可用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理的化合物的制作方法

variation of facial wrinkle trend,randomized clinical trial study)》”，(2012年)，《生命科学学报(life science journal)》第9(3)卷，第1184
‑
1189页]。通过以特定方式刺激皮肤细胞，减少皱纹和皮肤下垂是可能的。
7.在细胞水平上来说，mens也被认为能刺激胶原蛋白和弹性蛋白的产生。胶原蛋白是皮肤结缔组织中最丰富的蛋白质；其在提供所需柔性的同时形成有助于在新细胞生长时支持新细胞的网状结构。衰老的公认特性之一是皮肤下垂。增加胶原蛋白合成被认为有利于减少衰老迹象。胶原蛋白合成随着年龄的增长而下降，会导致老年人的皮肤失去紧致性、出现皱纹[varani,j.等人，“按时间顺序老化的皮肤中胶原蛋白的形成减少：年龄相关性改变在成纤维细胞功能和不合格机械性刺激中的作用(decreased collagen production in chronologically aged skin:roles of age
‑
dependent alteration in fibroblast function and defective mechanical stimulation)”，(2006年)，《美国病理学杂志(american journal of pathology)》，第168(6)卷，第1861
‑
1868页]。因此，mens可以改善面部皮肤的紧致度和弹性。
[0008]
然而，使用mens进行处理存在一些缺点。例如，电流强度可能要取决于个体皮肤的厚度。一般情况下，如果健康状况恶化或身体状况发生变化，体内流动的微电流就会变弱。皮肤厚度受年龄或外界因素的影响，因此个体内和个体间差异较大。在某些情况下，电极与待处理表面之间的电接触不良会导致使用者感到不适和疼痛，在极端情况下会导致皮肤过敏。一些mens设备使用电极和粘合剂凝胶来提高导电性，但这既昂贵又不方便(例如，在面部使用)。这是因为一旦电极就位，就再不允许其移动。此外，由于设备的不同，因此很难精确跟踪被处理身体表面的轮廓。而且，由于刺激应该能够定位到一个精确区域，这是一个问题。例如，一些设备需要使用镜子，以便能够将设备棒定位在面部的适当部位，挤压或拉伸皮肤。最后，一些潜在用户对mens处理存在负面偏见，例如，对在脸上用电进行日常美容处理存在偏见。
[0009]
需要提供替代方法减轻或预防皮肤老化的迹象，例如，用于改善肤色和紧致度和/或减少皮肤下垂。需要提供一种克服与比如面部拉皮或mens等已知方法相关的问题的方法。需要寻找可以减轻或预防皮肤衰老迹象的新型活性化合物。具体地，需要找到可以预防或减少皮肤皱纹和/或面部下垂出现的新型活性化合物。
[0010]
本发明旨在满足这些需求中的一些或全部需求并解决以上识别问题中的一些或全部问题。


技术实现要素：

[0011]
在第一方面，本发明提供了通过式(i)表示的化合物：
[0012]
r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6‑
y
p
‑
z
q
‑
r2ꢀꢀꢀꢀ
(i)，
[0013]
其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，其中：
[0014]
aa1为asp、glu、asn、gln、ala、gly或非氨基酸；
[0015]
aa2为val、ile、leu或ala；
[0016]
aa3为tyr、phe、trp、lys、arg或his；
[0017]
aa4为lys、arg、his、pro或val；
[0018]
aa5为asn、asp、gln或非氨基酸；
[0019]
aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；
[0020]
w、x、y和z各自独立地为任何氨基酸；
[0021]
m、n、p和q各自独立地为0或1；
[0022]
m n p q小于或等于2；
[0023]
r1选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由h、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基组成的组；
[0024]
r2选自由
‑
nr3r4、
‑
or3、
‑
sr3组成的组，其中，r3和r4独立地选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基组成的组；并且
[0025]
r1和r2不为氨基酸。
[0026]
特别地，本发明提供式(i)表示的化合物，其中，当aa5为asn、asp或gln时，aa1为ala、gly或非氨基酸；aa2为val、ile或leu；aa3为lys、arg或his；aa4为pro或val；aa6为thr、ala、ser或非氨基酸，但条件是aa1与aa6不同。任选地或此外，本发明提供由式(i)表示的化合物，其中，当aa5为非氨基酸时，aa1为asp、glu、asn或gln；aa2为val、ile、leu或ala；aa3为tyr、phe或trp；aa4为lys、arg或his；且aa6不为氨基酸。
[0027]
已发现本发明的化合物可有效上调盲肌样1(mbnl1)的表达。mbnl1是一种高度保守的rna结合蛋白，在成肌分化和维持过程中起着重要作用。增加成纤维细胞中的mbnl1蛋白会刺激它们向成肌纤维细胞的转分化过程，这种细胞能够释放更多诸如胶原蛋白、弹性蛋白和纤连蛋白等细胞外基质蛋白。增加成肌纤维细胞会使皮肤中的胶原蛋白增加，从而产生皮肤的紧致效果。因此，本发明的化合物可用于减轻和/或预防与由于肌肉老化引起的肌肉质量(肌肉张力)损失相关的问题，例如面部下垂出现。此外，本发明的化合物可用于美容处理，该美容处理通过化学机制发挥皮肤的提拉作用，类似于如电刺激微电流等物理处理作用，但没有后者的不便。此外，已经发现本发明的化合物在抑制皮肤中去甲肾上腺素的释放量和增加脂肪细胞中的脂质量方面是有效的。这些进一步表明了它们作为皮肤抗老化剂的作用。
[0028]
在另一方面，本发明提供了一种化妆品组合物，所述化妆品组合物包括式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐以及至少一种化妆品上可接受的赋形剂或佐剂。
[0029]
在另一方面，本发明提供了式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐、或包括式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的组合物用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理的用途。具体地，本发明提供了式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐、或包括式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理的用途。所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理可以：预防或处理皮肤衰老症状；处理和/或预防皮肤皱纹；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；提高或保持皮肤紧致度；处理和/或预防皮肤下垂出现；处理和/或预防面部不对称；和/或预防和/或减轻脂肪组织损失的影响。
[0030]
在另一方面，本发明提供了一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理
和/或护理的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐或包括所述式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的组合物。具体地，本发明提供了一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理的方法，所述方法包括向所述受试者施用化妆品上有效量的式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐或包括所述式(i)化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的化妆品组合物。通常，所述化合物将局部施用。所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理可以：预防或处理皮肤衰老症状；处理和/或预防皮肤皱纹；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；提高或保持皮肤紧致度；处理和/或预防皮肤下垂出现；处理和/或预防面部不对称；和/或预防和/或减轻脂肪组织损失的影响。
[0031]
在另一方面，本发明提供了一种用于对皮肤进行处理和/或护理的化妆品上、非治疗性方法的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0032]
(i)包含肉毒杆菌毒素的组合物；
[0033]
(ii)任选地，包括ac
‑
glu
‑
glu
‑
met
‑
gln
‑
arg
‑
arg
‑
nh2的组合物；和
[0034]
(iii)包括式(i)化合物的化妆品组合物。
附图说明
[0035]
图1示出了使用时间分辨荧光能量转移测定法测定的人骨骼肌细胞中存在的mbnl1蛋白质百分比(基于人骨骼肌细胞的总蛋白质含量)。对经本发明化合物处理的人类骨骼肌细胞样品和未经本发明化合物处理的人类骨骼肌细胞对照试样进行测定(实例7)。缩写：bc，基础对照。
[0036]
图2示出了使用免疫荧光测定法测定的人皮肤成纤维细胞中存在的mbnl1蛋白质水平。对经本发明化合物处理的人皮肤成纤维细胞样品和未经本发明化合物处理的人皮肤成纤维细胞对照试样进行测定(实例8)。缩写：bc，基础对照。
[0037]
图3示出了使用免疫荧光测定法测定的人骨骼肌细胞中的肌肉质量丢失水平。对经本发明化合物处理的人骨骼肌细胞样品和未经本发明化合物处理的人骨骼肌细胞对照试样进行测定(实例9)。缩写：bc，基础对照。
[0038]
图4示出了使用免疫荧光测定法测定的人骨骼肌细胞中的肌肉质量丢失百分比。在用肿瘤坏死因子α(tnfα)处理以及(i)用本发明的化合物处理的或(ii)未用本发明的化合物处理的人骨骼肌细胞的样品上进行测定。还将结果与未用tnfα处理以及未用本发明的化合物处理的人骨骼肌细胞进行比较(实例10)。缩写：bc tnf，带20mg/ml的tnfα的基础对照；bc，基础对照。
[0039]
图5示出了通过α
‑
elisa测定法测定的人皮肤成纤维细胞上的1型胶原蛋白水平(实例11)。对经本发明化合物处理的人皮肤成纤维细胞样品和未经本发明化合物处理的基础对照进行测定。缩写：％col，i型胶原蛋白的百分比；bc，基础对照。
[0040]
图6示出了使用免疫荧光测定法测定的人神经母细胞瘤细胞株ss上的去甲肾上腺素释放水平。对经本发明化合物处理的人神经母细胞瘤细胞株样品和未经本发明化合物处理的基础对照品进行测定(实例12)。缩写：na，去甲肾上腺素；bc，基础对照。
[0041]
图7示出了如通过荧光染色确定的人皮下前脂肪细胞中的脂质聚积水平。对已经
用本发明的化合物处理的或未用本发明的化合物处理的年轻的和年老前脂肪细胞的共培养物样品进行了测定。还将结果与年老前脂肪细胞的培养物进行比对比。缩写：％l，脂质聚积百分比；cc，共培养物对照；yc，年轻对照；oc，年老对照。
具体实施方式
[0042]
定义
[0043]
在本发明的上下文中，“皮肤”应理解为包括皮肤、从最上层或角质层到最下层或下皮层(包含两者)的层。这些层由不同类型的细胞构成，如角质形成细胞、成纤维细胞、黑素细胞、肥大细胞、神经元和/或脂肪细胞等。术语“皮肤”也包括头皮。术语“皮肤”包含哺乳动物的皮肤并且包含人类皮肤。同样，术语“毛发、指甲和粘膜”包含哺乳动物(例如，人类)的毛发、指甲和粘膜。
[0044]
术语“处理”如本文所用并且当其未伴随有限定性条件“化妆品上、非治疗性”时，是指处理性方法，所述处理性方法包含涉及施用根据本发明的化合物以减轻或消除疾病或病症，或减少或消除与所述疾病或病症相关联的一种或多种症状的方法。术语“处理”当其未伴随有限定性条件“化妆品上、非治疗性”时还涵盖涉及减轻或消除疾病或病症的生理后果的治疗方法。
[0045]
当术语“处理”和“护理”未伴随有限定性条件“化妆品上、非治疗性”时，其意指处理或护理的目的是改善或保持皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的美学外观。具体地，处理的目的是改善皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化妆品性质，如且不限于水合水平、弹性、紧致度、光泽、张力或质地，所述特性会影响皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的美学外观。术语“护理”在本说明书的上下文中是指保持皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的性质。所述特性通过化妆品处理和/或护理健康受试者以及呈现出皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的疾病和/或病症的受试者两者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜来改善或维持。
[0046]
如本发明中所使用的，术语“预防”，是指本发明的化合物预防、推迟或阻碍疾病或病症的出现或发展，或预防、推迟或阻碍皮肤、粘膜和/或毛发的化妆品性质变化的能力。如本发明中所使用的，术语“预防”与术语“抑制”可互换，也就是说，其是指本发明的化合物抑制疾病或病症的出现或发展，或抑制皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化妆品性质变化的能力。
[0047]
在本发明的上下文中，术语“衰老”是指皮肤由于固有的衰老过程(即慢性衰老)或环境因素(即，通过暴露于太阳(光衰老)或环境试剂(如烟草烟雾)、严寒或大风的极端气候条件、化学污染物或污染物)诱发的外在皮肤衰老过程而经历的变化。在本发明的上下文中，衰老包含所有外部可见和/或通过触摸可感知到的变化，如且不限于：皮肤的不连续发展，如皱纹、细纹、表情纹、妊娠纹、沟、不规则或粗糙；毛孔增大、水合丢失、弹性丢失、紧致度丢失、光滑度丢失、从变形恢复的能力的丢失、回弹性丢失；皮肤下垂，如脸颊下垂、眼睛下方出现眼袋或出现双下巴等；皮肤颜色变化，如斑纹、泛红、眼袋、或色素沉着过度区出现，如老年斑或雀斑等；异常分化、角化过度、弹性组织变性、角化病、毛发丢失、橘皮皮肤、胶原蛋白结构丢失以及角质层、真皮、表皮、血管系统(例如，蜘蛛静脉或毛细血管扩张出现)或靠近皮肤的那些组织的其它组织学变化等等。术语“光衰老”与由于皮肤延长暴露于导致皮肤永久衰老的紫外线照射的一组方法一起分组，并且其呈现了与衰老相同的物理特性，如且不限于软弱、下垂、颜色变化或色素沉着不规则、异常和/或过度角化。如暴露于烟
草烟雾、暴露于污染以及气候条件(如严寒和/或大风)等各种环境因素的总和也会导致皮肤衰老。
[0048]
在本说明书中，用于氨基酸的缩写遵循iupac
‑
iub生化命名委员会(iupac
‑
iub commission of biochemical nomenclature)在《欧洲生物化学杂志(eur.j.biochem.)》，(1984年)，第138卷，第9
‑
37页中指定的规则。因此，例如，gly表示nh2‑
ch2‑
cooh，gly
‑
表示nh2‑
ch2‑
co
‑
，
‑
gly表示
‑
nh
‑
ch2‑
cooh且
‑
gly
‑
表示
‑
nh
‑
ch2‑
co
‑
。因此，代表肽键的连字符在位于符号右侧时，消除了氨基酸的1
‑
羧基中的oh(在此以常规非电离形式表示)，并且在位于符号左侧时，消除了氨基酸的2
‑
氨基中的h；两种修改均可以应用于同一符号(请参见表1)。
[0049]
[0050][0051]
表1
[0052]
如本文所用，术语“非环状脂肪族基团”包含直链(即，直链和非支链)或支链、饱和或不饱和烃基，如烷基、烯基和炔基。非环状脂肪族基团可以是经取代的(单或多)或未经取代。
[0053]
如本文所用，术语“烷基”包含饱和直链和支链烷基，所述直链或支链烷基可以是经取代的(单或多)或未经取代的。烷基通过单键与分子的其余部分结合。烷基具有1个到24个，优选地1个到16个，更优选地1个到14个，甚至更优选地1个到12个，又更优选地1个、2个、3个、4个、5个或6个碳原子。术语“烷基”包含例如甲基、乙基、异丙基、异丁基、叔丁基、2
‑
甲基丁基、庚基、5
‑
甲基己基、2
‑
乙基己基、辛基、癸基、十二烷基、月桂基、十六烷基、十八烷基和戊基。
[0054]
如本文所用，术语“烯基”是指含有一个或多个碳
‑
碳双键并且可以是直链的或支链的以及经取代(单或多)或未经取代的基团。优选地，其具有1个、2个或3个碳
‑
碳双键。如果存在一个以上碳
‑
碳双键，则所述双键可以共轭或不共轭。优选地，烯基具有2个到24个，优选地2个到16个，更优选地2个到14个，甚至更优选地2个到12个，又更优选地2个、3个、4个、5个或6个碳原子。烯基通过单键与分子的其余部分结合。术语“烯基”包含例如乙烯基(
‑
ch2＝ch2)、烯丙基(
‑
ch2‑
ch＝ch2)、异戊二烯基、油烯基、亚油烯基等。
[0055]
术语“炔基”是指含有一个或多个碳
‑
碳三键并且可以是直链的或支链的以及经取代(单或多)或未经取代的基团。优选地，炔基具有1个、2个或3个碳
‑
碳三键。所述三键可以共轭或不共轭。炔基具有2个到24个，优选地2个到16个，更优选地2个到14个，甚至更优选地2个到12个，又更优选地2个、3个、4个、5个或6个碳原子。炔基通过单键与分子的其余部分结合。术语“炔基”包含例如且不限于乙炔基、1
‑
丙炔基、2
‑
丙炔基、1
‑
丁炔基、2
‑
丁炔基、3
‑
丁炔基、戊炔基，如1
‑
戊炔基等。炔基还可以含有一个或多个碳
‑
碳双键，并且炔基包含例如且不限于丁
‑1‑
烯
‑3‑
炔基和戊
‑4‑
烯
‑1‑
炔基等。
[0056]
术语“脂环基”在本文中用来涵盖如且不限于脂肪族环状(脂环族)基团，如环烷基或环烯基或环炔基。术语“脂环基”是指含有碳原子的一个或多个环的单价基团，所述环可以是饱和的(例如，环己基)或不饱和的(例如，环己烯基)，但前提条件是其不是芳香族的。更具体地，脂环基含有三个或更多个，3个到24个、3个到12个或6个到12个环碳原子。脂环基可为单环、双环或三环的环系统，并且所述环可以是例如稠合的或可以通过单键或如亚甲基或其它亚烷基等连接基连接。脂环基可以是经取代的(单或多)或未经取代的。在一个实施例中，脂环基为6元到12元环系统，其由碳原子组成并且任选地含有一个或两个双键。
[0057]
术语“环烷基”是指可以是经取代的(单或多)或未经取代的饱和单环或多环烷基。环烷基具有3个到24个，优选地3个到16个，更优选地3个到14个，甚至更优选地3个到12个，又甚至更优选地3个、4个、5个或6个碳原子。环烷基通过单键与分子的其余部分结合。环烷
基包含如且不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、甲基环己基、二甲基环己基、八氢茚、十氢萘、十二氢非那烯等。
[0058]
术语“环烯基”是指可以是经取代的(单或多)或未经取代的非芳香族单环或多环烯基。环烯基具有5个到24个，优选地5个到16个，更优选地5个到14个，甚至更优选地5个到12个，又更优选地5或6个碳原子。环烯基通过单键与分子的其余部分结合。优选地，环烯基含有1个、2个或3个碳
‑
碳双键。如果存在一个以上碳
‑
碳双键，则所述双键可以共轭或不共轭。环烯基包含如且不限于环戊
‑1‑
烯
‑1‑
基等。
[0059]
术语“环炔基”是指可以是经取代的(单或多)或未经取代的非芳香族单环或多环炔基。环炔基具有8个到24个，优选地8个到16个，更优选地8个到14个，甚至更优选地8个到12个，又甚至更优选地8个或9个碳原子，并且通过单键与分子的其余部分结合。优选地，环炔基含有1个、2个或3个碳
‑
碳三键，所述碳
‑
碳三建共轭或不共轭。环炔基包含例如且不限于环辛基
‑2‑
炔
‑1‑
基等。环炔基还可以含有一个或多个碳
‑
碳双键，所述一个或多个碳
‑
碳双键包含例如且不限于环辛基
‑4‑
烯
‑2‑
炔基等。
[0060]
