氟节胺快速检测荧光探针及其应用的制作方法

本技术涉及烟草检测，特别是一种氟节胺快速检测荧光探针及其应用。

背景技术：

1、配位聚合物（cps）是一类具有无限延伸网络结构的配合物，由有机配体与金属离子或金属团簇之间的配位键自组装而成。近年来，由于配体的可设计性、金属离子的多样性、丰富的拓扑结构、优异的物理化学性质，配位聚合物的研究受到广泛关注。

2、由于碘化亚铜（cui） 簇的结构多样性、发光特性和配位模式的多样性，与有机配体配位后可得到大量结构各异的碘化铜配合物。拓扑结构不同的碘化铜配合物的cps表现出多种特性，如刺激响应性、导电性、催化性和磁性。此外，由于金属铜在自然界中储量丰富、价格低廉，cui 配位聚合物从经济和环境的角度来看具有巨大的应用前景。

3、例如cn 202311336043.2中公开了一种用于荧光检测烟草中甲基硫菌灵的cui-p-dpa及其应用，cui-p-dpa的分子式为2,7-二(吡啶-4-)吖啶碘化亚铜，该α-cui-p-dpa对甲基硫菌灵有特异性反应α-cui-p-dpa具有选择性好、灵敏度高、响应时间短、抗干扰能力强等优点，可用于检测烟草样品农残的甲基硫菌灵。但该文献并未公开cui-p-dpa是否可用于氟节胺的检测。

4、aie性质是指荧光团从单体向聚集态转变时，荧光发射显著增加的现象。aie 现象主要是由于分子内运动（rim）受限引起的。因而具有aie性质的物质可运用于分析检测、生物成像、发光二极管等众多领域。现有报道的配位聚合物多不具有聚集诱导发射(aie)性质。

5、现有配位聚合物（cps）存在热稳定性、化学稳定性差的问题，配位聚合物热稳定性、化学稳定性差影响了此类物质在各个领域例如农残检测领域的广泛运用。

6、氟节胺（flumetralin）用于抑制烟草侧芽的二硝基苯胺类植物生长调节剂，氟节胺需在烟草人工打顶24小时内施药一次，即可保证整个生长季节内都不用抹芽。其作用迅速、用量少、吸收快，适用于雨季中施药等特点使其广泛运用于烟草种植行业。现有针对氟节胺的残留标准主要为国际烟草科学研究合作中心（coresta）规定的烟草中氟节胺指导性残留限量，为5 mg/kg。

7、现有针对氟节胺的检测方法主要是色谱法和半抗原法，色谱法存在检测设备昂贵，样品前处理复杂，操作需依赖专业技术人员等缺点，同时由于氟节胺电负性较强，在ms/ms检测时响应较弱，方法检出限往往高于一些组织和国家规定的最大残留限量。

8、半抗原法如cn201811104510.8中公开了一种检测氟节胺的试纸条及其制备方法和应用，该试纸条对烟草中氟节胺的检测限为5mg/kg，但所处理样本为烟草固体样本，该方法对水相样本中的氟节胺检测准确率不明确。cn201810246955.3中公开了一种检测水体中氟节胺的方法，该方法采用fe3o4@edta材料进行孵化后检测，处理效率较低，无法满足大批量样品单的快速检测需要。

9、公开于背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域普通技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

1、本技术针对上述技术问题提供了一种氟节胺快速检测荧光探针及其应用，该探针能通过荧光衰减实现对样本中氟节胺的快速准确检测。

2、本技术提供了一种氟节胺快速检测荧光探针，为α-cui-m-iah或β-cui-m-iah；β-cui-m-iah的化学式为c6h7cuin3o，β-cui-m-iah至少包括一个如下所示的结构式：

3、。

4、α-cui-m-iah或β-cui-m-iah与0.1 mm氟节胺结合后，均发生荧光强度下降现象，均可作为荧光探针用于氟节胺的检测。由于未获得α-cui-m-iah的晶体物质无法测定其化学式和结构式，以下以各项性质表征该物质。

5、优选的，α-cui-m-iah从40 ℃加热到120 ℃的pxrd测量衍射峰不改变；α-cui-m-iah氮气气氛下的热重分析曲线的热稳定温度为250 ℃；α-cui-m-iah在dmso和dmf中浸泡24小时后，pxrd谱图无明显变化；α-cui-m-iah在0.1 m hcl和0.1 m naoh以及ph 3.0~12.0的0.01 m tris-hcl缓冲溶液中结晶度没有明显变化；α-cui-m-iah在366 nm激发时表现出明显的黄色发光，最大发射波长513nm；α-cui-m-iah在dmso中表现出猝灭发光；α-cui-m-iah具有aie性质；α-cui-m-iah在dmso/etoh 混合溶剂fe=20%、40%、60%、90%中的形貌，由无定形絮状逐渐转变为块状，在fe为100%时获得了最高的荧光强度；α-cui-m-iah的光谱数据为：em大于470nm；φf大于0.75%；kr/107大于0.015s-1；具有以上性质的物质为α-cui-m-iah。fe为etoh在混合溶剂中的体积比。

