一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法与流程

1.本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法。


背景技术：

2.女性的胸部是实现曲线美的重要指标，完美的胸部曲线给女性带来自信。胸部过小、胸型不完美、下垂等都会造成胸部曲线不完美。研究表明，营养缺失、失衡，配戴胸罩不合理、快速减肥后皮肤松弛等是胸部萎缩、下垂的主因。胶原蛋白是胸部的重要组成部分，是保持胸部弹性的生物大分子，随着年龄的增长，胶原蛋白大量缺失，也会造成胸部缩小、下垂。
3.干细胞是一类具有自我更新能力且在适合微环境下具有多系分化潜能的细胞。脂肪干细胞(adipose
‑
derived stem cells，adscs)是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。研究发现adscs细胞能够在体外稳定增殖且衰亡率低，同时它具有取材容易、少量组织即可获取大量干细胞，适宜大规模培养，对机体损伤小等优点，而且其来源广泛，体内储备量大，适宜自体移植，逐渐成为近年来新的研究热点之一。
4.现有技术的丰胸方法，例如假体填充，具有操作难度大、创面大、形状不自然的缺点。
5.综上所述，亟需开发出一种操作方便、创面小的三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法，该方法分离和制备出的自体脂肪干细胞裂解液通过与生长因子进行配合，并且将自体脂肪干细胞在低温下进行裂解后混合，制得的产品质量稳定，能够用于胸部美化。
7.为实现上述目的，本发明是通过下列技术方案实现的：
8.一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法，
9.包括下列步骤：
10.s1自体脂肪细胞的采集
11.a在无菌条件下采集自体脂肪细胞80～100ml，用于采集分离出自体脂肪干细胞；
12.s2自体脂肪干细胞分离
13.a移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀；
14.b在脂肪颗粒中加入消化酶混合液，室温下以振荡30～38min；通过加入完全培养基终止消化，经过离心后除去上清液，pbs重悬细胞沉淀；
15.c将底层细胞沉淀用pbs重悬，加入等量红细胞裂解液静置5～15min进行裂解，红细胞充分裂解后，通过离心，丢弃上清液，pbs重悬细胞沉淀；
16.d将细胞悬液进行合并再通过过滤，分离出原代自体脂肪干细胞；
17.s3原代自体脂肪干细胞的传代培养
18.a将原代脂肪自体间充质干细胞接种培养，加入完全培养基；
19.b换液时间为2天/次，生长周期为5～7天，即可获得p1代脂肪间充质干细胞，按照上述步骤继续传代，至p10代，收集各代的自体脂肪干细胞；
20.s4自体脂肪干细胞裂解液的制备
21.a收集的各代自体脂肪干细胞装入冻存管内，立即放入
‑
196℃～
‑
200℃液氨罐内冻存15～20min，再通过电动混匀器强力混匀2～4min；
22.b反复上述操作至少3次，充分破碎裂解自体脂肪干细胞；
23.c通过离心装置对上述破碎裂解液进行离心处理，最终上层清液即为制得的自体脂肪干细胞裂解液。
24.作为本方案的进一步改进，还包括s5，将制得的自体脂肪干细胞裂解液与生长因子、转换因子混合，过来后，取得上层清液为注射液。
25.作为本方案的进一步改进，还包括s6，根据待丰胸者的乳房形状，在乳房底部、中部和顶部分别选取注射点位。
26.作为本方案的进一步改进，生长因子包括透明质酸、胰岛素、地塞米松、氨基酸、l
‑
氨酰胺中的任意三种。
27.作为本方案的进一步改进，所述脂肪为人体脂肪。
28.本发明具有以下有益效果：
29.1)三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法中，分离的方法简单，可以高效的从脐带中分离脂肪干细胞，提取出的干细胞不仅纯度高而且活力高；
30.2)在上述步骤中，悬浮液过滤采用过滤器进行过滤，过滤器包括至少两层过滤膜，第一层过滤膜进行预过滤，第二层过滤膜进行再次过滤。通过上述过滤操作，能够有效过滤杂质，而且能够除菌，进一步使得过滤后的液体能够长期进行低温存储；
31.3)本方法制备的细胞裂解液丰胸效果自然、莹润、无毒副作用。
