一种胶原蛋白活性肽GPAEF及其在调控Pla2g4a基因表达与胃粘膜保护中的应用

本发明涉及活性肽、功能核酸与胃黏膜保护，具体涉及一种具有pla2g4a基因启动子区g-四链体靶向调节能力的五肽gpaef，以及该五肽在调节pla2g4a相关通路和制备胃黏膜保护产品中的应用。

背景技术：

1、胃黏膜损伤是胃炎、胃溃疡等疾病的共同病理基础。前列腺素能够促进胃黏膜血流、刺激黏液和碳酸氢盐分泌并维持屏障完整性。pla2g4a基因编码胞浆型磷脂酶a2（cpla2），参与膜磷脂中花生四烯酸的释放，是前列腺素合成相关通路的重要调节节点。因此，获得能够针对pla2g4a调控元件发挥作用的明确活性成分，对于开发胃黏膜保护产品具有应用价值。

2、g-四链体（g-quadruplex，g4）是富含鸟嘌呤的核酸序列形成的高级结构，可存在于基因启动子区并参与转录调控。现有g4配体多集中于小分子化合物，针对胃黏膜保护相关基因启动子g4的短肽配体及其用途仍然有限。

3、重组iii型人源化胶原蛋白（rc）在乙醇诱导胃黏膜损伤模型中表现出保护作用。发明人进一步从其体外模拟胃消化产物中鉴定出五肽gpaef，并发现该五肽能够与pla2g4a启动子区g4相互作用。因此，有必要将gpaef作为序列明确的活性肽及其特定靶向功能和用途进行保护。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种具有pla2g4a基因启动子区g-四链体靶向调节能力的五肽gpaef，以及该五肽在调节pla2g4a相关胃黏膜保护通路和制备胃黏膜保护产品中的应用。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、1. 本发明提供一种分离或人工合成的五肽gpaef，其氨基酸序列为gly-pro-ala-glu-phe。

4、2. 本发明提供gpaef作为pla2g4a基因启动子区g-四链体靶向调节剂的应用。所述g4形成序列为gggatgaggggcagggggaggg。gpaef能够与所述g4结合并调节其构象稳定性。

5、3. 本发明提供gpaef在制备用于调节pla2g4a基因表达或pla2g4a-cpla2-前列腺素相关通路的产品中的应用。

6、4. 本发明提供gpaef在制备用于辅助预防或改善胃黏膜损伤产品中的应用，优选用于乙醇诱导的胃黏膜损伤。

7、5. 本发明提供一种包含gpaef以及药学上或食品学上可接受辅料的组合物。所述组合物可制成口服制剂、功能性食品、特殊膳食食品、保健食品或药物组合物。

8、有益效果

9、1）本发明提供了序列明确的五肽gpaef，保护对象为可制备、可鉴定且可质量控制的具体活性物质，而非仅为rc胃黏膜保护机制的解释。

10、2）本发明发现gpaef能够靶向调节pla2g4a基因启动子区g-四链体。圆二色谱、tht竞争结合、表观结合亲和力测定及g4破坏突变对照相互印证，其中gpaef对pla2g4a-g4的表观结合亲和力约为tht的13.18倍。

11、3）rc胃黏膜保护、pla2g4a转录上调、cpla2蛋白丰度及磷酸化相关活化恢复、cpla2酶活恢复和下游前列腺素相关代谢物回升等结果，为gpaef作为pla2g4a相关胃黏膜保护通路调节成分提供了连续的证据基础。

12、4）gpaef可由rc体外模拟胃消化产生，并在所筛选的代表性高丰度五肽中表现出突出的pla2g4a-g4构象调节能力，为其作为候选胃黏膜保护活性肽提供了物质来源与功能筛选依据。

13、5）gpaef仅由五个氨基酸组成，结构简单，便于人工合成、纯化、鉴定、质量控制和制剂开发，具有作为g4靶向分子工具及胃黏膜保护候选活性成分的应用潜力。

1. 一种分离或人工合成的五肽gpaef，其特征在于，所述五肽的氨基酸序列为gly-pro-ala-glu-phe，如seq id no: 1所示。

2.一种pla2g4a基因启动子区g-四链体靶向调节剂，其特征在于，所述靶向调节剂的活性成分为权利要求1所述的五肽gpaef。

3. 根据权利要求2所述的靶向调节剂，其特征在于，所述g-四链体由seq id no: 2所示核苷酸序列形成，所述靶向调节包括与所述g-四链体结合并调节其构象稳定性。

4.权利要求1所述的五肽gpaef在制备用于调节pla2g4a基因表达或pla2g4a-cpla2-前列腺素相关通路的产品中的应用。

5.权利要求1所述的五肽gpaef在制备用于辅助预防和/或改善胃黏膜损伤的产品中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述胃黏膜损伤为乙醇诱导的胃黏膜损伤。

7.一种靶向调节pla2g4a基因启动子区g-四链体的组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的五肽gpaef以及药学上或食品学上可接受的辅料。

8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物为口服制剂、功能性食品、特殊膳食食品、保健食品或药物组合物。