一种快速检测卡及检测试剂盒的制作方法

1.本发明涉及免疫胶体金检测技术领域，尤其是一种快速检测卡及检测试剂盒。


背景技术：

2.世界上人类疾病和死亡的主要原因之一是急性呼吸道疾病。尤其是儿童，呼吸道感染是其最常见的感染性疾病，该疾病占儿科住院患儿的24.5
‑
65.2％。根据调查表明大部分的急性上下呼吸道疾病是由细菌外的病原引起的，最常见的就是呼吸道病毒。其中，检测较多的病原体病毒类的有，甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、副流感病毒等；其它微生物有肺炎支原体、肺炎衣原体、肺炎链球菌和百日咳杆菌等。由于呼吸道感染的病原体种类繁多，临床上病症相似不易区分，一种快速、方便准确有效的病原体快速检测技术是必不可少。
3.目前比较常用的pcr检测技术(即聚合酶链式反应技术)，是用于放大扩增dna、rna等遗传物质的化学反应。通过pcr增加只有靶标病原体的特定序列，再通过切割特异性探针或染料的信号来确认被检体中是否存在病毒。但其操作复杂，需要专业的实验人员与昂贵的扩增设备，耗时长。且一旦目的基因发生突变就会漏检，其扩增产物还会造成环境气溶胶污染。
4.随着技术的发展，免疫胶体金快检技术应运而生。胶体金作为带负电荷的标志物可与抗原抗体等蛋白质分子的正电荷基团结合，又不影响其生物活性。在层析作用下，检测线和质控线处抗体与胶体金连接的蛋白质分子形成免疫复合物，从而形成肉眼可见的条带。其操作简便，设备小巧，便于携带。且普通非专业人员可自行完成检测，没有扩增避免生物污染。
5.目前市面上有各种疾病的抗原或抗体检测卡，通过检测卡对样品的检测，即可检查出相应疾病作为临床辅助诊断。但是这些检测卡大部分只能针对单一疾病的抗原进行检测，例如呼吸道疾病病毒种类多，在检测多种病原体时，购买成本较高，操作繁琐。
6.专利申请号为201120260472.2的检测卡，可以同时检测多种疾病抗体，但是它是在同一个试纸条上进行检测，会相互干扰对结果的检测，影响检测结果的灵敏度和特异性。
7.专利申请号为201320128922.1的检测卡，多个检测窗口防止了交叉感染，但是其同样多的样品槽使得操作复杂，样品加样量多。同时市面上的抗原检测卡多为水平放置，样本只通过纸层析作用力进行扩散，流速还有一定的提升的空间。


