RNA制剂的制作方法

本发明涉及其中rna的稳定性得到改善的rna水性制剂。

背景技术：

1、近年来，核酸（特别是rna分子，如mrna和sirna）在疗法以及其他领域例如作物保护中的应用取得了巨大的发展。基于rna的治疗剂包括反义寡核苷酸（aso）、小干扰rna（sirna）、微小rna（mirna）、信使rna（mrna）和单链向导rna（sgrna）介导的crispr-cas系统。

2、rna分子被认为比dna安全得多，因为rna分子能够迅速从生物体清除，并且不能整合至基因组中并以不可控的方式影响细胞的基因表达。rna治疗剂也不太可能引起严重副作用，如自身免疫性疾病或抗dna抗体的产生（bringmann等人，2010）。用rna转染只需要插入细胞的细胞质中，这比插入细胞核中更容易实现。

3、递送系统（如脂质纳米颗粒（lnp））被用于保护rna免于降解并帮助细胞摄取。

4、将rna配制成lnp时的一个挑战是随着时间推移保持rna质量。因此，本领域需要改进的rna制剂。

技术实现思路

1、在一个方面，本发明提供一种水性组合物，其包含rna分子、递送系统、tris和糖。适宜地，所述水性组合物还包含磷酸根阴离子。

2、在另一个方面，本发明提供本发明的水性组合物，其用于疗法，适宜地用作疫苗。

3、在另一个方面，本发明提供一种用于治疗或预防疾病的方法，其包括向有此需要的患者施用本发明的水性组合物。

4、在另一个方面，本发明提供一种用于治疗或预防感染性疾病的方法，其包括向有此需要的患者施用本发明的水性组合物。

5、在另一个方面，本发明提供本发明的水性组合物在制备药物或疫苗中的用途。

6、在另一个方面，本发明提供一种制备本发明的水性组合物的方法，其包括

7、a）提供初始组合物，其包含rna分子，适宜地mrna，和递送系统，适宜地lnp，

8、b）将该初始组合物转移至第一缓冲系统中，以获得中间组合物，

9、c）用稀释缓冲液稀释该中间组合物，以获得本发明的水性组合物。

1.一种水性组合物，其包含rna分子、递送系统、tris、糖和磷酸根阴离子。

2. 根据权利要求1所述的水性组合物，其中tris以5 mm和50 mm之间，适宜地7.5 mm和30 mm之间的浓度存在，例如以约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30 mm的浓度存在，适宜地以约15 mm的浓度存在。

3.根据权利要求1或2所述的水性组合物，其中所述糖是二糖，适宜地选自蔗糖、海藻糖及其组合。

4. 根据权利要求3所述的水性组合物，其中所述二糖是蔗糖，并且其中蔗糖以50 mm和700 mm之间，适宜地100 mm和600 mm之间的浓度存在，例如以约150、200、250、300、350、400、450、500或550 mm的浓度存在，适宜地以约300 mm的浓度存在。

5. 根据权利要求3所述的水性组合物，其中所述二糖是蔗糖和海藻糖的组合，并且其中蔗糖和海藻糖的总浓度在50 mm和700 mm之间，适宜地在100 mm和600 mm之间，例如150、200、250、300、350、400、450、500或550 mm，并且其中例如蔗糖和海藻糖均以约150 mm的浓度存在，或者蔗糖以50 mm的浓度存在且海藻糖以约550 mm的浓度存在。

6. 根据权利要求1至5中任一项所述的水性组合物，其中磷酸根阴离子以0.5 mm至15mm，适宜地1 mm至10 mm，更适宜地1 mm至5 mm的浓度存在，例如以约1、2、3、4或5 mm的浓度存在，适宜地以3 mm的浓度存在。

7. 根据权利要求1至6中任一项所述的水性组合物，其还包含氯化钠，适宜地以5 mm和50 mm之间，适宜地10 mm和40 mm之间，更适宜地15 mm和30 mm之间的浓度存在，例如以约15、20、21、22、22.5、23、24、25或30 mm的浓度存在，适宜地以约22.5 mm的浓度存在。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的水性组合物，其中所述水性组合物的ph在6.5和8.5之间，例如为约7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0，适宜地约7.4或约8.0。

9. 根据权利要求1至8中任一项所述的水性组合物，其还包含适宜地以10 mm至200mm，例如约25、50、75、100或150 mm，更适宜地约25 mm或约100 mm的浓度存在的甘油。

10. 根据权利要求9所述的水性组合物，其中糖和甘油的总浓度在50 mm和700 mm之间，适宜地在100 mm和600 mm之间，例如约150、200、250、300、350、400、450、500或550 mm，并且其中例如所述糖是蔗糖且以约150 mm的浓度存在，并且甘油以约100 mm的浓度存在。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的水性组合物，其中

12. 根据权利要求11所述的水性组合物，其中甘油以10 mm至200 mm，适宜地25 mm至175 mm范围的浓度存在。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中

14.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中

15.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中

16.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中

17.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中

18.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中

19.根据权利要求1至20中任一项所述的水性组合物，其中

20.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中

21.根据权利要求1至12中任一项所述的水性组合物，其中所述rna分子是编码感兴趣的蛋白质的mrna，适宜地是选自非复制型mrna和自复制型mrna的mrna。

22. 根据权利要求21所述的水性组合物，其中所述感兴趣的蛋白质是抗原，适宜地是选自以下的呼吸道病毒抗原：流感ha抗原、流感na抗原、sars-cov-2 s抗原、rsv f抗原、hmpv f抗原和piv f抗原。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的水性组合物，其中所述递送系统是脂质纳米颗粒（lnp），适宜地包含（i）可电离氨基脂质，（ii）中性脂质，适宜地dspc，（iii）甾醇，适宜地胆固醇；以及（iv）peg化脂质。

24. 根据权利要求1至23中任一项所述的水性组合物，其用于疗法，适宜地用作疫苗。

25.一种制备根据权利要求1至23所述的水性组合物的方法，其包括