中药单体粉防己碱与巨噬细胞联合用药在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用

本发明涉及类风湿性关节炎治疗的生物医药，具体涉及中药单体与免疫细胞联合用药的技术方向，尤其涉及粉防己碱与巨噬细胞协同作用治疗类风湿性关节炎的方法，涉及中药单体粉防己碱在调控巨噬细胞极化状态及抑制类风湿性关节炎滑膜细胞炎症反应中的新用途。

背景技术：

1、类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，ra）是一种以关节滑膜慢性炎症、血管翳形成及软骨和骨破坏为核心特征的自身免疫性疾病，目前临床治疗ra的药物主要包括非甾体抗炎药、改善病情抗风湿药（dmards）、生物制剂等，但存在明显局限性：非甾体抗炎药仅能对症止痛，无法阻断关节破坏；传统dmards 起效慢、毒副作用大，长期使用易损伤肝肾功能；生物制剂（如抗tnf-α抗体）虽靶向性较强，但价格昂贵、易产生耐药性，且约30%患者无应答，部分有效者随治疗时间延长疗效逐渐减退。因此，需要在临床上进一步寻找更安全、 更有效的治疗方法。

2、在类风湿关节炎（ra）中，巨噬细胞极化失衡是导致滑膜炎症持续进展的核心环节。正常状态下，巨噬细胞可在促炎的m1型（标志分子如cd80、cd86）与抗炎的m2型（标志分子如cd163、cd206）之间动态转换，维持免疫稳态。然而，ra患者滑膜微环境中巨噬细胞m1/m2极化稳态严重失衡，m1型巨噬细胞占据主导地位，通过糖酵解代谢重编程持续分泌tnf-α、il-1β、il-6等促炎因子，激活滑膜成纤维细胞并形成炎症正反馈，最终引发滑膜增生、软骨及骨破坏。与此同时，具有修复功能的m2型巨噬细胞及其分泌的il-10、il-4等抗炎因子相对不足，进一步加剧了m1/m2失衡。这种极化状态的紊乱不仅破坏免疫平衡，还推动疾病进展，因此，调控巨噬细胞极化、恢复m1/m2稳态，已然成为突破现有ra治疗方案局限、开拓新型治疗模式的核心前沿方向。

3、ipsc来源巨噬细胞（imac）已被证明具有内源性巨噬的完整免疫学功能和表达谱，并以其来源稳定、易于基因工程化改造等方面的优势在针对各类疾病的细胞治疗研究中占据着重要的地位。通过过继移植m2型imac来调节类风湿关节炎的免疫微环境，扭转m1/m2失衡从而发挥治疗功效的策略具有很强的可行性。然而，如何使该过继移植的imac在炎性环境中维持长效的m2极化状态成为一个重要的探索方向。

4、粉防己碱（tetrandrine, tet）是从中药防己中提取的一种双苄基异喹啉类生物碱，始载于《本经》，传统用于利水消肿、祛风止痛，主治水肿脚气、小便不利、湿疹疮毒、风湿痹痛及高血压。现代药理研究表明，粉防己碱具有抗炎、免疫调节、抗肿瘤等多种药理活性，可通过抑制nf-κb信号通路、调节钙离子通道等机制发挥抗炎作用，具体表现为抑制炎症细胞功能、抗自由基损伤、抑制炎症介质释放及对抗炎症介质的效应。以上研究结果提示tet具有促进巨噬细胞向m2方向极化的潜力。

5、现有相关研究及专利中，单一治疗手段难以实现对类风湿关节炎的炎症循环的彻底阻断：单一使用巨噬细胞移植治疗易因体内炎症微环境导致细胞再次极化，治疗效果短暂；单一使用粉防己碱等中药单体虽有一定抗炎作用，但体外实验显示其对炎性靶细胞的抑制效果有限，且无法针对性修复巨噬细胞极化失衡。现有技术如公开号为cn111419848a的专利仅保护葛根素与粉防己碱组合物的药用价值，未涉及与免疫细胞的联合；公开号为cn121466003a的专利聚焦巨噬细胞调节剂，未结合中药单体进行协同设计。综上，现有类风湿关节炎治疗手段均无法兼顾抗炎效果、靶向性、安全性及临床实用性，开发一种能精准调控巨噬细胞极化、阻断滑膜炎症循环的联合治疗方法，已成为本领域亟待解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于如何提出粉防己碱与巨噬细胞联用的新用途，用于治疗类风湿性关节炎。

2、本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：

3、本发明提出粉防己碱（tet）在制备ipsc来源巨噬细胞（imac）极化调节剂中的应用。

4、通过与tet的联合使用，可扭转imac治疗风湿性关节时的被诱导的 m1 极化状态，并有效抑制 mh7a 细胞分泌 il-1β、il-6 炎性因子。tet的使用浓度为0.1μm，用于将 m1型促炎imac调控为 m2 型抗炎imac。

