一株羊肚菌M6288及其鉴定方法和其应用与流程

本发明涉及生物领域，具体涉及一株羊肚菌m6288及其鉴定方法和其应用。

背景技术：

1、羊肚菌（morchella）作为一类珍稀食药用菌，因其风味独特、营养丰富，市场需求日益增长，已成为高附加值特色农业与功能性食品开发的热点之一。近年来，羊肚菌人工驯化和品种选育等工作取得显著进展，多个栽培品种逐步实现规模化应用，目前市面上人工种植商业化的羊肚菌90%是六妹羊肚菌。然而，现有羊肚菌菌株在栽培过程中仍存在生育期长、产量不稳定、出菇整齐度差、病害易发（出菇阶段白霉病的易感性）等问题，制约了规模化生产的发展。因此需筛选稳定性好、抗病性好、商品性优良且活性成分较高的羊肚菌。同时鉴于羊肚菌菌种在外观上难以区分，市场上充斥着大量假冒新品种的销售行为，急需快速精确的品种鉴别方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一株羊肚菌菌株m6288（morchella eximia），保藏号为gdmcc no:66623。

2、本发明的另一目的在于提供本发明的羊肚菌菌株在羊肚菌栽培和育种中的应用。

3、本发明的另一目的在于提供特异性引物组合，为引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4的任一种或其组合。

4、所述引物组合1，包括核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物f和核苷酸序列如seq id no.2所示的下游引物r。

5、所述引物组合2，包括核苷酸序列如seq id no.3所示的上游引物f和核苷酸序列如seq id no.4所示的下游引物r。

6、所述引物组合3，包括核苷酸序列如seq id no.5所示的上游引物f和核苷酸序列如seq id no.6所示的下游引物r。

7、所述引物组合4，包括核苷酸序列如seq id no.7所示的上游引物f和核苷酸序列如seq id no.8所示的下游引物r。

8、本发明的另一目的在于提供本发明的特异性引物组合在羊肚菌栽培和育种中的应用。

9、本发明的另一目的在于提供一种羊肚菌菌株m6288的鉴定方法，所述羊肚菌菌株m6288（morchella eximia），保藏号为gdmcc no:66623，具体包括如下步骤：

10、（1）以待测菌丝体的dna作为pcr模板，以引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4的任一种或其组合进行pcr反应，

11、（2）检测扩增产物是否出现条带，根据条带数量来鉴定是否羊肚菌m6288；

12、引物组合1，包括核苷酸序列如seq id no.1所示的上游引物f和核苷酸序列如seqid no.2所示的下游引物r，

13、引物组合2，包括核苷酸序列如seq id no.3所示的上游引物f和核苷酸序列如seqid no.4所示的下游引物r，

14、引物组合3，包括核苷酸序列如seq id no.5所示的上游引物f和核苷酸序列如seqid no.6所示的下游引物r，

15、引物组合4，包括核苷酸序列如seq id no.7所示的上游引物f和核苷酸序列如seqid no.8所示的下游引物r。

16、本发明优选的技术方案中，所述步骤(1)中pcr扩增中，每20.0μl扩增反应体系包括：pcr扩增酶预混液10μl，无菌蒸馏水8μl，上下游引物各0.5μl，dna模板1μl。

17、本发明优选的技术方案中，所述步骤(1)中pcr 扩增程序：94℃预变性5分钟；94℃变性40秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，30个循环；72℃终延伸5分钟。

18、本发明优选的技术方案中，所述步骤(2)中检测扩增产物的方法为琼脂糖凝胶电泳法。

19、本发明优选的技术方案中，当以引物组合1进行pcr反应时，m6288无法扩出条带，其余菌株均有2条条带。

20、本发明优选的技术方案中，当以引物组合2进行pcr反应时，m6288仅有1条目的条带，其余菌株均有2条条带。

21、本发明优选的技术方案中，当以引物组合3进行pcr反应时，m6288的条带略大于其他菌株。

22、本发明优选的技术方案中，当以引物组合4进行pcr反应时，m6288无目的条带，其余菌株有1条条带。

23、除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。

24、本发明采用如下检测方法检测：

25、1、氨基酸：gb 5009.124-2016；蛋白质：gb 5009.5-2016第一法；脂肪：gb 5009.6-2016第一法；总糖含量测定：gb/t 15672-2009；膳食纤维含量测定：gb/t 22224-2008。

