粘度药学聚合物、非离子药学聚合物、非离子纤维素药学聚合物、非离子水溶性药学聚合物、热不稳定药学聚合物、水溶性药学聚合物、水溶性纤维素药学聚合物及其组合。
[0016]
在进一步其他方面，药学聚合物载体选自卡波姆、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙酸偏苯三酸纤维素、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯
‑
甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸乙酯
‑
甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、聚(甲基丙烯酸丁酯
‑
共
‑
(2
‑
二甲氨基乙基)甲基丙烯酸酯
‑
共
‑
甲基丙烯酸甲酯)1:2:1、聚卡波非、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(甲基丙烯酸酯
‑
乙基丙烯酸酯)(1:1)共聚物、聚(甲基丙烯酸酯
‑
甲基丙烯酸甲酯)(1:1)共聚物、聚(甲基丙烯酸酯
‑
甲基丙烯酸甲酯)(1:2)共聚物、聚(乙酸乙烯酯)
‑
共
‑
聚(乙烯基吡咯烷酮)共聚物、聚(乙酸乙烯酯)邻苯二甲酸酯、聚(乙烯醇)、聚乙烯基己内酰胺
‑
聚乙酸乙烯酯
‑
聚乙二醇接枝共聚物、聚(乙烯基吡咯烷酮)、羧甲基纤维素钠及其组合。
[0017]
在一个方面，加工剂包含增塑剂。在另一个方面，表面活性剂选自磺基琥珀酸二辛酯钠、甘油聚乙二醇羟基硬脂酸酯
‑
脂肪酸甘油聚乙二醇酯
‑
聚乙二醇
‑
甘油乙氧基化物、甘油聚乙二醇蓖麻油酸酯
‑
聚乙二醇的脂肪酸酯
‑
聚乙二醇
‑
乙氧基化甘油、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯、十二烷基硫酸钠、脱水山梨糖醇月桂酸酯、维生素e tpgs及其组合。
[0018]
在一些实施方案中，本发明提供一种抑制细胞中组蛋白去乙酰化酶(hdac)同种型的组蛋白去乙酰化活性的方法，其包括：使所述细胞与包含化合物的组合物接触，所述化合物选自(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺、n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0019]
在某些方面，所述组合物以0.0005至2μm的半数最大抑制浓度(ic
50
)抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性。
[0020]
在一些实施方案中，hdac同种型选自hdac1、hdac2、hdac3、hdac6和hdac10。在其他
实施方案中，hdac同种型选自hdac1、hdac3、hdac6和hdac10。
[0021]
在一个方面，所述组合物抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性至少30％。在另一个方面，所述细胞选自癌细胞、神经元细胞、免疫系统细胞、循环系统细胞及其组合。在进一步其他方面，癌细胞选自急性淋巴细胞白血病(all)细胞、急性髓性白血病(aml)细胞、急性早幼粒细胞白血病(apl)细胞、胰腺腺鳞癌、血癌细胞、脑瘤细胞、乳腺癌细胞、宫颈鳞状细胞、慢性粒细胞白血病(cml)细胞、结肠癌细胞、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)细胞、子宫内膜癌细胞、胃肠道间质瘤(gist)细胞、胶质母细胞瘤(gbm)细胞、肝细胞癌细胞、霍奇金淋巴瘤细胞、白血病细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、黑素瘤细胞、间皮瘤细胞、多发性骨髓瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、非小细胞肺癌(nsclc)细胞、神经母细胞瘤细胞、卵巢癌细胞、胰腺癌细胞、胰腺导管腺癌细胞、外周t细胞淋巴瘤细胞、咽癌细胞、前列腺癌细胞、肾癌细胞、横纹肌肉瘤细胞、皮肤癌细胞、甲状腺癌细胞、舌肿瘤细胞、子宫癌细胞、华氏(waldenstrom)骨髓瘤细胞及其组合。
[0022]
在一个方面，癌症选自胰腺腺鳞癌、与rhoa突变相关的弥漫型胃癌、恶性横纹肌瘤、高钙血症型卵巢小细胞癌、葡萄膜黑素瘤及其组合。
[0023]
在某些实施方案中，所述组合物抑制细胞增殖、诱导细胞死亡或两者兼有。
[0024]
在其他实施方案中，本发明提供一种治疗受试者的组蛋白去乙酰化酶(hdac)相关疾病的方法，其包括向所述受试者施用组合物，其中所述组合物至少包含第一活性成分，所述第一活性成分选自(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺、n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0025]
在一些方面，所述疾病选自癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、神经变性疾病及其组合。在其他方面，癌症选自急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞白血病(aml)、急性早幼粒细胞白血病(apl)、乳腺癌、慢性粒细胞白血病(cml)、结肠癌、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、胃肠道间质瘤(gist)、胶质母细胞瘤(gbm)、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、白血病、肺癌、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺导管腺癌、外周t细胞淋巴瘤、前列腺癌、子宫癌、华氏骨髓瘤及其组合。
[0026]
在进一步其他方面，自身免疫性或炎性疾病选自气道高反应、克罗恩病、炎性肠病、多发性硬化症、银屑病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、i型糖尿病、溃疡性结肠炎及其组合。
[0027]
在一个方面，神经变性疾病选自阿尔茨海默病(ad)、肌萎缩性侧索硬化症(als)、脑缺血、亨廷顿病(hd)、帕金森病(pd)、脊髓性肌萎缩症及其组合。
[0028]
在某些实施方案中，大约每4、8、12、16或24小时以10至400mg每kg受试者体重来施用所述组合物。在其他实施方案中，以10至350mg每kg受试者体重，10至300mg每kg受试者体重，10至250mg每kg受试者体重，10至200mg每kg受试者体重，10至150mg每kg受试者体重，或10至100mg每kg受试者体重来施用所述组合物。在进一步其他实施方案中，每1小时，每2小时、每3小时、每4小时、每6小时、每8小时、每10小时、每12小时、每14小时、每16小时、每18小时、每20小时、每22小时或每24小时施用一次所述组合物。
[0029]
在一些方面，受试者是人。在其他方面，所述组合物进一步包含第二活性成分。在某些方面，第二活性成分为治疗剂，所述治疗剂选自化疗药物、mek抑制剂、增强抗原呈递的
药剂、增强效应细胞应答的药剂、降低肿瘤免疫抑制的药剂及其组合。
[0030]
在一个方面，化疗药物选自泊马度胺、地塞米松及其组合。在另一个方面，增强抗原呈递的药剂选自增强肿瘤细胞溶解的药剂、刺激吞噬细胞的药剂、解除吞噬细胞抑制(disinhibit a phagocyte)的药剂、活化树突细胞的药剂、活化巨噬细胞的药剂、募集树突细胞的药剂、募集巨噬细胞的药剂、疫苗及其组合。
[0031]
在某些实施方案中，增强抗原呈递的药剂选自基于细胞的疫苗、基于抗原的疫苗、溶瘤病毒、i型干扰素(ifn)激活剂、双特异性细胞接合剂、三特异性细胞接合剂及其组合。
[0032]
在其他实施方案中，增强抗原呈递的药剂选自干扰素基因刺激物激动剂(sting激动剂)、toll样受体(tlr)激动剂、tim
‑
3调节剂、血管内皮生长因子受体(vegfr)抑制剂、c
‑
met抑制剂、tgfb抑制剂、ido/tdo抑制剂、a2ar拮抗剂、溶瘤病毒、疫苗、双特异性细胞接合剂、三特异性细胞接合剂、双特异性抗体分子、三特异性抗体分子、ido/tdo抑制剂及其组合。
[0033]
在进一步其他实施方案中，增强效应细胞应答的药剂选自双特异性细胞接合剂、双特异性t细胞接合剂、活化肿瘤浸润淋巴细胞(til)的药剂、解除til抑制的药剂、免疫调节剂、凋亡抑制蛋白(iap)的抑制剂、雷帕霉素靶蛋白抑制剂(mtor)、白介素、白介素变体、淋巴细胞活化剂、nk细胞调节剂、nk细胞疗法、t细胞调节剂、三特异性细胞接合剂、疫苗及其组合。
[0034]
在某些方面，降低肿瘤免疫抑制的药剂选自增加m2极化的药剂、增加t细胞募集的药剂、增加t
reg
消耗的药剂、调节巨噬细胞2活性的药剂、调节mdsc活性的药剂、调节t
reg
活性的药剂、调节巨噬细胞2水平的药剂、调节mdsc水平的药剂、调节t
reg
水平的药剂及其组合。
[0035]
在一个方面，降低肿瘤免疫抑制的药剂选自免疫调节剂、csf
‑
1/1r抑制剂、il
‑
17抑制剂、il
‑
1β抑制剂、cxcr2抑制剂、磷酸肌醇3
‑
激酶抑制剂、baff
‑
r抑制剂、malt
‑
1/btk抑制剂、jak抑制剂、crth2抑制剂、vegfr抑制剂、il
‑
15或其变体、ctla
‑
4抑制剂、ido/tdo抑制剂、a2ar拮抗剂、tgfb抑制剂、pfkfb3抑制剂、免疫检查点分子抑制剂及其组合。
[0036]
在另一个方面，第二活性成分为mek抑制剂，所述mek抑制剂选自n
‑
((s)
‑
2,3
‑
二羟基
‑
丙基)
‑3‑
(2
‑
氟
‑4‑
碘
‑
苯基氨基)
‑
异烟酰胺、ci
‑
1040、pd035901、azd6244、gsk1 120212、gdc
‑
0973、u0126、xl
‑
518、arry
‑
162、arry
‑
300、pd184161、pd184352、pd0325901、arry
‑
142886(azd6244)、ro4927350、pd0325901、cip
‑
1374、tak
‑
733、ch4987655、rdea119、曲美替尼、考比替尼、瑞美替尼、司美替尼、宾美替尼、pd098059、u0126、ch4987655、ch5126755、gdc623、其药学上可接受的盐及其组合。
[0037]
在进一步其他方面，药学上可接受的盐选自铝、钙、镁、钾、钠、锌及其组合。
[0038]
在其他实施方案中，本发明提供一种合成式1a药物化合物的方法，所述方法包括：
[0039][0040]
在某些方面，所述方法包括专门为起始材料(即，2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酸)开发的合成方案，且包括在第一步中由独特的试剂(即s
‑
α
‑
苯乙胺，也称为s
‑
α
‑
pea)诱导的手性选择性沉淀(即结晶)。在该第一步中，起始材料的物理性质(如极性、溶解度等)的微小变化可能影响结晶。起始材料中官能团的变化或转变可能对这些物理性质产生显著影响。
附图说明
[0041]
图1显示n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺的一般合成方案。
[0042]
图2阐明#1a的优先且显著的肿瘤摄取和保留。
[0043]
图3阐明#1a对hdac6酶的k
off
动力学。
[0044]
图4阐明#1b对hdac6酶的k
off
动力学。
[0045]
图5显示通过id
‑
3拆分#1以产生两种对映异构体，即#1a(保留时间＝1.49min)和#1b(保留时间＝4.33)。
[0046]
图6显示#1a的晶体结构。
[0047]
图7显示(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(即#1a)的合成方案。
具体实施方式
[0048]
在本发明的附图和详细描述中描述了在此呈现的本发明的方面和应用。除非特别指出，本说明书和权利要求书中的词语和短语旨在向可适用的领域中的普通技术人员提供这些词语和短语的简单、普通和习惯性的含义。本发明人充分意识到，如果需要，他们可以成为自己的词典编纂者。
[0049]