技术实现要素：

8.本发明的目的是为了克服现有的技术的不足，提供一种快速检测卡及检测试剂盒，采用具有斜面的卡座，使得被固定在斜面上的试纸条中，样品垫的位置高于吸水垫的位置，从而利用重力加速样本流速，更快获取检测结果。
9.具体方案如下：
10.一种快速检测卡，包括手柄、卡盖、试纸条和卡座，所述手柄与所述卡座相连，所述
卡座与所述卡盖盖合，所述卡盖上设有加样孔和观察区，所述试纸条夹设在所述卡座与所述卡盖之间；所述试纸条包括样品垫、吸水垫、胶体金结合垫和硝酸纤维素膜，所述样品垫设置在靠近所述加样孔的一端，并且所述样品垫与所述加样孔连通，所述样品垫连接所述胶体金结合垫，所述胶体金结合垫连接所述硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜连接所述吸水垫；所述卡座设有至少一个斜面，使得所述样品垫的位置高于所述吸水垫的位置。
11.进一步的，所述观察区包括检测线t视窗和质控线c视窗，所述检测线t视窗和所述质控线c视窗位于所述硝酸纤维素膜上方。
12.进一步的，所述卡座与所述卡盖可拆卸地连接，所述卡座上设置定位凹槽，所述定位凹槽沿所述试纸条延伸方向设置，所述卡盖与所述卡座在盖合状态下，将所述试纸条夹在所述定位凹槽内。
13.进一步的，所述卡盖上设有1个加样孔和1
‑
n个观察区，n为大于1的正整数，所述卡座与所述卡盖之间夹设n个所述试纸条，n个所述试纸条分别与所述加样孔相连通，n个观察区与n个所述试纸条一一对应。
14.进一步的，3≤n≤10。
15.进一步的，所述斜面与水平面的夹角大于等于10度且小于等于60度。
16.进一步的，所述卡座呈直角三角形，所述卡盖设置在直角三角形的斜边上，所述手柄与直角三角形的直角边相连。
17.进一步的，所述卡座呈凸台形，包括位于中心的顶面，位于底部的基座，和连接在所述顶面和所述基座之间的斜面，所述斜面上设置至少一个所述试纸条；所述加样孔设置在所述顶面上，所述观察区设置在所述斜面上，所述手柄与所述基座相连。
18.进一步的，所述手柄表面设有二维码。
19.本发明还保护一种检测试剂盒，包含至少一个所述快速检测卡。
20.有益效果：
21.一、本技术中所述手柄方便使用者取用，避免手意外污染试纸条，影响检测。手柄上印有二维码，可以电子录入被检测者的信息，利于大数据统计，也避免被脏污，丢失，字迹辨识不清等情况。
22.二、本技术的检测卡和检测试剂盒，不仅可以用一份样本一次加样同时检测多种呼吸道病原体，还可以根据需要选择同时检测的病原体数量，操作简便，产品的适用性强，结构简单，满足自动化设备使用，提高生产效率，提高产品性能。
23.三、本技术的检测卡和检测试剂盒，通过卡座的倾斜不仅可以加快样本流速，还可以防止样品溢出倒流。
24.四、本技术的检测卡和检测试剂盒，可同时检测多种病原体，并且试纸条之间不会产生相互干扰，检测结果准确。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅涉及本发明的一些实施例，而非对本发明的限制。
26.图1是本发明一个实施例1提供的快速检测卡俯视图；
27.图2是本发明一个实施例1提供的快速检测卡侧视图；
28.图3是本发明一个实施例2提供的快速检测卡俯视图；
29.图4是本发明一个实施例3提供的快速检测卡俯视图；
30.图5是本发明一个实施例3提供的快速检测卡横切面示意图。
31.附图标记说明：1、手柄，2、观察区，3、质控线c，4、检测线t，5、加样孔，6、样品垫，7、硝酸纤维素膜，8、吸水垫，9、卡座，10、卡盖，11、定位凹槽，12、胶体金结合垫，13、试纸条。
具体实施方式
32.下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
33.现有技术的检测卡只有卡体，在取用过程中，手部十分容易接触到暴露的试纸条，或者手部的污迹会沾染检测卡，影响检测结果和判读。也有在卡体上提供手写标记区域的检测卡，但塑料材质不易手写，且笔迹易被脏污，不易辨识。且现有技术检测多种病原体的检测卡或试剂盒一种是设有多个加样孔需要多次加样，其操作不便，一种是在同一试纸条上同时检测多种病原体，其互相之间干扰严重。同时现有技术检测卡或试剂盒多呈水平放置，流速有限，仍需等待20分钟左右，等待时间较长。
34.实施例1
35.一种快速检测卡，参考图1和图2，包括手柄1、卡盖10、试纸条13和卡座9，手柄1上印有二维码。手柄1上印有二维码，可以电子录入被检测者的信息，利于大数据统计，避免脏污，丢失，字迹辨识不清等情况。
36.手柄1与卡座9相连，卡座9与卡盖10盖合，卡盖10上设有镂空的加样孔5和观察区2。
37.卡盖10上设有至少一个观察区2，观察区2包括检测线t视窗和质控线c视窗，能对应地看到检测线t4和质控线c3。试纸条13夹设在卡盖10和卡座9之间，并与加样孔5连通。
38.具体的，试纸条13由样品垫6、吸水垫8、胶体金结合垫12和硝酸纤维素膜7组成。其中，样品垫6设置在靠近加样孔5的一端，并且样品垫6与加样孔5连通，样品垫6连接胶体金结合垫12，胶体金结合垫12连接硝酸纤维素膜7，硝酸纤维素膜7连接吸水垫8。卡座9设有至少一个斜面，使得样品垫6的位置高于吸水垫8的位置，二者形成高度差，加快样本流速，更快获取检测结果。
39.具体的，卡座9与卡盖10相对设置且与卡盖10可拆卸链接；卡座9上设置有定位凹槽11，定位凹槽11是沿长度方向设置，即试纸条13延伸方向。定位凹槽11可方便固定试纸条13。
40.卡座9呈直角三角形，卡盖10设置在直角三角形的斜边上，手柄1与直角三角形的直角边相连。卡座9的斜边与水平面的夹角范围为0
‑
90度，优选为大于等于10度且小于等于60度。在具体的实施例中，斜边于水平面的夹角为30度。