如本文所用，术语“杂环基”或“杂环的”是指3个到10个成员的烃环系统，其中一个或多个环中的原子中的一个或多个原子是杂原子(即，不是碳原子)。因此，“杂环基”或“杂环的”是指其中环原子由碳和一个或多个杂原子组成的环状基团。为了满足化合价，杂原子可以与h或取代基键合。优选地，环碳原子中的1个、2个或3个为杂原子。每个杂原子可以独立地选自由o、n、s、p和b组成的组或由o、n和s组成的组。杂环基可以是经取代的(单或多)或未经取代的。杂环基可以是单环、双环或三环的环系统，并且所述环可以是例如稠合的或可以通过单键或如亚甲基或其它亚烷基等连接基连接。存在于杂环基中的氮原子、碳原子或硫原子可以任选被氧化，并且氮原子可以任选地被季铵化。杂环基可以是不饱和的或部分或完全饱和的。杂环基可以是脂肪族的或芳香族的。在一个实施例中，杂环基是脂肪族的(也被称为杂脂环基)并且是3元到10元环系统，其中一个或多个环的原子由碳原子以及1个到4个、或1个、2个或3个杂原子组成。在一个实施例中，杂环基为6元到10元环系统，其中一个或多个环的原子由碳原子以及1个到4个杂原子组成，并且其中所述环系统任选地含有一个或两个双键。在一个实施例中，杂环基是芳香族的(也被称为杂芳基)并且是6元到10元环系统，其中一个或多个环的原子由碳原子以及1个到4个、或1个、2个或3个杂原子组成。最优选的是，术语杂环基是指5个或6个成员的环。饱和杂脂环基的实例为二恶烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉和硫代吗啉。芳香族杂环基的实例为吡啶、吡咯、呋喃、噻吩、苯并呋喃、咪唑啉、喹啉(quinolein)、喹啉(quinoline)、哒嗪以及萘啶。
[0061]
术语“芳基”是指具有6个到30个，优选地6个到18个，更优选地6个与10个，又甚至更优选地6个或10个碳原子的芳香族基团。芳基可以包括1个、2个、3个或4个芳环，所述芳环可以通过碳
‑
碳键连接或可以稠合在一起，并且包含例如且不限于苯基、萘基、二苯基、茚基、菲基或蒽基等。芳基可以是经取代的(单或多)或未经取代的。
[0062]
术语“芳烷基”是指被芳香族基团取代的烷基，其具有7个到24个碳原子并且包含如且不限于：
‑
(ch2)1‑6‑
苯基、
‑
(ch2)1‑6‑
(1
‑
萘基)、
‑
(ch2)1‑6‑
(2
‑
萘基)、
‑
(ch2)1‑6‑
ch(苯基)2等。
[0063]
术语“杂芳基烷基”是指被如上定义的杂芳基(也被称为芳香族杂环基)取代的烷基，所述烷基具有1个到6个碳原子，并且所述杂芳基具有2个到24个碳原子以及1个到3个杂
原子。杂芳基烷基包含例如且不限于
‑
(ch2)1‑6‑
咪唑基、
‑
(ch2)1‑6‑
三唑基、
‑
(ch2)1‑6‑
噻吩基、
‑
(ch2)1‑6‑
呋喃基、
‑
(ch2)1‑6‑
吡咯烷基等。
[0064]
如在本技术领域中所理解的，上述基团可以具有一定程度的取代。具体地，在以上所标识的明确阐述的基团中的任何基团中可以存在取代。以上提及的经取代的基团(自由基)是在可用的一个或多个位置中被一个或多个取代基取代的基团(或自由基)。优选地，取代处于1个、2个或3个位置中，更优选地处于1个或2个位置中，又甚至更优选地处于1个位置中。合适的取代基包含例如且不限于：c1‑
c4烷基；羟基；c1‑
c4烷氧基；氨基；氨基
‑
c1‑
c4烷基；c1‑
c4羰基氧基；c1‑
c4氧羰基；卤素，如氟、氯、溴和碘；氰基；硝基；叠氮化物；c1‑
c4烷基磺酰基；硫基；c1‑
c4烷基硫基；芳基氧基，如苯氧基；
‑
nr
b
(c＝nr
b
)nr
b
r
c
；其中，r
b
和r
c
独立地选自由以下集团形成的组：h、c1‑
c4烷基、c2‑
c4烯基、炔基、c3‑
c
10
环烷基、c6‑
c
18
芳基、c7‑
c
17
芳烷基、3元到10元杂环基或氨基的保护基。
[0065]
如将理解的并且如上所述，当本文中陈述r为烷基、烯基、炔基、脂环基、环烷基、环烯基、环烯基、杂环基、杂环、杂芳基烷基、芳基或芳烷基等时，意味着r为此类基团。例如，当提到r是烷基时，就意味着r是烷基。如本文中所使用的，包含性的或开放式的并且不排除另外的未叙述的要素或方法步骤的术语“包括”旨在涵盖短语“基本上由
……
组成”和“由
……
组成”作为替代性实施例，其中“由
……
组成”排除未指定的任何要素或步骤，并且“基本上由
……
组成”允许包含不会实质上影响所考虑的组合物或方法的本质或基本和新颖特性的另外的未列举的要素或步骤。
[0066]
本发明的化合物
[0067]
本发明的第一方面涉及一种式(i)化合物
[0068]
r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6‑
y
p
‑
z
q
‑
r2ꢀꢀꢀꢀ
(i)，
[0069]
其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，其中：
[0070]
aa1为asp、glu、asn、gln、ala、gly或非氨基酸；
[0071]
aa2为val、ile、leu或ala；
[0072]
aa3为tyr、phe、trp、lys、arg或his；
[0073]
aa4为lys、arg、his、pro或val；
[0074]
aa5为asn、asp、gln或非氨基酸；
[0075]
aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；
[0076]
w、x、y和z各自独立地为任何氨基酸；
[0077]
m、n、p和q各自独立地为0或1；
[0078]
m n p q小于或等于2；
[0079]
r1选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由h、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基组成的组；
[0080]
r2选自由
‑
nr3r4、
‑
or3、
‑
sr3组成的组，其中，r3和r4独立地选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基组成的组；并且
[0081]
r1和r2不为氨基酸。
[0082]
有利地，已发现式(i)化合物可提高皮肤和皮肤肌细胞中的mbnl1蛋白。
可以选自由
‑
oh和
‑
nh2组成的组。
[0096]
r1可以选自由h和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由c1‑
c
16
烷基或c2‑
c
18
烯基组成的组；并且r2可为
‑
nr3r4或
‑
or3，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。在本实施例中，r3可为h，并且r4可以选自由h、c1‑
c
16
烷基、c1‑
c3烷基和c1‑
c2烷基形成的组；例如，r2可以选自由
‑
oh和
‑
nh2组成的组。
[0097]
r1可以选自由h、乙酰基、肉豆蔻酰基或棕榈酰基组成的组；并且r2可为
‑
nr3r4或
‑
or3，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。在本实施例中，r3可为h，并且r4可以选自由h、c1‑
c
16
烷基、c1‑
c3烷基和c1‑
c2烷基形成的组；例如，r2可以选自由
‑
oh和
‑
nh2组成的组。
[0098]
r1可以选自由h和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5为c1‑
c
15
烷基，并且r2可为
‑
nr3r4或
‑
or3，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。在本实施例中，r3可为h，并且r4可以选自由h、c1‑
c
16
烷基、c1‑
c3烷基和c1‑
c2烷基形成的组；例如，r2可以选自由
‑
oh和
‑
nh2组成的组。
[0099]
r1可以选自由h、乙酰基和棕榈酰基组成的组；r2可为
‑
nr3r4或
‑
or3，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。在本实施例中，r3可为h，并且r4可以选自由h、c1‑
c
16
烷基、c1‑
c3烷基和c1‑
c2烷基形成的组；例如，r2可以选自由
‑
oh和
‑
nh2组成的组。
[0100]
r1可以选自由h和乙酰基组成的组；r2可为
‑
nr3r4或
‑
or3，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。在本实施例中，r3可为h，并且r4可以选自由h、c1‑
c
16
烷基、c1‑
c3烷基和c1‑
c2烷基形成的组；例如，r2可以选自由
‑
oh和
‑
nh2组成的组。
[0101]
r1可以选自由h和乙酰基组成的组；r2可为
‑
nr3r4，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。在本实施例中，r3可为h，并且r4可以选自由h、c1‑
c
16
烷基、c1‑
c3烷基和c1‑
c2烷基形成的组；例如，r2可以选自由
‑
nh2和
‑
nnhr4组成的组，其中，r4为c1‑
c3烷基。r2可为
‑
nh2。
[0102]
r1可为h并且r2可为
‑
nh2。
[0103]
r1可以选自由以下基团组成的组：经取代的非环状脂肪族基团、经取代的脂环基、经取代的杂环基、经取代的杂芳基烷基、经取代的芳基、经取代的芳烷基和r5‑
co
‑
，其中，r5选自由以下基团组成的组：经取代的非环状脂肪族基团、经取代的脂环基、经取代的芳基、经取代的芳烷基、经取代的杂环基和经取代的杂芳基烷基；和/或r2为
‑
nr3r4，其中，r3和r4中的至少一个选自由以下组成的组：经取代的非环状脂肪族基团、经取代的脂环基、经取代的杂环基、经取代的杂芳基烷基、经取代的芳基和经取代的芳烷基，或者r2为
‑
or3或
‑
sr3，其中，r3选自由以下基团组成的组：经取代的非环状脂肪族基团、经取代的脂环基、经取代的杂环基、经取代的杂芳基烷基、经取代的芳基和经取代的芳烷基。
[0104]
根据另一特定实施例，衍生自聚乙二醇的聚合物的最优选结构为其中r为所包括的介于4与795之间的数字的基团(
‑
ch2‑
ch2‑
o)
r
‑
h以及
[0105][0106]
其中s为所包括的介于1与125之间的数字的基团。
[0107]
本发明提供了一种式(i)化合物，其中，存在以下情况中的至少一种情况：r1不为
h；并且r2不为oh。也就是说，本发明提供了一种其中r1不为h和/或r2不为oh的式(i)化合物。
[0108]
在式(i)化合物中：aa1选自由asp、glu、asn、gln、ala、gly和非氨基酸组成的组；aa2选自由val、ile、leu或ala组成的组；aa3选自由tyr、phe、trp、lys、arg和his组成的组；aa4选自由lys、arg、his、pro和val组成的组；aa5选自由asn、asp、gln和非氨基酸组成的组；aa6选自由thr、ala、ser和非氨基酸组成的组。例如，当aa1为非氨基酸时，这意味着化合物中不存在氨基酸aa1。
[0109]
本发明提供了式(i)化合物，其附带下列条件：当aa5位有氨基酸时，即当aa5为asn、asp或gln时，aa1为ala、gly或非氨基酸；aa2为val、ile或leu；aa3为lys、arg或his；aa4为pro或val；aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；aa1与aa6不同。
[0110]
本发明提供了(i)化合物，其附带如下条件：当aa5位非氨基酸时，即aa5为非氨基酸时，aa1为asp、glu、asn或gln；aa2为val、ile、leu或ala；aa3为tyr、phe或trp；aa4为lys、arg或his；aa6为非氨基酸。
[0111]
本发明提供式(i)化合物，其中，当aa5为非氨基酸时，aa1为asp、glu、asn或gln；aa2为val、ile、leu或ala；aa3为tyr、phe或trp；aa4为lys、arg或his；aa6为非氨基酸。在本实施例中，aa1选自由asp、glu、asn和gln组成的组；aa2选自由val、ile、leu和ala组成的组；aa3选自由tyr、phe和trp组成的组；aa4选自由lys、arg和his组成的组；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸。换言之，本发明提供了式(ii)化合物：
[0112]
r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
y
p
‑
z
q
‑
r2ꢀꢀꢀ
(ii)，
[0113]
其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，其中：
[0114]
aa1为asp、glu、asn或gln；
[0115]
aa2为val、ile、leu或ala；
[0116]
aa3为tyr、phe或trp；
[0117]
aa4为lys、arg或his；
[0118]
w、x、y和z各自独立地为任何氨基酸；
[0119]
m、n、p和q各自独立地为0或1；
[0120]
m n p q小于或等于2；
[0121]
r1选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由h、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基组成的组；
[0122]
r2选自由
‑
nr3r4、
‑
or3、
‑
sr3组成的组，其中，r3和r4独立地选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基组成的组；并且
[0123]
r1和r2不为氨基酸。
[0124]
式(i)化合物是包括在链中连接的4个、5个或6个氨基酸的肽。r1与肽的氨基端(n端)结合，并且r2与肽的羧基端(c端)结合。针对式(i)化合物，r1和r2如上定义。
[0125]
本发明提供式(i)化合物，其中：aa1选自由asp、glu和asn组成的组；aa2选自由val、ile、leu和ala组成的组；aa3选自由tyr、phe和trp组成的组；aa4选自由lys、arg和his组成的组。在本实施例中，aa1可以选自asp和glu。
[0126]
本发明提供式(ii)化合物，其中：aa1选自由asp、glu、asn和gln组成的组；aa2选自
由val和ile组成的组；aa3选自由tyr、phe和trp组成的组；aa4选自由lys、arg和his组成的组。在本实施例中，aa1可以选自asp、glu和asn，或选自asp和glu。
[0127]
本发明提供式(ii)化合物，其中：aa1选自由asp、glu、asn和gln组成的组；aa2选自val、ile、leu和ala组成的组或val和ile组成的组；aa3选自由tyr和phe组成的组；aa4选自由lys、arg和his组成的组。在本实施例中，aa1可以选自asp、glu和asn，或选自asp和glu。
[0128]
本发明提供式(ii)化合物，其中：aa1选自由asp、glu、asn和gln组成的组；aa2选自val、ile、leu和ala组成的组或val和ile组成的组；aa3选自tyr、phe和trp组成的组或tyr和phe成的组；aa4选自lys和arg组成的组。在本实施例中，aa1可以选自asp、glu和asn，或选自asp和glu。
[0129]
本发明提供式(ii)化合物，其中：aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys。
[0130]
本发明提供(i)化合物，其中，当aa5为asn、asp或gln时，aa1为ala、gly或非氨基酸；aa2为val、ile或leu；aa3为lys、arg或his；aa4为pro或val；aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；aa1与aa6不同。在本实施例中，aa1选自由ala、gly和非氨基酸组成的组；aa2选自由val、ile和leu组成的组；aa3选自由lys、arg和his组成的组；aa4选自由pro和val组成的组；aa5选自由asn、asp和gln组成的组；aa6选自由thr、ala、ser和非氨基酸组成的组；以及aa1与aa6不同。因此，当aa1为ala时，aa6选自由thr、ser和非氨基酸组成的组。此外，当aa1为非氨基酸时，即不存在氨基酸aa1时，氨基酸aa6必须存在，即aa6选自由thr、ala和ser组成的组。类似地，当aa6为ala时，aa1选自由gly和非氨基酸组成的组。同理，当aa6为非氨基酸时，即氨基酸aa6不存在时，即aa1选自由ala和gly组成的组。
[0131]
因此，本发明提供式(iii)化合物：
[0132]
r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6‑
y
p
‑
z
q
‑
r2ꢀꢀꢀꢀ
(iii)，
[0133]
其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，其中：
[0134]
aa1为ala、gly或非氨基酸；
[0135]
aa2为val、ile或leu；
[0136]
aa3为lys、arg或his；
[0137]
aa4为pro或val；
[0138]
aa5为asn、asp或gln；
[0139]
aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；
[0140]
aa1与aa6不同；
[0141]
w、x、y和z各自独立地为任何氨基酸；
[0142]
m、n、p和q各自独立地为0或1；
[0143]
m n p q小于或等于2；
[0144]
r1选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由h、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基组成的组；
[0145]
r2选自由
‑
nr3r4、
‑
or3、
‑
sr3组成的组，其中，r3和r4独立地选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基组成的组；并且
[0146]
r1和r2不为氨基酸。
[0147]
式(i)化合物是包括在链中连接的5个、6个或7个氨基酸的肽。r1与肽的氨基端(n端)结合，并且r2与肽的羧基端(c端)结合。针对式(i)化合物，r1和r2如上定义。
[0148]
本发明提供式(iii)化合物，其中：aa1选自由ala和gly组成的组；aa2选自由val、ile和leu组成的组；aa3选自由lys、arg和his组成的组；aa4选自由pro和val组成的组；aa5选自由asn、asp和gln组成的组；aa6选自由thr、ala、ser和非氨基酸组成的组；以及aa1与aa6不同。
[0149]
本发明提供式(iii)化合物，其中：aa1选自由ala、gly且非氨基酸组成的组，或ala和gly组成的组；aa2选自由ile和leu组成的组；aa3选自由lys、arg和his组成的组；aa4选自由pro和val组成的组；aa5选自由asn、asp和gln组成的组；aa6选自由thr、ala、ser且非氨基酸组成的组；以及aa1与aa6不同。
[0150]
本发明提供式(iii)化合物，其中：aa1选自由ala、gly且非氨基酸的组，或ala和gly组成的组；aa2选自由val、ile和leu组成的组；aa3选自由lys和arg组成的组；aa4选自由pro和val组成的组；aa5选自由asn、asp和gln组成的组；aa6选自由thr、ala、ser和非氨基酸的组；以及aa1与aa6不同。在本实施例中，aa2可为leu或ile。
[0151]
本发明提供式(iii)化合物，其中：aa1选自由ala、gly且非氨基酸组成的组，或ala和gly组成的组；aa2选自由val、ile和leu组成的组；aa3选自由lys、arg和his组成的组；aa4选自由pro和val组成的组；aa5选自由asn和asp组成的组；aa6选自由thr、ala、ser和非氨基酸组成的组；以及aa1与aa6不同。在本实施例中，aa2可以选自leu和ile组成的组；和/或aa3可以选自由lys和arg组成的组。
[0152]
本发明提供式(iii)化合物，其中：aa1选自由ala、gly且非氨基酸组成的组，或由ala和gly组成的组；aa2选自由val、ile和leu组成的组；aa3选自由lys、arg和his组成的组；aa4选自由pro和val组成的组；aa5选自由asn和gln组成的组；aa6选自由thr、ala、ser和非氨基酸组成的组；以及aa1与aa6不同。在本实施例中，aa2可以选自leu和ile组成的组；和/或aa3可以选自由lys和arg组成的组。
[0153]
本发明提供式(iii)化合物，其中：aa1选自由ala、gly且非氨基酸组成的组，或ala和gly组成的组；aa2选自由val、ile和leu组成的组；aa3选自由lys、arg和his组成的组；aa4选自由pro和val组成的组；aa5选自由asn、asp和gln组成的组；aa6选自由thr、ala和ser组成的组；以及aa1与aa6不同。在本实施例中，aa2可以选自由leu和ile组成的组；aa3可以选自由lys和arg组成的组；和/或aa5可以选自由asn和asp组成的组。
[0154]
本发明提供式(iii)化合物，其中：aa1为ala；aa2为leu；aa3为lys；aa4为pro；aa5为asn；aa6为thr。