本发明人还意识到英语语法的正常规则。因此，如果要以某种方式进一步表征、指
定或缩小名词、术语或短语，则此类名词、术语或短语将明确地包括额外的与英语语法的正常规则一致的形容词、描述性术语或其它修饰语。如果不使用这些形容词、描述性术语或修饰语，则名词、术语或短语旨在被赋予其最广泛的可能含义。
[0050]
除非上下文另有明确规定，单数形式“一(a)”、“一个(an)”和“该(the)”包括复数个所指对象。因此，例如，对“药剂”的引述包括对一种或多种该药剂的引述。
[0051]
在以下描述中，并且出于解释的目的，阐述了许多具体细节以便提供对本发明的各个方面的透彻理解。然而，相关领域的技术人员将理解，可以在没有这些具体细节的情况下实践本发明。在其他情况下，更一般地示出或讨论了已知的结构和设备，以避免模糊本发明。在许多情况下，操作的描述足以使人们能够实现本发明的各种形式。应该注意，存在所公开的发明可以应用的许多不同的和可选的配置、设备、组成和技术。本发明的全部范围不限于下面描述的示例。
[0052]
本公开涉及化合物(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(化合物#1a，以下称“#1a”)、其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0053]
本公开涵盖#1a可以采用的任何物理化学形式。物理化学形式的非限制性示例包括水合形式、溶剂化形式、结晶(已知或尚未公开)、多晶型结晶和无定形形式等。产生这种物理化学形式的方法是本领域技术人员已知的。
[0054]
本公开还涉及一种用于治疗组蛋白去乙酰化酶(hdac)相关疾病的药物组合物。所述药物组合物至少包含第一活性成分，所述第一活性成分选自(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1a)、n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(化合物#1，以下称“#1”)及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0055]
在一些方面，#1a、其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物以重量计占第一活性成分的80至100％，或者例如85至100％、85至99.99％、90至99.99％、90至99.9％、92.5％至99.9％、92.5％至99.5％、95至99.5％、95至99％或97.5至99％等之间的任何数值范围。在其他方面，#1a、其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物以重量计占第一活性成分的至少80％、至少85％、至少90％、至少92.5％、至少95％、至少97.5％或至少99％。
[0056]
药学上可接受的盐包括衍生自有机酸或无机酸的任何盐。这些盐的示例包括但不限于：氢溴酸、盐酸、硝酸、磷酸和硫酸的盐。有机酸加成盐包括，例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、2
‑
(4
‑
氯苯氧基)
‑2‑
甲基丙酸、1,2
‑
乙二磺酸、乙磺酸、乙二胺四乙酸(edta)、富马酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、n
‑
羟乙酰基阿散酸(n
‑
glycolylarsanilic acid)、4
‑
己基间苯二酚、马尿酸、2
‑
(4
‑
羟基苯甲酰基)苯甲酸、1
‑
羟基
‑2‑
萘甲酸、3
‑
羟基
‑2‑
萘甲酸、2
‑
羟基乙磺酸、乳糖酸、正十二烷基硫酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、甲基硫酸、粘酸、2
‑
萘磺酸、双羟萘酸、泛酸、磷脂酸((4
‑
氨基苯基)膦酸)、苦味酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、单宁酸、酒石酸、对苯二甲酸、对甲苯磺酸、10
‑
十一碳烯酸或现在已知或尚未公开的任何其他酸的盐。本领域技术人员将理解，这些药学上可接受的盐可以用于药理学组合物的制剂。可以通过本领域技术人员已知的方式使公开的化合物与合适的酸反应来制备这些盐。
[0057]
在优选的实施方案中，#1a的药学上可接受的盐选自na

、k

、mg
2
、ca
2
、zn
2
和al
3
。
在优选的实施方案中，#1的药学上可接受的盐选自na

、k

、mg
2
、ca
2
、zn
2
和al
3
。
[0058]
所述药物组合物的物理形式取决于许多因素。例如，期望的施用方法、所公开的化合物或其药学上可接受的盐所采用的物理化学形式。物理形式的非限制性示例包括固体、液体、气体、溶胶、凝胶、气溶胶等。在一些实施方案中，所述药物组合物由所公开的化合物或其药学上可接受的盐组成，没有任何其他添加剂。
[0059]
在其他实施方案中，所述药物组合物包含在化学式上与#1a或#1不同的第二活性成分。在一些方面，第二活性成分具有与#1a或#1的靶点相同或相似的分子靶点。在其他实施方案中，第二活性成分在#1a或#1的分子靶点的上游对一种或多种生化通路发挥作用。在进一步其他实施方案中，第二活性成分在#1a或#1的分子靶点的下游对一种或多种生化通路发挥作用。可以使用制药领域熟知的方法制备包含所公开的化合物的药物组合物。
[0060]
在一些实施方案中，所述药物组合物包含能够改变剂量单位的物理形式的材料。在一个非限制性示例中，所述组合物包含形成约束化合物的涂层的材料。材料的非限制性示例包括糖、虫胶、明胶和其他惰性涂层剂。
[0061]
本发明涉及一种治疗受试者的组蛋白去乙酰化酶(hdac)相关疾病的方法，其包括向所述受试者施用组合物，其中所述组合物选自#1a、#1及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0062]
组蛋白乙酰基转移酶(hat)通过控制组蛋白周围dna的卷曲和展开来影响基因表达。组蛋白乙酰基转移酶通过使核心组蛋白中的赖氨酸残基乙酰化，导致染色质紧密性降低且转录活性提高来实现此目的。相比之下，组蛋白去乙酰化酶(hdac)从赖氨酸残基上去除乙酰基，导致染色质更紧密且转录沉默。核心组蛋白末端尾部的可逆修饰构成用于重构高级染色质结构和控制基因表达的主要表观遗传机制。hdac抑制剂(hdi)阻断该作用，并且可以导致组蛋白过度乙酰化，从而影响基因表达。thagalingam s.,cheng k h,lee h j等人,ann.n.y.acad.sci.983:84
‑
100,2003；marks p a.richon v m,rifkind r a,j.natl.cancer inst.92(15)1210
‑
16,2000；dokmanovic m,clarke c.,marks p a,mol.cancer res.5(10)981
‑
989,2007。
[0063]
组蛋白去乙酰化酶(hdac)抑制剂是一类新的细胞抑制剂，其通过诱导细胞周期停滞、分化和/或凋亡来在培养物中和体内抑制肿瘤细胞的增殖。乙酰化和去乙酰化在染色质拓扑结构的调节和基因转录的调节中发挥重要的作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂在染色质的许多区域中诱导超乙酰化的核小体核心组蛋白的积累，但仅影响一小部分的基因的表达，导致一些基因的转录活化，但抑制相等或更多数量的其他基因。非组蛋白蛋白质(如转录因子)也是乙酰化的靶标，具有不同的功能作用。乙酰化增强一些转录因子(如肿瘤抑制因子p53和红细胞分化因子gata
‑
1)的活性，但可以抑制其他转录因子(包括t细胞因子和共激活因子actr)的转录活性。最近的研究表明，雌激素受体α(eralpha)可以在响应组蛋白去乙酰化酶抑制中被超乙酰化，从而抑制配体敏感性并通过组蛋白去乙酰化酶抑制剂调节转录活化。其他核受体中乙酰化的eralpha基序的保守性提示乙酰化可能在多种核受体信号传导功能中发挥重要的调节作用。在动物模型中，许多结构多样的组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体内显示出有效的抗肿瘤功效，且毒性小。数种化合物目前正处于早期临床开发阶段中，作为单一疗法和与细胞毒素和分化剂组合，作为用于实体癌症和血液癌症的潜在疗法。
[0064]
hdac酶家族构成了18个基因的家族，基于它们与相应的酵母直接同源物
(ortholog)的同源性，其可以被分为四个亚类：i至iv类。属于i、ii和iv类的hdac包含11个成员，即hdac同种型1至11，通常称为经典hdac，为金属依赖性水解酶。iii类hdac包含7个成员，被称为sirtuin，即sirt 1至7，为nad 依赖性水解酶。i类hdac是具有普遍存在的组织表达的核蛋白。ii类和iv类hdac在细胞核和细胞质中均有发现，并且表现出组织特异性表达。ii类hdac家族进一步细分为iia和iib亚类。iia类包含同种型hdac4、hdac5、hdac7和hdac9，而iib类包含同种型hdac6和hdac10。hdac6包含两个串联的去乙酰化酶结构域和一个c末端锌指结构域。hdac10在结构上与hdac6相关，但具有一个额外的催化结构域。表1表示经典hdac的细胞位置和组织表达(改编自witt,o.等人,cancer lett.,277:8
‑
21(2008))。
[0065]
表1.经典hdac，细胞位置和组织表达
[0066]
类同种型细胞位置组织表达i类hdac1核普遍存在 hdac2核普遍存在 hdac3核普遍存在 hdac8核/细胞质普遍存在iia类hdac4核/细胞质心脏、平滑肌、大脑 hdac5核/细胞质心脏、平滑肌、大脑 hdac7核/细胞质心脏、胎盘、胰腺、平滑肌 hdac9核/细胞质平滑肌、大脑iib类hdac6细胞质肾脏、肝脏、心脏、胰腺 hdac10细胞质脾脏、肾脏、肝脏iv类hdac11核/细胞质心脏、平滑肌、肾脏、大脑
[0067]
hdac在正常和异常细胞增殖和分化中均发挥重要的作用。hdac已经与一些涉及增殖的疾病状态相关，包括但不限于细胞增殖性疾病和病症，如各种形式的癌症。(在witt,o.等人,cancer lett.,277:8
‑
21(2008)和portella a.等人,nat.biotechnol.,28:1057
‑
1068(2010)中有评论)。i类和ii类hdac已经被确定为用于抗癌疗法的有吸引力的靶标。特别地，独特的i类和ii类hdac蛋白在一些癌症中过度表达，包括卵巢癌(hdac1至3)、胃癌(hdac2)和肺癌(hdac1和3)等。另外，已经提出了hdac8与急性髓细胞白血病(aml)之间的可能的相关性。对于ii类hdac蛋白，在一些乳腺癌细胞中诱导了hdac6的异常表达。基于其临床作用，已经确定了hdac抑制剂，其抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞分化，并上调与抗癌作用相关的关键基因。hdac还涉及多种类型的癌症(bali p,等人,“inhibition of histonedeacetylase 6 acetylates and disrupts the chaperone function of heat shockprotein 90:a novel basis for antileukemia activity of histone deacetylaseinhibitors,”j.biol.chem.,2005 280:26729
‑
26734；santo l.等人,“preclinical activity,pharmacodynamic and pharmacokinetic properties of a selective hdac6 inhibitor,acy
‑
1215,in combination with bortezomib in multiple myeloma,”blood,2012,119(11):2579
‑
89)、自身免疫疾病或炎性疾病(shuttleworth,s.j.,等人,curr.drug targets,11:1430
‑
1438(2010))、认知疾病和神经变性疾病(fischer,a.,等人,trends pharmacol.sci.,31:605
‑
617(2010)；chuang,d.
