环二肽类化合物及其制备方法和神经保护药物制药用途

本发明涉及生物医药，具体涉及环二肽类化合物及其制备方法和神经保护药物制药用途。

背景技术：

1、神经退行性疾病是一类严重危害人类健康的神经系统病变，其中阿尔茨海默病、帕金森病和缺血性脑卒中最为常见。该类疾病能够导致患者认知衰退、运动功能障碍等症状，给生活质量和社会医疗体系带来沉重负担。当前，该类疾病呈现年轻化趋势，并伴有多种并发症及地域医疗资源不均等问题，使得防治工作愈发棘手。

2、目前，一线及二线神经保护药物多为辅助治疗制剂，仅能缓解症状而无法阻断神经病变进展，且存在治疗周期长、不良反应明显等缺陷。近年来，环色氨酸二肽类化合物因具备良好的血脑屏障穿透能力、可调节小胶质细胞活性及抑制神经炎症等核心优势，成为神经保护药物研发的热点。

3、然而，天然环色氨酸二肽类化合物存在生物利用度低、体内代谢速度快、靶向性不足等固有缺陷，限制了其临床转化。现有研究尝试通过甲基化修饰进行后修饰改造，以改善化合物的脂溶性、代谢稳定性及神经保护效能，但化学合成方法存在步骤繁琐、反应条件苛刻、副产物多、生产成本高、环境污染严重等问题，且难以规模化生产，无法满足临床应用需求。

技术实现思路

1、基于此，本发明提供环二肽类化合物及其制备方法和神经保护药物制药用途，至少解决现有技术中的一个问题。

2、第一方面，本发明提供一种环二肽类化合物或其药学上可接受的盐，其中，环二肽类化合物具有式i或式ii所示的结构：

3、式i；

4、式ii。

5、式i或式ii所示的环二肽类化合物或其药学上可接受的盐具有神经保护活性，因此，式i或式ii所示的环二肽类化合物或其药学上可接受的盐可以用于制备神经保护药物，用于预防或治疗神经退行性疾病或神经损伤。

6、第二方面，本发明提供所述环二肽类化合物的制备方法，其包括以下步骤：

7、构建细胞工厂e21w-trmpts-ms；

8、制备细胞工厂e21w-trmpts-ms的发酵培养物；

9、从细胞工厂e21w-trmpts-ms的发酵培养物中分离出所述环二肽类化合物。

10、在一些可选的实施例中，所述构建细胞工厂e21w-trmpts-ms的步骤包括：

11、使用限制性核酸内切酶

ndeⅰ和

kpnⅰ对质粒prsfduet-1进行双酶切，并将双酶切后的prsfduet-1质粒载体与

stspm1基因片段连接，得到重组质粒prsfduet-

stspm1；

12、使用限制性核酸内切酶

bamhⅰ和

ecorⅰ对重组质粒prsfduet-

stspm1进行双酶切，并将双酶切后的prsfduet-

stspm1质粒载体与

ncda基因片段连接，得到prsfduet-

ncda-

stspm1质粒；

13、将prsfduet-

ncda-

stspm1质粒转化到e21w-trmpts基因工程菌的感受态细胞中，培养出单菌落，利用引物duet-stspm1-fr与duet-stspm1-re对单菌落进行菌落pcr，获取阳性克隆子，即得到细胞工厂e21w-trmpts-ms；

14、其中，引物duet-stspm1-fr的序列如seq id no. 13所示，引物duet-stspm1-re的序列如seq id no. 14所示。

15、在一些可选的实施例中，所述e21w-trmpts基因工程菌的制备方法包括以下步骤：

16、以puc57-

stspm1为模版，m1-93-stspm1-fr1、m1-93-stspm1-fr2、m1-93-stspm1-fr3为正向引物，m1-93-stspm1-re为反向引物，进行pcr扩增，得到m1-93-

stspm1基因片段；

17、以

e. coli bl21(de3)基因组为模版，利用pcr扩增获得上游同源臂phea

tyra-uha和下游同源臂pheat

yra-dha，并与m1-93-

stspm1基因片段融合，得到

phea

tyra-uha-m1-93-

stspm1-dha；

18、使用限制性内切酶

hindⅲ对质粒pecgrna进行单酶切，获取pecgrna(hindⅲ)，并将

phea

tyra-uha-m1-93-

stspm1-dha与pecgrna(hindⅲ)重组，得到pecgrna-

phea

tyra::m1-93-

stspm1基因编辑质粒；

19、将pecgrna-

phea

tyra::m1-93-

stspm1基因编辑质粒转化到感受态细胞中，在含有kan抗体和spec抗体的培养基上培养出单菌落，利用引物pecgrna-id-fr与pecgrna-id-re对单菌落进行菌落pcr，获取阳性克隆子，即得到e21w-trmpts基因工程菌；

20、其中，m1-93-stspm1-fr1的序列如seq id no. 1所示，m1-93-stspm1-fr2的序列如seq id no. 2所示，m1-93-stspm1-fr3的序列如seq id no. 3所示，m1-93-stspm1-re的序列如seq id no. 4所示；引物pecgrna-id-fr的序列如aacttgaaaaagtggcaccg所示，引物pecgrna-id-re的序列如seq id no. 10所示。

21、第三方面，本发明提供所述式i或式ii所示的环二肽类化合物或其药学上可接受的盐在制备神经保护药物中的应用。

22、在一些可选的实施例中，所述神经保护药物为保护海马神经元细胞的药物。

23、第四方面，本发明提供一种神经保护药物，其包括所述式i或式ii所示的环二肽类化合物或其药学上可接受的盐。

24、在一些可选的实施例中，所述神经保护药物还包括药学上可接受的辅料。

25、在一些可选的实施例中，所述药学上可接受的辅料为水。

26、由于采用了以上技术方案，本发明的实施例至少具有以下有益效果：构建了细胞工厂e21w-trmpts-ms，细胞工厂e21w-trmpts-ms能够高效稳定地生产两种具有神经保护活性的环二肽类化合物（式i或式ii所示）；式i或式ii所示的环二肽类化合物对海马神经元细胞具有显著的保护作用，将其制备成神经保护药物，可以用于神经退行性疾病的治疗。