抑制TGF-β1基因和COX-2基因表达的siRNA组合物在制备治疗骨关节炎的药物中的应用的制作方法

本发明属于基因治疗，具体涉及抑制tgf-β1基因和cox-2基因表达的sirna组合物在制备治疗骨关节炎的药物中的应用。

背景技术：

1、骨关节炎（osteoarthritis, oa）是一种以关节软骨退行性变、继发性骨质增生及慢性滑膜炎为特征的全身代谢性疾病，尤其好发于膝关节、髋关节等负重关节。临床主要表现为关节疼痛、晨僵、活动受限，晚期常导致关节畸形甚至残疾，严重影响患者生活质量。

2、目前临床针对oa的药物治疗主要涵盖非甾体抗炎药（nsaids，代表性药物如双氯芬酸、塞来昔布）、对乙酰氨基酚、关节腔注射糖皮质激素，以及氨基葡萄糖、透明质酸等关节营养补充剂。然而，现有疗法存在显著的临床局限性：系统性应用nsaids虽可短期镇痛，但长期用药伴随难以忽视的安全性隐患，包括但不限于胃肠道黏膜损伤、肝肾功能损害及心血管不良事件风险升高；而糖皮质激素虽具强效抗炎作用，其反复关节腔注射却可能干扰软骨细胞代谢稳态，加速软骨基质降解，反致关节结构破坏。

3、因此，开发一种兼具病因干预、局部给药及高安全性的治疗骨关节炎的药物具有重要的临床转化意义与广阔的市场前景。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种抑制tgf-β1基因和cox-2基因表达的sirna组合物在制备治疗骨关节炎的药物中的新用途。

2、为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：

3、抑制tgf-β1基因和cox-2基因表达的sirna组合物在制备治疗骨关节炎的药物中的应用。

4、具体地，所述sirna组合物包括靶向tgf-β1 mrna并抑制其表达的第一sirna分子和靶向cox-2 mrna并抑制其表达的第二sirna分子。

5、在一些具体实施方式中，所述第一sirna分子的正义链为： 5’-cccaagggcuaccaugccaacuucu-3’（seq id no：1），反义链为：5’ -agaaguuggcaugguagcccuuggg-3’（seq id no：2）。

6、在一些具体实施方式中，所述第二sirna分子的正义链为：5’-ggucuggugccuggucugaugaugu-3’ （seq id no：3），反义链为：5’ -acaucaucagaccaggcaccagacc- 3’ （seq id no：4）。

7、在一些实施方式中，所述第一sirna分子和所述第二sirna分子的拷贝数比为1：0.8~1.2（即摩尔比1：0.8~1.2），优选为1：0.9~1.1，尤其优选为1：1。

8、在一些实施方式中，所述sirna组合物还包括用于递送所述的第一核酸分子和所述的第二核酸分子的药学上可接受的载体。

9、在一些实施方式中，所述载体包括含有至少一个组氨酸残基和至少一个赖氨酸的多肽聚合物。

10、在一些具体实施方式中，所述的载体包括hkp和/或hkp(+h)。

11、进一步地，所述sirna组合物中sirna分子总量和载体的质量比为1：3~5，进一步优选为1：3.5~4.5。

12、在一些具体实施方式中，所述sirna组合物为纳米颗粒制剂。

13、在一些具体实施方式中，所述治疗骨关节炎的药物为注射剂，其还包括生理盐水，通过关节腔内注射给药。

14、本发明提供一种骨关节炎的治疗方法，其特征在于，给患者患处施用有效剂量的含有上文所述sirna组合物的治疗骨关节炎的药物。

15、具体地，所述治疗骨关节炎的药物通过患关节炎的关节腔注射给药。

16、由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

17、本发明通过将抑制tgf-β1基因和cox-2基因表达的sirna组合物用于制备治疗骨关节炎的药物，提供了一种通过关节腔注射给药，抑制炎症因子表达，延缓软骨退变，用于治疗骨关节炎的新型核酸类药物。已有实验证明，本发明sirna组合物在大鼠骨关节炎模型中表现出优异的治疗活性：相较于口服双氯芬酸钠需频繁给药，本发明 sirna 关节腔注射给药频次更低，且软骨保护效果更优。局部安全性评价显示，健康大鼠关节腔注射后无明显关节肿胀、软骨或骨结构破坏，亦无异常行为表现；全身毒性评价显示，给药后大鼠体重正常增长，观察期内无明显消化道出血、死亡或其他全身毒性反应，表明本发明sirna组合物在关节腔局部及全身均具有良好的安全性。

1.抑制tgf-β1基因和cox-2基因表达的sirna组合物在制备治疗骨关节炎的药物中的应用，其特征在于，所述sirna组合物包括靶向tgf-β1 mrna并抑制其表达的第一sirna分子和靶向cox-2 mrna并抑制其表达的第二sirna分子。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一sirna分子的正义链为： 5’-cccaagggcuaccaugccaacuucu-3’（seq id no：1），反义链为：5’ -agaaguuggcaugguagcccuuggg-3’（seq id no：2）；

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一sirna分子和所述第二sirna分子的拷贝数比为1：0.8~1.2。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述sirna组合物还包括用于递送所述的第一核酸分子和所述的第二核酸分子的药学上可接受的载体。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述载体包括含有至少一个组氨酸残基和至少一个赖氨酸的多肽聚合物。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的载体包括hkp和/或hkp(+h)。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述sirna组合物中sirna分子总量和载体的质量比为1：3~5。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述sirna组合物为纳米颗粒制剂。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述治疗骨关节炎的药物为注射剂，其还包括所述sirna组合物和生理盐水。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述治疗骨关节炎的药物通过关节腔内注射给药。