‑
m.,等人,trends neurosci.32:591
‑
601(2009))、纤维化疾病(pang,m.等人,
j.pharmacol.exp.ther.,335:266
‑
272(2010))、原生动物性疾病(参见例如美国专利号5,922,837)和病毒性疾病(margolis,d.m.等人,curr.opin.hiv aids,6:25
‑
29(2011))。
[0068]
近年来，已经努力开发hdac抑制剂作为癌症治疗和/或作为辅助疗法。mark p a.等人expert opinion on investigational drugs 14(12):1497
‑
1511(2005)。化合物发挥作用的确切机理尚不清楚，但是已经研究了表观遗传通路以帮助阐明确切的生物学通路。claude monneret,anticancer drugs 18(4):363
‑
370 2007。例如，已经显示hdac抑制剂诱导p21(wafi)表达，所述p21为p53肿瘤抑制活性的调节剂。rochon v m.等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.97(18):10014
‑
10019,2000。hdac参与视网膜母细胞瘤蛋白(prb)抑制细胞增殖的通路。prb蛋白是复合物的一部分，所述复合物将hdac吸引到染色质，从而使组蛋白去乙酰化。brehm a.等人,nature391(6667):597
‑
601,1998。hdac1通过直接相互作用负调节心血管转录因子kruppel样因子5。matsumura t.等人,j.biol.chem.280(13):12123
‑
12129,2005。雌激素已被公认为一种促有丝分裂因子，其经由与雌激素受体α(erα)结合而涉及到乳腺癌的肿瘤发生和发展。近期的数据表明，由hdac和dna甲基化介导的染色质失活为人乳腺癌细胞中erα沉默的重要组成部分。zhang z.等人,breast cancer res.treat.94(1):11
‑
16,2005。
[0069]
典型地，所述方法包括向受试者施用任何一种所公开的化合物或其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。
[0070]
所述疾病的非限制性示例包括：细胞增殖性疾病(例如，癌症)、自身免疫性疾病、炎性疾病、神经变性疾病及其组合等。
[0071]
在一些实施方案中，细胞增殖性疾病为癌症。癌症的非限制性示例包括：急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞白血病(aml)、急性早幼粒细胞白血病(apl)、乳腺癌、慢性粒细胞白血病(cml)、结肠癌、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、胃肠道间质瘤(gist)、胶质母细胞瘤(gbm)、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、白血病、肺癌、多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞肺癌(nsclc)、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺导管腺癌、外周t细胞淋巴瘤、前列腺癌、子宫癌、华氏骨髓瘤及其组合等。
[0072]
在一些实施方案中，癌症选自卵巢癌、前列腺癌、肺癌、急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、膀胱癌、肾癌、乳腺癌、结肠直肠癌、神经母细胞瘤、黑素瘤、胃癌及其组合。在一些方面，式(i)化合物抑制癌细胞增殖，诱导癌细胞死亡或两者兼有。
[0073]
自身免疫疾病或炎性疾病的非限制性示例包括：气道高反应、克罗恩病、炎性肠病、多发性硬化症、银屑病、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、1型糖尿病、溃疡性结肠炎及其组合等。
[0074]
神经变性疾病的非限制性示例包括：阿尔茨海默病(ad)、肌萎缩性侧索硬化症(als)、脑缺血、亨廷顿病(hd)、帕金森病(pd)、脊髓性肌萎缩及其组合等。
[0075]
在一些方面，所述疾病与hdac1、hdac2、hdac3、hdac4、hdac5、hdac6、hdac7、hdac8、hdac9、hdac10、hdac11或其组合有关。在其他方面，hdac相关疾病与hdac1、hdac2、hdac3、hdac6、hdac10或其组合有关。在进一步其他方面，hdac相关疾病与hdac1、hdac2、hdac6或其组合有关。
[0076]
在本发明的某些更具体的方面，所述组合物以0.0001至4μm，或者例如0.0002至4μm、0.0002至3.5μm、0.0005至3.5μm、0.0005至3μm、0.001至3μm、0.001至2.5μm、0.002至2.5μ
m、0.002至2μm或0.005至2μm等之间的任何数值范围的半数最大抑制浓度(ic
50
)降低癌细胞增殖。
[0077]
在其他方面，所述组合物以0.001至10μm，或者例如0.001至8μm、0.002至8μm、0.002至6μm、0.003至6μm、0.003至4μm、0.005至4μm、0.005至2μm或0.01至2μm等之间的任何数值范围的半数最大抑制浓度(ic
50
)降低癌细胞增殖。在进一步其他方面，所述组合物以0.02至10μm，或者例如0.05至10μm、0.05至9μm、0.1至9μm、0.1至8μm、0.2至8μm、0.2至7μm、0.4至7μm或0.4至6μm等之间的任何数值范围的半数最大抑制浓度(ic
50
)降低癌细胞增殖。在进一步的方面，式(i)化合物以小于1μm、小于0.5μm、小于0.2μm、小于0.1μm、小于0.01μm、小于0.001μm等的半数最大抑制浓度(ic
50
)抑制hdac同种型的活性。
[0078]
在一些实施方案中，所述组合物降低癌细胞增殖至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％或至少10％。在其他实施方案中，所述组合物降低癌细胞增殖10至100％，或者例如10至90％、15至90％、30％至90％、15至80％、20至80％、30％至80％、20至70％、25至70％、30％至70％、25至60％、30至60％或30至50％等之间的任何百分比范围。
[0079]
在一些实施方案中，所述组合物抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％或至少10％。在其他实施方案中，组合物抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性10至100％，或者例如10至90％、15至90％、30％至90％、15至80％、20至80％、30％至80％、20至70％、25至70％、30％至70％、25至60％、30至60％或30至50％等之间的任何百分比范围。
[0080]
在一些方面，以10至400mg/kg，或者例如10至350mg/kg、20至350mg/kg、20至300mg/kg、30至300mg/kg、30至250mg/kg、40至250mg/kg、40至200mg/kg、50至200mg/kg、50至150mg/kg、60至150mg/kg或60至100mg/kg等之间的任何数值施用所述组合物。
[0081]
在其他方面，大约每4、8、12、16或24小时施用所述组合物。在进一步其他方面，每1至24小时，或者例如每2至24小时、2至18小时、3至18小时、3至16小时、4至16小时、4至12小时、5至12小时、5至8小时等之间的任何数值施用所述组合物。
[0082]
在一些实施方案中，所述组合物进一步包含第二活性成分，所述第二活性成分选自化疗药物、增强抗原呈递的药剂(“抗原呈递组合”)、增强效应细胞应答的药剂(“效应细胞组合”)、降低肿瘤免疫抑制的药剂(“抗肿瘤免疫抑制组合”)及其组合。
[0083]
化疗药物的非限制性示例包括：泊马度胺或地塞米松等。
[0084]
与激酶抑制的组合
[0085]
在抗增殖活性方面，小分子调节的一个特别有吸引力的靶点是mek。抑制mek1(mapk/erk激酶)是控制肿瘤生长的有前途的策略，所述肿瘤依赖于异常erk/mapk通路信号。mek
‑
erk信号转导级联是一个保守的通路，其响应于生长因子、细胞因子和激素来调节细胞的生长、增殖、分化和凋亡。该通路在ras的下游运行，其在人类肿瘤中经常上调或发生突变。已经证明mek是ras功能的关键效应子。erk/mapk通路在30％的所有肿瘤中上调，并且已分别在22％和18％的所有癌症中确定k
‑
ras和b
‑
raf中的致癌激活突变。据报道，大部分人类癌症具有激活的ras和raf突变，所述大部分人类癌症包括66％(b
‑
raf)的恶性黑素瘤、60％(k
‑
ras)和4％(b
‑
raf)的胰腺癌、50％的结直肠癌(特别是结肠癌，k
‑
ras：30％，b
‑
raf：15％)、20％(k
‑
ras)的肺癌、27％(b
‑
raf)乳头状和间变性甲状腺癌和10至20％(braf)的子
宫内膜样卵巢癌。已经证明，erk通路的抑制，特别是mek激酶活性的抑制导致抗转移和抗血管生成作用，这主要是由于细胞间接触和运动的减少以及血管内皮生长因子(vegf)表达的下调。此外，显性负性的mek或erk的表达降低了突变体ras的转化能力，如在细胞培养物和体内人类肿瘤异种移植物的原发性和转移性生长中所见。因此，mek
‑
erk信号转导通路是用于治疗性干预的合适通路。
[0086]
抑制mek激酶的药剂的非限制性示例可以选自n
‑
((s)
‑
2,3
‑
二羟基
‑
丙基)
‑3‑
(2
‑
氟
‑4‑
碘
‑
苯基氨基)
‑
异烟酰胺、ci
‑
1040、pd035901、azd6244、gsk1 120212、gdc
‑
0973、u0126、xl
‑
518、arry
‑
162、arry
‑
300、pd184161、pd184352、pd0325901、arry
‑
142886(azd6244)、ro4927350、pd0325901、cip
‑
1374、tak
‑
