一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法与流程

本发明涉及医药，具体涉及一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法。

背景技术：

1、桂枝茯苓丸源于东汉医圣张仲景所著《金匮要略》，由桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、芍药五味药材组成，为中医治疗妇科癥瘕积聚的经典方剂。其功效为活血化瘀、消癥，适用于妇人宿有癥块、血瘀经闭、行经腹痛及产后恶露不尽。现代临床广泛应用于子宫肌瘤、卵巢囊肿、子宫内膜异位症等妇科疾病的治疗，兼具调经止痛、改善血液循环的作用，是中医妇科领域不可或缺的中药复方。

2、《中国药典》现行版主要通过高效液相色谱（hplc）法测定肉桂酸、丹皮酚等单一成分含量，结合薄层色谱鉴别进行质量控制。然而，由于桂枝茯苓丸的组方药材成分复杂、含量差异大，该方法难以全面反映复方整体药材特征，无法有效关联成分与临床功效，亟待建立更为系统的质量评价体系。

3、中药指纹图谱技术为桂枝茯苓丸的全面质量控制提供了新路径。通过建立涵盖多指标成分的高效液相色谱指纹图谱，可系统表征其化学成分轮廓，结合多变量统计分析明确质量标志物。因此，建立专属、稳定、可重复的桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱，对提升其质量可控性、保障临床用药安全有效、推动其现代化和标准化发展具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法。

2、本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：

3、本发明提供的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，主要包括以下步骤：

4、步骤一、对照品溶液的制备；

5、取芍药苷、肉桂酸、丹皮酚、没食子酸、苯甲酰芍药苷、芍药苷内酯适量，加甲醇进行定容，即得；

6、步骤二、供试品溶液的制备；

7、精密称定桂枝茯苓丸粉末1.0～3.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～50ml，称量，超声处理0.3～0.7h，放冷，再称量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

8、步骤三、测定；

9、分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～15μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对色谱图进行处理，即得桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱。

10、作为优选的实施例，步骤一中，取芍药苷、肉桂酸、丹皮酚、没食子酸、苯甲酰芍药苷、芍药苷内酯适量，加甲醇定容至10 ml，即得对照品溶液。

11、作为优选的实施例，步骤二中，精密称定桂枝茯苓丸粉末1.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称量，超声处理0.5 h，放冷，再称量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

12、作为优选的实施例，步骤三中，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对色谱图进行处理，即得桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱。

13、作为优选的实施例，步骤三中，测定的高效液相色谱条件为：

14、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%磷酸溶液（a）-乙腈（b）为流动相，进行梯度洗脱，流速0.5～1.0ml/min，柱温30～40℃，检测波长为220～250nm。

15、作为优选的实施例，步骤三中，测定的高效液相色谱条件为：

16、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%磷酸溶液（a）-乙腈（b）为流动相，进行梯度洗脱，流速0.8 ml/min，柱温35℃，检测波长为230nm。

17、作为优选的实施例，流动相梯度洗脱程序如下：

18、

19、作为优选的实施例，所述桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱共有13个共有峰，共有峰中1、5、6、10、11、12号色谱峰分别被指认为没食子酸、芍药苷内酯、芍药苷、苯甲酰芍药苷、肉桂酸、丹皮酚。

20、作为优选的实施例，1、5、6、10、11、12号色谱峰的相对保留时间rsd＜1%，相对峰面积的rsd＜3%。

21、本发明的有益效果是：

22、本发明建立的桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱首次实现了对其质量的控制，不再局限于单一成分或药材的鉴别，从而能有效地指导投料，规范生产操作，保障临床用药的安全性与有效性。本发明通过建立5批次桂枝茯苓丸的高效液相色谱指纹图谱，相似度在0.975-1.000之间，全面反映了桂枝茯苓丸所含的化学信息，能够更准确地表征其质量。本发明标定了6个共有峰，其中1、5、6、10、11、12号色谱峰分别被指认为没食子酸、芍药苷内酯、芍药苷、苯甲酰芍药苷、肉桂酸和丹皮酚。此外，本发明选择在230 nm波长处进行测定，该波长下出峰较多，所反映的信息较为全面；各峰吸收值良好，基线平稳，同时有效避免了近紫外区杂质峰的较大吸收干扰。

1.一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤一中，取芍药苷、肉桂酸、丹皮酚、没食子酸、苯甲酰芍药苷、芍药苷内酯适量，加甲醇定容至10 ml，即得对照品溶液。

3.根据权利要求1所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤二中，精密称定桂枝茯苓丸粉末1.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称量，超声处理0.5 h，放冷，再称量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

4.根据权利要求1所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤三中，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，用指纹图谱软件对色谱图进行处理，即得桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱。

5.根据权利要求1所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤三中，测定的高效液相色谱条件为：

6.根据权利要求5所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤三中，测定的高效液相色谱条件为：

7.根据权利要求5所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，流动相梯度洗脱程序如下：

8.根据权利要求1所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱共有13个共有峰，共有峰中1、5、6、10、11、12号色谱峰分别被指认为没食子酸、芍药苷内酯、芍药苷、苯甲酰芍药苷、肉桂酸、丹皮酚。

9.根据权利要求8所述的一种桂枝茯苓丸高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征在于，1、5、6、10、11、12号色谱峰的相对保留时间rsd＜1%，相对峰面积的rsd＜3%。