[0155]
本发明的化合物可以排除pro
‑
leu
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys，即本发明提供了一种如上所述的式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，其中，所述化合物不为pro
‑
leu
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys。
[0156]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可排除tyr
‑
lys
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys，或其中m为1且w为tyr；n为1且x为lys；aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸；p为0；q为0；r1为h并且r2为oh的实施例。
[0157]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可以排除arg
‑
lys
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys，或其中m为1且w为arg；n为1且x为lys；aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸；p为0；q为0；r1为h且r2为oh的实施例。
[0158]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可以排除arg
‑
asn
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys，或其中m为1且w为arg；n为1且x为asn；aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸；p为0；q为0；r1为h且r2为oh的实施例。
[0159]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可以排除arg
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
gln
‑
asn，或其中m为0；n为1且x为arg；aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys；aa5为gln；aa6为非氨基酸；p为1且y为asn；q为0；r1为h且r2为oh的实施例。
[0160]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可以排除asp
‑
ala
‑
tyr
‑
lys，或其中m为0；n为0；aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸；p为0；q为0；r1为h且r2为oh的实施例。
[0161]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可以排除asp
‑
ala
‑
tyr
‑
lys，或其中m为0；n为0；aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸；p为0，q为0；r1为h且r2为oh的实施例。
[0162]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可以排除asp
‑
leu
‑
lys
‑
lys，或其中m为0；n为0；aa1为asp；aa2为leu；aa3为lys；aa4为lys；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸；p为0，q为0；r1为h且r2为oh的实施例。
[0163]
本发明的化合物，即式(i)、式(ii)和式(iii)化合物，可以排除his
‑
asp
‑
leu
‑
lys
‑
lys
‑
tyr，或其中m为0；n为1；x为his；aa1为asp；aa2为leu；aa3为lys；aa4为lys；aa5为非氨基酸；aa6为非氨基酸；p为1；y为tyr；q为0；r1为h且r2为oh的实施例。
[0164]
本发明的化合物包括选自由表2中列出的氨基酸序列的组的化合物，其中详述了其序列标识符、其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐。
[0165]
[0166][0167]
表2
[0168]
本发明的化合物包含表2中的序列中的每个序列，其中氨基酸aa1到aa6之一被置换氨基酸替代，其中所述置换氨基酸选自所列出的在以上式(i)、式(ii)和式(iii)中被替代的氨基酸的替代性氨基酸。所述置换氨基酸与被置换的氨基酸不同。置换氨基酸可为非氨基酸。因此，本发明提供了与seq id no.1相对应的式(ii)化合物，其中氨基酸aa1至aa4之一被氨基酸置换，其中：当asp(aa1)被置换时，其被gly、asn或gln置换；当val(aa2)被置换时，其被置换为ile、leu或ala；当tyr(aa3)被置换时，其被phe或trp置换；当lys(aa4)被置换时，其被arg或lys置换。此外，本发明提供了与seq id no.2相对应的式(iii)化合物，其中氨基酸aa1至aa6之一被氨基酸置换，其中：当ala(aa1)被置换时，其被gly或非氨基酸置换；当leu(aa2)被置换时，其被ile或val置换；当lys(aa3)被置换时，其被arg或his置换；当pro(aa4)被置换时，其被val置换；当asn(aa5)被置换时，其被asp或gln置换；当thr(aa6)被置换时，其被ala、ser或非氨基酸置换；但前提是aa1与aa6不同。
[0169]
在根据式(i)、式(ii)和式(iii)所述的表2的氨基酸序列中，r1和r2分别为h和oh。本发明的化合物包含表2的序列中的每个序列，其n端和c端分别被另外的r1和r2基团修饰，如本文对式(i)、式(ii)和式(iii)所定义的。例如，本发明的化合物包含表2中的序列中的每个序列，其中n端氨基酸残基终止于如以上定义的式(i)的r1，其中，r1不为h，并且可替代地或另外，其中，c端氨基酸残基任选地终止于如以上所定义的式(i)、式(ii)和式(iii)的r2，其中，r2不为oh。
[0170]
因此，特别地，本发明提供了根据式(i)、式(ii)和式(iii)的化合物，其中，该化合物为任何氨基酸序列seq id no.1至39或40和其立体异构体，和/或其化妆品可接受的盐，其中，任选地所述序列的n端氨基酸如上文式(i)、式(ii)和式(iii)所定义被r1修饰，其中，r1不为h，并且可选地或另外，所述序列的c端氨基酸如上式(1)所定义被r2修饰，其中，r2不为oh。氨基酸序列可以选自seq id no.1和seq id no.3至seq id no.19。氨基酸序列可以
选自seq id no.2和seq id no.20至seq id no.39，或选自seq id no.2和seq id no.20至40。氨基酸序列可为seq id no.1或seq id no.2。
[0171]
本发明的化合物可以作为立体异构体或立体异构体混合物存在，例如，包括其的氨基酸可具有配置l
‑
、d
‑
或独立于彼此为外消旋的。因此，可能的是获得异构体混合物以及外消旋混合物或非对映异构体混合物或纯非对映异构体或对映异构体，这取决于非对称碳的数量以及哪些异构体或异构体混合物存在。本发明的化合物的优选结构是纯异构体，即对映异构体或非对映异构体。例如，当指出aa2可以为arg时，应当理解，除非另有说明，否则aa2选自l
‑
arg、d
‑
arg或两者的混合物(外消旋的或非外消旋的)。在本文件中描述的制备程序使本领域的技术人员能够通过选择具有正确配置的氨基酸来获得本发明的化合物的立体异构体中的每种立体异构体。
[0172]
在本发明的上下文中，术语“氨基酸”包含由遗传密码编码的氨基酸以及非编码氨基酸，无论其是天然的还是非天然的。未编码的氨基酸是实例为但不限于：瓜氨酸、鸟氨酸、肌氨酸、锁链素、正缬氨酸、4
‑
氨基丁酸、2
‑
氨基丁酸、2
‑
氨基异丁酸、6
‑
氨基己酸、1
‑
萘基丙氨酸、2
‑
萘基丙氨酸、2
‑
氨基苯甲酸、4
‑
氨基苯甲酸、4
‑
氯苯基丙氨酸、2,3
‑
二氨基丙酸、2,4
‑
二氨基丁酸、环丝氨酸、肉毒碱、胱氨酸、青霉胺、焦谷氨酸、噻吩基丙氨酸、羟脯氨酸、别异亮氨酸、别苏氨酸、异哌啶酸、异丝氨酸、苯基甘氨酸、他汀、β
‑
丙氨酸、正亮氨酸、n
‑
甲基氨基酸、α
‑
氨基酸和β
‑
氨基酸等以及其衍生物。非天然氨基酸的列表可见于d.c.roberts和f.vellaccio，在《肽(peptides)》，第5卷(1983年)，第vi章，gross e.和meienhofer j.，学术出版社(academic press)，美国纽约(new york,usa)中的“《肽合成中的不寻常氨基酸(unusual amino acids in peptide synthesis)》”或专门从事此领域的公司的商业目录中。
[0173]
在本发明的上下文中，当w、x、y和/或z存在，即n、m、p或q中的至少一个不为0时，应当理解，w、x、y和/或z的性质不妨碍本发明的化合物的活性，而是有助于对其起作用或对其不起作用。w、x、y和z可以独立地选自由ala、gly、val和ile组成的组。w、x、y和z可以独立地选自由ala、gly和val组成的组。w、x、y和z各自可以为ala或gly。w、x、y和z各自可以为ala。
[0174]
m、n、p和q的每一个可以为0，即式(i)化合物为包括在链中连接的3个、4个、5个或6个氨基酸(例如，aa2‑
aa3‑
aa4、aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4、aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6和aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6)的肽。可替代地，m、n、p和q的总数可以为1，即式(i)化合物为包括链中连接的4个、5个、6个或7个氨基酸的肽。可替代地，m、n、p和q的总数可为2，即式(i)化合物为包括在链中连接的5个、6个、7个或8个氨基酸的肽。
[0175]
m、n、p和q中的每一个可以为0，即式(ii)化合物为包括在链中aa1与aa4连接的4个氨基酸的肽。可替代地，m、n、p和q的总数可以为1，即式(i)化合物为包括在链中连接的5个氨基酸的肽。可替代地，m、n、p和q的总数可以为2，即式(ii)化合物为包括在链中连接的6个氨基酸的肽。
[0176]
m、n、p和q中的每一个可以为0，即式(iii)化合物为包括在链中aa1至aa5、aa2至aa6或aa1至aa6连接的5个或6个氨基酸的肽。可替代地，m、n、p和q的总数可以为1，即式(iii)化合物为包括在链中连接的6个或7个氨基酸的肽。可替代地，m、n、p和q的总数可以为2，即式(iii)化合物为包括在链中连接的7个或8个氨基酸的肽。
[0177]
具体地，本发明的化合物可以选自表3中列出的化合物、其立体异构体和/或其化
妆品上可接受的盐的组。
[0178]
[0179]
[0180][0181]
表3
[0182]
本发明的化合物包含表3中的化合物中的每种化合物，其中，氨基酸aa1至aa6之一被置换氨基酸置换，其中所述置换氨基酸选自所列出的在以上式(i)、式(ii)和式(iii)中被置换的氨基酸的替代性氨基酸。所述置换氨基酸与被置换的氨基酸不同。置换氨基酸可为非氨基酸。因此，本发明提供了与seq id no.1相对应的式(ii)化合物，其中氨基酸aa1至aa4之一被氨基酸置换，其中：当asp(aa1)被置换时，其被gly、asn或gln置换；当val(aa2)被置换时，其被置换为ile、leu或ala；当tyr(aa3)被置换时，其被phe或trp置换；当lys(aa4)被置换时，其被arg或lys置换。此外，本发明提供了与seq id no.2相对应的式(iii)化合物，其中氨基酸aa1至aa6之一被氨基酸置换，其中：当ala(aa1)被置换时，其被gly或非氨基酸置换；当leu(aa2)被置换时，其被ile或val置换；当lys(aa3)被置换时，其被arg或his置换；当pro(aa4)被置换时，其被val置换；当asn(aa5)被置换时，其被asp或gln置换；当thr(aa6)被置换时，其被ala、ser或非氨基酸置换；但前提是aa1与aa6不同。
[0183]
本发明提供了根据式(1)的化合物，其中所述化合物选自pep1至pep49中的任一个或pep1至pep50中的任一个，及其立体异构体和/或其化妆品上或药学上可接受的盐。本发明的化合物可以选自pep1和pep3至pep24。本发明的化合物可以选自pep2和pep25至pep49或选自pep2和pep25至pep50。特别地，该化合物可以选自pep1和pep2。
[0184]
本发明提供的化合物的化妆品上或药学上可接受的盐也在本发明的领域内找到。术语“化妆品上或药学上可接受的盐”是指被认可用于动物(例如，哺乳动物)，更具体地，可用于人类的盐，并且包含：用于形成以下的盐：碱加成盐，所述碱加成盐是无机的，例如且不限于锂、钠、钾、钙、镁、锰、铜、锌或铝等，或者所述碱加成盐是有机的，例如且不限于乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、组氨酸或哌嗪等；或酸加成盐，所述酸加成盐是有机的，例如且不限于乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、苯甲酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、琥珀酸盐、油酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐或葡糖酸盐等，或者是无机的，例如且不限于氯化物、硫酸盐、硼酸盐或碳酸盐等。只要盐是化妆品上或药学上可接受的，则其性质并不重要。本发明的化合物的化妆品上或药学上可接受的盐可以通过现有技术中熟知的常规方法获得[berge s.m.等人，“《药物盐(pharmaceutical salts)》”，(1977年)，《药物科学杂志(j.pharm.sci.)》，第66卷，第1
‑
19页]。
[0185]
本发明还提供了以上描述的实施例中的任何实施例中的具有以下的本发明的化合物、其立体异构体和/或其化妆品上可接受的盐的组合：肉毒杆菌毒素；ac
‑
glu
‑
glu
‑
met
‑
gln
‑
arg
‑
arg
‑
nh2；或h
‑
tyr
‑
d
‑
ala
‑
gly
‑
phe
‑
leu
‑
oh；或其组合。
[0186]
本发明的化合物的制备程序
[0187]
本发明的化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐可以根据现有技术中已知的常规方法合成，比如固相肽合成方法[stewart j.m.和young j.d.，“《固相肽合成(solid phase peptide synthesis)》第2版”，(1984年)，皮尔斯化学公司(pierce chemical company)，伊利诺州洛克福特(rockford,illinois)；bodanzsky m.和bodanzsky a.，“《肽合成的实践(the practice of peptide synthesis)》”，(1994年)，柏林施普林格(springer verlag,berlin)；lloyd
‑
williams p.等人，“《肽和蛋白质的合成的化学方法(chemical approaches to the synthesis of peptides and proteins)》”，(1997年)，crc公司，美国佛罗里达州博卡拉顿(boca raton,fl,usa)]、溶液中的合成、酶合成[kullmann w.“《蛋白酶作为用于阿片肽的酶合成的催化剂(proteases as catalysts for enzymic syntheses of opioid peptides》)”，(1980年)，《生物化学杂志(j.biol.chem.)》，第255(17)卷，第8234
‑
8238页]或其任何组合。化合物还可以通过细菌菌株的发酵获得、通过基因工程化进行修饰或未通过基因工程化进行修饰以产生所需序列，或通过具有动物或植物起源，优先地植物起源的蛋白质的水解控制，所述水解会产生含有期望的序列的游离肽片段。
[0188]
例如，获得式(i)化合物、其立体异构体和其混合物的方法包括以下步骤：
[0189]
将具有受保护的n端和游离c端的氨基酸与具有游离n端和受保护的或与固相载体结合的c端的氨基酸偶联；
[0190]
消除n端的保护基；
[0191]
重复偶联序列并且消除n端的保护基，直至获得所需肽序列为止；
[0192]
消除c端的保护基或切割固相载体。
[0193]
优选地，c端与固相载体结合，并且方法是在固相中执行的并且因此包括将具有受保护的n端和自由的c端的氨基酸与具有自由的n端和与聚合物载体结合的c端的氨基酸偶联；消除n端的保护基；以及如因此获得所需长度的化合物所需的多次重复此序列，最后之后从原始聚合物载体切割经合成的化合物。
[0194]
氨基酸的侧链的官能团在整个合成中利用临时或永久保护基保持充分地保护，并且可以与从所述聚合物载体切割肽的过程同时地或正交地脱保护。
[0195]
可替代地，固相合成可以使用将具有聚合物载体的肽与先前与聚合物载体结合的肽或氨基酸偶联的汇聚式策略(convergent strategy)来执行。汇聚式合成策略是本领域的技术人员广泛已知的并且在lloyd
‑
williams p.等人，“《汇聚式固相肽合成(convergent solid
‑
phase peptide synthesis)》”(1993年)，《四面体(tetrahedron)》，第49(48)卷，第11065
‑
11133页中进行了描述。
[0196]
所述方法可以包括使用现有技术中已知的标准方法和条件，以不加区别的次序对n端和c端进行脱保护和/或从聚合物载体切割肽的其他步骤，在所述其他步骤之后可以对这些端部的官能团进行修饰。对n端和c端的任选修饰可以利用锚固到聚合物载体的式(i)的肽执行，或在所述肽已与所述聚合物载体分离时执行。
[0197]
任选地，r1可以借助于在适当的碱和溶剂的存在下通过亲核取代反应，使本发明的化合物的n端与r1‑
x化合物反应引入，其中具有不涉及n
‑
c键形成的官能团的片段利用临时或永久保护基适当地保护。r1如以上所定义的，并且x为离去基团，如且不限于甲苯磺酰
基、甲磺酰基和卤素基团等。
[0198]
任选地和/或另外，r2基团可以通过以下引入：在有适当溶剂和碱(如n,n
‑
二异丙基乙基胺(diea)或三甲基胺)或添加剂(如1
‑
羟基苯并三唑(hobt)或1
‑
羟基氮杂苯并三唑(hoat))以及脱水剂(如碳二亚胺、脲盐、鏻盐或脒盐等)存在的情况下，使化合物hr2与对应于其中r2为
‑
oh的式(i)的肽反应或通过用例如亚硫酰氯预先形成酰基卤并且由此获得根据式(i)的本发明，其中具有不涉及n
‑
c键形成的官能团的片段利用临时或永久保护基进行适当保护。可替代地，其它r2基团可以通过同时从聚合物载体掺入到肽切割过程中来引入。r2为
‑
or3、
‑
nr3r4或
‑
sr3，其中，r3和r4如以上所定义的。
[0199]
本领域的技术人员将容易地理解，可以根据现有技术中已知的方法以不同的次序来执行c端和n端的脱保护/切割步骤及其随后的衍生。
[0200]
术语“保护基”涉及阻断有机官能团并且可以在受控条件下去除的基团。保护基、其相对反应性以及其保持惰性的条件是本领域的技术人员已知的。
[0201]
氨基的代表性保护基的实例为酰胺，如乙酸酰胺、苯甲酸酰胺、新戊酸酰胺；氨基甲酸酯，如苄氧基羰基(cbz或z)、2
‑
氯苄基(ciz)、对
‑
硝基苄氧基羰基(pnz)、叔丁氧基羰基(boc)、2,2,2
‑
三氯乙氧基羰基(troc)、2
‑
(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基(teoc)、9
‑
芴基甲氧基羰基(fmoc)或烯丙氧基羰基(alloc)、三苯甲基(trt)、甲氧基三苯甲基(mtt)、2,4
‑
二硝基苯基(dnp)、n
‑
[1
‑
(4,4
‑
二甲基
‑
2,6
‑
二氧代环己
‑1‑
亚基)乙基(dde)、1
‑
(4,4
‑
二甲基
‑
2,6
‑
二氧代
‑
亚环己基)
‑3‑
甲基丁基(ivdde)、1
‑
(1
‑
金刚烷基)
‑1‑
甲基乙氧基羰基(adpoc)等，优选地为boc或fmoc。
[0202]
羧基的代表性保护基的实例为酯，如叔丁基酯(tbu)、烯丙基酯(all)、三苯基甲基酯(trt酯)、环己基酯(chx)、苄基酯(bzl)、邻硝基苄基酯、对硝基苄基酯、对甲氧基苄基酯、三甲基甲硅烷基乙基酯、2
‑
苯基异丙基酯、芴基甲基酯(fm)、4
‑
(n
‑
[1
‑
(4,4
‑
二甲基
‑
2,6
‑
二氧代环己亚基)
‑3‑
