一种基于转录调控序列重布的反向遗传操作方法及其应用与流程

技术特征：
1.一种基于转录调控序列重布而研发的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗重组弱毒苗的构建方法；所述方法为根据hun4
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f112感染性克隆全长测序以及转录调控前导序列（leader trs），下游转录调控序列(body trss)一级核心6碱基序列的鉴定，将hun4
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f112全基因组设计为分别包含leader trs ,body trss在内的六段基因组序列，根据基因组序列设计引物pcr扩增获得六段基因组片段并了分别连接中间载体，分别设计用于leader trs ,body trss核心6碱基序列c5c6定点突变的引物，获得全基因组转录调控序列整体突变的基因组片段，而后进行转录调控序列整体突变的全长感染性克隆的连接构建；最终获得转录调控序列整体突变全长质粒phutrsall。2.如权利要求1所述的一种基于转录调控序列重布能够抗重组的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法；所述的转录调控序列整体突变全长质粒phutrsall是能够成功拯救获得整体突变病毒va
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trsall。3.如权利要求1所述的一种基于转录调控序列重布能够抗重组的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法；所述转录调控序列整体突变全长质粒phutrsall的全长序列如下全长prrsv核苷酸序列所示。4.一种利用权利要求1
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3之一所述的一种基于转录调控序列重布能够抗重组的猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法获得的转录调控序列整体突变全长质粒phutrsall。5.一种权利要求4所述的转录调控序列核心6碱基c5c6整体突变的全长质粒的应用，所述应用为作为一种能够用于猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫保护的抗重组基因工程弱毒苗。

技术总结
本发明公开了一种基于转录调控序列重布的反向遗传操作方法及其应用，其中，所述方法为根据HuN4


技术研发人员：高飞 童光志 陈金霞 李丽薇 周艳君 童武 姜一峰 李国新
受保护的技术使用者：中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心）
技术研发日：2021.08.02
技术公布日：2021/11/2