733、ch4987655、rdea119、曲美替尼、考比替尼、瑞美替尼、司美替尼、宾美替尼、pd098059、u0126、ch4987655、ch5126755、gdc623、其药学上可接受的盐及其组合。
[0087]
抗原呈递组合
[0088]
增强抗原呈递的药剂的非限制性示例包括：增强抗原呈递的药剂、增强肿瘤细胞溶解的药剂、刺激吞噬细胞的药剂、解除吞噬细胞抑制的药剂、活化树突细胞的药剂、活化巨噬细胞(例如，巨噬细胞i)的药剂、募集树突细胞的药剂、募集巨噬细胞(例如，巨噬细胞i)的药剂或疫苗等。在某些非限制性方面，增强抗原呈递的药剂增强肿瘤抗原呈递。
[0089]
疫苗的非限制性示例包括：基于细胞的疫苗(例如，基于树突细胞的疫苗，如provenge.rtm)或基于抗原的疫苗(例如，il
‑
2与muc1的组合)等。增强肿瘤细胞溶解的药剂的非限制性示例为溶瘤病毒。刺激吞噬细胞的药剂的非限制性示例为i型干扰素(ifn)活化剂，例如tlr激动剂或rig
‑
i样受体激动剂(rlr)等。活化和/或募集树突细胞或巨噬细胞的药剂的非限制性示例包括：双特异性细胞接合剂或三特异性细胞接合剂等。
[0090]
在一些实施方案中，增强抗原呈递的药剂选自干扰素基因刺激物激动剂(sting激动剂)、toll样受体(tlr)激动剂、tim
‑
3调节剂、血管内皮生长因子受体(vegfr)抑制剂、c
‑
met抑制剂、tgfb抑制剂、ido/tdo抑制剂、a2ar拮抗剂、溶瘤病毒、疫苗、双特异性细胞接合剂、三特异性细胞接合剂、双特异性抗体分子、三特异性抗体分子、ido/tdo抑制剂及其组合。
[0091]
tlr的非限制性示例包括：tlr
‑
3、tlr
‑
4、tlr
‑
5、tlr
‑
7、tlr
‑
8或tlr
‑
9的激动剂等。tim
‑
3调节剂的非限制性示例为抗tim
‑
3抗体分子。tgfb抑制剂的非限制性示例为抗tgfb抗体。疫苗的非限制性示例为支架疫苗(scaffold vaccine)。在一些方面，溶瘤病毒表达细胞因子，例如gm
‑
csf或csf(例如csfl或csf2)等。双特异性或三特异性细胞接合物的非限制性示例包括：针对cd47和cd19的双特异性或三特异性抗体分子，其具有或不具有fc结构域。
[0092]
效应细胞组合
[0093]
增强效应细胞应答的药剂的非限制性示例包括：淋巴细胞活化剂、活化肿瘤浸润淋巴细胞(til)和/或解除肿瘤浸润淋巴细胞抑制的药剂、nk细胞调节剂、白介素或白介素变体、双特异性或三特异性细胞接合剂、nk细胞疗法、诱导nk细胞的疫苗和抗原/免疫刺激剂、免疫调节剂、t细胞调节剂、双特异性t细胞接合剂、iap(凋亡抑制蛋白)抑制剂或雷帕霉素靶蛋白(mtor)抑制剂等。
[0094]
淋巴细胞活化剂的非限制性示例包括：nk细胞活化剂或t细胞活化剂等。肿瘤浸润淋巴细胞(til)的非限制性示例包括：nk细胞或t细胞等。nk细胞调节剂的非限制性示例为
nk受体的调节剂(例如，抗体分子)，例如nkg2a、kir3dl、nkp46、mica、ceacam1的调节剂或其组合等。白介素的非限制性示例包括：il
‑
2、il
‑
15、il
‑
21、il
‑
13r、il
‑
12细胞因子或其组合等。双特异性或三特异性细胞接合剂的非限制性示例包括：nkg2a和cd138的双特异性抗体分子，或cd3和tcr的双特异性抗体分子等。免疫调节剂的非限制性示例包括：共刺激分子的活化剂，或免疫检查点分子的抑制剂等。
[0095]
在一些实施方案中，t细胞调节剂为选自检查点抑制剂的抑制剂的t细胞调节剂。选自检查点抑制剂的抑制剂(例如抗体)的t细胞调节剂的非限制性示例包括：pd
‑
1抑制剂、pd
‑
l1抑制剂、tim
‑
3抑制剂、lag
‑
3抑制剂、vista抑制剂、二酰甘油激酶(dkg)
‑
α抑制剂、b7
‑
h3抑制剂、b7
‑
h4抑制剂、tigit抑制剂、ctla4抑制剂、btla抑制剂、cd160抑制剂、tim1抑制剂、ido抑制剂、lair1抑制剂、il
‑
12抑制剂或其组合等。
[0096]
在其他实施方案中，t细胞调节剂为选自共刺激分子的激动剂或活化剂的t细胞调节剂。选自共刺激分子的激动剂或活化剂的t细胞调节剂的非限制性示例包括：gitr、ox40、icos、slam(例如slamf7)、hvem、light、cd2、cd27、cd28、cds、icam
‑
1、lfa
‑
1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4
‑
1bb(cd137)、cd30、cd40、baffr、cd7、nkg2c、nkp80、cd160、b7
‑
h3或cd83配体等的激动性抗体、其抗原结合片段或可溶性融合物等。双特异性t细胞接合剂的非限制性示例为结合cd3和肿瘤抗原(例如表皮生长因子受体(egfr)、psca、psma、epcam或her2)的双特异性抗体分子等。
[0097]
抗肿瘤免疫抑制组合
[0098]
降低肿瘤免疫抑制的药剂的非限制性示例包括：调节t
reg
、巨噬细胞2和/或mdsc的活性和/或水平的药剂，增加m2极化、t
reg
消耗和/或t细胞募集的药剂。
[0099]
降低肿瘤免疫抑制的药剂的非限制性示例包括：免疫调节剂、csf
‑
1/1r抑制剂、il
‑
17抑制剂、il
‑
1β抑制剂、cxcr2抑制剂、磷酸肌醇3
‑
激酶抑制剂、baff
‑
r抑制剂、malt
‑
1/btk抑制剂、jak抑制剂、crth2抑制剂、vegfr抑制剂、il
‑
15或其变体、ctla
‑
4抑制剂、ido/tdo抑制剂、a2ar拮抗剂、tgfb抑制剂、pfkfb3抑制剂、免疫检查点分子抑制剂等。
[0100]
免疫调节剂的非限制性示例包括：共刺激分子的活化剂(如gitr激动剂)或免疫检查点分子(如pd
‑
1、pd
‑
l1、lag
‑
3、tim
‑
3或ctla
‑
4等)的抑制剂等。csf
‑
1/1r抑制剂的非限制性示例为巨噬细胞集落刺激因子(m
‑
csf)的抑制剂。磷酸肌醇3
‑
激酶抑制剂的非限制性示例为pi3k，例如pi3kγ或pi3kδ等。免疫检查点分子抑制剂的非限制性示例包括：pd
‑
1抑制剂、pd
‑
l1抑制剂、lag
‑
3抑制剂、tim
‑
3抑制剂、ceacam(例如ceacam
‑
1、ceacam
‑
3和/或ceacam
‑
5等)抑制剂或ctla
‑
4抑制剂等。
[0101]
在一些实施方案中，第二活性成分包含一种或多种增强抗原呈递的治疗剂、一种或多种增强效应细胞应答的治疗剂和/或一种或多种降低肿瘤免疫抑制的治疗剂。
[0102]
在某些实施方案中，第二活性成分选自sting激动剂、tlr激动剂(例如tlr7激动剂)、tim
‑
3调节剂(例如tim
‑
3抑制剂)、gitr调节剂(例如gitr激动剂)、pd
‑
1抑制剂(例如抗pd
‑
1抗体分子)、pd
‑
l1抑制剂、csf
‑
1/1r抑制剂(例如m
‑
csf抑制剂)、il
‑
17抑制剂、il
‑
1β抑制剂及其组合。
[0103]
由第二治疗剂和#1a n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺或其药学上可接受的盐治疗的组蛋白去乙酰化酶(hdac)相关疾病的非限制性示例包括：乳腺癌、结直肠癌、头颈癌、血液癌、白血病、肝癌、肺癌、黑素瘤、骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、胰腺
癌、前列腺癌、肾癌或癌症转移灶等。
[0104]
施用途径可以受本发明的物理形式和待治疗的疾病的影响。在一些实施方案中，将药物组合物制备为气体。在其他实施方案中，将药物组合物制备为气溶胶。气溶胶涵盖各种系统，包括胶体和加压包装。以这种形式递送组合物的非限制性示例包括通过液化气体、通过其他压缩气体并使用合适的泵系统推进药物组合物。可以单相、双相或三相系统递送气溶胶。
[0105]
本发明进一步涉及一种用于治疗组蛋白去乙酰化酶(hdac)相关疾病的药物组合物。典型地，药物组合物包含活性成分和药学上可接受的载体。活性成分至少包含第一活性成分，所述第一活性成分选自(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺、n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物。在一些非限制性方面，第一活性成分形成无定形分散体。在一些实施方案中，药学上可接受的盐选自铝、钙、镁、钾、钠、锌及其组合。在其他实施方案中，药物组合物进一步包含第二活性成分(在最终剂型中)。在一些方面，第二活性成分包含dna甲基转移酶抑制剂、溴结构域抑制剂或两者兼有。
[0106]
在一些方面，药学上可接受的载体选自药学聚合物载体、加工剂、表面活性剂及其组合。
[0107]
药学聚合物载体的非限制性示例包括：纤维素药学聚合物、交联药学聚合物、高熔体粘度药学聚合物、非离子药学聚合物、非离子纤维素药学聚合物、非离子水溶性药学聚合物、热不稳定药学聚合物、水溶性药学聚合物或水溶性纤维素药学聚合物等。
[0108]
非离子药学聚合物载体的非限制性示例包括：纤维素聚合物、水溶性聚合物或纤维素水溶性聚合物等。非离子水溶性药学聚合物的非限制性示例包括：羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚(乙酸乙烯酯)
‑
共
‑
聚(乙烯基吡咯烷酮)共聚物、聚(乙烯醇)、聚乙烯己内酰胺
‑
聚乙酸乙烯酯
‑
聚乙二醇接枝共聚物、聚(乙烯基吡咯烷酮)或羧甲基纤维素钠等。
[0109]
交联药学聚合物的非限制性示例包括：卡波姆、交聚维酮、聚卡波非或交联羧甲基纤维素钠等。
[0110]
药学聚合物的非限制性示例包括：乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙酸偏苯三酸纤维素、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯
‑
甲基丙烯酸酯共聚物、丙烯酸乙酯
‑
甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、聚(甲基丙烯酸丁酯
‑
共
‑
(2
‑
二甲氨基乙基)甲基丙烯酸酯
‑
共
‑
甲基丙烯酸甲酯)1:2:1、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(甲基丙烯酸酯
‑
乙基丙烯酸酯)(1:1)共聚物、聚(甲基丙烯酸酯
‑
甲基丙烯酸甲酯)(1:1)共聚物、聚(甲基丙烯酸酯