甲基丁基]氨基)苄基酯(dmab)等；本发明的优选保护基为all、tbu、chex、bzl和trt酯。
[0203]
三官能氨基酸的侧链可以在合成过程期间用与n端和c端的保护基正交的临时或永久保护基团来保护。
[0204]
酪氨酸侧链的羟基可以用2
‑
溴苄氧基羰基(2
‑
brz)、tbu、all、bzl或2,6
‑
二氯苄基(2,6
‑
diclz)等来保护。在优选实施例中，所使用的保护基策略是其中氨基受boc保护，羧基受bzl、chx或all酯保护并且酪氨酸侧链受2
‑
brz或bzl保护的策略。在另一个优选实施例中，采用的保护基策略是其中氨基受fmoc保护，羧基受tbu、all或trt酯保护，酪氨酸侧链受tbu保护的策略。
[0205]
色氨酸侧链的氨基可以例如受甲酰基(for)或boc保护。在一个实施例中，当氨基酸受fmoc保护时，色氨酸侧链可以：为未保护的，即氨基酸以fmoc
‑
trp
‑
oh形式掺入；受boc保护，即氨基酸以fmoc
‑
trp(boc)
‑
oh形式掺入；或受for保护，即氨基酸以fmoc
‑
trp(for)
‑
oh形式掺入。在一个实施例中，氨基受boc保护，并且色氨酸侧链可以受for保护，即氨基酸以boc
‑
trp(for)
‑
oh形式掺入。
[0206]
这些和其它保护基、其引入和去除的实例可以在文献[atherton b.和sheppard r.c.，“《固相肽合成：实用方法(solid phase peptide synthesis:a practical approach)》”，(1989年)，irl牛津大学出版社(irl oxford university press)]中找到。术
语“保护基”还包含固相合成中所使用的聚合物载体。
[0207]
当合成完全或部分以固相发生时，本发明的方法中所使用的可能的固相载体涉及聚苯乙烯载体、接枝到聚苯乙烯的聚乙二醇等，如且不限于：对甲基二苯甲胺树脂(mbha)[matsueda g.r.等人，“用于改善肽酰胺的固相合成的对甲基二苯甲胺树脂(a p
‑
methylbenzhydrylamine resin for improved solid
‑
phase synthesis of peptide amides)”，(1981年)，《肽》，第2卷，第45
‑
50页]；2
‑
氯三苯甲基树脂[barlos k.等人，“darstellung gesch
ü
tzter peptid
‑
fragmente unter einsatz substituierter triphenylmethyl
‑
harze”,(1989年)，《四面体通讯(tetrahedron lett.)》，第30卷，第3943
‑
3946页；barlos k.等人，“veresterung von partiell gesch
ü
tzten peptid
‑
fragmenten mit harzen.einsatz von 2
‑
chlorotritylchlorid zur synthese von leu1
‑
gastrin i”，(1989年)，《四面体通讯》，第30卷，第3947
‑
3951页]；树脂(rapp polymere gmbh公司)；树脂(matrix创新公司(matrix innovation,inc))等，其可以包含或可以不包含不稳定的连接子，如5
‑
(4
‑
氨基甲基
‑
3,5
‑
二甲氧基苯氧基)戊酸(pal)[albericio f.等人，“《5
‑
(4
‑
(9
‑
芴基甲氧基羰基)氨基甲基
‑
3,5
‑
二甲氧基
‑
苯氧基)戊酸(pal)的制备和应用在温和条件下处理c端肽酰胺的固相合成(preparation and application of the 5
‑
(4
‑
(9
‑
fluorenylmethyloxycarbonyl)aminomethyl
‑
3,5
‑
dimethoxy
‑
phenoxy)valeric acid(pal)handle for the solid
‑
phase synthesis of c
‑
terminal peptide amides under mild conditions)》”，(1990年)，《有机化学期刊(j.org.chem.)》，第55卷，第3730
‑
3743页]；2
‑
[4
‑
氨基甲基
‑
(2,4
‑
二甲氧基苯基)]苯氧基乙酸(am)[rink h.，“使用三烷氧基
‑
二苯基
‑
甲基酯树脂对受保护的肽片段的固相合成(solid
‑
phase synthesis of protected peptide fragments using a trialkoxy
‑
diphenyl
‑
methylester resin)”,(1987年)，《四面体通讯》，第28卷，第3787
‑
3790页]、[wang s.s.，“用于受保护的肽片段的固相合成的对
‑
烷氧基苄基醇树脂和对
‑
烷氧基苄氧基羰基酰肼树脂(p
‑
alkoxybenzyl alcohol resin and p
‑
alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide resin for solid phase synthesis of protected peptide fragments)”，(1973年)，《美国化学会志(j.am.chem.soc.)》，第95卷，第1328
‑
1333页]等，其使得能够同时从聚合物载体脱保护和切割化合物。
[0208]
应用
[0209]
本发明基于以下发现：式(i)化合物(本发明的化合物)可用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理。具体地，已经发现本发明的化合物可以抑制去甲肾上腺素释放并增加皮肤/骨骼肌中的盲肌样1(mbnl
‑
1)蛋白的表达，并且因此可用于预防或处理皮肤衰老的症状，包含皮肤皱纹、皮肤下垂出现和紧致度丢失，并且可用于处理或预防面部不对称。已经发现，本发明的化合物可以抑制去甲肾上腺素的释放，增加皮肤中的胶原蛋白合成。进一步地，已经发现，本发明的化合物可以增加脂肪细胞的脂质含量，并且因此可以增大脂肪组织的体积。这些作用进一步表明了本发明的所述化合物在预防或处理皮肤衰老症状中的有用性。因此，式(i)化合物可用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理。
[0210]
mbnl1是一种rna结合蛋白，其与健康肌肉功能所需的剪接模式的分化和维持有关。一些观察结果表明，mbnl1功能的丧失是健康人在肌肉自然老化过程中肌肉质量丢失的一个原因[malatesta,m.等人“盲肌样1在肌强直性营养不良和肌少症的骨骼肌核中发生异
位迁移”，(2013年)，《欧洲组织化学杂志(european journal of histochemistry)》，第57(e15)卷，第86
‑
92页；malatesta,m.等人，“在肌强直性营养不良和肌少症中，骨骼肌细胞的rna转录和成熟同样受到损害：超微结构证据”，(2014年)，《衰老神经科学前沿(frontiers in aging neuroscience)》，第6(196)卷，第1
‑
6页]。研究还表明，成纤维细胞中mbnl1蛋白的增加激活了其向成肌纤维细胞的转分化过程，肌成纤维细胞是一种能够释放大量细胞外基质蛋白的细胞类型，如胶原蛋白、弹性蛋白和纤连蛋白。事实上，电刺激被证明可以诱导成肌纤维细胞的外观和功能[davis,j.等人，“mbnl1介导的分化rna调控促进成肌纤维细胞转化和纤维化反应(mbnl1
‑
mediated regulation of differentiation rnas promotes myofibroblast transformation and the fibrotic response)”，(2015年)，《自然
‑
通讯(nature communications)》，第6(10084)卷，第1
‑
14页；jennings,j.a.等人，“连续低强度直流电场对基因表达的调控(regulation of gene expression in response to continuous low intensity direct current electrical fields)”，(2007年)，《博士论文(doctoral thesis)》，第1
‑
208页]。
[0211]
人们认为，皮肤/面部肌肉中mbnl1蛋白的增加有助于减缓和/或避免由于肌肉老化激活萎缩过程而导致的肌肉质量丢失。本发明的化合物在上调盲肌样1(mbnl
‑
1)的表达方面特别有效，因此有助于防止或缓解由于肌肉衰老导致的肌肉质量丢失对皮肤美容特性的影响。因此，本发明的化合物可特别用于保持或改善皮肤紧致度，预防皮肤下垂出现和/或减少面部不对称。
[0212]
胶原蛋白是皮肤结缔组织中最丰富的蛋白质；其在提供所需柔性的同时形成有助于在新细胞生长时支持新细胞的网状结构。i型胶原蛋白(胶原蛋白i)是皮肤的主要胶原蛋白并且负责此组织的强度和弹力。衰老的公认特性之一是皮肤下垂。这是由多种因素造成的，包含皮肤弹性和紧致度的丢失、重力的影响、面部的骨骼支撑物的丢失以及面部中的皮下脂肪组织载体的丢失。增加与mbln1蛋白增加相关的胶原蛋白合成被认为有利于减少上述皮肤老化症状。
[0213]
抑制去甲肾上腺素释放，是抑制神经元胞吐的指示，类似于抑制肉毒杆菌毒素。在神经肌肉接头中，神经递质从周围神经元到骨骼肌的释放允许肌肉收缩。面部肌肉也会经受这些收缩。这些收缩在眼睛、嘴和额头周围更为频繁。随着年龄的增长，神经递质持续释放到神经肌肉接头以及降低弹性会促进面部皱纹和永久性表情纹的增加。因此，抑制去甲肾上腺素释放被视为有利于减少这些衰老症状。
[0214]
脂肪组织或身体脂肪是包括被称为脂肪细胞的细胞的结缔组织，所述脂肪细胞会使脂质聚积。有利的是，已发现本发明化合物可有效增加脂肪细胞中的脂质含量，因此在增加脂肪组织体积、防止和/或减轻脂肪组织损失的处理中有用。
[0215]
在一方面，本发明提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物在对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理中的用途。具体地，化妆品上、非治疗性处理和/或护理为对皮肤进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理。在本发明的上下文中，皮肤包含整个身体的皮肤，包含面部的皮肤(包含眼睛周围的皮肤)、颈圈、颈部、胸部、手臂、手、腿、脚、大腿、髋部、臀部、胃部和躯干。
[0216]
本发明的化合物可用于对皮肤进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理，所述化妆
品上、非治疗性处理和/或护理包含：处理和/或预防皮肤的衰老、处理和/或预防皮肤皱纹；保持和改善皮肤紧致度；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；处理和/或预防皮肤下垂出现；和/或减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积；和/或预防和/或减轻脂肪组织丢失造成的影响。
[0217]
本发明的化合物可用于对皮肤进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理，所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理包含：处理和/或预防皮肤的衰老、处理和/或预防皮肤皱纹；保持和改善皮肤紧致度；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；处理和/或预防皮肤下垂出现；和/或减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积；预防和/或减少脂肪组织损失；和/或降低皮肤粗糙度和/或改善皮肤的光滑性。
[0218]
对皮肤的化妆品上、非治疗性处理和/或护理可以：处理和/或预防皮肤皱纹；保持和改善皮肤紧致度；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失。
[0219]
化妆品上、非治疗性处理和/或护理可以涉及抑制去甲肾上腺素，刺激胶原蛋白的合成和/或上调mbnl
‑
1。因此，对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜的化妆品上、非治疗性处理和/或护理可能与增加胶原蛋白合成和/或上调盲肌样1(mbnl
‑
1)的表达和/或去甲肾上腺素的存在相关联。
[0220]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于处理和/或预防皮肤衰老的用途。皮肤衰老的处理和/或预防包含减轻和/或预防皮肤衰老的症状。皮肤衰老的症状包含皱纹出现和皮肤生物力学性质(如紧致度)的丢失。随着年龄的增长，皮肤中胶原蛋白的生成减少或肌肉张力(肌肉质量)的丧失可能会导致紧致度的丢。具体地，肌张力的丢失是指皮肤肌肉，更具体地，是指皮肤面部肌肉。
[0221]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于处理和/或预防皮肤皱纹的用途。皮肤皱纹包含表情皱纹，通常也被称为表情纹。
[0222]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于保持和/或改善皮肤紧致度的用途。
[0223]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失的用途。
[0224]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于处理和/或预防皮肤下垂出现。下垂出现可能是由于肌肉张力(肌肉质量)，具体地，皮肤肌肉张力，更具体地，面部肌肉张力的丢失引起的。
[0225]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于减少和/或预防面部不对称的用途。
[0226]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于
增加脂肪组织的体积和/或预防和/或减轻脂肪组织丢失造成的影响。具体地说，脂肪组织是皮下脂肪组织，更具体地说是面部、手部和颈部下部的皮下脂肪组织。本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包含本发明化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物，可减少衰老相关分泌表型(sasp)。
[0227]
在一个实施例中，提供了本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物用于降低皮肤粗糙度和/或改善皮肤光滑度的用途。
[0228]
本发明延伸至本发明化合物与微电流神经肌肉电刺激(mens)处理结合用于如以上关于本发明的化合物的应用(用途)所描述的皮肤、头发、指甲和/或粘膜的处理和/或护理的用途。mens处理是对皮肤、头发、指甲和/或粘膜的化妆品上、非治疗性处理。例如，mens处理通常使用小于1ma范围内的直流电(与交流电相反)，例如300
‑
500μa，该电流可选地可以0.1到680hz的频率进行脉冲。
[0229]
本发明还延伸至本发明化合物与肉毒杆菌毒素和/或ac
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glu
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glu
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nh2组合用于如以上关于本发明的化合物的应用(用途)所描述的处理和/或护理皮肤、头发、指甲和/或粘膜中的用途。ac
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nh2作为肽被lipotec sau(lubrizol)商业化，且由于它能抑制神经元胞吐，因此被认为能模拟肉毒杆菌毒素对皮肤的美容效果。
[0230]
在另一方面，本发明提供了一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理的方法，所述方法包括施用本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐、或包括本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐的组合物。具体地，本发明提供了一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理的化妆品上、非治疗性方法，所述化妆品上、非治疗性方法包括向所述受试者施用化妆品上有效量的本发明化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或包括化妆品上有效量的本发明化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐的化妆品组合物。所述方法可以用于如以上关于本发明的化合物和组合物的应用(用途)所描述的对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理。具体地，处理和/或护理的化妆品上、非治疗性方法为对皮肤的处理和/或护理。施用可以为局部地或例如，经皮。在本发明的此方面，本发明的化合物可以存在于化妆品组合物中，如本文所描述的化妆品组合物。在一个实施例中，该方法涉及使用微针施用化合物或施用组合物。
[0231]
本发明还扩展到一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理的方法，所述方法包括向所述受试者施用本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐以及施用化妆品上微电流神经肌肉电刺激(mens)处理。所述方法可以用于如以上关于本发明的化合物的应用(用途)所描述的对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理。mens处理是皮肤、头发、指甲和/或粘膜的化妆品上、非治疗性处理，例如，通常使用300
‑
500μa范围内的直流电(而非交流电)。电流可以0.1到680hz的频率进行脉冲。优选地，该处理方法为皮肤抗衰老处理。本发明的化合物可与mens处理同步(同时)或与mens处理顺序施用。本发明的化合物可在mens处理之前或之后施用。在非限制性实例中，处理方法可涉及利用mens进行美化处理，随后在一段时间内每天至少施用一次化合物。
[0232]
本发明还扩展到一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理
的方法，所述方法包括向所述受试者施用本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐与肉毒杆菌毒素和/或ac
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glu
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nh2的组合。所述方法可以用于如以上关于本发明的化合物的应用(用途)所描述的对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理。例如，处理方法可以包括向受试者施用肉毒杆菌毒素和本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐。例如，处理方法可以包括向受试者施用ac
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glu
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nh2和本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐。优选地，该处理方法为皮肤抗衰老处理。
[0233]
肉毒杆菌毒素和/或ac
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glu
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glu
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met
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nh2以及本发明的化合物可以同步(同时)施用或相继施用。当肉毒杆菌毒素和/或ac
