一种液相色谱-质谱/质谱法测定化妆品中3-(烯丙氧基)-2-羟基丙磺酸钠的方法和系统与流程

本发明化妆品的生化检测，尤其涉及一种液相色谱-质谱/质谱法测定化妆品中3-(烯丙氧基)-2-羟基丙磺酸钠的方法和系统。

背景技术：

1、3-(烯丙氧基)-2-羟基丙磺酸钠（sodium3-(allyloxy)-2-hydroxypropanesulfonate，简称ahps）是一种含有磺酸基、羟基和碳碳双键的反应型阴离子化合物，具有较强的水溶性，可作为聚合反应单体、表面活性组分或配方助剂应用于精细化工产品。为评价化妆品原料及成品中ahps的残留情况，需要建立能够适应水基类、凝胶类、膏霜类和乳液类等不同化妆品基质的定性、定量检测方法。

2、ahps分子极性较强，缺少适于常规紫外检测的特征发色基团。在反相液相色谱体系中，该物质容易在接近色谱柱死体积的位置洗脱，并可能与化妆品中的盐类、多元醇、增稠剂、乳化剂及其他高极性组分共同进入离子源，造成色谱保留不足、峰形展宽及离子抑制等问题。水基类化妆品组成相对简单，而凝胶类、膏霜类及乳液类化妆品通常含有高分子增稠剂、油脂和乳化组分。采用水或含水量较高的溶剂提取时，部分样品容易形成胶状体系，影响离心和过滤；采用与目标物极性不匹配的有机溶剂时，又可能造成ahps提取不完全。因此，样品提取方式、色谱保留条件、质谱特征离子及基质效应校正方式均会影响检测结果。

3、现有技术中，公开号为cn102721757a的中国发明专利申请公开了一种化妆品中全氟烷基化合物残留量的检测方法。该方法针对液态、粉状及乳状化妆品，采用甲醇提取，并经过浓缩、弱阴离子交换固相萃取、淋洗、洗脱和氮吹等处理后，以c18色谱柱进行分离，采用电喷雾负离子多反应监测模式进行测定。该方法说明液相色谱-串联质谱可以用于化妆品中磺酸类物质的分析，但其检测对象主要为具有含氟碳链结构的全氟烷基酸及全氟烷基磺酸，与ahps在分子尺寸、疏水性、色谱保留及碰撞裂解行为方面存在明显差异；同时，其前处理过程包括浓缩和固相萃取等多个环节，操作时间较长，目标物还可能在转移、吸附及洗脱过程中发生损失，因而不能直接解决ahps在不同含水化妆品基质中的快速检测问题。

4、公告号为cn109283272b的中国发明专利公开了一种2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸及其钠盐的检测方法。该方法将纺织品试样用甲醇进行超声提取，过滤后采用c18色谱柱、酸性水相和有机相进行梯度洗脱，并在电喷雾负离子多反应监测模式下，利用定量离子对和定性离子对进行检测。该方法为磺酸及其钠盐的双离子对质谱确证提供了技术参考，但其待测物具有二苯甲酮芳香结构，在反相色谱柱上的保留能力明显强于小分子高极性的ahps；其检测基质为纺织品，基质组成及提取行为也不同于含有水、油脂、乳化剂和增稠剂的化妆品。因此，该文献公开的提取条件、流动相组成、梯度程序和质谱离子对不能直接用于化妆品中ahps的测定。

5、此外，已有反相液相色谱资料主要针对ahps标准品或组成较为简单的溶液体系，尚不能解决复杂化妆品基质中的低含量ahps检测问题。若仅采用标准溶剂配制工作曲线，样品基质与标准溶液之间的离子化效率差异还可能导致定量偏差；若普遍增加固相萃取或浓缩步骤，又会增加检测时间、操作误差及目标物损失风险。

技术实现思路

1、本发明的技术目的在于提供一种液相色谱-质谱/质谱测定含水化妆品中3-(烯丙氧基)-2-羟基丙磺酸钠的方法及系统，以解决ahps极性强、在反相色谱柱上保留困难、复杂化妆品基质干扰明显以及现有前处理过程繁琐的问题，实现对水基类、凝胶类、膏霜类和乳液类化妆品中ahps的准确检测。

2、第一方面，为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：

3、一种液相色谱-质谱/质谱测定含水化妆品中3-(烯丙氧基)-2-羟基丙磺酸钠（ahps）的方法，该方法包括以下的步骤：

4、s1，将含水化妆品混匀，称取均质试样置于玻璃比色管中，加入甲醇，涡旋1 min并超声提取20 min，以甲醇定容至10 ml；

5、s2，将提取液以10000 r/min离心5 min，取上清液经0.22 μm有机微孔滤膜过滤，所得滤液不经固相萃取而直接作为待测液；

6、s3，以同基质类型的空白化妆品按s1和s2制得空白基质提取液，并用其配制0.3～20.0 μg/l的系列基质标准工作液；

7、s4，将待测液和系列基质标准工作液注入150 mm×4.6 mm、粒径3 μm的ultimate-xb-c18色谱柱，以甲醇和0.15%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，甲醇体积分数为：0～1.0 min保持10%，1.0～3.0 min由10%升至98%，3.0～6.0 min保持98%，6.0～6.1 min由98%降至10%，6.1～8.0 min保持10%；