26、2、折干率指的是‌，鲜菇经过烘干后的干菇重量占鲜菇重量的百分比‌，计算公式为：‌折干率=干菇重量÷鲜菇重量× 100%‌‌。

27、与现有技术相比，本发明有益的技术效果包括：

28、1、本发明利用野生羊肚菌种质资源，通过多孢自交和人工栽培筛选，成功获得羊肚菌菌株m6288，优势如下：一是羊肚菌菌株子实体菇形好，菌盖占比高，采收后无需切菌柄，免切柄节省损耗10%以上，整体口感更优，且折干率高，可提升子实体营养物质如氨基酸的占比，在干制/鲜食双通道具有明显的品质优势；二是稳定性好，平原、高原均可稳定出菇，具备宽幅温差适应性、低温与高温波动的双重耐受性，产量和性状均稳定，可用于羊肚菌栽培和育种；三是抗病性强，出菇期间无白霉病症状；四是总生育周期短，栽培出菇时间相对一致，子实体整齐度高，采收时间集中，可实现短周期同步出菇，并实现集约化采收，从而降低成本。

29、2、本发明设计特异性引物组合1-4并通过pcr鉴定菌株m6288的方法，4组引物组合可以单独使用，也可组合使用，为菌株的身份鉴定提供分子层面的技术工具。该鉴定方法特异性强，操作简单，无需使用出菇后的子实体，仅使用菌丝体即可鉴定；鉴定时间仅需2-3小时（相比传统菌丝拮抗试验1-2周大幅缩短），提高育种效率的同时大幅节约成本。

30、生物材料保藏

31、本发明所述的菌株命名为m6288（morchella eximia），已于2025年7月2日提交保藏，保藏号：gdmcc no: 66623，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，保藏地址为广东省先烈中路100号大院59号楼5楼。

1.一株羊肚菌菌株m6288（morchella eximia），保藏号为gdmcc no:66623。

2.特异性引物组合，为引物组合1、引物组合2、引物组合3、引物组合4的任一种或其组合，

3.如权利要求1所述的羊肚菌菌株m6288和/或如权利要求2所述的特异性引物组合在羊肚菌栽培和育种中的应用。

4.一种羊肚菌菌株m6288的鉴定方法，所述羊肚菌菌株m6288（morchella eximia），保藏号为gdmcc no:66623，具体包括如下步骤：

5.如权利要求4所述的方法，所述步骤(1)中pcr扩增中，每20.0μl扩增反应体系包括：pcr扩增酶预混液10μl，无菌蒸馏水8μl，上下游引物各0.5μl，dna模板1μl，优选的，所述步骤(1)中pcr 扩增程序：94℃预变性5分钟；94℃变性40秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，30个循环；72℃终延伸5分钟。

6.如权利要求4-5任一项所述的方法，所述步骤(2)中检测扩增产物的方法为琼脂糖凝胶电泳法。

7.如权利要求4-6任一项所述的方法，当以引物组合1进行pcr反应时，m6288无法扩出条带，其余菌株均有2条条带。

8.如权利要求4-7任一项所述的方法，当以引物组合2进行pcr反应时，m6288仅有1条目的条带，其余菌株均有2条条带。

9.如权利要求4-8任一项所述的方法，当以引物组合3进行pcr反应时，m6288的条带略大于其他菌株。

10.如权利要求4-9任一项所述的方法，当以引物组合4进行pcr反应时，m6288无目的条带，其余菌株有1条条带。