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nh2以及本发明的化合物或组合物同时施用时，其可以单独剂型或以单个组合物的一部分形式施用。当产物以单独剂型形式施用时，剂型可以处于相同或不同的容器中。
[0234]
以上处理方法包含对皮肤进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理，所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理包含：处理和/或预防皮肤的衰老、处理和/或预防皮肤皱纹；保持和改善皮肤紧致度；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；处理和/或预防皮肤下垂出现；减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积；和/或预防和/或减轻脂肪组织丢失造成的影响。在一个实施例中，对皮肤进行处理和/或护理的化妆品上、非治疗性方法为皮肤抗衰老处理。
[0235]
以上处理方法包含对皮肤进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理，所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理包含：处理和/或预防皮肤的衰老、处理和/或预防皮肤皱纹；保持和改善皮肤紧致度；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；处理和/或预防皮肤下垂出现；减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积；预防和/或减少脂肪组织损失；和/或降低皮肤粗糙度和/或改善皮肤的光滑性。在一个实施例中，对皮肤进行处理和/或护理的化妆品上、非治疗性方法为皮肤抗衰老处理。
[0236]
在另一方面，本发明提供了一种用作药品的式(i)化合物、其立体异构体和/或药学上可接受的盐或包括式(i)化合物、其立体异构体和/或药学上可接受的盐的药物组合物。具体地，本发明提供了一种用于处理或预防疾病或病症的式(i)化合物、其立体异构体和/或药学上可接受的盐或包括式(i)化合物、其立体异构体和/或药学上可接受的盐的药物组合物。在另一方面，本发明提供了式(i)化合物、其立体异构体和/或药学上可接受的盐用于处理或预防疾病或病症的药品制造的用途。在另一方面，本发明提供了一种处理或预防受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的式(i)化合物或包括所述化合物的药物组合物。
[0237]
对于以上描述的本发明的方法，局部或经皮施用可以通过离子电渗、超声促渗、电穿孔、机械压力、渗透压梯度、包扎护理、显微注射、借助于压力的无针注射、通过微电子贴剂、面膜或其任何组合来执行。
[0238]
对于以上描述的本发明的方法，根据每个受试者的需要，应用或施用频率可能相差很大，其中应用建议为一个月一次到一天十次、优选地一周一次到一天四次、更优选地一周三次到一天两次、甚至更优选地一天一次。例如，依据每个受试者的需要，根据对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行处理和/或护理的方法的施用频率可能相差很大，所述方法包括向所述受试者施用本发明的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受
的盐与肉毒杆菌毒素和/或ac
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glu
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arg
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nh2的组合。在一个实施例中，本发明的方法包括施用肉毒杆菌毒素，然后施用本发明的化合物或组合物。在特定实施例中，在施用肉毒杆菌毒素之后，本发明的化合物或组合物至少每天施用一次，持续至少一周。更具体地，在下次施用肉毒杆菌毒素之前，本发明的化合物或组合物至少每天施用一次。
[0239]
本发明的组合物
[0240]
本发明的化合物可以针对其应用，通过引起化合物与受试者的身体，优选地哺乳动物的身体，优选地人的身体的作用部位之间的接触并且以含有所述化合物的组合物的形式施用。
[0241]
在另一方面，本发明提供了一种组合物，所述组合物包括根据式(i)的化合物、其立体异构体和/或化妆品上或药学上可接受的盐。
[0242]
具体地，本发明提供了一种化妆品组合物，所述化妆品组合物包括根据式(i)化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐以及至少一种化妆品上可接受的赋形剂或佐剂。这些组合物可以通过本领域的技术人员已知的常规方式制备[“harry氏化妆品法(harry’s cosmeticology)”，第七版，(1982年)，wilkinson j.b.、moore r.j.编辑，朗文出版社(longman house)，英国艾塞克斯(essex,gb)]。
[0243]
根据其氨基酸序列的性质或n端和/或c端的任何可能修饰，本发明的化合物在水中具有可变的溶解度。因此，本发明的化合物可以通过水性溶液而掺入到组合物中，并且不可溶于水中的那些可以溶解于化妆品上或药学上可接受的常规溶剂中，如且不局限于乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、甘油、丁二醇或聚乙二醇、或其任何组合。
[0244]
应施用的本发明的化合物的化妆品上有效量以及其剂量将取决于多种因素，包含年龄、患者的状态、待处理和/或护理的病状、病症或疾病的性质或严重性、施用的途径和频率以及待使用的化合物的具体性质。
[0245]
术语“化妆品上有效量”和“药学上有效量”应理解为意指无毒但足以提供所需效果的本发明的一种或多种化合物的量。术语“药学上有效”和“处理上有效”在本文可互换使用。本发明的化合物在本发明的化妆品或药物组合物中以实现所需效果的化妆品上或药学上有效的浓度使用；例如，以相对于组合物的总重量的量使用：0.00000001％(以重量计)到20％(以重量计)；0.000001％(以重量计)到15％(以重量计)、0.00001％(以重量计)到10％(以重量计)；或0.0001％(以重量计)到5％(以重量计)。
[0246]
式(i)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐也可以掺入到化妆品或药物递送系统和/或缓释系统中。
[0247]
术语“递送系统”涉及与本发明的化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。这些化妆品或药物载体可以是液体，如水、油、或表面活性剂，包含石油、动物、植物、或合成来源，如且不限于，花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、聚山梨酯、脱水山梨糖醇酯、醚硫酸酯、硫酸酯、甜菜碱、葡糖苷、麦芽糖苷、脂肪醇、壬苯醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯、聚乙二醇、右旋糖、甘油、毛地黄皂苷等。本领域的技术人员已知在可以施用本发明的化合物的不同递送系统中可以使用的稀释剂、佐剂或赋形剂。
[0248]
术语“缓释”在常规含义上用于化合物的递送系统，所述递送系统提供此化合物在一段时期内的逐渐释放，并且优选地、但不是必须地，在一段时期内具有相对恒定的化合物释放水平。
[0249]
递送或缓释系统的实例包含但不限于脂质体、混合脂质体、油质体、类脂质体、醇质体、毫米颗粒、微颗粒、纳米颗粒和固体脂质纳米颗粒、纳米结构脂质载体、海绵状物、环糊精、囊泡、胶束、表面活性剂的混合胶束、表面活性剂
‑
磷脂混合胶束、毫米球、微球和纳米球、脂质球、毫米胶囊、微胶囊和纳米胶囊、以及微乳剂和纳米乳剂，可以添加这些递送或缓释系统以实现活性成分的更大渗透性和/或改善其药代动力学和药效动力学性质。优选的递送或缓释系统是脂质体、表面活性剂
‑
磷脂混合胶束、微乳剂，更优选地具有反胶束内部结构的油包水微乳剂和含有微乳剂的纳米胶囊。
[0250]
在一个实施例中，本发明提供了一种化妆品或药物组合物，所述化妆品或药物组合物包括式(i)化合物和选自由乳膏、乳剂、凝胶、脂质体、纳米颗粒和软膏组成的组的化妆品上或药学上可接受的载体。
[0251]
缓释系统可以通过现有技术中已知的方法来制备，并且含有所述缓释系统的组合物可以例如通过以下方式来施用：通过局部或经皮施用，包含粘附贴剂、非粘附贴剂、封闭贴剂和微电子贴剂；或通过全身施用，如且不局限于，口服或肠胃外途径，包含鼻、直肠或皮下植入或注射、或直接植入或注射到具体身体部位中，并且优选地应该释放相对恒定量的本发明的化合物。缓释系统中含有的化合物的量将取决于例如组合物将施用在哪里、本发明的化合物的释放的动力学和持续时间以及待处理和/或护理的病状、病症和/或疾病的性质。
[0252]
本发明的化合物还可以吸附在固体有机聚合物或固体矿物载体上，如且不限于，滑石、膨润土、二氧化硅、淀粉或麦芽糊精等。
[0253]
含有式(i)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的组合物还可以掺入到与皮肤直接接触的织物、非织造织物以及医学器械中，从而由于身体湿度、皮肤的ph或身体温度，通过结合系统到织物、非织造织物以及医学器械中的生物降解、或通过其与身体之间的摩擦来释放本发明的化合物。此外，本发明的化合物可以掺入到用于制造与身体直接接触的服装的织物和非织造织物中。
[0254]
织物、无纺织物、服装、医学装置和用于将化合物固定到其的装置(其为以上描述的递送系统和/或缓释系统)等的实例可以在文献中找到并且是现有技术中已知的[schaab c.k.(1986年)happi，1986年5月；nelson g.，“微囊化在纺织品中的应用(application of microencapsulation in textiles)”，(2002年)，《国际制药学杂志(int.j.pharm.)，第242(1
‑
2)卷，第55
‑
62页；“生物功能纺织品与皮肤(biofunctional textiles and the skin)”(2006年)《当前皮肤病问题(curr.probl.dermatol.)》第33卷，hipler u.c.和elsner p.编辑，卡尔格公司(s.karger ag)，瑞士巴塞尔(basel,switzerland)；malcolm r.k.等人，“从新颖自润滑硅酮生物材料中控制释放模型抗菌药物(controlled release of a model antibacterial drug from a novel self
‑
lubricating silicone biomaterial)”,(2004年)，《控制释放杂志(j.cont.release)》，第97(2)卷，第313
‑
320页]。优选的织物、非织造织物、衣服和医学装置是绷带、纱布、t
‑
恤衫、袜子、紧身衣、内衣、腰带、手套、尿布、卫生巾、敷裹物、床罩、擦拭巾、粘附贴剂、非粘附贴剂、封闭贴剂、微电子贴剂和/或面膜。
[0255]
含有本发明的化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆品或药物组合物可以用于局部或经皮应用的不同类型的组合物中，所述组合物任选地包含调配所需施用形式必须的化妆品上或药学上可接受的赋形剂。
[0256]
用于局部或经皮应用的组合物可以任何固体、液体或半固体调配物形式制备，例如但不限于乳膏、多重乳剂(如且不限于水包油和/或硅酮乳剂、油包水和/或硅酮乳剂、水/油/水或水/硅酮/水型乳剂以及油/水/油或硅酮/水/硅酮型乳剂)、无水组合物、水分散体、油、乳、香膏、泡沫、乳液、凝胶、乳膏凝胶、水醇溶液、水甘醇溶液、水凝胶、搽剂、浆液、肥皂、洗发水、护发素、血清、多糖膜、软膏、摩丝、润发油、粉末、杆剂、笔剂以及喷雾剂或气雾剂(喷雾剂)，包含免洗和冲洗调配物。这些局部或透皮应用调配物可以使用本领域技术人员已知的技术并入到不同类型的固体辅料中，如但不限于绷带、纱布、t恤、袜子、紧身衣、内衣、腰带、手套、尿布、卫生巾、敷料、床罩、抹布、粘附贴剂、非粘附贴剂、闭塞贴剂、微电贴剂或面膜，或者其可以并入到不同的化妆产品中，如化妆粉底(如液体粉底和粉饼)、卸妆液、卸妆乳、眼部遮瑕膏、眼影、口红、护唇膏、唇彩和唇粉等。
[0257]
本发明的化妆品或药物组合物可以包含增加本发明化合物的经皮吸收药剂，例如但不限于二甲亚砜、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、表面活性剂、氮酮(1
‑
十二烷基氮杂环庚烷
‑2‑
酮)、醇、脲、乙氧基二甘醇、丙酮、丙二醇或聚乙二醇等。此外，本发明的化妆品或药物组合物可以适用于通过离子电渗、超声促渗、电穿孔、微电贴剂、机械压力、渗透压梯度、闭塞治愈、显微注射或通过压力进行的无针注射(如通过氧气压力进行的注射)或其任何组合处理的局部区域，以实现本发明的肽的更大渗透。应用区域将通过待处理和/或护理的病状、病症和/或疾病的性质来确定。
[0258]
此外，含有式(i)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的组合物可用于不同类型的口服制剂中，优选地以口服化妆品或药物的形式，如且不局限于：胶囊剂，包含明胶胶囊剂、软胶囊剂、硬胶囊剂；片剂，包含糖衣片剂、片剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、口香糖；溶液；悬浮液；乳剂；糖浆剂；酏剂；多糖膜；胶冻或明胶；以及本领域的技术人员已知的任何其它形式。在特定实施例中，本发明的化合物可以掺入到任何形式的功能性食品或强化食品中，如且不局限于，膳食条或压缩或非压缩粉末。这些粉末可以溶解于水、苏打水、乳制品、大豆衍生物中或可掺入到饮食棒中。本发明的化合物可以与用于口服组合物或食品补充剂的常见赋形剂和佐剂一起调配，如且不局限于，在食品工业中常见的脂肪组分、水性组分、保湿剂、防腐剂、增稠剂、调味剂、香味剂、抗氧化剂以及着色剂。
[0259]
含有式(i)化合物、其立体异构体、其混合物和/或其化妆品上或药学上可接受的盐的化妆品或药物组合物通过局部或经皮途径施用之外、还可以通过任何其它适当的途径，如口服或肠胃外途径来施用，为此这些组合物将包含用于调配所需施用形式所必需的药学上可接受的赋形剂。在本发明的上下文中，术语“肠胃外”包含经鼻、耳、眼、直肠、尿道、阴道、皮下、真皮内途径、血管内注射，如静脉内、肌内、眼内、玻璃体内、角膜内、脊柱内、髓内、颅内、宫颈管内、大脑内、脑膜内、关节内、肝内、胸内、气管内、鞘内和腹膜内，以及任何另一种类似的注射或输注技术。本领域的技术人员已知可以施用含有本发明的化合物的化妆品或药物组合物的不同装置。
[0260]
在本发明中描述的药物组合物中含有的化妆品上或药学上可接受的佐剂中是化妆品或药物组合物中通常使用的其他成分，如且不限于抗皱剂、肉毒杆菌样剂和/或抗衰老剂；(ii)紧致剂、皮肤弹性剂和/或重组剂；保湿剂；(iv)抗光衰老剂和/或蓝光保护剂；dna保护剂、dna修复剂和/或干细胞保护剂；自由基清除剂和/或抗糖基化剂、解毒剂、抗氧化剂
和/或抗污染剂；止汗剂；黑色素合成刺激剂或抑制剂；美白剂或脱色剂；色素沉着促进剂；自晒黑剂；脂解剂或刺激脂解的药剂、生脂剂等。其他实例可以在《ctfa国际化妆品成分词典和手册(ctfa international cosmetic ingredient dictionary&handbook)，第12版(2008年)中找到。
[0261]
在一个实施例中，本发明提供了一种化妆品或药物组合物，所述化妆品或药物组合物包括式(i)化合物和药学上或化妆品上有效量的佐剂，所述佐剂选自由以下组成的组：(i)抗皱剂、肉毒杆菌样剂和/或抗衰老剂；(ii)紧致剂、皮肤弹性剂和/或重组剂；(iii)保湿剂；(iv)抗光衰老剂和/或蓝光保护剂；(v)dna保护剂、dna修复剂和/或干细胞保护剂；(vi)自由基清除剂和/或抗糖基化剂、解毒剂、抗氧化剂和/或抗污染剂；和/或其组合。
[0262]
在特定实施例中，抗皱剂、肉毒杆菌样剂和/或抗衰老剂选自由以下组成的组：[inci：棕榈酰基五肽
‑
4]、[inci：棕榈酰基四肽
‑
7、棕榈酰基寡肽]、synthe’6[inci：甘油、水、羟丙基环糊精、棕榈酰基三肽
‑
38]、morphomics
tm
[inci：戊二醇、辛甘醇]、essenskin
tm
[inci：羟基蛋氨酸钙]、renovage[inci：替普瑞酮(teprenone)]、[inci：棕榈酰基寡肽]、calmosensine[inci：丁二醇、乙酰基二肽
‑
1鲸蜡基酯]、volulip[inci：鲸蜡硬脂醇乙基己酸酯、山梨坦异硬脂酸酯、毛马齿苋提取物、蔗糖
‑
椰油酸酯、棕榈酰基三肽
‑
38]、subliskin[inci：苜蓿中华根瘤菌发酵物、鲸蜡基羟乙基纤维素、卵磷脂]、生物肽cl[inci：棕榈酰基寡肽]、生物肽el[inci：棕榈酰基寡肽]、丽晶肽(rigin)[inci：棕榈酰基四肽
‑
3]、biobustyl[inci：甘油聚甲基丙烯酸酯、拉恩氏菌/大豆蛋白发酵物、棕榈酰基寡肽]、dynalift[inci：聚磺苯乙烯钠、高粱茎汁、甘油]、idealift[inci：乙酰基二肽
‑
1鲸蜡基酯]、豨莶[inci：豨莶属提取物]、ovaliss[inci：椰油基葡糖苷、辛甘醇、醇、海罂粟碱]、juvinity
tm
[inci：香叶基香叶醇异丙醇]、prolevis[inci：水解植物蛋白]、idealift
tm
[inci：羟乙基纤维素、乙酰基二肽
‑
1鲸蜡基酯]、beautifeye
tm
[inci：合欢树皮提取物、豨莶苷]、chromocare
tm
[inci：豨莶属提取物、冬凌草提取物]或resistem
tm
[inci提议的：心叶球花发酵物]，由sederma/禾大公司(sederma/croda)销售；[inci：五肽
‑
3]、[inci：二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐]、[inci：棕榈酰基三肽
‑
5]、phytaluronate[inci：角豆树(槐豆树)胶]、[inci：野大豆(大豆)蛋白、氧化还原酶]、pepha
‑
nutrix[inci：天然营养因素]、pepha
‑
tight[inci：海藻提取物、普鲁兰多糖]、pentacare
‑
na[inci：水解小麦面筋、角豆渣口香糖]、[inci：甘油、棕榈酰基二肽
‑
5二氨基丁酰羟基苏氨酸、棕榈酰基二肽
‑
6二氨基羟基丁酸酯]、beauactive mtp[inci：水解乳蛋白]、[inci：十四烷基氨基丁酰缬氨酰胺基丁酸脲三氟乙酸盐、棕榈酰基三肽
‑
5、棕榈酰基二肽
‑
5二氨基丁酰羟基苏氨酸]、[inci：十四烷基氨基丁酰缬氨酰胺基丁酸脲三氟乙酸盐]、[inci：十四烷基氨基丁酰缬氨酰胺基丁酸脲三氟乙酸盐]、regu
‑
age[inci：水解米糠蛋白、氧化还原酶、野大豆蛋白]、pepha
‑
timp[inci：人寡肽
‑
20]、pepha
‑
age[inci：杜氏盐藻提取物]、colhibin[inci：水解大米蛋白]、elhibin[inci：野大豆蛋白、椰油酰两性基二乙酸二钠]或all
‑
q
tm plus[inci：泛醌、生育酚乙酸酯]，由pentapharm/dsm公司销售；myoxinol
tm
[inci：水解黄秋葵提取物]、myoxinol
tm ls 9736[inci：水解黄秋葵提取物、糊精]、
syniorage
tm
[inci：乙酰基四肽
‑
11]、dermican
tm
[inci：乙酰基四肽
‑
9]、ls[inci：翅荚决明叶提取物]、hyalufix gl[inci：高良姜叶提取物]、neurobiox[inci：欧蓍草提取物]、deliner[inci：玉蜀黍(玉米)仁提取物]、lys'lastine v[inci：黄花前胡(莳萝)提取物]、extracellium[inci：水解马铃薯蛋白]、proteasyl tp ls 8657[inci：豌豆提取物]、flavagrum peg[inci：peg
‑
6异硬脂酸酯、橙皮素月桂酸酯]、熊果酸[inci：苹果属果实提取物]、extracellium[inci：水解马铃薯蛋白]、海洋填充球(marine filling spheres)[inci：季戊四醇四异硬脂酸酯、二甲基甲硅烷基化硅石、硫酸软骨素钠盐、去端肽胶原]、triactigen[inci：甘露醇、环糊精、酵母提取物、琥珀酸二钠]、eterniskin[inci：灰树花子实体提取物、麦芽糊精]、ascotide[inci：抗坏血酸磷酸酯琥珀酰五肽
‑
12]、hyalurosmooth[inci：狭叶番泻籽多糖]、indinyl ca[inci：狭叶番泻籽多糖]、arganyl[inci：刺阿干树叶提取物]、sphingoceryl veg[inci：植物神经酰胺]、vit
‑
a
‑