具体实施方式
32.为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，以下结合和最佳实施例对本发明作进一步说明：
33.本发明的三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法分为如下三个步骤：
34.实施例1
35.一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法，
36.包括下列步骤：
37.s1自体脂肪细胞的采集
38.a在无菌条件下采集自体脂肪细胞80～100ml，用于采集分离出自体脂肪干细胞；
39.s2自体脂肪干细胞分离
40.a移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀；
41.b在脂肪颗粒中加入消化酶混合液，室温下以振荡30～38min；通过加入完全培养基终止消化，经过离心后除去上清液，pbs重悬细胞沉淀；
42.c将底层细胞沉淀用pbs重悬，加入等量红细胞裂解液静置5～15min进行裂解，红
细胞充分裂解后，通过离心，丢弃上清液，pbs重悬细胞沉淀；
43.d将细胞悬液进行合并再通过过滤，分离出原代自体脂肪干细胞；
44.s3原代自体脂肪干细胞的传代培养
45.a将原代脂肪自体间充质干细胞接种培养，加入完全培养基；
46.b换液时间为2天/次，生长周期为5～7天，即可获得p1代脂肪间充质干细胞，按照上述步骤继续传代，至p10代，收集各代的自体脂肪干细胞；
47.s4自体脂肪干细胞裂解液的制备
48.a收集的各代自体脂肪干细胞装入冻存管内，立即放入
‑
196℃～
‑
200℃液氨罐内冻存15～20min，再通过电动混匀器强力混匀2～4min；
49.b反复上述操作至少3次，充分破碎裂解自体脂肪干细胞；
50.c通过离心装置对上述破碎裂解液进行离心处理，最终上层清液即为制得的自体脂肪干细胞裂解液。
51.还包括s5，将制得的自体脂肪干细胞裂解液与生长因子、转换因子混合，过来后，取得上层清液为注射液。
52.还包括s6，根据待丰胸者的乳房形状，在乳房底部、中部和顶部分别选取注射点位。
53.实施例2
54.一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法，
55.包括下列步骤：
56.s1自体脂肪细胞的采集
57.a在无菌条件下采集自体脂肪细胞80～100ml，用于采集分离出自体脂肪干细胞；
58.s2自体脂肪干细胞分离
59.a移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀；
60.b在脂肪颗粒中加入消化酶混合液，室温下以振荡30～38min；通过加入完全培养基终止消化，经过离心后除去上清液，pbs重悬细胞沉淀；
61.c将底层细胞沉淀用pbs重悬，加入等量红细胞裂解液静置5～15min进行裂解，红细胞充分裂解后，通过离心，丢弃上清液，pbs重悬细胞沉淀；
62.d将细胞悬液进行合并再通过过滤，分离出原代自体脂肪干细胞；
63.s3原代自体脂肪干细胞的传代培养
64.a将原代脂肪自体间充质干细胞接种培养，加入完全培养基；
65.b换液时间为2天/次，生长周期为5～7天，即可获得p1代脂肪间充质干细胞，按照上述步骤继续传代，至p10代，收集各代的自体脂肪干细胞；
66.s4自体脂肪干细胞裂解液的制备
67.a收集的各代自体脂肪干细胞装入冻存管内，立即放入
‑
196℃～
‑
200℃液氨罐内冻存15～20min，再通过电动混匀器强力混匀2～4min；
68.b反复上述操作至少3次，充分破碎裂解自体脂肪干细胞；
69.c通过离心装置对上述破碎裂解液进行离心处理，最终上层清液即为制得的自体脂肪干细胞裂解液。
70.还包括s5，将制得的自体脂肪干细胞裂解液与生长因子、转换因子混合，过来后，
取得上层清液为注射液。
71.实施例3
72.一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法，
73.包括下列步骤：
74.s1自体脂肪细胞的采集
75.a在无菌条件下采集自体脂肪细胞80～100ml，用于采集分离出自体脂肪干细胞；
76.s2自体脂肪干细胞分离
77.a移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀；