‑
甲基丙烯酸甲酯)(1:2)共聚物、聚(乙酸乙烯酯)
‑
共
‑
聚(乙烯基吡咯烷酮)共聚物、聚(乙酸乙烯酯)邻苯二甲酸酯、聚(乙烯醇)、聚乙烯基己内酰胺
‑
聚乙酸乙烯酯
‑
聚乙二醇接枝共聚物、聚(乙烯基吡咯烷酮)或羧甲基纤维素钠。
[0111]
加工剂的非限制性示例为增塑剂。
[0112]
表面活性剂的非限制性示例包括：磺基琥珀酸二辛酯钠、甘油聚乙二醇羟基硬脂酸酯
‑
脂肪酸甘油聚乙二醇酯
‑
聚乙二醇
‑
甘油乙氧基化物、甘油聚乙二醇蓖麻油酸酯
‑
聚乙二醇的脂肪酸酯
‑
聚乙二醇
‑
乙氧基化甘油、聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯、十二烷
基硫酸钠、脱水山梨糖醇月桂酸酯或维生素e tpgs(也称为d
‑
α
‑
生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)。
[0113]
在一些方面，药物组合物为复合物(composite)。在一些实施方案中，药物组合物为熔融共混的药物复合物。在进一步的实施方案中，药物组合物为均质组合物、异质组合物或异质均质组合物(heterogeneously homogenous composition)。在其他方面，将药物组合物配制成口服剂型。口服剂型的非限制性示例包括：片剂、胶囊或袋剂等。
[0114]
本公开还涉及一种制备药物组合物的方法。典型地，所述方法包括在热动力学混合器中将活性成分与药学上可接受的载体混合一段时间，其中活性成分至少包含第一活性成分，所述第一活性成分选自#1a、#1及其药学上可接受的盐、酯、衍生物、类似物、前药或溶剂化物，并将活性成分和药学上可接受的载体经热动力学混合以形成熔融共混的药物复合物。
[0115]
在制备药物组合物的方法的一些方面，在最终剂型中所述活性成分进一步包含第二活性成分(除#1a以外)，例如dna甲基转移酶抑制剂、溴结构域抑制剂或两者兼有。
[0116]
混合时间的长度的非限制性示例包括：小于1,200秒、小于900秒、小于600秒、小于500秒、小于400秒、小于350秒、小于250秒、小于200秒或小于150秒。在优选的实施方案中，混合时间的长度小于300秒。
[0117]
在所述方法的一些方面，在限定的温度进行混合。例如，低于约400℃、低于约375℃、低于约350℃、低于约325℃、低于约300℃、低于约275℃、低于约225℃或低于约200℃等。在优选的实施方案中，在低于约250℃进行混合。
[0118]
在一些方面，将药物组合物溶解在药学上可接受的溶剂或多于一种溶剂的混合物中。溶剂递送足够量的所公开的化合物以治疗受试者的hdac相关疾病，且不带来严重并发症。溶剂的非限制性示例包括吡啶、氯仿、丙
‑1‑
醇、油酸乙酯、乳酸乙酯、环氧乙烷、水或乙醇等。
[0119]
药物组合物可以采用任意数量的制剂，这取决于组合物的物理化学形式和施用类型。组合物的形式的非限制性示例包括溶液、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、小丸剂或胶囊等。胶囊的非限制性示例包括：液体、粉末剂、缓释制剂、定向释放制剂、冻干剂、栓剂、乳剂、气溶胶、喷雾剂、颗粒剂、粉末剂、糖浆剂或酏剂等。
[0120]
合适的药学载体的示例在e.w.martin的“remington’s pharmaceutical sciences”中有所描述，在此将其通过引用整体并入。
[0121]
施用方法的非限制性示例包括口服施用和肠胃外施用。肠胃外施用的非限制性示例包括皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、鼻内、脑内、心室内、鞘内、阴道内、经皮、直肠、吸入和局部(例如至耳、鼻、眼睛或皮肤)等。在一些方面，施用使用选自输注和快速浓注的输注技术和通过经由上皮的或粘膜皮肤的(mucocutaneous)内里(例如口腔粘膜、直肠粘膜和肠粘膜)的吸收。在其他方面，将用于肠胃外施用的组合物封装在由玻璃、塑料或其他材料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。
[0122]
在一些实施方案中，施用是全身的。在其他实施方案中，施用是局部的，即施用到需要治疗的区域。局部施用的非限制性示例包括手术期间的局部输注、局部应用和局部注射(通过导管、栓剂或植入物)。在一些方面，施用为在癌症、肿瘤、癌前组织的部位或前部位的直接注射。在其他方面，施用为通过例如脑室内和鞘内注射向中枢神经系统内的直接注
射。在进一步其他方面，通过脑室内导管进行脑室内注射。在进一步的方面，将脑室内导管连接至贮器(例如奥马耶贮器(ommaya reservoir))。在一些实施方案中，使用肺部施用。肺部施用的非限制性示例包括使用吸入器或喷雾器、含有雾化剂的制剂和在碳氟化合物或合成的肺表面活性剂中的灌注。在其他实施方案中，在天然或合成囊泡的情况下递送药物组合物。在进一步其他实施方案中，在脂质体中递送药物组合物。
[0123]
在一些方面，通过用水溶解所公开的化合物以形成溶液来制备药物组合物。在其他方面，加入表面活性剂以促进均质溶液或混悬液的形成。表面活性剂包括任何络合物，其能够与所公开的化合物非共价相互作用以促进化合物的溶解或均匀混悬。
[0124]
在进一步其他方面，将药物组合物制备为促进局部或经皮施用的形式，例如溶液、乳剂、软膏、凝胶基质、经皮贴剂或离子电渗装置的形式。这些组合物中使用的基质的非限制性示例包括矿脂、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释剂(例如水或醇)、乳化剂、稳定剂、增稠剂等。
[0125]
在某些实施方案中，本发明涉及一种抑制一种或多种不同细胞的hdac同种型的方法。所述方法包括使所述细胞接触有效量的任何一种所公开的式(i)化合物或其药学上可接受的盐形式。
[0126]
在一些实施方案中，所述细胞选自癌细胞、神经元细胞、免疫系统细胞、循环系统细胞及其组合。在其他实施方案中，所述细胞为癌细胞。在进一步其他实施方案中，所述细胞为神经元细胞。在进一步的实施方案中，所述细胞为免疫系统细胞。在进一步的实施方案中，所述细胞为循环系统细胞。
[0127]
癌细胞的非限制性示例包括：急性淋巴细胞白血病(all)细胞、急性髓性白血病(aml)细胞、急性早幼粒细胞白血病(apl)细胞、乳腺癌细胞、慢性粒细胞白血病(cml)细胞、结肠癌细胞、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)细胞、胃肠道间质瘤(gist)细胞、胶质母细胞瘤(gbm)细胞、肝细胞癌细胞、霍奇金淋巴瘤细胞、白血病细胞、肺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤细胞、非小细胞肺癌(nsclc)细胞、神经母细胞瘤细胞、卵巢癌细胞、胰腺导管腺癌细胞、外周t细胞淋巴瘤细胞、前列腺癌细胞、子宫癌细胞和华氏骨髓瘤细胞等。
[0128]
在一些实施方案中，hdac同种型选自hdac1、hdac2、hdac3、hdac4、hdac5、hdac6、hdac7、hdac8、hdac9、hdac10、hdac11及其组合。在其他实施方案中，hdac同种型选自hdac1、hdac2、hdac3、hdac6、hdac10及其组合。在进一步其他实施方案中，hdac同种型选自hdac1、hdac3、hdac6及其组合。
[0129]
在一些方面，式(i)化合物以0.0001至4μm，或者例如0.0002至4μm、0.0002至3.5μm、0.0005至3.5μm、0.0005至3μm、0.001至3μm、0.001至2.5μm、0.002至2.5μm、0.002至2μm或0.005至2μm等之间的任何数值范围的半数最大抑制浓度(ic
50
)抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性。在其他方面，式(i)化合物以0.001至10μm，或者例如0.001至8μm、0.002至8μm、0.002至6μm、0.003至6μm、0.003至4μm、0.005至4μm、0.005至2μm或0.01至2μm等之间的任何数值范围的半数最大抑制浓度(ic
50
)抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性。在进一步其他方面，式(i)化合物以0.02至10μm，或者例如0.05至10μm、0.05至9μm、0.1至9μm、0.1至8μm、0.2至8μm、0.2至7μm、0.4至7μm或0.4至6μm等之间的任何数值范围的半数最大抑制浓度(ic
50
)抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性。在进一步的方面，式(i)化合物以小于1μm、小于0.5μm、小于0.2μm、小于0.1μm、小于0.01μm、小于0.001μm等的半数最大抑制浓度(ic
50
)
抑制hdac同种型的活性。
[0130]
在一些实施方案中，所述化合物抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％或至少10％。在其他实施方案中，所述化合物抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性10至100％，或者例如10至90％、15至90％、30％至90％、15至80％、20至80％、30％至80％、20至70％、25至70％、30％至70％、25至60％、30至60％或30至50％等之间的任何百分比范围。
[0131]
在一些实施方案中，式(i)化合物抑制hdac同种型的组蛋白去乙酰化活性，从而抑制细胞增殖、诱导细胞死亡或两者兼有。
[0132]
在一些方面，在体外进行所述方法。一个非限制性示例为筛选试验，其使用式(i)化合物作为阳性对照、标准或两者来测量未知化合物抑制hdac的活性。
[0133]
在一些方面，在体内进行所述方法，从而抑制受试者中的hdac同种型。通过以有效抑制hdac同种型的量施用所述化合物或其药学上可接受的盐形式来实现接触。在其他方面，受试者为人，例如患者。
[0134]