like[inci：豇豆种子提取物]、peptiskin[inci：精氨酸/赖氨酸多肽]、prodejine[inci：甘露醇、环糊精、酵母提取物、琥珀酸二钠、aqu'activ[inci：山嵛醇、甘油油酸酯、椰油酰胺mipa、柠檬酸钙]、elestan[inci：甘油、铁线子叶提取物]、hibiscin hp[inci：咖啡黄葵籽提取物]、18[inci：非洲楝树皮提取物]、collrepair
tm dg[inci：己二醇、烟酸]或litchiderm[inci：荔枝果皮提取物]，由实验室s
é
robiologiques/科宁/巴斯夫(laboratoires s
é
robiologiques/cognis/basf)销售；[inci：乙酰基六肽
‑
8]、snap
‑
7[inci：乙酰基七肽
‑
4]、snap
‑
8[inci：乙酰基八肽
‑
3]、[inci：五肽
‑
18]、[inci：乙酰基六肽
‑
30]、[inci：水解小麦蛋白、水解大豆蛋白、三肽
‑
1]、[inci：二氨基丙酰基三肽
‑
33]、[inci：三肽
‑
10瓜氨酸]、[inci：三肽
‑
9瓜氨酸]、[inci：假交替单胞菌发酵物提取物、水解小麦蛋白、水解大豆蛋白、三肽
‑
10瓜氨酸、三肽
‑
1]、[inci：乙酰基四肽
‑
5]、肽ac29[inci：乙酰基三肽
‑
30瓜氨酸]、[inci：乙酰精氨酰色氨酰二苯基甘氨酸]、[inci：乙酰基四肽
‑
22]、lipochroman
tm
[inci：二甲基甲氧基苯并二氢吡喃]、[inci：二甲基甲氧基苯并二氢吡喃基棕榈酸酯]、[inci：假交替单胞菌发酵物提取物]、[inci：赖氨酸hcl、卵磷脂、三肽
‑
9瓜氨酸]、vilastene
tm
[inci：赖氨酸hcl、卵磷脂、三肽
‑
10瓜氨酸]、[inci：假交替单胞菌发酵物提取物]、hyanify
tm
[inci：糖类同分异构体]、[inci：乙酰基六肽
‑
37]、[inci：大豆(野大豆)油、倍半油酸山梨坦、异十六烷、透明质酸、月桂基二甲基铵羟丙基水解大豆蛋白、乙酰基六肽
‑
39]、[inci：乙酰基六肽
‑
38]、delisens
tm
[inci：乙酰基六肽
‑
46]、telangyn
tm
[inci：乙酰基四肽
‑
40]、reproage
tm
肽[inci：乙酰基六肽
‑
8]、cellynkage
tm
海洋成分[inci：糖类同分异构体]、eyedeline
tm
海洋成分[inci：浮游生物提取物]、uplevity
tm
[inci：乙酰基四肽
‑
2]、seacode
tm
海洋成分[inci：假交替单胞菌发酵物提取物]或肽溶液[inci：六肽
‑
10]由利普泰/路博润公司(lipotec/lubrizol)销售；sirtalice
tm
[inci：芽孢杆菌发酵物]、epitensive
tm
[inci：本氏烟草六肽
‑
40sh
‑
寡肽
‑
1]、scelleye
tm
[inci：本氏烟草sh
‑
寡肽
‑
2]、seadermium[inci：水、甘油、芽孢杆
菌发酵物]、pauseile[inci：水、甘油、芽孢杆菌发酵物]或neoclair pro[inci：水、甘油、辛甘醇、乙酰基四肽
‑
2]，由lipotrue公司销售；is[inci：六肽
‑
9]、laminixyl is
tm
[inci：七肽]、orsirtine
tm gl[inci：水稻(大米)提取物]、d’orientine
tm is[inci：海枣(枣)籽提取物]、phytoquintescine
tm
[inci：einkorn(一粒小麦)提取物]、quintescine
tm is[inci：二肽
‑
4]、肽vinci 01[inci：五
‑
十肽
‑
1]、肽vinci 02
tm
[inci：六肽
‑
3]、aquarize is
tm
[inci：水解大米提取物]、lanablue[inci：海藻提取物]、ederline
tm
[inci：苹果属(苹果)籽提取物]、dynachondrine
tm isr[inci：水解大豆蛋白]、prolixir s20
tm
[inci：二聚体三肽
‑
43]、phytocohesine
tm psp[inci：β
‑
谷甾醇硫酸酯钠、β
‑
谷甾醇]、perenityl
tm is[inci：砂梨(梨)籽提取物]、caspaline 14
tm
[inci：六肽
‑
42]、肽q10
tm
[inci：五肽
‑
34三氟醋酸盐]、survixyl is
tm
[inci：五肽
‑
31]、chronogen
tm
[inci：四肽
‑
26]、elixiance[inci：柔毛肖乳香提取物]、harmoniance
tm
[inci：莲花提取物]、serenityl[inci：南美牛奶藤提取物]、natriance皱纹少[inci：水解玉米蛋白]、phytoneomatrix[inci：水解大豆提取物]、prolixir ice[inci：水解大米蛋白]、phytornx baobab
tm
[inci：水解猴面包树提取物]、natriance革新提取物[inci：水解亚麻籽提取物]、natriance自水合提取物[inci：豌豆提取物]、actopontine yst[inci：水解酵母蛋白]或telosense
tm
[提议的inci：水解大豆蛋白、水解酵母蛋白]，由由vincience/国际特品公司/亚什兰公司(vincience/isp/ashland)销售；bont
‑
l
‑
肽[inci：棕榈酰基六肽
‑
19]、timp肽[inci：乙酰基六肽
‑
20]、ecm moduline[inci：棕榈酰基三肽
‑
28]、renaissance[inci：水解小麦蛋白、棕榈酰基十肽
‑
21、十肽
‑
22、寡肽
‑
78、锌棕榈酰基十肽
‑
14]或x50抗衰老[inci：乳酸/乙醇酸共聚物、聚乙烯基醇、铜棕榈酰基七肽
‑
14、七肽
‑
15棕榈酸酯]由infinitec activos公司销售；equistat[inci：苹果属果实提取物\野大豆籽提取物]、juvenesce[inci：乙氧基二甘醇和辛酸甘油三酯、熊果酸、植物甲萘醌、伊洛马司他(ilomastat)]、ursolisome[inci：卵磷脂、熊果酸、去端肽胶原、黄原胶、硫酸软骨素钠盐]、basaline[inci：水解麦芽提取物]、phytokine[inci：水解大豆蛋白]，由coletica公司/恩格尔哈德公司/巴斯夫公司(coletica/engelhard/basf)销售；ameliox[inci：肌肽、生育酚、水飞蓟果提取物]或phytocelltec malus domestica[inci：苹果果实细胞培养物]、lipobelle soyaglicane[inci：大豆异黄酮]、royalepigen p5[inci：牛油果树果油、氢化卵磷脂、麦芽糊精、五肽
‑
48、苯乙基醇、乙基己基甘油、甘油、水]或dermcom[inci：金盏番红花球茎提取物、阿拉伯胶、水/水(aqua/water)]，由米百樂生化公司(mibelle biochemistr)销售；actimatrix[inci：基于肽的蘑菇提取物]、peptamide 6[inci：六肽
‑
11]，由active organics/arch公司销售；以及其组合。
[0263]
在另一方面，紧致剂、皮肤弹性剂和/或重组剂选自由以下组成的组：argassential[inci：c10
‑
16烷基葡萄糖苷、二辛基醚、甘油]或replexium bc[inci：异山梨醇二甲醚、聚山梨酯20、水、乙酰基四肽
‑
11、乙酰基四肽
‑
9]，由巴斯夫公司销售；prolevis[inci：水解植物蛋白]或poretect[inci：辛酸/癸酸甘油三酯、山梨坦三油酸酯、芹菜提取物、亚麻籽提取物]，由sederma/禾大公司销售；actifirm高级植物成分[inci：积雪草提取物、迷迭香叶提取物、缩二丙二醇、醇、狭叶松果菊叶提取物]或actifcol高级植物成分[inci：水、甘油、柠檬酸钠、香菇提取物、山梨酸钾、苯甲酸钠、植酸]，由利普泰/路博润公司销售；densorphin
tm
[inci：穗花牡荆提取物、水、麦芽糊精]或phytocelltec
tm
[inci：异麦芽酮糖醇、水、阿干树愈伤组织培养物、卵磷脂]，由米百樂公司销售；以及其组
合。
[0264]
在另一实施例中，保湿剂选自由以下组成的组：qua shuttle[inci：山梨醇、掌状海带提取物、矽藻土]，由infinitec公司销售；aqua
‑
osmoline
tm
[inci：长角豆(角豆)籽提取物]，由vincience/国际特品公司/亚什兰公司销售；hydralphatine
tm
亚洲[inci：氢化淀粉水解物、泛醇、龙头竹笋提取物、莲花提取物、白睡莲根提取物]或hydraporine
tm
[inci：甜菜碱、氢化卵磷脂、蜂蜜、果胶]，由lucas meyer cosmetics/unipex销售；patch2o
tm
[inci：海藻糖、尿素、丝氨酸、甘油聚丙烯酸酯、藻胶,透明质酸、普鲁兰多糖]、aqu’activ
tm
[inci：山嵛醇、甘油油酸酯、椰油酰胺mipa]、[inci：辛基十二烷醇、野芒果油、氫化椰油酸甘油酯]、)[inci：辛基十二烷醇、花生醇丙酸酯、生育酚乙酸酯、视黄醇棕榈酸酯、亚油酸乙酯、亚麻酸乙酯]或su[inci：山梨醇、海藻提取物、角叉菜(角叉菜胶)、墨角藻提取物、藻胶]，由实验室serobiologiques/科宁/巴斯夫销售；極地雪藻粉末[inci：雪藻提取物]，由米百樂公司销售；hyasol bt[inci：透明质酸]、syn
‑
up
tm
[inci：苄基磺酰基d
‑
丝氨酰高苯丙氨酸脒基.苯甲酰胺乙酸盐]或[inci：糖类同分异构体]，由pentapharm/dsm公司销售；aqualance
tm
[inci：赤藓糖醇、龙虾肌碱hcl]、hydraprotectol
tm
[inci：甘油聚甲基丙烯酸酯、油桐酸、酵母提取物(酵母萃取)、糖蛋白]、moist 24
tm
[inci：白茅根提取物]、optim hyal
tm
[inci：水解酵母提取物、鲸蜡基羟乙基纤维素、聚多糖酸]、4[inci：甘油、丙烯酸酯/c10
‑
30烷醇丙烯酸酯交联聚合物]或revidrate
tm
[inci：乙基己基棕榈酸酯、山梨坦油酸酯、山梨坦月桂酸酯、苹果酸肉豆蔻基磷酸]，由sederma/禾大公司销售；分子膜[inci：甘油、假交替单胞菌发酵物提取物、黄原胶、脯氨酸、丙氨酸、丝氨酸、乙基己基甘油、辛甘醇]或actizyme gl高级植物成分[inci：甘油、米赫毛霉提取物、水、柠檬酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、植酸]，由利普泰/路博润公司销售；以及其组合。
[0265]
在另一个实施例中，抗光衰老剂和/或蓝光保护剂选自由以下组成的组：algaktiv genofix cpd[inci：浮游生物提取物、水、卵磷脂]，由greenaltech公司销售；blumilight
tm
生物功能[inci提议：水/水(和)丁二醇(和)可可属(可可)籽提取物]，由亚什兰公司销售；lys’sun[inci：北美金缕梅叶提取物、水、戊二醇、辛甘醇、黄原胶]，由巴斯夫销售；vitachelox[inci：葡萄籽提取物、茶叶提取物、夏栎木提取物]，由indena公司销售；l
‑
vcg[inci：抗坏血酸葡糖苷]，由freshine生物技术公司(freshine bio
‑
technology)销售；lumicease蓝色成分[inci：甘油、水、水解豌豆蛋白、葡萄糖、氯化钠]，由利普泰/路博润公司销售；lightwaves defense[js m][inci：茉莉花叶细胞提取物]，由naolys公司销售；blue oleoactif[inci：野大豆油、聚甘油
‑
3二异硬脂酸酯、水稻胚芽提取物、水稻提取物]，由oleos
‑
hallstar公司销售；majestem[inci：甘油、高山火绒草愈伤组织培养物提取物、黄原胶]或senestem[inci：甘油、长车前草叶提取物、黄原胶]，由sederma公司销售；blueshield[inci：甘油、辣椒果提取物、黄原胶]，由solabia公司销售；以及其组合。
[0266]
在另一个实施例中，dna保护剂、dna修复剂和/或干细胞保护剂选自由以下组成的组：gp4g sp[inci：水、甘油、卤虫提取物]、heliostatine[inci：水、甘油、豌豆提取物]、orsirtine[inci：水、甘油、水稻提取物]、chronogen[inci：水、丁二醇、四肽(inci提议)]、survixyl is[inci：水、丁二醇、五肽
‑
31]和chrondricare[inci：水、丁二醇五肽
‑
28]，由
berries)提取物(植物性内啡肽))、乙酰基络氨酸]、cm
‑
glucan[inci：羧甲基β葡聚糖钠、苯氧乙醇、sunactin[inci：向日葵(太阳花)芽提取物、生育酚、甘油、卵磷脂、苯氧乙醇、水]、gsp
‑
t皮肤[inci：甘油、醇、水、peg
‑
40氢化蓖麻油、葡萄(vitis vinifera)(葡萄(grape))籽提取物]或detoxophane[inci：黄皮芽提取物、卵磷脂、苯氧乙醇、甘油、水]，由米百樂生化公司销售；bacocalmine[inci：peg
‑
8、假马齿苋提取物提取物、水(水)羟乙基纤维素]、kombuchka[inci：酵母属/紅茶酵母发酵物、甘油、羟乙基纤维素]、citystem[inci：甘油、欧夏至草提取物]或prodizia[inci：合欢树皮提取物、甘油]，由sederma/禾大公司销售；extramel c[inci：羟丙基三甲基氯化铵麦芽煳精交联聚合物、甜瓜(香瓜)果实提取物]，由赛比克(seppic)公司销售；defensine[inci：小麦胚芽提取物]、[inci：欧蒲公英(蒲公英)提取物]、[inci：水、丁二醇、牛油果树(乳木果油)籽饼提取物]或antiglyskin[inci：水、向日葵籽提取物]，由silab销售；以及其组合。
[0268]
本发明的组合物可以用于上述标题“应用”下讨论的任何应用或用途。
[0269]
在另一方面，本发明提供了用于对皮肤进行处理和/或护理的化妆品上、非治疗性方法的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0270]
(i)包含肉毒杆菌毒素的组合物；
[0271]
(ii)任选地，包括ac
‑
glu
‑
glu
‑
met
‑
gln
‑
arg
‑
arg
‑
nh2的组合物；和
[0272]
(iii)包括式(i)、式(ii)和式(iii)化合物的化妆品组合物。
[0273]
(i)包括肉毒杆菌毒素的组合物、(ii)包括ac
‑
glu
‑
glu
‑
met
‑
gln
‑
arg
‑
arg
‑
nh2(如果存在的话)的组合物以及(iii)包括根据第一方面的本发明的化合物的组合物可以处于相同或单独容器中。在一个实施例中，试剂盒可以进一步包括将组合物应用于皮肤的装置。例如，试剂盒可以包括如注射器或微针等装置。
[0274]
通过以下非限制性实例说明本发明。
[0275]
实例
[0276]
一般方法
[0277]
缩写
[0278]
氨基酸的缩写遵循《欧洲生物化学杂志(eur.j.biochem.)》(1984年)138:9
‑
37中概述的1983iupac
‑
iub生化命名联合委员会建议。
[0279]
(r)，树脂；2
‑
cltrt
‑
(r)，2
‑
氯三苯甲基树脂；ac，乙酰基；acoh，乙酸；ala，丙氨酸；am，2
‑
[4
‑
氨基甲基
‑
(2,4
‑
二甲氧基苯基)]苯氧基乙酸；arg，精氨酸；asn，天冬酰胺；asp，天冬氨酸；boc，叔丁氧基羰基；dcm，二氯甲烷；diea，n,n'
‑
二异丙基乙基胺；dipcdi，n,n'
‑
二异丙基碳二亚胺；dmf，n,n
‑
二甲基甲酰胺；esi
‑
ms，电喷雾电离质谱；fmoc，9
‑
芴基甲氧基羰基；gln，谷氨酰胺；glu，谷氨酸；gly，甘氨酸；his，组氨酸；hobt，1
‑
羟基苯并三唑；hplc，高效液相色谱；ile，异亮氨酸；koh，氢氧化钾；leu，亮氨酸；lys，赖氨酸；mbha，p
‑
甲基二苯甲基胺；mecn，乙腈；meoh，甲醇；met，蛋氨酸；myr，肉豆蔻酰基；palm，棕榈酰基；pbf，2,2,4,6,7
‑
五甲基二氢苯并呋喃
‑5‑
磺酰基；pro，脯氨酸；ser，丝氨酸；tbu，叔丁基；tfa，三氟乙酸；thr，苏氨酸；trt，三苯甲基；val，缬氨酸。
[0280]
化学合成
[0281]
所有合成方法是在装配有多孔聚乙烯盘的聚丙烯注射器中执行的。按照参考书目中建立的标准方案执行偶联方案，并通过抽吸去除溶剂和可溶性试剂。用哌啶
‑
dmf(2:8，v/
v)(1
×
1min、1
×
5min，5ml/g树脂)去除fmoc基团[lloyd
‑
williams p.等人，(1997年)《肽和蛋白质合成的化学方法(chemical approaches to the synthesis of peptides and proteins)》crc，博卡拉顿(boca raton))美国佛罗里达州(fl，usa))]。用dmf执行在脱保护、偶联与再次脱保护阶段之间进行的洗涤(3
×
1min)，每次使用10ml溶剂/克树脂。用3ml溶剂/克树脂执行偶联反应。偶联的控制通过执行以下来执行：茚三酮测试[kaiser e.等人,《分析化学(anal.biochem.)》(1970年)，第34卷，第595
‑
598页]或四氯苯醌测试\[christensen t.，《斯堪的纳维亚化学学报(acta chem.scand.)》，(1979年)，第33b卷，第763
‑
766页]。当所需肽合成时，重复偶联反应。所有合成反应和洗涤均在25℃下执行。
[0282]
本领域的技术人员已知的是，一些氨基酸与其在侧链中的受保护的官能团一起使用。例如，保护基的非限制性实例为：
[0283]
·
tbu，氨基酸glu的叔丁基；以及
[0284]
·
pbf，氨基酸arg的2,2,4,6,7
‑
五甲基二氢苯并呋喃
‑5‑
磺酰基；以及
[0285]
·
trt，氨基酸gln的三辛基。
[0286]
使用恒温于30℃(50
×
4.6mm，kromasil c18，3.5μm，瑞典的阿克苏诺贝尔公司(akzo nobel,sweden))的反相柱，利用shimadzu设备(日本京都(kyoto,japan))执行hplc色谱分析。使用一定梯度的含乙腈( 0.07％tfa)的水( 0.1％tfa)以1.6ml/min的流动速率洗脱，并在220nm处进行检测。使用呈移动相的mecn:h2o 4:1( 0.1％tfa)的混合物以及0.3ml/min的流动速率，在沃特世联盟(waters alliance)zq 2000检测器中进行电喷雾电离质谱。
[0287]
实例1
[0288]
获得fmoc
‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
y
p
‑
z
q
‑
am
‑
mbha
‑
(r)，其中，aa1为l
‑
asp；aa2为l
‑
val；aa3为l
‑
tyr；aa4为l
‑
lys，n、m、p和q均为0。
[0289]
已使重量规范化。根据一般方案用哌啶：dmf对fmoc
‑
am
‑
pmbha树脂进行处理，以去除fmoc基团。在5.5当量的dipcdi和5当量的hobt存在的情况下，使用dmf作为溶剂将5当量的fmoc
‑
l
‑
lys(boc)
‑
oh掺入到脱保护的树脂上，持续1小时。
[0290]
然后如一般方法中所描述的对树脂进行洗涤，并且重复fmoc基团的脱保护处理，以便偶联下一个氨基酸：将5当量的fmoc
‑
l
‑
tyr(tbu)
‑
oh；以及随后5当量的fmoc
‑
l
‑
val
‑
oh；5当量的fmoc
‑
l
‑
asp(tbu)
‑
oh)在5当量的hobt和5.5当量的dipcdi存在的情况下，以彼此偶联的步骤依序偶联。
[0291]
合成之后，用dcm对肽基树脂进行洗涤(3
×
1min)。
[0292]
通过遵循所描述的方法可能的是，获得改变待偶联的所需氨基酸的不同序列。
[0293]
实例2
[0294]
获得fmoc
‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6‑
‑
y
p
‑
z
q
‑
am
‑
mbha
‑
(r)，其中，aa1为l
‑
ala；aa2为l
‑
leu；aa3为l
‑
lys；aa4为l
‑
pro；aa5为l
‑
asn；aa6为l
‑
thr；n、m、p、q均为0。
[0295]
已使重量规范化。根据一般方案用哌啶：dmf对fmoc
‑
am
‑
pmbha树脂进行处理，以去除fmoc基团。在5.5当量的dipcdi和5当量的hobt存在的情况下，使用dmf作为溶剂将5当量的fmoc
‑
l
‑
thr(tbu)
‑
oh掺入到脱保护的树脂上，持续1小时。
[0296]
然后如一般方法中所描述的对树脂进行洗涤，并且重复fmoc基团的脱保护处理，以便偶联下一个氨基酸：将5当量的fmoc
‑
l
‑
asn(trt)
‑
oh；以及随后5当量的fmoc
‑
l
‑
pro
‑
oh；5当量的fmoc
‑
l
‑
lys(boc)
‑
oh；5当量的fmoc
‑
l
‑
leu
‑
oh；以及最后5当量的fmoc
‑
l
‑
ala
‑
