一种从刺玫果籽中同时提取原花青素和多糖的方法与流程

1.本发明涉及食用制剂技术领域，具体涉及一种从刺玫果籽中同时提取原花青素和多糖的方法。


背景技术：

2.刺玫果为蔷薇科山刺玫rosa davurica pall．的干燥成熟果实，秋季果实成熟时采收，主要产于东北、华北及内蒙古等地，刺玫果中含总黄酮，维生素、果胶、糖及皂苷等化学成份，其中，鲜果可食部分维生素c 含量在2720mg/100g以上，最高可达8300 mg/100g，是沙田柚的2.25倍、猕猴桃的2.6倍、山楂的27倍、普通樱桃的207倍，刺玫果被誉为“大地果实维生素c 之王”，常用于人类抗衰老制品的天然添加剂，可显著提高人体的抗衰老和抗氧化能力。药理实验表明，刺玫果水提物、醇提物均可降低麻醉大鼠血压和脑血管阻力，可使麻醉猫心率减慢，增加冠脉流量，降低冠脉阻力；还可降低小鼠耗氧量及延长缺氧小鼠存活时间，并能对抗异丙肾上腺素增加心肌耗氧量的作用；刺玫果水提物静脉注射，可抑制大鼠血栓形成，近年来国内的大量研究表明它有抗衰老、增强免疫、抗疲劳、保肝等作用。刺玫果籽作为刺玫加工副产物，富含大量的原花青素及刺玫果籽油，具有较高的开发价值。大量研究结果表明，原花青素有能力引导内表面依赖性血管舒张功能，增加胆固醇的逆向转运，降低总胆固醇和低密度脂蛋白。刺玫果籽原花青素分子具有显著抗氧化的能力，起到消除氧自由基效果，从而防止血脂在动脉壁内堆积沉降，促进血液循环；另一方面，刺玫果籽原花青素能够降低ldl
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c水平，阻碍ldl
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c将肝脏中胆固醇分子带入动脉壁细胞，进一步降低机体血液内胆固醇含量。因此，研究刺玫果籽原花青素的提取工艺，对于刺玫果籽原花青素类保健食品的开发具有重要意义。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于一种从刺玫果籽中同时提取原花青素和多糖的方法。
4.一种从刺玫果籽中同时提取原花青素和多糖的方法，其特征在于以刺玫果籽为原料，经过浸泡、提取、分离纯化、浓缩干燥等步骤同时制备原花青素含量大于70%的提取粉末和多糖含量大于40%的提取粉末。
5.一种从刺玫果籽中同时提取原花青素和多糖的方法，包括以下步骤：（1）浸泡：将新鲜的刺玫果的果肉与籽分离，果肉用于提取总黄酮等活性成分，将刺玫果籽按照固液比（g：ml）1:3加入沸程为60℃～90℃的石油醚，室温浸泡24小时，过滤，滤渣于60℃～65℃干燥12小时，得脱脂果籽。称取脱脂果籽适量置于具塞三角瓶中，按照固液比（g：ml）1:2.2加入蒸馏水、按照脱脂果籽质量的0.5%加入果胶酶，在室温和超声功率450w条件下超声处理20min，然后室温浸泡3h；（2）提取：将浸泡好的脱脂果籽，连同浸泡溶剂一起转移至玻璃柱中，加入少许蒸馏水，保持水没过刺玫果籽，按照固液比（脱脂果籽：蒸馏水=g：ml）1:2.2为一个收集单位（即1份），以0.8ml/min的流速进行收集，共收集2份，得到刺玫果籽多糖提取液，然后将洗脱
液更改为60%乙醇水溶液，按照固液比（脱脂果籽：60%乙醇水溶液=g：ml）1:2.4为一个收集单位（即1份），以0.8ml/min的流速进行收集，再收集2份60%乙醇水溶液，得到刺玫果籽原花青素提取液；（3）分离纯化：将刺玫果籽多糖提取液与刺玫果籽原花青素提取液合并，减压浓缩至每1ml相当于刺玫果脱脂果籽1g的流浸膏，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到60%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，离心液留存待用，沉淀加入适量蒸馏水溶解，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，将两次离心液合并，即为刺玫果籽原花青素分离液，沉淀即为刺玫果籽粗多糖；（4）浓缩干燥：将刺玫果籽原花青素分离液采用真空浓缩器于60℃浓缩，得到相对密度为1.10～1.15g/ml(60℃)的流浸膏，将流浸膏放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽原花青素提取粉末，经硫酸铁铵
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正丁醇
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盐酸法测定其原花青素的含量，其原花青素含量高达70%以上。将刺玫果籽粗多糖沉淀放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽粗多糖提取粉末，经苯酚
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硫酸显色法测定其多糖的含量，其多糖含量大于40%。