癌细胞包括来源于肿瘤、肿瘤形成(neoplasm)、癌症、癌前病变、细胞系或能够潜在地无限扩增和生长的任何其他来源的细胞。在一些方面，癌细胞来源于天然存在的来源。在其他方面，癌细胞为人工产生的。在一些实施方案中，当置于动物宿主中时，癌细胞能够侵入组织并转移。癌细胞进一步涵盖已侵入其他组织的、转移的或者二者的任何恶性细胞。在一些方面，生物体的一种或多种癌细胞被称为癌症、肿瘤、肿瘤形成、生长物(growth)、恶性肿瘤或本领域中用于描述癌症状态的细胞的其他术语。
[0135]
癌细胞的扩增包括导致来源于癌细胞的个体细胞数量增加的任何过程。癌细胞的扩增可以由癌细胞的有丝分裂、增殖或任何其他形式的扩增引起，无论是体外还是体内。癌细胞的扩增进一步涵盖侵袭和转移。癌细胞可以在生理上接近来自相同克隆或来自不同克隆的癌细胞(可能与其在遗传上相同或可能与其在遗传上不相同)。这种聚集可以呈集落(colony)、肿瘤或转移的形式，其中任何一种都可以在体内或体外发生。可以通过抑制促进扩增的细胞过程，或通过引起抑制扩增的细胞过程来实现减缓癌细胞的扩增。抑制扩增的过程包括减缓有丝分裂的过程和促进细胞衰老或细胞死亡的过程。抑制扩增的具体过程的示例包括：半胱天冬酶依赖性和独立性通路、自噬、坏死、细胞凋亡、线粒体依赖性和独立性过程，并且进一步包括尚待公开的任何此类过程。
[0136]
向癌细胞中加入药物组合物包括实现药物组合物对癌细胞的作用的所有活动。所选择的加入类型将取决于癌细胞是体内的、离体的还是体外的，药物组合物的物理或化学性质，以及组合物对癌细胞的作用。加入的非限制性示例包括向组织培养介质(其中体外癌细胞正在生长)中加入包含药物组合物的溶液；可以将药物组合物施用至动物的任何方法，包括静脉内、口服、肠胃外或任何其他施用方法；或者细胞的活化或抑制，其反过来对癌细胞产生作用，所述癌细胞如免疫细胞(例如巨噬细胞和cd8

t细胞)或可在血管生成或血管发生过程中分化为血管结构的内皮细胞。
[0137]
确定所公开化合物的有效量是在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文提供的详细公开内容。可以通过本领域技术人员现在已知的药学和毒理学方法，或通过尚未公开的任何类似方法，在细胞培养物或实验动物中确定用于引起特定目的的药物组合物的有效量以及其毒性、排泄和总体耐受性。一个示例为在细胞系或靶分子中体外测定药物
组合物的ic
50
(半数最大抑制浓度)。另一个示例为在实验动物中测定药物组合物的ld
50
(导致50％受试动物死亡的致死剂量)。用于确定有效量的确切技术将取决于多种因素，如药物组合物的类型和物理/化学性质，待测试的性质，以及测试是在体外还是体内进行。药物组合物的有效量的测定对于本领域技术人员来说是熟知的，他们将使用从任何测试中获得的数据进行该测定。确定用于加入到癌细胞中的所公开化合物的有效量还包括确定有效治疗量，包括用于体内(包括人)的有效剂量范围的制剂。
[0138]
在生命体中考虑治疗，所述生命体包括但不限于哺乳动物(特别是人)以及具有经济或社会重要性的其他哺乳动物，包括处在濒危状态的那些哺乳动物。进一步的示例包括通常为人类消费而饲养的家畜或其他动物，以及家养伴侣动物。
[0139]
导致癌细胞扩增减慢的所公开化合物的有效量为靶组织处或附近的浓度，所述浓度有效减缓肿瘤细胞中的细胞扩增，但对非肿瘤细胞的作用很小(直至且包括无作用)，所述非肿瘤细胞包括之前或同时暴露于辐射或化疗化学试剂的非肿瘤细胞。可以使用例如细胞凋亡标志物(如体外或体内的细胞凋亡指数和/或半胱天冬酶活性)确定产生这些作用的浓度。
[0140]
病症的治疗为任何方法、过程或程序的实践，目的在于停止、抑制、减缓或逆转疾病、病症或病状的进展，实质上缓解疾病、病症或病状的临床症状，或者实质上预防疾病、病症或病状的临床症状的出现，直至和包括使病变实体恢复至疾病发展之前的状态。
[0141]
治疗有效量的所公开化合物的加入涵盖化合物的任何给药方法。所公开的化合物的给药可以包括单次或多次施用包含所公开的化合物作为活性成分的多种药物组合物中任何一种。示例包括缓释组合物的单次施用，涉及定期或不定期的多次治疗的治疗过程，多次施用一段时间直至达到疾病状态的减少，在症状出现之前应用的预防性治疗，或者本领域已知的或尚未公开的本领域技术人员将认识到作为潜在有效方案的任何其他给药方案。包括施用规律和施用模式的最终给药方案将取决于许多因素中的任何一种，包括但不限于所治疗的受试者；痛苦的严重程度；施用方式，疾病的发展阶段，一种或多种其他情况的存在，如怀孕、婴儿期，或一种或多种其他疾病的存在；或者现在已知或尚未公开的影响施用模式的选择、施用剂量和施用该剂量的时间阶段的任何其他因素。
[0142]
可以将包含所公开的化合物的药物组合物在施用第二药物组合物(其可能包含或可能不包含该化合物)之前、同时或之后施用。如果组合物同时施用，则它们彼此在一分钟内施用。如果不同时施用，第二药物组合物可以在包含化合物的药物组合物之前或之后一个或多个分钟、小时、天、周或月的时间施用。可替代地，可以循环施用药物组合物的组合。循环疗法包括施用一种或多种药物组合物持续一段时间，然后施用一种或多种不同的药物组合物持续一段时间并重复这种顺序施用，以减少对一种或多种组合物的耐受性的发展，避免或减少一种或多种组合物的副作用，和/或改善治疗的功效。
[0143]
本发明进一步涵盖试剂盒，所述试剂盒有助于将所公开的化合物施用至患病实体。这种试剂盒的示例包括一种或多种单位剂量的化合物。将单位剂量包封在优选的无菌容器中，并且包含所公开的化合物和药学上可接受的载体。在另一个方面，单位剂量包含一种或多种化合物的冻干物。在本发明的这个方面，试剂盒可以包括另一个优选的无菌容器，其包封能够溶解冻干物的溶液。然而，这种溶液不需要包含在试剂盒中，并且可以与冻干物分开获得。在另一个方面，试剂盒可以包含一种或多种装置，所述装置用于施用单位剂量或
与化合物组合使用的药物组合物。这种装置的示例包括但不限于注射器、滴液袋、贴剂或灌肠剂。在本发明的一些方面，装置包含包封单位剂量的容器。
[0144]
包含所公开的化合物的药物组合物可以用于治疗癌症的方法中。这些方法涉及将包含所公开的化合物和/或其药学上可接受的盐的治疗量的药物组合物施用至哺乳动物，优选已经诊断出癌症的哺乳动物。
[0145]
治疗量进一步包括预防癌症进展为肿瘤性、恶性或转移状态的量。在已知或怀疑先前发展为肿瘤或癌症的情况下，特别是在已经发生由增生、化生或发育不良组成的非肿瘤性细胞扩增的情况下(对于这种异常扩增情况的评论，参见robbins和angell，1976，basic pathology，第二版，wb saunders co.，philadelphia，第68
‑
79页)提示这种预防性使用。增生为受控的细胞增殖的一种形式，其涉及组织或器官中细胞数量的增加，而结构或活性没有显著改变。例如，子宫内膜增生通常在子宫内膜癌之前，癌前结肠息肉通常转变为癌性病变。化生为一种受控的细胞扩增的形式，其中一种类型的成体或完全分化的细胞替代另一种类型的成体细胞。化生可以发生在上皮细胞或结缔组织细胞中。典型的化生涉及有些无序的化生上皮细胞。发育不良通常是癌症的先兆，主要发现于上皮细胞；其为非肿瘤性细胞扩增中最无序的形式，涉及个体细胞均匀性和细胞结构方向的丧失。发育不良的细胞通常具有异常大的、深染的细胞核，并表现出多形性。发育不良特征性地发生在存在慢性刺激或炎症的地方，并且经常在子宫颈、呼吸道、口腔和胆囊中发现。
[0146]
可替代地，或者除了特征为增生、化生或发育不良的异常细胞扩增的存在，转化表型或恶性表型的一种或多种特征(其在体内展示或在体外通过来源于患者的细胞样品展示)的存在可以提示需要预防性/治疗性施用包含所述化合物的药物组合物。转化表型的这种特征包括形态学变化、较弱的基质附着、接触抑制丧失、锚定依赖性丧失、蛋白酶释放、糖转运增加、血清需求降低、胎儿抗原表达、250,000道尔顿细胞表面蛋白质的消失等(参见同上，第84
‑
90页，与转化或恶性表型相关的特征)。进一步的示例包括黏膜白斑病(其中上皮的良性外观的增生性或发育不良性病变)或鲍文病(bowen’s disease)(原位癌)，它们为肿瘤前病变，表明需要预防性干预。在另一个示例中，纤维囊性疾病(包括囊性增生、乳腺发育不良、腺病或良性上皮增生)表明需要预防性干预。
[0147]
在本发明的一些方面，所公开的化合物的使用可以通过一种或多种身体因素确定，如肿瘤大小和等级或一种或多种分子标记物和/或指示预后的表达特征及对化合物治疗的可能反应。例如，雌激素(er)和孕酮(pr)类固醇激素受体状态的确定已经成为评估乳腺癌患者的常规程序。参见，例如，fitzgibbons等人，arch.pathol.lab.med.124:966
‑
78,2000。激素受体阳性的肿瘤更可能对激素疗法产生反应，并且其生长典型地不那么有侵略性，从而导致er

/pr

肿瘤患者的预后更好。在另一个示例中，人表皮生长因子受体2(her
‑
2/neu)(一种跨膜酪氨酸激酶受体蛋白)的过表达与乳腺癌预后不良相关(参见，例如，ross等人，the oncologist8:307
‑
25,2003)，并且乳腺肿瘤中的her
‑
2表达水平用于预测抗her
‑
2单克隆抗体治疗剂曲妥珠单抗(genentech，南圣弗朗西斯科，ca)的反应。
[0148]
在本发明的另一个方面，患病实体表现出一种或多种恶性肿瘤的诱发因素，其可以通过施用包含所述化合物的药物组合物来治疗。这些诱发因素包括但不限于与恶性肿瘤相关的染色体易位，如对于慢性髓性白血病的费城染色体和对于滤泡性淋巴瘤的t(14；18)；提示结肠癌的息肉病或加德纳(gardner’s)综合征的发病率；提示多发性骨髓瘤的良
性单克隆丙种球蛋白病；与曾经患有或目前患有癌症或癌症前期疾病的人的亲属关系；暴露于致癌物质；或现在已知或尚未公开的提示癌症发病率增加的任何其他诱发因素。
[0149]
本发明进一步涵盖包含组合疗法的治疗癌症的方法，其中所述组合疗法包括施用包含所公开的化合物的药物组合物和另一种治疗方式(modality)。这种治疗方式包括但不限于放射疗法、化学疗法、外科手术、免疫疗法、癌症疫苗、放射免疫疗法、用包括所公开的化合物的那些之外的药物组合物的治疗，或现在已知或尚未公开的与所公开的化合物组合有效治疗癌症的任何其他方法。联合疗法可以协同作用。也就是说，两种疗法的组合比单独施用的任一疗法更有效。这导致可以有效地使用较低剂量的两种治疗方式的情况。这反过来降低了与施用任一方式相关的毒性和副作用(如果有的话)，而没有降低功效。
[0150]