6、优选地，荧光探针为α-cui-m-iah时，样本中氟节胺的检测线性范围宽为1.0 μm~600 μm。

7、优选地，荧光探针为α-cui-m-iah时，检出限为0.49 μm，即0.206 mg/kg，响应时间为10 min。

8、优选地，荧光探针为α-cui-m-iah。该探针稳定性更优，且荧光反应更明显，易于观察，更加适用于荧光检测。α-cui-m-iah与0.1 mm氟节胺结合后荧光强度下降了70.7%，β-cui-m-iah仅降10.9%。

9、本技术的另一方面还提供了上述氟节胺快速检测荧光探针的制备方法，包括以下步骤：将cui和m-iah在室温下研磨，研磨过程中滴加乙腈，得到荧光探针。具体研磨5~10分钟即可完成制备。

10、优选地，cui：m-iah物质的量之比为1:5~5:1；优选地，当cui：m-iah物质的量之比为1:1~5:1时，所得产物为α-cui-m-iah；优选地，当cui：m-iah物质的量之比为1:5~1:2时，所得产物为β-cui-m-iah。

11、本技术的另一方面还提供了上述氟节胺快速检测荧光探针的制备方法，包括以下步骤：m-iah溶液与cui溶液混合搅拌反应至出现白色沉淀物，经后处理得到荧光探针。

12、优选地，cui：m-iah物质的量之比为1:5~5:1；优选地，当cui：m-iah物质的量之比为1:1~5:1时，所得产物为α-cui-m-iah；优选地，当cui：m-iah物质的量之比为1:5~1:2时，所得产物为β-cui-m-iah。

13、优选地，后处理为离心分离沉淀物，用有机溶剂多次清洗沉淀，干燥。具体地，洗涤所用有机溶剂为乙醇、乙腈，采用乙醇、乙腈分别清洗产物。具体地，干燥条件为40 ℃真空下干燥16小时。具体地，反应时间为4h，搅拌转速为680 rpm。

14、优选地，m-iah溶液所用溶剂为乙醇；cui溶液所用溶剂为乙腈；

15、优选地，反应温度为 20~40℃；更优选为25 ℃；优选地，反应体系中至少含有乙腈；

16、本技术的另一方面还提供了氟节胺的荧光探针检测方法，包括以下步骤：将样本与上述荧光探针溶液混合后得到混合溶液，静置至少10分钟后，用339 nm为激发波长，在380~690 nm范围内记录和收集荧光光谱观察混合溶液的荧光强度是否下降，如果明显下降则样本中含有氟节胺；如果无明显下降则样本中不含氟节胺。

17、优选地，混合溶液的ph为 7.0；荧光探针溶于浓度大于等于1 mm 的tris-hcl缓冲溶液中得到荧光探针溶液；荧光探针溶液中荧光探针的浓度大于等于0.5 mg/ml。

18、优选地，样本前处理包括：样本破碎为粉末后，加入4 mol/l盐酸溶液中，搅拌条件下升温至120 ℃冷却至室温后离心，取上清液稀释后与荧光探针溶液混合进行检测。

19、优选地，样本为烟草；

20、该探针可用于样本水样的检测，且检测结果与hplc检测结果响应显示出 87.44%~ 101.87% 的良好回收率。

21、本技术的另一方面还提供了上述荧光探针的重复使用方法，包括以下步骤：在室温下，离心检测样本后的荧光探针溶液得到沉淀，用二氯甲烷洗涤沉淀重复至少13次后，干燥得到荧光探针。

22、该荧光探针经过洗脱氟节胺后，检测性能无显著下降，该探针可多次重复使用，降低检测成本。

23、本技术能产生的有益效果包括：

24、1）本技术所提供的氟节胺快速检测荧光探针，该探针为一种新性能的配位聚合物，该配位聚合物有较好的热稳定性、化学稳定性，同时具有 aie性质；该配位聚合物可应用于氟节胺的检测。所得探针能在含氟节胺的样本中发生荧光衰减，从而便于直观高效的检测样本中的氟节胺。

25、2）本技术所提供的氟节胺快速检测荧光探针，该探针的氟节胺检测浓度为1 μm~600 μm，检出限低（0.49 μm，即0.206 mg/kg），响应时间短仅需10 min。探针对烟草中氟节胺的响应显示出87.44% ~ 101.87% 的良好回收率。