oh在5当量的hobt和5.5当量的dipcdi存在的情况下，以彼此偶联的步骤依序偶联。
[0297]
合成之后，用dcm对肽基树脂进行洗涤(3
×
1min)。
[0298]
通过遵循所描述的方法可能获得改变待偶联的所需氨基酸的不同序列。
[0299]
实例3
[0300]
用于去除fmoc n端保护基的一般方法。
[0301]
如一般方法所述(dmf中20％哌啶，1x1 min 1x5 min)，对实例1或2中获得的肽基树脂的n端fmoc基团进行脱保护。用dmf(5
×
1min)、dcm(3
×
1min)、二乙醚(3
×
1min)对肽基树脂进行洗涤，并在真空下干燥。
[0302]
实例4
[0303]
用于将r1棕榈酰基引入到实例3中获得的肽基树脂上的方法。
[0304]
在hobt和dipcdi存在的情况下，分别向实例3中获得的肽基树脂中的每种肽基树脂添加预先溶解于dmf中的5当量的棕榈酸(1ml)。允许混合物反应3小时，然后用dmf(3
×
1min)、dcm(3
×
1min)、二乙醚(3
×
1min)对树脂进行洗涤，并在真空下干燥。
[0305]
实例5
[0306]
用于将r1乙酰基引入到实例3中获得的肽基树脂上的方法。
[0307]
在diea存在的情况下，使用dmf作为溶剂，用乙酸酐对实例3中获得的肽基树脂中的每个肽基树脂进行处理。允许混合物反应30分钟，然后用dmf(3
×
1min)、dcm(3
×
1min)、二乙醚(3
×
1min)对树脂进行洗涤，并在真空下干燥。
[0308]
实例6
[0309]
从实例3、实例4和实例5中获得的肽基树脂的聚合物载体进行的切割方法。
[0310]
用3ml的tfa:h2o(95:5，v/v)对实例3、实例4和实例5中获得的干燥肽基树脂中的每个肽基树脂进行处理，在搅动状态下室温持续2小时。然后通过装配有多孔聚乙烯板的聚丙烯注射器对其进行过滤。将滤液收集到冷二乙醚上，并用二乙醚洗涤5次。在真空下对最终沉淀物进行干燥。
[0311]
在此方法之后获得其中r1为h、乙酰基或棕榈酰基的通式r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
y
p
‑
z
q
‑
oh、r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
nh2、r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6‑
y
p
‑
z
q
‑
oh或r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6‑
y
p
‑
z
q
‑
nh2的肽。
[0312]
对一定梯度的含mecn( 0.07％tfa)的h2o( 0.1％tfa)中的获得的肽的hplc分析示出了在所有情况下纯度超过80％。通过esi
‑
ms确认获得肽的同一性。
[0313]
实例7
[0314]
通过时间分辨荧光共振能量转移在人骨骼肌细胞中对盲肌样蛋白1(mbnl1)进行的体外定量。
[0315]
衰老与肌肉质量下降有关。盲肌样蛋白1(mbnl1)的功能丢失与面部肌肉的衰老过程中涉及的肌肉质量丢失有关。
[0316]
通过时间分辨荧光共振能量转移(tr
‑
fret)测定法评价由本发明的肽进行的mbnl1诱导。本研究的目的是研究候选肽增加人骨骼肌细胞(hskmc)中的mbnl
‑
1的能力。
[0317]
在骨骼肌细胞生长培养基(promocell公司)中，以1.5
×
104个细胞/孔的密度将hskmc(innoprot公司)接种在12孔板中。在72小时温育之后，去除培养基并用骨骼肌细胞分
化培养基(promocell公司)替代。开始细胞分化之后48小时，添加具有0.5mg/ml测试项目的新鲜分化培养基。继续处理48小时，并将未经处理的细胞用作基础对照。在处理48小时之后，去除细胞培养基，并向孔中添加细胞裂解缓冲液。立即将板保持在
‑
80℃下，以改善除霜过程期间的蛋白质提取。72小时之后，通过在室温下在轨道转子中摇动板45分钟来使细胞裂解。接下来，收集细胞裂解物并对其进行测定，以对mbnl1蛋白的水平和总蛋白质浓度进行定量。
[0318]
mbnl1蛋白质水平测量是根据制造商的协议利用人mbnl1测定试剂盒(cisbio)执行的。简而言之，所述试剂盒用于执行针对mbnl1定量的tr
‑
fret。用试剂盒中提供的抗体检测蛋白质，并通过荧光测量对蛋白质进行定量。通过使用设置为665nm和620nm的酶标仪(bmg公司的clariostar)执行定量。
[0319]
根据制造商的协议通过使用pierce bca蛋白质测定试剂盒(赛默飞世尔科技公司(thermo scientific))确定细胞裂解物的总蛋白质浓度。简而言之，在将工作试剂添加到样品和标准液之后，温育样品。之后，用吸收光酶标仪(bmg公司的clariostar)在562nm下测量颜色变化。使用总蛋白质量对样品中通过tr
‑
fret测试获得的mbnl1蛋白浓度水平进行归一化。
[0320]
结果表明，与基础对照相比，本发明的肽pep1(ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2)和pep2(h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2)提高了mbnl1水平(图1)。据信，mbnl1蛋白的增强减缓了衰老过程中的肌肉质量丢失，从而避免了老年人面部皮肤出现下垂。
[0321]
实例8
[0322]
通过荧光免疫法对人真皮成纤维细胞中的盲肌样蛋白1(mbnl1)进行体外定量。
[0323]
增加胶原蛋白合成被认为有利于减少衰老迹象。成纤维细胞中的盲肌样蛋白1(mbnl1)激活其向成肌纤维细胞转分化。这些细胞可以释放更多的细胞外基质蛋白，如胶原蛋白、弹性蛋白或纤连蛋白，以防止出现皱纹。
[0324]
通过免疫荧光测定法评价本发明的肽诱导的mbnl1。本研究的目的是研究候选肽增加人真皮成纤维细胞(hdf)中mbnl1的能力。
[0325]
hdf(级联)以8x103细胞/孔的密度接种在成纤维细胞生长培养基(promocell公司)中的96孔板中。培养48小时后，移除培养基，并添加含有1mg/ml、0.5mg/ml和0.01mg/ml测试项目的新鲜培养基。继续处理24小时，并且将未经处理的细胞用作基础对照。处理24小时后，进行荧光免疫检验。用4％的多聚甲醛(sigma公司)将细胞固定15分钟，用1％的triton x
‑
100(sigma公司)渗透15分钟，然后用5％的牛血清白蛋白(sigma公司)阻断。接下来，添加第一抗体抗mbnl1兔(sigma公司)并温育2小时。在此之后，添加第二抗体alexa fluor 488羊抗兔igg(生命科技公司(life technologies))，并温育1小时。添加hoechst(生命科技公司(life technologies))并温育10分钟，以便实现细胞核染色。最后，通过operetta(珀金埃尔默公司(perkin elmer))测量mbnl1细胞的荧光强度和核数量。通过细胞核对荧光进行规范化，并且相对于基础对照呈现结果。结果如图2所示。
[0326]
结果表明，与基础对照相比，本发明的肽pep1(ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2)和pep2(h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2)提高了mbnl1水平。
[0327]
实例9
[0328]
通过免疫荧光法对人骨骼肌细胞引起的肌肉质量丢失进行体外预防。
[0329]
肌肉质量丢失与面部肌肉老化有关。有研究表明，肌细胞中的盲肌样蛋白1(mbnl1)的功能丧失可能与衰老过程中肌肉质量丢失有关。文献中还描述了，当肌细胞中的肌管直径低于20μm时，其为肌肉质量丢失指标。
[0330]
肌球蛋白重链(mhyc)用作分化肌管的形态标记，以便允许测量其直径从而确定质量丢失程度。肿瘤坏死因子α(tnf
‑
α)在文献中已被描述为肌肉质量丢失诱导子。
[0331]
通过免疫荧光测定法评价本发明的肽来预防肌肉质量丢失。本研究的目的是研究候选肽在人骨骼肌细胞(hskmc)中存在tnf
‑
α时预防肌肉质量丢失的能力。
[0332]
hskmc(tebu bio公司)在骨骼肌细胞生长培养基(promocell公司)中以1.5x104细胞/孔的密度接种在96孔板中。温育24小时后，用骨骼肌细胞分化培养基(promocell公司)替代所述培养基，细胞分化6天。此后，添加含有0.5mg/ml测试项目和20ng/ml tnfα(sigma公司)的新鲜分化培养基。处理持续48小时，未经处理的细胞用作基础对照，经20ng/ml tnfα处理的细胞用作肌肉质量丢失对照品。处理48小时后，进行荧光免疫检验。用4％的多聚甲醛(sigma公司)将细胞固定15分钟，用1％的triton x
‑
100(sigma公司)渗透15分钟，然后用5％的牛血清白蛋白(sigma公司)阻断。接下来，添加第一抗体抗
‑
mhyc小鼠(1:100，体外)，并且在温育2小时。在此之后，添加第二抗体alexa fluor 488山羊抗小鼠igg(1:250，生命技术公司(life technologies))，并且温育1小时。最后，通过operetta(珀金埃尔默公司(perkin elmer))对mhyc染色进行成像来确定肌管直径。利用harmony(珀金埃尔默公司(perkin elmer))软件通过使用20μm的萎缩阈值根据肌管直径对肌管进行分类，以自动计算质量丢失百分比。结果如图4所示，并且相对于tnf
‑
α进行规范化。
[0333]
结果表明本发明的肽pep1和pep2与tnf
‑
α处理相比，可防止质量丢失。
[0334]
实例10
[0335]
通过免疫荧光法对人骨骼肌细胞引起的肌肉质量丢失减轻体外影响。
[0336]
通过免疫荧光测定法评价通过本发明的肽进行的肌肉质量丢失校正。此研究的目的是研究候选肽在用人骨骼肌细胞(hskmc)中的tnf
‑
α处理后校正肌肉质量丢失的能力。肌球蛋白重链(mhyc)用作分化肌管的形态标记，以便允许测量其直径从而确定质量丢失程度。肿瘤坏死因子α(tnf
‑
α)在文献中已被描述为肌肉质量丢失诱导子。
[0337]
hskmc(tebu bio公司)在骨骼肌细胞生长培养基(promocell公司)中以1.5x104细胞/孔的密度接种在96孔板中。温育24小时后，用骨骼肌细胞分化培养基(promocell公司)替代所述培养基，细胞分化6天。在此之后，通过添加具有20ng/ml tnfα(sigma公司)的新鲜分化培养基诱导肌肉细胞质量丢失。非tnfα处理的细胞用作基础质量丢失对照品(bc)。在质量丢失诱导24小时之后，在孔板中的一些孔板中用包括0.01mg/ml的本发明的肽的新鲜分化培养基替换所述培养基。tnfα处理的细胞用作质量丢失对照品(bcn tnf)，未使用本发明项目的肽或tnfα处理过的细胞用作基础质量丢失对照品(bc)。24小时后重新进行处理。第二次处理后的24小时之后，确定免疫荧光法。用4％的多聚甲醛(sigma公司)将细胞固定15分钟，用1％的triton x
‑
100(sigma公司)渗透15分钟，并且然后用5％的牛血清白蛋白(sigma公司)阻断。接下来，添加第一抗体抗
‑
mhyc小鼠(1:100，体外)，并且在4℃下温育过夜。在此之后，添加第二抗体alexa fluor 488山羊抗小鼠igg(1:250，生命技术公司(life technologies))，并且温育1小时。最后，通过operetta(珀金埃尔默公司(perkin elmer))对mhyc染色进行成像来确定肌管直径。利用harmony(珀金埃尔默公司(perkin elmer))软
件通过使用20μm的质量丢失阈值根据肌管直径对肌管进行分类，以自动计算质量丢失的百分比。图4显示的结果是标准化质量丢失对照品。
[0338]
结果表明，与用tnf
‑
α处理的基础对照相比，本发明的肽pep1和pep2校正(即减少)质量丢失。
[0339]
实例11
[0340]
通过酶联免疫吸附(alphalisa)技术对人真皮成纤维细胞上的i型胶原蛋白合成进行体外研究。
[0341]
利用alphalisa测定来评价由本发明的肽进行的胶原蛋白诱导。此研究的目的是研究产物在从成人中分离的人真皮成纤维细胞(hdfa)中诱导i型胶原蛋白合成的能力。
[0342]
hdfa(promocell公司)以1x105的密度接种在添加有c
‑
39016(promocell公司)的成纤维细胞生长培养基中的48孔板中。孵育24小时后，加入含0.5μg/ml测试项目的低血清生长补充物(gibco)的新鲜培养基106。继续处理48小时，并且将未经处理的细胞用作基础对照。处理48小时后，收集细胞上清液。将蛋白酶抑制剂混合物(sigma公司)添加到每个上清液中，然后将其保持在
‑
80℃，直到通过alphalisa和alphalisa col1a1检测试剂盒(perkinlemer公司)按照制造商的说明使用对其进行分析。简而言之，在i型胶原蛋白存在的情况下，供体珠和受体珠的距离近到足以产生与每种测试条件中存在的i型胶原蛋白量成正比的发光信号。在微滴定板读数器中测量通过此反应产生的颜色，并且使用标准曲线的线性回归确定i型胶原蛋白浓度。图5显示了胶原合成与未处理细胞的对比结果。
[0343]
结果表明，相对于基础条件，本发明的肽在hdfa中以所测试浓度促进i型胶原蛋白产生。
[0344]
实例12
[0345]
抑制人神经母细胞瘤细胞释放去甲肾上腺素。
[0346]
此研究的目的是借助于通过酶联免疫吸附测定法(elisa)测量人神经母细胞瘤细胞株(sh
‑
sy5y细胞)释放去甲肾上腺素(na)的水平来评价本发明的肽对神经元胞吐的抑制功效。
[0347]
将sh
‑
sy5y(ecacc)细胞以1x106个细胞/孔的密度接种在12孔板中。经过6天的培养，从孔中去除培养基，并且用溶解于汉克斯(hank's)平衡盐溶液(hbss，生命技术公司(life technologies))的本发明的肽以0.01和0.5mg/ml对细胞进行处理，持续60分钟。将用hbss单独处理的细胞用作基础对照。为了调动na囊泡，去除上清液，并且将100nm的十四烷酰
‑
13
‑
乙酸盐(tpa，sigma公司)在测试项目存在的情况下溶解于hbss中，或者在基础对照的情况下溶解于单独hbss中。在此之后，去除具有tpa的溶液，并且通过添加10μm离子霉素(epica)与在测试项目存在的情况下溶解于hbss中，或者在基础对照的情况下溶解于单独hbss中的100nm tpa诱导na释放。之后，收集孔中的含有释放na的培养基，并对其进行离心。遵循制造商的说明，将获得的上清液用于利用去甲肾上腺素elisa试剂盒(ibl国际(ibl international))通过elisa对na进行的定量。简而言之，利用预先涂覆有抗na抗体的板进行直接夹心elisa。底物添加后获得的颜色与所测试的每种条件下存在的na的量成正比。在微板吸光度读数器(bmg公司的clariostar)中读取的吸光度为405nm。相对于基础对照，计算每种条件下na释放的百分比。na释放相对于未经处理的细胞(基础对照)的百分比结果示出在图6中。
[0348]
结果表明，相对于基础条件，本发明的肽在一种或多种测试浓度下抑制了sh
‑
sy5y中的na释放。神经肌肉接头中的胞吐释放增加与衰老以及面部皱纹和表情纹的增加有关。本发明的肽降低了胞吐水平，因为其减少了sh
‑
sy5y中的na释放。
[0349]
实例13
[0350]
人皮下前脂肪细胞中的体外脂质积累。
[0351]
此研究的目的是研究候选肽诱导人皮下脂肪细胞中的脂质聚积，并因此预防脂肪细胞衰老的能力。在年轻和年老的脂肪细胞共培养中测量脂质聚积，可间接评估衰老相关分泌表型(sasp)的抑制作用。年老脂肪细胞池中的衰老细胞更多。当与年轻细胞共培养时，观察到由于sasp对年轻脂肪细胞的衰老诱导作用，脂质聚积低于理论上的预期水平。
[0352]
通过本发明的肽对脂质聚积的诱导通过用测定试剂进行的脂质荧光染色来评价。在人前脂肪细胞生长培养基(sigma公司)中，将人皮下前脂肪细胞(26岁和60岁供体，细胞应用)的细胞以每个年龄4
×
103个细胞/孔的密度在96孔板中共培养。以8
×
103个细胞/孔的密度对每个年龄的单培养物接种，作为年龄脂质聚积对照。温育24小时之后，通过将培养基改变为新鲜的人前脂肪细胞分化培养基(promocell公司)来诱导前脂肪细胞分化为脂肪细胞。同时，用0.01mg/ml的测试项目对共培养细胞进行处理。将未经处理的共培养细胞用作基础对照，并且将单培养的年轻和年老细胞用作年龄脂质聚积对照。处理和分化12天后，按照制造商的说明用检测试剂(龙沙公司(lonza))对细胞染色。简言之，用磷酸盐缓冲盐水(sigma公司)对板进行洗涤，并且然后添加试剂和hoechst 33342(生命技术公司((life technologies))，并且在37℃下温育15分钟。最后，通过operetta(珀金埃尔默公司(perkin elmer)测量荧光强度和核数量。通过细胞核对荧光进行规范化，并且相对于共培养的基础对照呈现结果。图7中示出了脂质含量相对于未经处理的细胞(基础对照)的百分比结果。
[0353]
结果表明，与基础对照和年老对照相比，本发明的肽pep1和pep2增加了脂肪细胞中的脂质积累。
[0354]
实例14
[0355]
制备含有肽pep1(ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2)溶液的乳膏
[0356]
在合适的器皿中，使相a的成分：水[inci：水(水)]、zemea
tm
[inci：丙二醇]、5[inci：戊二醇]、phenoxetol
tm
[inci：苯氧乙醇]和na2[inci：edta二钠]溶解。
[0357]
将相a1成分：ultrez 10聚合物[inci：卡波姆(carbomer)]添加到先前的混合物中。一旦分散，就将相a2：fax cpe
‑
k[inci：鲸蜡醇磷酸酯钾]引入。然后将混合物加热到70
‑
75℃。
[0358]
在单独器皿中，将相b成分：schercemol
tm dis酯[inci：癸二酸二异丙酯]、2000[inci：甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇、棕榈酰基水解小麦蛋白钾]、ec[inci：椰油酸乙基己酯]、astro
‑
sil 2c 350[inci：二甲聚硅氧烷]和生育酚乙酸酯[inci：生育酚乙酸酯]混合，并且将混合物在70
‑
75℃下加热。
[0359]
通过在用涡轮机快速搅动的条件下，将相b缓慢添加到相a中来制备乳剂。
[0360]
一旦混合物冷却到40℃，就将相c的组分：novemer
tm
ec
‑
1聚合物[inci：矿物油(液体石蜡)；水(水)；丙烯酸酯/丙烯酰胺交联聚合物；聚山梨酯85]在搅动下添加到先前的混合物中并且混合，直至分散为止。
[0361]
将相d：肽pep1溶液[inci：甘油；水(水)；肽pep1)添加到先前的混合物中。
[0362]
添加相e：香料[inci：香料(香精)]。
[0363]
用以下相f成分将ph调节到6.0
‑
6.5：氢氧化钠20％w/w[inci：水(水)；氢氧化钠])
[0364][0365]
表4
[0366]
制备含有肽pep2(h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2)溶液的乳膏
[0367]
在合适的器皿中，使相a的成分：水[inci：水(水)]、zemea
tm
[inci：丙二醇]、5[inci：戊二醇]、phenoxetol
tm
[inci：苯氧乙醇]和na2[inci：edta二钠]溶解。
[0368]
将相a1成分：ultrez 10聚合物[inci：卡波姆(carbomer)]添加到先前的混合物中。一旦分散，就将相a2：fax cpe
‑
k[inci：鲸蜡醇磷酸酯钾]引入。然后将混合物加热到70
‑
75℃。
[0369]
在单独器皿中，将相b成分：schercemol
tm dis酯[inci：癸二酸二异丙酯]、2000[inci：甘油硬脂酸酯、鲸蜡硬脂醇、棕榈酰基水解小麦蛋白钾]、ec[inci：椰油酸乙基己酯]、astro
‑
sil 2c 350[inci：二甲聚硅氧烷]和生育酚乙酸酯[inci：生育酚乙酸酯]混合，并且将混合物在70
‑
75℃下加热。
[0370]
通过在用涡轮机快速搅动的条件下，将相b缓慢添加到相a中来制备乳剂。
[0371]
一旦混合物冷却到40℃，就将相c的组分：novemer
tm
ec
‑
1聚合物[inci：矿物油(液体石蜡)；水(水)；丙烯酸酯/丙烯酰胺交联聚合物；聚山梨酯85]在搅动下添加到先前的混合物中并且混合，直至分散为止。
[0372]
将相d：肽pep2溶液[inci：甘油；水(水)；肽pep2)添加到先前的混合物中。
[0373]
添加相e：香料[inci：香料(香精)]。
[0374]
用以下相f成分将ph调节到6.0
‑
6.5：氢氧化钠20％w/w[inci：水(水)；氢氧化钠])
[0375][0376]
表5
[0377]
实例15
[0378]
制备包括肽pep1(ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2)的凝胶霜。
