使用POLY(A)聚合酶对RNA的尺寸选择的制作方法

技术特征：
1.一种用于处理rna样品的方法，其包括：(a)将包含rna的样品片段化以产生不同长度的rna片段群体，其中所述rna片段群体包括较长rna片段和较短rna片段，(b)在其中polya聚合酶优先地将polya尾添加到所述较长rna片段而不是所述较短片段的条件下，将所述polya聚合酶与所述rna片段群体温育，以产生加尾的rna；(c)将所述加尾的rna与oligo(dt)寡核苷酸杂交；和(d)(i)使用所述oligo(dt)寡核苷酸作为引物逆转录所述加尾的rna，以产生cdna文库，或(ii)通过洗去未与所述oligo(dt)寡核苷酸杂交的rna分子来富集所述加尾的rna。2.权利要求1所述的方法，其中所述rna样品包含至少mrna。3.权利要求1或2所述的方法，其中所述较长片段长度为至少20个核糖核苷酸，而所述较短片段长度为至多15个核糖核苷酸。4.权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中步骤(b)的条件包含0.6mm至1.2mm的二价阳离子。5.权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中步骤(b)的条件包含0.75mm至1.0mm的二价阳离子。6.权利要求4或5所述的方法，其中所述二价阳离子为mg
2
。7.权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中步骤(b)的条件包含浓度小于0.02u/ul的polya聚合酶。8.权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中步骤(b)的条件包含浓度在0.002u/ul至0.02u/ul范围内的polya聚合酶。9.权利要求1至8中任一项所述的方法，其中步骤(a)的样品包含dna:rna杂交体，并且所述方法包括用rnaseh处理所述样品。10.权利要求1
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8中任一项所述的方法，其中步骤(a)通过在二价阳离子存在的情况下加热所述rna来完成。11.权利要求1所述的方法，其中步骤(a)的样品还包含小rna，其中：步骤(a)的rna片段群体包括：i.较长rna，其包括未片段化的小rna和rna的片段，以及ii.较短rna，其包括rna的片段，步骤(b)的加尾的rna包括加尾的rna片段和加尾的未片段化的小rna。12.权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中步骤(a)的样品还包含小rna，其中所述方法包括：(a)将所述样品片段化以产生不同长度的rna片段群体，其中所述rna片段群体包括：i.较长rna，其包括未片段化的小rna和rna的片段，以及ii.较短rna，其包括rna的片段，(b)在其中polya聚合酶优先地将polya尾添加到较长rna而非较短rna的条件下，将所述polya聚合酶与所述rna片段群体温育，以产生加尾的rna，其包含加尾的rna片段和加尾的未片段化的小rna；和(c)将所述加尾的rna与oligo(dt)寡核苷酸杂交；和(d)使用所述oligo(dt)寡核苷酸作为引物逆转录所述加尾的rna，以产生cdna文库或通过洗去未与所述oligo(dt)寡核苷酸杂交的rna分子来富集所述加尾的rna。13.权利要求11所述的方法，其中所述小rna包括微rna(mirna)分子、微小非编码rna(tncrna)分子、小调节性rna(smrna)分子、piwi
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相互作用rna(prna)分子和snorna分子。
14.权利要求1
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13中任一项所述的方法，其还包括对所述cdna文库或富集的加尾的rna进行测序。15.权利要求14所述的方法，其中所述方法包括在测序之前通过pcr扩增所述cdna文库。16.权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述方法还包括：向步骤(a)的rna片段群体或步骤(b)的加尾的rna的5’末端添加衔接子序列。

技术总结
本公开内容尤其提供了一种制备cDNA文库的方法。在一些实施方案中，所述方法可包括通过将RNA片段群体与polyA聚合酶温育，将polyA尾添加至样品中的较长RNA片段而不是较短RNA片段，其中使用的反应条件优选地仅对较长片段而非较短片段进行加尾。而非较短片段进行加尾。而非较短片段进行加尾。


技术研发人员：K
受保护的技术使用者：BIOO科技公司
技术研发日：2019.08.20
技术公布日：2021/11/4