鸢尾甲黄素A在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用的制作方法

鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及鸢尾甲黄素a技术领域，是一种鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用。


背景技术：

2.支气管哮喘属于炎症相关性疾病，严重威胁人们的身心健康。局部炎症过度、免疫紊乱和气道高反应性是其主要病理特征。一般哮喘的抗炎治疗是其主要治疗原则，糖皮质激素是重要的治疗手段。但此类药物的长期使用会导致药物的耐药性，后期严重影响患者的生活质量。


技术实现要素：

3.本发明提供了一种鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用，克服了上述现有技术之不足，其首次公开了鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用，从而实现对支气管哮喘疾病的有效治疗。
4.本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用。
5.下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进：上述鸢尾甲黄素a是从中药材射干中提取得到的。
6.上述药物是将鸢尾甲黄素a通过任何一种药学上可接受的剂型进行装载得到。
7.上述药学上可接受的剂型是通过药学上允许的和药学上可接受的辅料制成。
8.上述药学上可接受的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液中的一种。
9.本发明首次公开了鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用，鸢尾甲黄素a不仅能有效降低模型小鼠肺气道阻力，改善模型小鼠气道高反应性，还能降低模型小鼠肺泡灌洗液中总白细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的数量，有效控制炎症，同时，可显著降低气道炎症因子il
‑
4和il
‑
5，从而实现对支气管哮喘疾病的有效治疗。
附图说明
10.附图1为本发明中各组气道阻力（rl）变化的折线图。
11.附图2为本发明中各组肺泡灌洗液（balf）中总白细胞（wbc）变化的柱状图。
12.附图3为本发明中各组肺泡灌洗液（balf）中单核细胞（monocyte）变化的柱状图。
13.附图4为本发明中各组肺泡灌洗液（balf）中嗜碱性粒细胞（basophil）变化的柱状图。
14.附图5为本发明中各组小鼠肺泡灌洗液（balf）上清中白介素4（il
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4）变化的散点图。
15.附图6为本发明中各组小鼠肺泡灌洗液（balf）上清中白介素5（il
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5）变化的散点图。
具体实施方式
16.本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公知公用的化学试剂和化学用品；本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量百分数；本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液。
17.下面结合实施例对本发明作进一步描述：实施例1：一种鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用。
18.实施例2：作为上述实施例的优化，鸢尾甲黄素a是从中药材射干中提取得到的。
19.实施例3：作为上述实施例的优化，药物是将鸢尾甲黄素a通过任何一种药学上可接受的剂型进行装载得到。
20.实施例4：作为上述实施例的优化，药学上可接受的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液中的一种。
21.药效学实验。实验动物：采用健康清洁级balb/c小鼠，饲养于复旦大学药学院实验动物中心，饲养条件：光照时间固定，水、食物自由摄取。
22.试剂与仪器：卵蛋白（上海丽珠东风生物技术有限公司）；氢氧化铝凝胶（美国sigma公司）；戊巴比妥钠（上海化学试剂公司进口分装）；il
‑
4和il
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5试剂盒（biosource生物公司进口分装）；dl
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8r冷冻离心机（上海离心机械研究所）；ys9801型医用超声雾化器（上海亿圣科技有限公司）；动物诱喘装置：不完全封闭有机玻璃箱，（28
×
15
×
13）cm3，箱体一端为通气孔，另一端连接超声雾化器。
23.分组：健康清洁级6周至8周龄雌性balb/c小鼠50只，体重16g至18g，随机分为5组，分别为正常对照组（以下简称nc组）、哮喘模型组（以下简称ova/saline组）、地塞米松干预组（以下简称ova/dex组）、鸢尾甲黄素a低剂量(5mg/kg)干预组（以下简称ova/itg 5组）和鸢尾甲黄素a高剂量(10mg/kg)干预组（以下简称ova/itg 10组）。
24.建立哮喘模型：小鼠第1天起一次性腹腔注射20ug卵蛋白和2mg氢氧化铝的生理盐水混悬液0.2ml，使小鼠处于致敏状态，一周1次，总致敏4次。在第27天雾化吸入3%的卵蛋白，每次约30分钟诱发哮喘，连续雾化7天。小鼠出现呼吸加快、腹肌痉挛、口唇发绀、点头呼吸及站立不稳等，表明模型建立成功。
25.给药：ova/itg 5组和ova/itg 10组分别于致敏后第8天开始灌胃给药，鸢尾甲黄素a使用前，使用羧甲基纤维素钠形成悬浮液后进行灌胃，两组分别给予0.2ml鸢尾甲黄素a低剂量(5mg/kg)形成的悬浮液和鸢尾甲黄素a高剂量(10mg/kg)形成的悬浮液进行灌胃给药，每日1次，连续灌胃7天，ova/dex组给予地塞米松（1mg/kg），nc组和ova/saline组给予等量生理盐水，连续7天。
26.试验1：各组肺功能的考察。试验方法：肺功能测定选用buxco公司气道阻力和肺顺应性有创检测系统，气道阻力（rl）的检测参照pichavant m等建立的方法操作。各组大鼠处理的具体步骤如下：1.先给予戊巴比妥钠（50mg/kg）麻醉；2.行气管插管术：将麻醉后的balb/c小鼠固定在手术板上，颈部备皮，常规消毒，切开颈部皮肤，逐层剥离肌肉，鈍性分离，暴露气管，在分离出的颈部气管上剪一＂t＂形小切口（约在第4、5环状软骨处），进行气管插管；3.将小鼠放入体积描记箱中，呼吸化辅助通气；4.先测定小鼠基线肺阻力，待其稳定，并使其变异率＜5%，记录3min；5.随后采用倍増浓度的乙酰胆碱雾化，其浓度从低到高为