[0379]
在合适的器皿中，使相a的成分：水[inci：水(水)]、zemea
tm
[inci：丙二醇]、[inci：苯氧乙醇]、na2[inci：edta二钠]和山梨酸钾颗粒[山梨酸钾]分散。
[0380]
将相a1成分：ultrez 21聚合物[inci：丙烯酸酯/c10/30烷醇丙烯酸酯交联聚合物]在搅动下添加到先前的混合物中。一旦分散，就将相a2：黄原胶[inci：黄原胶]引入到先前的混合物中并且搅动，直至完全分散。
[0381]
在单独器皿中，将相b成分：schercemol
tm 1818酯[inci：isoste芳基异硬脂酸酯]称重。
[0382]
通过在用涡轮机快速搅动的条件下，将相b缓慢添加到相a中来制备乳剂。
[0383]
将相c：肽pep1溶液[inci：水(水)；辛甘醇；肽pep1]添加到先前的混合物中。
[0384]
利用以下相d成分将ph调节到6.0
‑
6.5：氢氧化钠20％w/w[inci：水(水)；氢氧化
钠])
[0385][0386]
表6
[0387]
在本实例中，可通过用pep2代替pep1来获得包含肽pep2(h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2)的凝胶霜。
[0388]
实例16
[0389]
制备包括2％的肽pep1(ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2)溶液的凝胶
[0390]
在合适的器皿中，溶解相a的成分：水[inci：水(水)]、zemea
tm
[inci：丙二醇]、glucam
tm
e
‑
20保湿剂[inci：甲基葡糖醇聚醚
‑
20]、na2[inci：edta二钠]、[inci：苯氧乙醇]。
[0391]
将相a1：ultrez 10聚合物[inci：卡波姆]添加到先前的混合物中并且混合，直至完全分散。
[0392]
将相b：肽pep
‑
23溶液[inci：水(水)；辛甘醇；pep
‑
23]添加到先前的混合物中并混合。
[0393]
将相c：co 40[inci：peg
‑
40氢化蓖麻油]、香料[inci：香料(香精)]添加到先前的混合物中并混合。
[0394]
利用以下相d的成分将ph调节到6.0
‑
6.5：氢氧化钠20％w/w[inci：水(水)；氢氧化钠]。
[0395]
[0396]
表7
[0397]
在本实例中，可通过用pep2代替pep1来获得包含肽pep2(h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2)的凝胶。
[0398]
实例17
[0399]
制备包括2％的肽pep1(ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2)溶液的乳液
[0400]
在合适的器皿中，溶解相a1的成分：水[inci：水(水)]，zemea
tm
[inci：propanediol]、甘油[inci：甘油]、山梨酸钾[inci：山梨酸钾]和na2[inci：edta二钠]。
[0401]
将相a2的成分：ultrez 30聚合物[inci:卡波姆]加入前述混合物中。一旦分散，则引入相a3：黄原胶[inci：黄原胶]。将混合物在70
‑
75℃下加热。
[0402]
在单独器皿中，将相b成分：白芒花籽油[inci：白池花(白芒花)籽油]、kodasil 600idd凝胶[inci：异十二烷；乙烯基二甲聚硅氧烷/月桂基二甲聚硅氧烷交联聚合物；二甲聚硅氧烷；月桂基二甲聚硅氧烷]、astro
‑
sil 2c 350[inci：二甲聚硅氧烷]、schercemol
tm catc酯[inci：椰油酰基己二酸/三羟甲基丙烷共聚物；三羟甲基丙烷]、schercemol
tm dis酯[inci：癸二酸二异丙酯]、生育酚乙酸酯[inci：生育酚乙酸酯]和phenoxetol
tm
[inci：苯氧乙醇]混合，并且将所产生的混合物在70
‑
75℃下加热。
[0403]
通过在用涡轮机快速搅动的条件下，将相b缓慢添加到相a中来制备乳剂。
[0404]
一旦混合物冷却到40℃，就将相c的组分：novemer
tm
ec
‑
2聚合物[inci：水(水)；丙烯酸钠/山嵛醇聚醚
‑
25甲基丙烯酸酯交联聚合物；氢化聚癸烯、月桂基葡萄糖苷]、sa
‑
sb
‑
300(7％)[inci：二氧化硅；二甲聚硅氧烷]、香料[inci：香料(香精)]和肽pep1溶液[inci：水(水)；辛甘醇；肽pep1)添加到先前的混合物。
[0405]
用以下相d成分将ph调节到6.0
‑
6.5：氢氧化钠20％w/w[inci：水(水)；氢氧化钠])
[0406][0407]
表8
[0408]
在本实例中，可通过将pep2替换为pep1来获得包含肽pep2(h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2)的洗剂。
[0409]
实例18
[0410]
制备包括2％的肽pep1(ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2)溶液的液体乳剂
[0411]
在合适的器皿中，使相a1的成分：水[inci：水(水)]、zemea
tm
[inci：丙二醇]、甘油[inci：甘油]、genencare
tm osms ba[inci：甜菜碱]、na2[inci：edta二钠]、山梨酸钾[inci：山梨酸钾]溶解。
[0412]
将相a2：ultrez 10聚合物[inci：卡波姆]添加到前述混合物中。一旦分散，则添加相a3：fax cpe
‑
k[inci：鲸蜡醇磷酸酯钾]。将所得混合物在70
‑
75℃下加热。
[0413]
在另一个器皿中，将相b的组分：hd[inci：异十六烷]、lincol bas[inci：c12
‑
15烷基苯甲酸酯]、gandak c[inci：鲸蜡基醇]、山梨醇t 20p[inci：聚山梨酯20]、2
‑
苯氧乙醇[inci：苯氧乙醇]、蔬菜硬脂酸50/50[inci：硬脂酸；棕榈酸]混合并且在70
‑
75℃下加热。在用涡轮机紧密搅动的条件下，在相a上缓慢引入相b。
[0414]
在40℃下冷却混合物，并添加相c：brb cm 56
‑
s[inci：环甲硅脂]，肽pep1溶液[inci：水(水)；辛甘醇；肽pep1]、香料[inci：香料(香精)。利用以下相d的成分将ph调节到6.0
‑
6.5：氢氧化钠20％w/w[inci：水(水)；氢氧化钠]。
[0415][0416]
表9
[0417]
在本实例中，可通过用pep2代替pep1来获得包含肽pep2(h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2)的液体乳液。
[0418]
实例19
[0419]
通过时间分辨荧光共振能量转移在人骨骼肌细胞中对盲肌样蛋白1(mbnl1)进行的体外定量。
[0420]
如实例7中所示，以0.5mg/ml的浓度测试本发明的不同肽。结果如表10所示，表明与基础对照相比，所有肽都提高了mbnl1水平。
[0421]
[0422][0423]
表10
[0424]
实例20
[0425]
通过时间分辨荧光共振能量转移在人骨骼肌细胞中对盲肌样蛋白1(mbnl1)进行的体外定量。
[0426]
除使用tebu
‑
bio(西班牙巴塞罗那)的hskmc外，按照实例7中公开的方法进行分析。本发明的不同肽以0.5mg/ml的浓度进行测试。
[0427]
结果如表11所示，表明与基础对照相比，所有肽都提高了mbnl1水平。
[0428]
标识符化合物％mbnl1pep27ac
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
oh126.1pep30h
‑
ala
‑
leu
‑
arg
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2181.3pep31h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
val
‑
asn
‑
thr
‑
nh2120.0pep40h
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2117.3pep41h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
nh2138.4pep42h
‑
gly
‑
ile
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2114.2pep44h
‑
ala
‑
ile
‑
arg
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2240.6pep46h
‑
gly
‑
val
‑
arg
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2182.1pep50h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
gln
‑
thr
‑
nh2119.4
[0429]
表11
[0430]
实例21
[0431]
用包含pep1的组合物进行的体外研究评估白人皮肤女性志愿者长期应用的抗皱和光滑效果
[0432]
这项研究持续了28天。其中包括42名年龄在35
‑
58岁之间的白人女性志愿者，她们的鱼尾纹部位均有皮肤皱纹。受试者在面部一侧(左侧或右侧)涂抹包含pep1(活性乳膏)的乳膏，以及除pep1(安慰剂乳膏)外具有相同成分的无效对照乳膏。这两种乳膏使用28天，每天两次(早上和晚上)。受试者作为自身参考，并且将在28天获得的结果与在初始时间获得的结果进行比较(活性对安慰剂)。
[0433]
通过测定最大皱纹的最大深度来评估鱼尾纹区乳膏的抗皱效果：志愿者鱼尾纹区域的图像通过3d显微地形成像系统进行测量。志愿者被要求保持微笑的表情，并在首次使用产品时和使用产品28天后测量最大皱纹的最大深度。处理后的减皱效果见表12。
[0434][0435]
表12
[0436]
结果表明，与初始时间相比，使用乳膏28天后，最大皱纹的最大深度有所减少。活性乳膏的降幅远高于安慰剂乳膏。
[0437]
通过测定算术粗糙度(sa)来评估乳膏的平滑效果：利用三维微形貌成像系统对志愿者的脸颊进行成像。在涂抹乳膏的初始时间和28天后测定算术粗糙度(sa)。处理后粗糙度降低结果如表13所示。
[0438][0439]
表13
[0440]
结果表明，使用活性乳膏处理后，算术粗糙度(sa)有所降低，而使用安慰剂乳膏处理后，这种影响可忽略不计。粗糙度降低意味着皮肤更光滑。
[0441]
本发明的各个方面和实施例由以下编号的条款定义：
[0442]
1.一种式(i)化合物：
[0443]
r1‑
w
m
‑
x
n
‑
aa1‑
aa2‑
aa3‑
aa4‑
aa5‑
aa6‑
y
p
‑
z
q
‑
r2ꢀꢀꢀꢀ
(i)，
[0444]
其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，其中：
[0445]
aa1为asp、glu、asn、gln、ala、gly或非氨基酸；
[0446]
aa2为val、ile、leu或ala；
[0447]
aa3为tyr、phe、trp、lys、arg或his；
[0448]
aa4为lys、arg、his、pro或val；
[0449]
aa5为asn、asp、gln或非氨基酸；
[0450]
aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；
[0451]
w、x、y和z各自独立地为任何氨基酸；
[0452]
m、n、p和q各自独立地为0或1；
[0453]
m n p q小于或等于2；
[0454]
r1选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基、芳烷基和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由h、非环状脂肪族基团、脂环基、芳基、芳烷基、杂环基和杂芳基烷基组成的组；
[0455]
r2选自由
‑
nr3r4、
‑
or3、
‑
sr3组成的组，其中，r3和r4独立地选自由h、衍生自聚乙二醇的聚合物、非环状脂肪族基团、脂环基、杂环基、杂芳基烷基、芳基和芳烷基组成的组；并且
[0456]
r1和r2不为氨基酸。
[0457]
2.根据条款1所述的化合物，其中，当aa5为非氨基酸时，aa1为asp、glu、asn或gln；
aa2为val、ile、leu或ala；aa3为tyr、phe或trp；aa4为lys、arg或his；aa6为非氨基酸。
[0458]
3.根据条款2所述的化合物，其中，aa1为asp、glu、asn或gln；aa2为val、ile、leu或ala；aa3为tyr、phe或trp；aa4为lys、arg或his；aa5非氨基酸；且aa6为非氨基酸。
[0459]
4.根据条款3所述的化合物，其中，(i)aa1为asp、glu或asn，或(ii)aa1为asp或glu。
[0460]
5.根据条款3或条款4所述的化合物，其中，aa2为val或ile。
[0461]
6.根据条款3至5中任一项所述的化合物，其中，aa3为tyr或phe。
[0462]
7.根据条款3至6中任一项所述的化合物，其中，aa4为lys或arg。
[0463]
8.根据条款3至7中任一项所述的化合物，其中，aa1为asp；aa2为val；aa3为tyr；aa4为lys。
[0464]
9.根据前述条款中任一项所述的化合物，其中，r1选自由h和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由c1‑
c
18
烷基、c2‑
c
24
烯基、c3‑
c
24
环烷基组成的组；并且r2为
‑
nr3r4或
‑
or3，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。
[0465]
10.根据条款1所述的化合物，其中，所述化合物为：
[0466]
ac
‑
w
m
‑
x
n
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
y
p
‑
z
q
‑
nh2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(iv)；
[0467]
h
‑
w
m
‑
x
n
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
y
p
‑
z
q
‑
nh2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(v)；
[0468]
ac
‑
asp
‑
val
‑
tyr
‑
lys
‑
nh2(pep1)；或
[0469]
h
‑
ala
‑
leu
‑
lys
‑
pro
‑
asn
‑
thr
‑
nh2(pep2)。
[0470]
11.一种根据条款1到10中任一项所述的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐与肉毒杆菌毒素和/或序列为ac
‑
glu
‑
glu
‑
met
‑
gln
‑
arg
‑
arg
‑
nh2的肽的组合。
[0471]
12.一种组合物，所述组合物包括化妆品上有效量的根据条款1到11中任一项所述的式(i)化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或根据条款10所述的组合以及至少一种化妆品上可接受的赋形剂或佐剂。
[0472]
13.一种根据条款1到10中任一项所述的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理。
[0473]
14.根据条款13所述的用途，其中，所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理为：处理和/或预防皮肤衰老；减少和/或预防皮肤皱纹；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；提高或保持肌肤紧致；处理和/或预防皮肤下垂；减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积和/或预防和/或减轻脂肪组织丢失。
[0474]
15.一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理的方法，所述方法包括向所述受试者施用化妆品上有效量的根据条款1到10中任一项所述的化合物、根据条款11所述的组合或根据条款13所述的组合物。
[0475]
16.根据条款15所述的方法，其中，所述非治疗性化妆品上的处理和/或护理为：处理和/或预防皮肤衰老；减少和/或预防皮肤皱纹；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；提高或保持肌肤紧致；处理和/或预防皮肤下垂；减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积和/或预防和/或减轻脂肪组织丢失。
[0476]
17.根据条款1所述的化合物，其中，当aa5为asn、asp或gln时，aa1为ala、gly或非氨基酸；aa2为val、ile或leu；aa3为lys、arg或his；aa4为pro或val；aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；aa1与aa6不同。
[0477]
18.根据条款17所述的化合物，其中，aa1为ala、gly或非氨基酸；aa2为val、ile或
leu；aa3为lys、arg或his；aa4为pro或val；aa5为asn、asp或gln；aa6为thr、ala、ser或非氨基酸；aa1与aa6不同。
[0478]
19.根据条款18所述的化合物，其中，aa1为ala或gly。
[0479]
20.根据条款18或条款19所述的化合物，其中，aa2为leu或ile。
[0480]
21.根据条款18至20中任一项所述的化合物，其中，aa3为lys或arg。
[0481]
22.根据条款18至21中任一项所述的化合物，其中，aa5为asn或asp。
[0482]
23.根据条款18至22中任一项所述的化合物，其中，(i)aa6为thr、ala或ser，或(ii)aa6为thr或ala。
[0483]
24.根据条款18至23中任一项所述的化合物，其中，aa1为ala；aa2为leu；aa3为lys；aa4为pro；aa5为asn；aa6为thr。
[0484]
25.根据条款17至23中任一项所述的化合物，其中，r1选自由h和r5‑
co
‑
组成的组，其中，r5选自由c1‑
c
18
烷基、c2‑
c
24
烯基、c3‑
c
24
环烷基组成的组；并且r2为
‑
nr3r4或
‑
or3，其中，r3和r4独立地选自由h和c1‑
c
16
烷基组成的组。
[0485]
26.一种根据条款17至25中任一项所述的化合物组合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐与肉毒杆菌毒素和/或序列为ac
‑
glu
‑
glu
‑
met
‑
gln
‑
arg
‑
arg
‑
nh2的肽的组合。
[0486]
27.一种组合物，所述组合物包括化妆品上有效量的根据条款17至25中任一项所述的式(i)化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐，或根据条款26所述的组合以及至少一种化妆品上可接受的赋形剂或佐剂。
[0487]
28.根据条款17至25中任一项所述的化合物、其立体异构体和/或化妆品上可接受的盐用于对皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理的用途。
[0488]
29.根据条款28所述的用途，其中，所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理为：处理和/或预防皮肤衰老；减少和/或预防皮肤皱纹；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；提高或保持皮肤紧致；处理和/或预防皮肤下垂；减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积和/或预防和/或减轻脂肪组织损失。
[0489]
30.一种对受试者的皮肤、毛发、指甲和/或粘膜进行化妆品上、非治疗性处理和/或护理的方法，所述方法包括向所述受试者施用化妆品上有效量的根据条款17至23中任一项所述的化合物、根据条款26所述的组合或根据条款27所述的组合物。
[0490]
31.根据条款30所述的方法，其中，所述化妆品上、非治疗性处理和/或护理为：处理和/或预防皮肤衰老；减少和/或预防皮肤皱纹；刺激胶原蛋白合成和/或预防胶原蛋白丢失；提高或保持皮肤紧致；处理和/或预防皮肤下垂；减少和/或预防面部不对称；增加脂肪组织的体积和/或预防和/或减轻脂肪组织丢失。