在本发明的另一个方面，将包含所公开的化合物的药物组合物与治疗有效量的放射疗法组合施用。可以在施用包含化合物的药物组合物同时、之前或之后施用放射疗法。放射疗法可以与包含化合物的药物组合物叠加或协同作用。本发明的这个特定方面在已知对放射疗法有反应的癌症中最有效。已知对放射疗法有反应的癌症包括但不限于非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、尤因氏肉瘤、睾丸癌、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、喉癌、宫颈癌、鼻咽癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、头颈癌、食道癌、直肠癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、脑肿瘤、其他cns肿瘤或现在已知或尚未公开的任何其他此类肿瘤。
[0151]
可以与所公开的化合物组合使用的药物组合物的非限制性示例包括核酸结合组合物(如顺
‑
二氨二氯化铂(ii)(顺铂)、多柔比星、5
‑
氟尿嘧啶、紫杉醇)和拓扑异构酶抑制剂(如依托泊苷、替尼泊苷、伊立替康和拓扑替康)。还有的其他药物组合物包括止吐组合物，如甲氧氯普胺(metoclopromide)、多潘立酮、丙氯拉嗪、异丙嗪、氯丙嗪、曲美苄胺、昂丹司琼、格拉司琼、羟嗪、乙酰亮氨酸单乙醇胺(acethylleucine monoethanolamine)、阿齐必利、阿扎司琼、苯喹胺、比阿塔那定(bietanautine)、溴必利、布克利嗪、氯波必利、赛克利嗪、茶苯海明、敌芬尼朵(diphenidol)、多拉司琼、美克洛嗪、美沙拉妥、美托哌丙嗪、纳比隆、奥昔喷地(oxyperndyl)、匹哌马嗪、东莨菪碱、舒必利、四氢大麻酚、硫乙拉嗪、硫丙拉嗪和托烷司琼。
[0152]
可以与包含所公开的化合物的药物组合物组合使用的药物组合物的其他示例为造血集落刺激因子。造血集落刺激因子的示例包括但不限于非格司亭、沙格司亭、莫拉司亭和阿法依泊汀。可替代地，包含所公开的化合物的药物组合物可以与抗焦虑剂组合使用。抗焦虑剂的示例包括但不限于丁螺环酮和苯二氮卓类，如地西泮、劳拉西泮、奥沙西泮、氯氮卓(chlorazepate)、氯硝西泮、甲氨二氮卓(chlordiazepoxide)和阿普唑仑。
[0153]
可以与包含所公开的化合物的药物组合物组合使用的药物组合物可以包括镇痛剂。这种药剂可以为阿片类镇痛剂或非阿片类镇痛剂。阿片类镇痛剂的非限制性示例包括吗啡、海洛因、氢吗啡酮、氢可酮、羟吗啡酮、羟考酮、美托酮、阿扑吗啡、去甲吗啡、埃托啡、丁丙诺啡、哌替啶、洛哌丁胺、阿尼利定、依索庚嗪(ethoheptazine)、匹米诺定(piminidine)、倍它罗定、地芬诺酯、芬太尼、舒芬太尼、阿芬太尼、瑞芬太尼、左啡诺、右美沙芬、非那佐辛、喷他佐辛、环佐辛、美沙酮、异美沙酮和丙氧芬。合适的非阿片类镇痛剂包括但不限于阿司匹林、塞来昔布、罗非考昔、双氯芬酸(diclofinac)、二氟尼柳(diflusinal)、依托度酸(etodolac)、非诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、酮洛芬、吲哚美辛、酮咯酸、甲氯芬酯、美芬那酸(mefanamic acid)、萘丁美酮、萘普生、吡罗昔康、舒林酸或现在已
知或尚未公开的任何其他镇痛剂。
[0154]
在本发明的其他方面，包含所公开的化合物的药物组合物可以与涉及离体治疗癌症的方法组合使用。这种治疗的一个示例为自体干细胞移植。在该方法中，收获患病实体的自体造血干细胞，并清除所有癌细胞。可以将包含所公开的化合物的治疗量的药物组合物施用至患者，然后通过加入患者自身的或供体的干细胞来恢复实体的骨髓。
[0155]
可以通过单独或与另一种治疗方式组合的药物组合物(包含所公开的化合物)治疗的癌症包括实体瘤，如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮细胞肉瘤(lymphangioendothelio
‑
sarcoma)、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、结直肠癌、肾癌、胰腺癌、骨癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、肾母细胞瘤(wilms’tumor)、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、小细胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme)、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、皮肤癌、黑素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。
[0156]
可以通过包含所公开的化合物的药物组合物治疗的其他癌症包括血源性癌症，如急性淋巴细胞白血病(all)、急性淋巴细胞性b细胞白血病、急性淋巴细胞性t细胞白血病、急性髓细胞白血病(aml)、急性早幼粒细胞白血病(apl)、急性单核细胞白血病、急性红白血病性白血病、急性成巨核细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性未分化白血病、慢性粒细胞白血病(cml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、成淋巴细胞白血病、髓性白血病、淋巴细胞白血病、粒细胞白血病、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症(waldenstrom's macroglobulinemia)、重链病和红细胞增多症。
[0157]
通过以下实施例进一步阐明本公开，所述实施例不应被解释为限制。
[0158]
实施例
[0159]
化合物
[0160]
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1)(m 1:336)
[0161][0162]
(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1a)
[0163][0164]
(r)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1b)
[0165][0166]
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1)的合成
[0167]
化合物#1的合成遵循以下通用方案(图1)。式ii的羧酸与式iii的氨基噻唑之间的酰胺形成反应在n,n
‑
二甲基甲醛(dmf)中由n,n,n',n'
‑
四甲基
‑
o
‑
(7
‑
氮杂苯并三唑
‑1‑
基)脲六氟磷酸酯(hatu)和二异丙基乙胺(diea)介导。将式iv的偶联产物在四氢呋喃和甲醇溶液中用羟胺和氢氧化钠处理，获得相应的式v的异羟肟酸。v的手性拆分提供了光学活性对映异构体va。进行进一步的化学转化如酯化和磺化以获得vi。
[0168]
(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1a)和
[0169]
(r)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1b)
[0170]
步骤1.向2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酸(135mg，0.70mmol)和2
‑
氨基噻唑
‑5‑
羧酸乙酯(100mg，0.58mmol)在dmf中的溶液中加入diea(112mg，0.87mmol)和hatu(264mg，0.70mmol)。将反应物在室温搅拌4小时，并在乙酸乙酯和水之间分液。将有机层干燥并浓缩。将残余物通过biotage柱色谱法纯化，获得2
‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰氨基)噻唑
‑5‑
羧酸乙酯(163mg)。
[0171]
步骤2.向2
‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰氨基)噻唑
‑5‑
羧酸甲酯(112mg，0.322mmol)在四氢呋喃/甲醇(4:1)混合物中的溶液中加入2.8ml羟胺(50％在水中)，然后加入氢氧化钠溶液(1n，1.0ml)。将混合物在室温搅拌过夜并浓缩。将残余物用1n hcl酸化，并通过c18 biotage柱色谱法纯化，获得化合物(
±
)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(71mg)。ms(计算的m 1：349；实测：349)
[0172]
步骤3.将来自步骤2的外消旋混合物通过id
‑
3拆分，获得两种对映异构体，化合物#1a(保留时间＝1.49分钟)和化合物#1b(保留时间＝4.33)(图3)。柱色谱法条件为：
[0173]
共溶剂：meoh:dcm＝1:1(0.2％ipa)
[0174]
柱：chiral pak id
‑
3 4.6*250mm 5μm
[0175]
进样体积：3
[0176]
共溶剂％：50％
[0177]
柱温：36.6c
[0178]
样品槽：p1:3a
[0179]
总流量：4
[0180]
背压：100
[0181]
压降：68
[0182]
(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1a)的合成
[0183]
化合物#1a的合成遵循图7中所示的方案。
[0184]
步骤1
[0185][0186]
(2s)
‑2‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酸
[0187]
在n2下，将s
‑
α
‑
苯乙胺(s
‑
α
‑
pea)(49.6g，1.0eq.)溶解在400ml丙酮中。向其中滴加2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酸(80.0g，1.0eq.)在丙酮(400ml)中的溶液。将溶液加热至50至55℃并搅拌2小时，冷却至室温。将沉淀物过滤，用丙酮洗涤并溶解在水(1600ml)和2n hcl(60ml)中。将溶液用乙酸乙酯(3
×
80ml)萃取。将合并的有机相用水(2