6.在本发明的一个优选实施例中，所述浸泡步骤中，原料为经过石油醚脱脂处理的刺玫果籽；浸泡时先按照固液比（g：ml）1:2.2加入蒸馏水和脱脂果籽质量的0.5%果胶酶，并在室温和超声功率450w条件下超声处理20min，然后室温浸泡3h；所述提取步骤中，使用一根玻璃柱先使用蒸馏水提取得到刺玫果籽多糖提取液，其收集体积为脱脂果籽质量的4.4倍，然后使用60%乙醇水溶液提取得到刺玫果籽原花青素提取液，其收集体积为脱脂果籽质量的4.8倍；所述分离纯化步骤中，使用醇沉的方式使刺玫果籽多糖与原花青素分离，醇沉次数为2次，第1次醇沉浓度为60%，第2次醇沉浓度为80%；所述浓缩干燥步骤中，刺玫果籽原花青素分离液采用真空浓缩器进行浓缩，浓缩温度为60℃，刺玫果籽粗多糖与刺玫果籽原花青素流浸膏的干燥方式为在微波
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真空干燥，干燥温度为60℃。
7.下面结合实例进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
8.实施例1：一种从刺玫果籽中同时提取原花青素和多糖的方法，包括以下步骤：（1）浸泡：将新鲜的刺玫果的果肉与籽分离，果肉用于提取总黄酮等活性成分，将刺玫果籽按照固液比（g：ml）1:3加入沸程为60℃～90℃的石油醚，室温浸泡24小时，过滤，滤渣于60℃～65℃干燥12小时，得脱脂果籽。称取脱脂果籽50g置于具塞三角瓶中，加入蒸馏水110ml、果胶酶0.25g，在室温和超声功率450w条件下超声处理20min，然后室温浸泡3h；（2）提取：将浸泡好的脱脂果籽，连同浸泡溶剂一起转移至玻璃柱中，加入蒸馏水50ml，以0.8ml/min的流速进行收集蒸馏水洗脱液220ml，得到刺玫果籽多糖提取液，然后将洗脱液更改为60%乙醇水溶液，以0.8ml/min的流速进行收集60%乙醇水溶液洗脱液240ml，得到刺玫果籽原花青素提取液；（3）分离纯化：将刺玫果籽多糖提取液与刺玫果籽原花青素提取液合并，减压浓缩至50ml，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到60%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，离心液留存待用，沉淀加入50ml蒸馏水溶解，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，将两次离心液合并，即为刺玫果籽原花青素分离液。沉淀即为刺玫果籽粗多糖；
（4）浓缩干燥：将刺玫果籽原花青素分离液采用真空浓缩器于60℃浓缩，得到相对密度为1.10～1.15g/ml(60℃)的流浸膏，将流浸膏放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽原花青素提取粉末，经硫酸铁铵
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正丁醇
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盐酸法测定其原花青素的含量，其原花青素含量为72.26%。将刺玫果籽粗多糖沉淀放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽粗多糖提取粉末，经苯酚
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硫酸显色法测定其多糖的含量，其多糖含量为41.50%。
9.通过单因素试验，以提取粉末中原花青素含量或多糖含量为指标，分别考察刺玫果籽多糖洗脱液收集体积和刺玫果籽原花青素洗脱液收集体积、洗脱流速、刺玫果籽原花青素分离液的浓缩温度、刺玫果籽原花青素流浸膏和刺玫果籽粗多糖的干燥温度对提取效果的影响。
10.刺玫果籽多糖和刺玫果籽原花青素洗脱液收集体积对提取效果的影响称取脱脂果籽5份，各50g，分别置于具塞三角瓶中，分别加入蒸馏水100ml、110ml、120ml、130ml、150ml和果胶酶0.5g，在室温和超声功率450w条件下超声处理25min，然后室温浸泡3h；将浸泡好的脱脂果籽，连同浸泡溶剂一起转移至5根玻璃柱中，分别加入蒸馏水50ml，以0.8ml/min的流速分别收集蒸馏水洗脱液200ml、220ml、240ml、260ml、300ml，得到刺玫果籽多糖提取液，然后将洗脱液更改为60%乙醇水溶液，以0.8ml/min的流速收集60%乙醇水溶液洗脱液240ml，得到刺玫果籽原花青素提取液；分别将刺玫果籽多糖提取液与刺玫果籽原花青素提取液合并，减压浓缩至50ml，各加入无水乙醇至乙醇体积分数达到60%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，离心液留存待用，沉淀加入50ml蒸馏水溶解，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，将两次离心液合并，即为刺玫果籽原花青素分离液，沉淀即为刺玫果籽粗多糖；将刺玫果籽原花青素分离液采用真空浓缩器于60℃浓缩，得到相对密度为1.10～1.15g/ml(60℃)的流浸膏，将流浸膏放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽原花青素提取粉末，经硫酸铁铵