5、本发明还提出一种ipsc来源巨噬细胞（imac）极化调节剂，主要活性成分包括粉防己碱（tet）。

6、优选的，所述粉防己碱（tet）的浓度为0.05~0.2μm，进一步优选为0.1μm。

7、优选的，粉防己碱（tet）作为唯一活性成分。

8、本发明还提出一种ipsc来源巨噬细胞（imac）极化状态的调控方法，包括以下步骤：将ipsc来源巨噬细胞（imac）与粉防己碱（tet）共培养，即可。

9、本发明还提出粉防己碱（tet）与imac联用在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。

10、本发明还提出一种治疗类风湿性关节炎的药物，主要活性成分包括粉防己碱（tet）和经tet预处理后的imac。

11、优选的，所述粉防己碱（tet）的浓度为0.05~0.2μm，进一步优选为0.1μm。

12、优选的，预处理的方式为：将ipsc来源巨噬细胞（imac）与粉防己碱（tet）共培养。

13、优选的，共培养的时间为70~74h，进一步优选为72h。

14、所述药物的给药方式包括通过关节腔注射方式给药，从而抑制滑膜组织中促炎因子的分泌、减轻滑膜慢性炎症。

15、优选的，所述药物还包括药学上可接受的载体。

16、“药学上可接受的”意指不降低活性成分的无毒性材料。此类药学可接受的辅料、载体是本领域中公知的(见remington’s pharmaceutical sciences，第18版，a.r gennaro编 ，mack publishing company (1990) 及 hand book of pharmaceutical excipients，第3版，a.kibbe编，pharmaceutical press(2000))。

17、优选的，所述药学上可接受的载体选自稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂中的一种或多种。

18、优选的，所述药物制成药学上可接受的剂型。

19、优选的，所述剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、粉剂、散剂、栓剂、滴剂、乳剂、注射液、口服液、气雾剂或混悬液。

20、本发明还提出一种类风湿性关节炎治疗制剂，包含tet、经tet预处理后的imac及药学上可接受的载体，所述制剂为关节腔注射剂，具有扭转巨噬细胞 m1 极化、抑制其il-1β/il-6 分泌的功能。

21、本发明的有益效果在于：

22、1、本发明提供了一种imac和tet联合使用来治疗类风湿关节炎的新策略。具体方法是：使用本发明提供的tet特定浓度和处理时间可使imac向m2方向极化，m2极化后的imac可抑制滑膜成纤维样滑膜细胞（mh7a）分泌 il-6、il-8 等促炎因子，减轻滑膜慢性炎症，缓解关节组织破坏。

23、2、本发明提供的tet与imac联合用药治疗类风湿性关节炎的方法，与现有技术相比，具有显著的技术优势和有益效果，且所有效果均通过体外实验数据验证，具体如下：

24、（1）协同抗炎效果显著，彻底阻断类风湿性关节炎炎症循环：本发明首次将中药单体tet与imac联用，tet预处理可维持imac的m2抗炎表型，imac可靶向作用于类风湿性关节炎的滑膜微环境，二者协同实现双重调控：一方面扭转imac的m1极化失衡，另一方面显著抑制 mh7a 细胞分泌il-1β、il-6等核心促炎因子，从源头阻断滑膜炎症的正反馈循环，解决了单一治疗手段抗炎效果有限的技术问题；

25、（2）确定最佳用药参数，保证治疗效果的稳定性：通过 cck8 实验筛选出tet的安全有效浓度为 0.1 μm，明确最佳预处理时间为72h，为临床应用提供了精准的技术参数，避免了因浓度、时间不当导致的效果不佳或细胞毒性问题；

26、（3）安全性高，生物相容性好：tet为天然中药单体，相较于化学合成抗风湿药，细胞毒性低、体内副作用小；所用imac可采用自体细胞，避免了异体移植的免疫排斥反应，解决了现有治疗药物毒副作用大、生物制剂易耐药的问题；

27、（4）拓展了中药单体与免疫细胞的联合应用范围：本发明首次证实tet可作为巨噬细胞极化调节剂，为中药单体与免疫细胞联合治疗自身免疫性疾病提供了新的研究思路，同时本发明的联合用药方法可直接应用于制备类风湿性关节炎的治疗药物/制剂，为类风湿性关节炎的临床治疗提供了新的靶向性药物研发方向。

28、3、提供一种tet与imac联合用药的治疗方法，实现二者的协同作用，在实现过继移植imac处于m2计划状态的同时精准扭转类风湿关节炎患者体内巨噬细胞的m1型极化状态，阻断促炎炎症循环；

29、4、通过tet与imac的联合用药继而有效抑制mh7a分泌 il-6、il-8 等促炎因子，减轻滑膜慢性炎症，缓解关节组织破坏；

30、5、利用中药单体tet的天然抗炎特性，降低免疫细胞治疗的极化风险，同时借助imac的免疫调控作用，提升tet的靶向抗炎效果，解决单一治疗手段效果不佳的问题；

31、6、明确该联合用药方法在制备类风湿性关节炎治疗药物 / 制剂中的应用，为类风湿关节炎的临床治疗提供新的靶向性、安全性兼具的技术方案。

32、当然，实施本发明的任一产品或方法并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。