×
80ml)洗涤并浓缩，获得23.2g的(2s)
‑2‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酸(化合物vii)(98.60％lc纯度，98.2％ee)。
[0188]
步骤2
[0189][0190]2‑
{[(2s)
‑2‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰基]氨基}
‑
1,3
‑
噻唑
‑5‑
羧酸乙酯
[0191]
在0℃在n2下，向化合物vii(22.0g，1.0eq.)在二氯甲烷(220ml)中的溶液中滴加socl2(40.4g，3.0eq.)。将反应物在5至15℃搅拌3小时并浓缩。将残余物溶解在thf(330ml)中，浓缩以去除残余的socl2，并溶解在thf(330ml)中。在0℃，将该酰氯溶液滴加到2
‑
氨基
‑
1,3
‑
噻唑
‑5‑
羧酸乙酯(化合物iii)(21.46g，1.1eq.)和三乙胺(25.38g，2.0eq.)在thf中的溶液中。将反应物升温至室温，搅拌过夜，并在室温用水(440ml)淬灭反应。将混合物用甲基叔丁基醚(460ml)萃取。将有机层用1n hcl(230ml)、0.5n nahco3(230ml)和5％nacl(115ml)洗涤并浓缩。将残余物与正庚烷(230ml)混合，在40至50℃搅拌0.5小时，然后冷却至室温。将沉淀过滤，用丙酮/正庚烷(1:10，46ml)洗涤。收集滤饼，在45℃以下真空干燥，获得2
‑
{[(2s)
‑2‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰基]氨基}
‑
1,3
‑
噻唑
‑5‑
羧酸乙酯(化合物viii)(35.8g)。
[0192]
步骤3
[0193][0194]
(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺
[0195]
向化合物viii(35.8g，1.0eq.)在thf(720ml)和meoh(180ml)中的溶液中加入50％nh2oh(50％在水中，900ml)。向其中滴加1n naoh(330ml)。将反应物在15至25℃搅拌过夜，用浓hcl淬灭，直到ph值约为6。将混合物用乙酸乙酯(2
×
720ml)萃取。合并的有机相用5％盐水(360ml)洗涤，浓缩。向残余物中加入二氯甲烷(540ml)，并将混合物在室温搅拌1小时。
将固体过滤并用dcm(100ml)洗涤，收集滤饼，在45℃以下真空干燥，获得(s)
‑
n
‑
羟基
‑2‑
(2
‑
(4
‑
甲氧基苯基)丁酰胺基)噻唑
‑5‑
甲酰胺(#1a)(27.9g)。
[0196]
#1a和#1b对hdac酶的抑制
[0197]
以12点浓度
‑
应答形式针对11种hdac酶测试化合物，如表2a中所列。使用3倍稀释步骤在100％dmso中稀释测试化合物。测试中的最终化合物浓度为100μm至0.565nm或根据要求。对于每个稀释度，在单个孔中测试化合物，并且所有测试中的dmso最终浓度均保持在1％。以相同方式测试参比化合物。结果列于表2b中。
[0198][0199]
#1、#1a和#1b对细胞活力的作用
[0200]
使用在不同时间点不同浓度的上述化合物存在时的细胞活力来评估细胞毒性和
化合物对细胞增殖的作用。所公开的化合物在细胞系中的ic
50
(或活性百分比)数据总结在表3中。
[0201]
细胞活力测试
[0202]
通过promega(madison，wi)的细胞活力试验来测量细胞活力。发光细胞活力试验是一种均质方法，所述方法基于定量存在的atp来确定培养物中存活细胞的数量，所述存在的atp标志着代谢活性细胞的存在。在处理后，将加入到处理孔中并在37℃孵育。使用molecular devices spectramax酶标仪测量发光值。
[0203]
单个试剂研究
[0204]
使细胞生长至70％融合，胰蛋白酶消化，计数，并以2.5
×
103至5
×
103细胞/孔的终浓度接种于96孔平底板中(第0天)。使细胞在生长介质中孵育24小时。在第1天开始用测试试剂或标准试剂处理，并持续72小时。在第72小时的时间点，去除含有介质的处理。如上面所描述通过细胞活力试验来定量活细胞数。使用这些研究的结果以计算每种化合物的ic
50
值(抑制对照的50％细胞生长的药物浓度)。
[0205]
数据收集
[0206]
对于单个试剂和组合研究，收集每个实验的数据，并使用以下计算将其表示为细胞生长％：
[0207]
细胞生长％＝(f
测试
/f
载体
)
×
100
[0208]
其中f
测试
为测试的样品的荧光，f
载体
为药物溶解在其中的载体的荧光。使用prism 6软件(graphpad)使用以下等式来生成剂量应答图和ic
50
值：
[0209]
y＝(顶部
‑
底部)/(1 10
((logic50
‑
x)
‑
斜率)
)
[0210]
其中x为浓度的对数，y为应答。y从底部(bottom)开始以s形状延伸至顶部(top)。
[0211]
表3
[0212]
[0213]
[0214]
[0215]
[0216][0217]
药代动力学
[0218]
#1、#1a和#1b在小鼠中的药代动力学研究如表4和表5所示。与#1或#1b相比，#1a显示vz/f(口服施用后末期的表观分布容积)显著增加。分布容积是候选药物最重要的药代动力学性质之一，对于抗癌药物而言，可导致药物向肿瘤的分布增加。图2阐明#1a确实具有优先且显著的肿瘤摄取和保留。
[0219]
表4
[0220]
[0221][0222]
表5.#1a在小鼠中的药代动力学研究
[0223][0224]
针对hdac6蛋白的k
off
动力学的测定
[0225]
通过将100nm hdac6蛋白与0.120μm化合物#1a、#1b或dmso预孵育3小时来测定#1a(图3)或#1b(图4)的解离速率。预孵育后，将化合物
‑
酶络合物稀释(200x)到含有底物肽的测试缓冲液中。使用labchip3000仪器观察约8小时的进展曲线。用以下等式：((a (vs*x)) (((vo
‑
vs)*(1
‑
exp(((
‑
1)*kobs)*t)))/kobs))拟合与化合物预孵育后的进展曲线(蓝色)，以确定观察到的解离速率。保留时间确定为ln(2)/kobs。
[0226]
结果表明，与#1b相比，#1a的k
off
和保留时间具有令人惊讶且预料不到的改进。化合物#1a看起来是一种非常紧密结合的hdac6抑制剂。辅助透析研究证实了该发现，所述研究证明透析24小时后只有5％的#1a回收。#1a与hdac6结合的保留时间为1915分钟，而化合物#1b仅为35分钟，#1a的保留时间增加了55倍。
[0227]
#1a的x射线晶体学
[0228]
通过缓慢蒸发从dcm和甲醇的混合物中重结晶(#1a)的单一无色板状晶体。选择合适的晶体(0.47
×
0.20
×
0.03)mm3并将其装载在bruker apex
‑
ii ccd衍射仪上具有paratone油的尼龙环上。在数据收集期间，使晶体保持在t＝173(2)k。使用olex2(dolomanov等人，2009)，通过shelxt(sheldrick,2015)结构求解程序，使用固有相位求解方法(intrinsic phasing solution method)求解结构。使用最小二乘最小化采用xl版本(sheldrick,2008)改进模型。
[0229]
晶体数据
[0230]
c15h17n3o4s,mr＝335.38,三斜晶系,p1(no.1),c15h17n3o4s,mr＝335.38,三斜晶系,p1(no.1),α＝87.8140(10)
°
,β＝73.8220(10)
°
,γ＝80.9970
(10)
°
,t＝173(2)k,z＝2,z'＝2,测量了14374个反射，4991个独特反射(rint＝0.0353)，用于所有计算。最终的wr2为0.0867(所有数据)，r1为0.0342(i>2(i))(参见图5)。
[0231]
除非另有定义，本文中的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管类似于或等同于本文所述的那些方法和材料的任何方法和材料可以用于本发明的实践或测试，但本文描述了优选的方法和材料。所引用的所有出版物、专利和专利出版物出于所有目的通过引用整体并入本文。
[0232]
提供本文讨论的出版物，仅用于它们在本技术的申请日之前的公开。本文中的任何内容均不应被解释为承认因为在先发明，本发明无权早于此类出版物。
[0233]
虽然已经结合其具体实施方案描述了本发明，但应当理解，其能够进一步改进，本技术旨在涵盖一般遵循本发明原理的本发明的任何变化、用途或改变，并包括在本发明所属领域内的已知或惯用实践中以及可应用于上文所述的基本特征以及所附权利要求的范围内的与本公开的偏离。
[0234]
参考文献
[0235]
1.cosmo
‑
v1.61
‑
software for the ccd detector systems for determining data collection parameters,bruker axs,madison,wi(2000).
[0236]
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341.
[0237]
3.sheldrick,g.m.,a short history of shelx,acta cryst.,(2008),a64,339
‑
341.
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4.sheldrick,g.m.,shelxt
‑
integrated space
‑
group and crystal
‑
structure determination,acta cryst.,(2015),a71,3
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8.
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5.software for the integration of ccd detector system bruker analytical x
‑
ray systems,bruker axs,madison,wi(2013年后).