3.125mg/ml、12.5mg/ml和50mg/ml。每次雾化10s，记录3min，间隔4min。乙酰胆碱经雾化器后，随呼吸机气流进入动物气道内，激发后通过测定气道阻力（rl）来反映小鼠气道的反应性。
27.结果：气道阻力（rl）变化趋势，如图1所示，其中，横坐标为乙酰胆碱的浓度，纵坐标为气道阻力的增长率，由图1所知，相比nc组，ova/saline组的小鼠肺气道阻力显著增加，说明ova/saline组具有显著的气道高反应性，证明模型制备成功。模型小鼠给药干预后，当雾化吸入乙酰胆碱浓度为3.125mg/ml和12.5mg/ml时，给药的各组均未降低小鼠肺气道阻力（rl），当雾化吸入乙酰胆碱浓度为50mg/ml时，相比ova/saline组，ova/dex组、ova/itg 5组和ova/itg 10组均显著降低小鼠的肺气道阻力（rl），并且ova/itg 5组比ova/itg 10组的药效更显著，说明本发明能有效降低模型小鼠肺气道阻力（rl），改善模型小鼠气道高反应性。
28.试验2：各组小鼠肺泡灌洗液（balf）中的白细胞数量的考察。试验方法：小鼠采血后，将其固定在手术板上，从已暴露的颈部气管，插入特制的钝头针，并把针头和气管一起固定结扎，打开胸腔结扎右主支气管。用1ml注射器向气管内缓慢注入预冷的含有3%bsa的pbs缓冲液0.5ml，迅速回抽灌洗液，进行左肺灌洗，注入回抽反复２次。将回收的液体1200rpm、4℃、离心10min。取其上清液移入无菌离心管内，置于
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80℃冰箱中保存待测。而沉淀细胞用0.2ml含有3%bsa的pbs 缓冲液重悬后，对沉淀细胞进行瑞氏或吉姆萨染色后，采用血细胞分析仪对肺泡灌洗液（balf）中的总白细胞（wbc）、单核细胞（monocyte）和嗜碱性粒细胞（basophil）进行分类与计数。
29.结果：各组肺泡灌洗液（balf）中总白细胞的数量变化，如图2所示，由图2所知，与nc组相比，ova/saline组的总白细胞数量显著增高（p<0.001），ova/itg 5组和ova/dex组显著降低了模型小鼠的总白细胞数量（p＜0.01），itg 10组对总白细胞数量无影响；各组肺泡灌洗液（balf）中的单核细胞的数量变化，如图3所示，由图3所知，与nc组相比，ova/saline组的单核细胞数量显著增高（p<0.001），与ova/saline组相比，ova/dex组、ova/itg 5组和ova/itg 10组的单核细胞数量均显著减少（p＜0.01）；各组肺泡灌洗液（balf）中的嗜碱性粒细胞的数量变化，如图4所示，由图4可知，与nc组相比，ova/saline组的嗜碱性粒细胞数量显著增高（p<0.001），与ova/saline组相比，ova/itg 5组显著降低了嗜碱性粒细胞的数量（p<0.01）, 而ova/itg 10组和ova/dex组均无显著差异，说明模型小鼠给予鸢尾甲黄素a低剂量(5mg/kg)干预，能有效降低模型小鼠肺泡灌洗液（balf）中总白细胞（wbc）、单核细胞（monocyte）和嗜碱性粒细胞（basophil）的数量，控制炎症。
30.试验3：各组小鼠肺泡灌洗液（balf）上清中白介素4（il
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4）和白介素5（il
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5）的考察。试验方法：采用酶联免疫吸附elisa法检测各组小鼠肺泡灌洗液（balf）中白介素4（il
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4）和白介素5（il
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5）的水平。
31.结果：白介素4（il
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4）的变化，如图5所示，由图5可知，与nc组相比，ova/saline组小鼠肺泡灌洗液（balf）上清中的白介素4（il
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4）表达量显著增高（p<0.001），与ova/saline组相比，ova/dex组、ova/itg 5组和ova/itg 10组小鼠肺泡灌洗液（balf）上清中的白介素4 （il
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4）表达量显著降低（p<0.01），其中，ova/itg 5组可显著降低白介素4（il
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4）水平；白介素5（il
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5）的变化，如图6所示，由图6可知，与nc组相比，ova/saline组小鼠肺泡灌洗液（balf）上清中的白介素5（il
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5）表达量显著增高（p<0.001），与ova/saline组相比，ova/dex
组、ova/itg 5组和ova/itg 10组小鼠肺泡灌洗液（balf）上清中的白介素5（il
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5）表达量显著降低（p<0.001），其中，ova/itg 5组和ova/itg 10组可显著降低白介素5（il
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5）水平，由上可知，ova/itg 5组可显著降低ova/saline组中的白介素4（il
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4）和白介素5（il
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5）的水平。
32.综上所述，本发明首次公开了鸢尾甲黄素a在制备防治支气管哮喘疾病药物中的应用，鸢尾甲黄素a不仅能有效降低模型小鼠肺气道阻力，改善模型小鼠气道高反应性，还能降低模型小鼠肺泡灌洗液中总白细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的数量，有效控制炎症，同时，可显著降低气道炎症因子il
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4和il
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5，从而实现对支气管哮喘疾病的有效治疗。
33.以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。