78.b在脂肪颗粒中加入消化酶混合液，室温下以振荡30～38min；通过加入完全培养基终止消化，经过离心后除去上清液，pbs重悬细胞沉淀；
79.c将底层细胞沉淀用pbs重悬，加入等量红细胞裂解液静置5～15min进行裂解，红细胞充分裂解后，通过离心，丢弃上清液，pbs重悬细胞沉淀；
80.d将细胞悬液进行合并再通过过滤，分离出原代自体脂肪干细胞；
81.s3原代自体脂肪干细胞的传代培养
82.a将原代脂肪自体间充质干细胞接种培养，加入完全培养基；
83.b换液时间为2天/次，生长周期为5～7天，即可获得p1代脂肪间充质干细胞，按照上述步骤继续传代，至p10代，收集各代的自体脂肪干细胞；
84.s4自体脂肪干细胞裂解液的制备
85.a收集的各代自体脂肪干细胞装入冻存管内，立即放入
‑
196℃～
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200℃液氨罐内冻存15～20min，再通过电动混匀器强力混匀2～4min；
86.b反复上述操作至少3次，充分破碎裂解自体脂肪干细胞；
87.c通过离心装置对上述破碎裂解液进行离心处理，最终上层清液即为制得的自体脂肪干细胞裂解液。
88.还包括s5，将制得的自体脂肪干细胞裂解液与生长因子、转换因子混合，过来后，取得上层清液为注射液。
89.还包括s6，根据待丰胸者的乳房形状，在乳房底部、中部和顶部分别选取注射点位。
90.生长因子包括透明质酸、胰岛素、地塞米松、氨基酸、l
‑
氨酰胺中的任意三种。
91.实施例4
92.一种三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法，
93.包括下列步骤：
94.s1自体脂肪细胞的采集
95.a在无菌条件下采集自体脂肪细胞80～100ml，用于采集分离出自体脂肪干细胞；
96.s2自体脂肪干细胞分离
97.a移除最上层油脂，并分别移取悬浮的脂肪颗粒和底层细胞沉淀；
98.b在脂肪颗粒中加入消化酶混合液，室温下以振荡30～38min；通过加入完全培养基终止消化，经过离心后除去上清液，pbs重悬细胞沉淀；
99.c将底层细胞沉淀用pbs重悬，加入等量红细胞裂解液静置5～15min进行裂解，红细胞充分裂解后，通过离心，丢弃上清液，pbs重悬细胞沉淀；
100.d将细胞悬液进行合并再通过过滤，分离出原代自体脂肪干细胞；
101.s3原代自体脂肪干细胞的传代培养
102.a将原代脂肪自体间充质干细胞接种培养，加入完全培养基；
103.b换液时间为2天/次，生长周期为5～7天，即可获得p1代脂肪间充质干细胞，按照上述步骤继续传代，至p10代，收集各代的自体脂肪干细胞；
104.s4自体脂肪干细胞裂解液的制备
105.a收集的各代自体脂肪干细胞装入冻存管内，立即放入
‑
196℃～
‑
200℃液氨罐内冻存15～20min，再通过电动混匀器强力混匀2～4min；
106.b反复上述操作至少3次，充分破碎裂解自体脂肪干细胞；
107.c通过离心装置对上述破碎裂解液进行离心处理，最终上层清液即为制得的自体脂肪干细胞裂解液。
108.还包括s5，将制得的自体脂肪干细胞裂解液与生长因子、转换因子混合，过来后，取得上层清液为注射液；
109.还包括s6，根据待丰胸者的乳房形状，在乳房底部、中部和顶部分别选取注射点位。生长因子包括透明质酸、胰岛素、地塞米松、氨基酸、l
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氨酰胺中的任意三种。所述脂肪为人体脂肪。
110.实施例1～4制备出的自体脂肪细胞裂解液及其制备方法具备下述效果：1)三段式自体脂肪干细胞裂解液丰胸方法中，分离的方法简单，可以高效的从脐带中分离脂肪干细胞，提取出的干细胞不仅纯度高而且活力高；2)在上述步骤中，悬浮液过滤采用过滤器进行过滤，过滤器包括至少两层过滤膜，第一层过滤膜进行预过滤，第二层过滤膜进行再次过滤。通过上述过滤操作，能够有效过滤杂质，而且能够除菌，进一步使得过滤后的液体能够长期进行低温存储；3)本方法制备的细胞裂解液丰胸效果自然、莹润、无毒副作用。
111.以上所述仅为本发明的优选实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明所作的等效变换，均在本发明的专利保护范围内。