8、s5，采用电喷雾负离子、多反应监测模式检测，以m/z 194.9→79.9为定量离子对，以m/z 194.9→94.9为定性离子对；

9、s6，根据定量离子对峰面积与系列基质标准工作液浓度建立基质标准工作曲线，计算待测液中的ahps浓度，并依据保留时间和两离子对的相对离子丰度进行定性确证。

10、作为进一步改进，在步骤s1中，均质试样的称量精确至0.001 g；先向均质试样中加入部分甲醇进行涡旋和超声提取，再用甲醇定容至10 ml并混匀。

11、作为进一步改进，步骤s3包括：将ahps标准品用水溶解并配制成1000 mg/l的标准储备液，将标准储备液用水稀释成1 mg/l的标准使用液，再以空白基质提取液为稀释介质，配制浓度分别为0.3 μg/l、1.0 μg/l、2.0 μg/l、5.0 μg/l、10.0 μg/l和20.0 μg/l的系列基质标准工作液。

12、作为进一步改进，步骤s4中，液相色谱的流速为1.0 ml/min，柱温为40 ℃，进样体积为10.0 μl；

13、和/或，步骤s5中，电喷雾电压为−4500 v，离子源温度为550 ℃，气体参数gs1为55psi、gs2为55 psi、cur为25 psi；

14、和/或，步骤s5中，两个离子对的驻留时间均为100 ms，去簇电压均为−55 v，碰撞室入口电压均为−10 v，碰撞室出口电压均为−11 v；定量离子对m/z 194.9→79.9的碰撞能量为−45 ev，定性离子对m/z 194.9→94.9的碰撞能量为−25 ev。

15、作为进一步改进，步骤s6中，定性确证条件包括：待测液中ahps色谱峰的保留时间相对于浓度相当的基质标准工作液中ahps色谱峰保留时间的偏差小于2.5%；当定性离子的相对离子丰度大于50%、大于20%且不大于50%、大于10%且不大于20%、不大于10%时，其相对离子丰度允许偏差依次不超过±20%、±25%、±30%、±50%；

16、和/或，步骤s6中，采用基质匹配外标法定量；当待测液中ahps的响应值超出系列基质标准工作液形成的线性响应范围时，采用空白基质提取液对待测液进行稀释，使稀释后的响应值处于所述线性响应范围内，并根据稀释倍数计算含水化妆品中的ahps含量。

17、作为进一步改进，所述含水化妆品为水基类化妆品、凝胶类化妆品、膏霜类化妆品或乳液类化妆品；所述同基质类型的空白化妆品与待测含水化妆品属于相同的化妆品类型。

18、作为进一步改进，在水基类、凝胶类、膏霜类、乳液类等化妆品中3-(烯丙氧基)-2-羟基丙磺酸钠在3个水平下的添加水平、回收率和精密度如下，

n=6；

19、

20、该方法检出限以s/n大于3计为5 μg/kg；方法定量限以s/n大于10计为15 μg/kg；

21、该方法工作曲线线性相关系数大于0.995；在水基类、凝胶类、膏霜类、乳液类化妆品中加入3-(烯丙氧基)-2-羟基丙磺酸钠标准品，进行添加

22、第二方面，本发明还提供了一种含水化妆品中ahps的液相色谱-质谱/质谱检测系统，该系统用于实现所述的方法，包括：

23、样品前处理单元，用于以甲醇对含水化妆品进行涡旋和超声提取，并对提取液依次进行离心和微孔过滤，得到不经固相萃取的待测液；

24、基质校准单元，用于以同基质类型的空白化妆品制备空白基质提取液，并配制系列基质标准工作液；

25、液相色谱单元，包括ultimate-xb-c18色谱柱、甲醇储液组件、0.15%甲酸水溶液储液组件和梯度泵，用于对待测液和系列基质标准工作液进行梯度洗脱；

26、串联质谱单元，用于在电喷雾负离子、多反应监测模式下采集m/z 194.9→79.9和m/z 194.9→94.9的离子信号；

27、数据处理单元，用于建立基质标准工作曲线，根据m/z 194.9→79.9离子对的峰面积计算ahps浓度，并根据保留时间和两个离子对的相对离子丰度进行定性确证。

28、作为进一步改进，所述样品前处理单元包括玻璃比色管、涡旋混匀器、超声提取器、转速能够达到10000 r/min的离心机以及孔径为0.22 μm的有机微孔过滤组件。

29、作为进一步改进，所述数据处理单元存储有梯度洗脱程序、质谱采集参数和定性确证规则；所述梯度洗脱程序用于在8 min内控制甲醇体积分数在10%与98%之间变化，所述质谱采集参数包括两个离子对对应的去簇电压和碰撞能量，所述定性确证规则包括保留时间偏差阈值和相对离子丰度偏差阈值。

30、本发明采用甲醇对均质试样进行涡旋和超声提取，经离心及微孔过滤后直接进样，无需进行固相萃取、旋转蒸发或氮吹浓缩，能够缩短样品前处理时间，减少转移、吸附和洗脱造成的目标物损失；通过限定试样质量、提取体积、c18色谱柱、0.15%甲酸水溶液—甲醇梯度洗脱程序以及电喷雾负离子多反应监测参数，使高极性的ahps与化妆品基质中的干扰组分得到有效区分，并以m/z 194.9→79.9作为定量离子对、以m/z 194.9→94.9作为定性离子对，结合保留时间和相对离子丰度进行双重确证，从而降低假阳性风险；同时，采用与待测样品类型相同的空白化妆品提取液配制系列基质标准工作液，能够补偿不同化妆品基质引起的离子增强或离子抑制，提高定量结果的准确性和不同基质间的适用性。经方法学验证，该方法线性相关系数大于0.995，方法检出限为5 μg/kg，方法定量限为15 μg/kg，适用于水基类、凝胶类、膏霜类和乳液类等含水化妆品中ahps的定性确证和定量测定。