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正丁醇
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盐酸法测定其原花青素的含量，其原花青素含量分别为70.89%、71.55%、72.41%、72.35%、70.12%。分别将刺玫果籽粗多糖沉淀放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽粗多糖提取粉末，经苯酚
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硫酸显色法测定其多糖的含量，其多糖含量分别为38.74%、42.16%、41.75%、40.02%、38.42%，根据多糖含量选择蒸馏水洗脱液的收集体积为220ml，即按照固液比（脱脂果籽：蒸馏水=g：ml）1:2.2为一个收集单位，共收集2份蒸馏水洗脱液，得到刺玫果籽多糖提取液；按照上述试验方法，将蒸馏水浸泡体积设定为120ml，待收集蒸馏水洗脱液220ml后，将洗脱液更改为60%乙醇水溶液，以0.8ml/min的流速分别收集60%乙醇水溶液洗脱液200ml、220ml、240ml、260ml、300ml，分别得到刺玫果籽原花青素提取液，后续处理与上述试验相同，分别测定刺玫果籽原花青素提取粉末中原花青素含量，其含量分别为68.81%、70.83%、73.65%、73.01%、69.15%，根据原花青素含量选择60%乙醇水溶液洗脱液的收集体积为240ml，即按照固液比（脱脂果籽：60%乙醇水溶液=g：ml）1:2.4为一个收集单位，共收集2份60%乙醇水溶液洗脱液，得到刺玫果籽原花青素提取液。
11.洗脱液收集流速对提取效果的影响称取脱脂果籽6份，各50g，分别置于具塞三角瓶中，分别加入蒸馏水110ml和果胶酶0.5g，在室温和超声功率450w条件下超声处理25min，
然后室温浸泡3h；将浸泡好的脱脂果籽，连同浸泡溶剂一起转移至6根玻璃柱中，分别加入蒸馏水50ml，分别以0.2ml/min、0.4ml/min、0.6ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min的流速分别收集蒸馏水洗脱液220ml，得到刺玫果籽多糖提取液，然后将洗脱液更改为60%乙醇水溶液，分别以0.2ml/min、0.4ml/min、0.6ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min的流速收集60%乙醇水溶液洗脱液240ml，得到刺玫果籽原花青素提取液；分别将刺玫果籽多糖提取液与刺玫果籽原花青素提取液合并，减压浓缩至50ml，各加入无水乙醇至乙醇体积分数达到60%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，离心液留存待用，沉淀加入50ml蒸馏水溶解，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，将两次离心液合并，即为刺玫果籽原花青素分离液，沉淀即为刺玫果籽粗多糖；将刺玫果籽原花青素分离液采用真空浓缩器于60℃浓缩，得到相对密度为1.10～1.15g/ml(60℃)的流浸膏，将流浸膏放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽原花青素提取粉末，经硫酸铁铵
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正丁醇
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盐酸法测定其原花青素的含量，其原花青素含量分别为73.91%、73.65%、73.22%、72.89%、69.12%、67.32%。分别将刺玫果籽粗多糖沉淀放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽粗多糖提取粉末，经苯酚
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硫酸显色法测定其多糖的含量，其多糖含量分别为43.57%、42.38%、41.81%、41.22%、38.27%、36.62%，试验结果表明当洗脱液的收集流速在0.2～0.8ml/min之间时，刺玫果籽原花青素提取粉末中原花青素的含量可以达到72%以上，刺玫果籽粗多糖提取粉末中多糖的含量可以达到41%以上，而且变化较小，所以洗脱液的收集流速不大于0.8ml/min即可。