41.实施例2
42.本实施例在实施例2的基础上进行改进，参考图3，一种快速检测卡，包括手柄1，手柄1上印有二维码，可以电子录入被检测者的信息，利于大数据统计，避免脏污，丢失，字迹
辨识不清等情况。
43.还包括卡盖，卡盖上有加样孔5，加样孔5为凹槽结构，可实现一次加样多重检测。卡盖上有4个观察区2，每个观察区2下的硝酸纤维素膜位置处设有检测线t4和质控线c3，对应检测不同的病原体。即每个观察区2对应的试纸条不同，并且试纸条彼此间隔一段距离，优选为以加样孔5为圆心呈放射状分布，从而避免互相干扰，影响结果判读。
44.优选的，卡座9上与4条试纸条对应地设置4个定位凹槽11，定位凹槽11是沿长度方向设置，即试纸条13延伸方向。
45.实施例3
46.本实施例在实施例2的基础上进行改进，参考图4和图5，本实施例提供一种可检测多种病原体的检测卡，可以同时检测新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、副流感病毒、肺炎支原体和百日咳杆菌多种病原体。
47.具体的，一种快速检测卡，包括手柄1，手柄1上印有二维码，可以电子录入被检测者的信息，利于大数据统计，避免脏污，丢失，字迹辨识不清等情况。
48.还包括卡盖10，卡盖10中心上有加样孔5，加样孔5为凹槽结构，可实现一次加样多重检测。卡盖10为圆形，卡盖10以加样孔5为中心对称地设置8个观察区2，观察区2沿圆的半径延伸。每个观察区2下的硝酸纤维素膜7位置处设有检测线t4和质控线c3。
49.卡盖10盖合在卡座9上，卡座9呈凸台形，包括位于中心的顶面，位于底部的基座，和连接在顶面和基座之间的斜面，斜面上对称地设置8个不同的试纸条。加样孔5设置在顶面上，观察区2设置在斜面上。手柄1与基座相连。
50.卡座9的斜面上设有定位凹槽11，可固定试纸条13，并避免互相干扰，影响结果判读。
51.由于斜面与水平夹角为30度，使样品垫6水平位置高于吸水垫8形成高度差，加快样本流速，更快获取检测结果。
52.实施例4
53.本实施例对快速检测卡的具体检测方法进行说明，使用步骤如下：
54.一、检测
55.(1)取样前先扫描二维码录入病人的身份信息。
56.(2)检测样本：鼻咽拭子、前鼻拭子、口咽拭子、痰液
57.(3)将带有样本的拭子放入提取管中。转动拭子3
‑
5次，把拭子留在提取处缓冲1分钟。
58.(4)倒转提取管，轻轻挤压提取管，将500μl的测试样品加到加样孔(5)(s)中。在5
‑
10分钟内读取结果。
59.二、结果解释：
60.阳性:如果在5
‑
10分钟内观察区(2)出现两个色带，其中一个色带在质控区(c)，另一个色带在试验区(t)，则试验结果为阳性且有效。无论测试区(t)中的色带有多暗，结果都应视为阳性。阳性结果不排除与其他病原体共感染。
61.阴性:如果质控区(c)出现一个色带，而在5
‑
10分钟内试验区(t)中没有出现色带，则试验结果为阴性有效。阴性结果不排除sars
‑
cov
‑
2病毒感染，应通过分子生物学证实疑似sars
‑
cov
‑
2病的诊断方法。
62.无效结果:如果质控区(c)在5
‑
10分钟内没有色带，则测试结果无效。表示操作不当或检测卡损坏。
63.分别进行以下实验，包括：
64.1.灵敏度实验
65.采用实施例3中的快速检测卡，对不同病原体按照比例进行稀释，每个浓度梯度检测20组，结果如下表。需要说明的是，试纸条采用针对相应检测目标的试纸，这部分内容为现有技术，在此不赘述。病原体采用公知的病原样本。从表1可以看出，本技术的快速检测卡对新型冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、副流感病毒和百日咳杆菌的最低检测限为100pg/ml，而肺炎支原体的检出限为10pg/ml。
66.表1 检出限统计表
[0067][0068]
2.特异性实验
[0069]
采用实施例3中的快速检测卡，用于普通微生物样品检测，需要注意的是，试纸条采用针对相应检测目标的试纸，这部分内容为现有技术，在此不赘述。检出限结果见表2，从表2可以看出，在所列浓度范围内，这些微生物样品的检测结果均为阴性，彼此之间无交叉感染，表明本检测卡特异性好。
[0070]
可见，采用本技术所述快速检测卡，检测时所需加样次数少，操作简便，耗时短，可在10min内获取检测结果。
[0071]
表2 普通微生物样品检出限
[0072]
微生物浓度微生物浓度人冠状病毒229e1
×
104copies/ml梅斯冠状病毒1
×
105copies/ml人冠状病毒oc431
×
104copies/ml疟原虫1
×
104copies/ml人冠状病毒nl631
×
104copies/ml肺炎链球菌1
×
104copies/ml肠病毒ev711
×
104copies/ml化脓性链球菌1
×
104copies/ml鼻病毒1
×
104copies/ml结核分枝杆菌1
×
104copies/ml金黄色葡萄球菌1
×
104copies/ml肺炎军团菌1
×
104copies/ml铜绿假单胞菌1
×
104copies/ml白色念珠菌1
×
104copies/ml
[0073]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0074]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛
盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
[0075]
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。