12.刺玫果籽原花青素分离液的浓缩温度对提取效果的影响 称取脱脂果籽150g，置于密闭容器中，加入蒸馏水330ml和果胶酶1.5g，在室温和超声功率450w条件下超声处理25min，然后室温浸泡3h；将浸泡好的脱脂果籽，连同浸泡溶剂一起转移至玻璃柱中，加入蒸馏水150ml，以0.8ml/min的流速收集蒸馏水洗脱液660ml，得到刺玫果籽多糖提取液，然后将洗脱液更改为60%乙醇水溶液，分别以0.8ml/min的流速收集60%乙醇水溶液洗脱液720ml，得到刺玫果籽原花青素提取液；将刺玫果籽多糖提取液与刺玫果籽原花青素提取液合并，减压浓缩至150ml，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到60%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，离心液留存待用，沉淀加入150ml蒸馏水溶解，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，将两次离心液合并，即为刺玫果籽原花青素分离液，沉淀即为刺玫果籽粗多糖；将刺玫果籽原花青素分离液分为5等份，采用真空浓缩器分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃浓缩，得到相对密度为1.10～1.15g/ml的流浸膏，将流浸膏放置在微波
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真空干燥箱中于60℃烘干，得到刺玫果籽原花青素提取粉末，经硫酸铁铵
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正丁醇
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盐酸法测定其原花青素的含量，其原花青素含量分别为74.12%、73.88%、73.72%、68.19%、66.12%。试验结果表明当刺玫果籽原花青素分离液的浓缩温度在40～60℃之间时，刺玫果籽原花青素提取粉末中原花青素的含量可以达到72%以上，而且变化较小，所以刺玫果籽原花青素分离液的浓缩温度不高于60℃即可。
13.刺玫果籽原花青素流浸膏和刺玫果籽粗多糖的干燥温度对提取效果的影响 称取脱脂果籽150g，置于密闭容器中，加入蒸馏水330ml和果胶酶1.5g，在室温和超声功率450w条件下超声处理25min，然后室温浸泡3h；将浸泡好的脱脂果籽，连同浸泡溶剂一起转移至玻璃柱中，加入蒸馏水150ml，以0.8ml/min的流速收集蒸馏水洗脱液660ml，得到刺玫果籽多糖提取液，然后将洗脱液更改为60%乙醇水溶液，分别以0.8ml/min的流速收集60%乙醇水溶液洗脱液720ml，得到刺玫果籽原花青素提取液；将刺玫果籽多糖提取液与刺玫果籽原花青素提取液合并，减压浓缩至150ml，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到60%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，离心液留存待用，沉淀加入150ml蒸馏水溶解，加入无水乙醇至乙醇体积分数达到80%，充分摇匀，冰箱4℃静置12h，6000r/min低温离心10min，将两次离心液合并，即为刺玫果籽原花青素分离液，沉淀即为刺玫果籽粗多糖；将刺玫果籽原花青素分离液分为6等份，采用真空浓缩器于60℃浓缩，得到相对密度为1.10～1.15g/ml(60℃)的流浸膏，将流浸膏放置在微波
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真空干燥箱中分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、100℃烘干，得到刺玫果籽原花青素提取粉末，经硫酸铁铵
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正丁醇
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盐酸法测定其原花青素的含量，其原花青素含量分别为73.72%、72.91%、72.36%、68.03%、65.87%、62.08%。将刺玫果籽粗多糖分为6等份，将刺玫果籽粗多糖沉淀放置在微波
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真空干燥箱中分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、100℃烘干，得到刺玫果籽粗多糖提取粉末，经苯酚
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硫酸显色法测定其多糖的含量，其多糖含量分别为43.18%、42.48%、42.01%、38.06%、35.92%、33.16%，试验结果表明当刺玫果籽原花青素分离液的浓缩温度在40～60℃之间时，刺玫果籽原花青素提取粉末中原花青素的含量可以达到72%以上，刺玫果籽粗多糖提取粉末中多糖的含量可以达到42%以上，而且变化较小，所以刺玫果籽原花青素流浸膏和刺玫果籽粗多糖的干燥温度不高于60℃即可。