用于缺血性脑卒中复发风险分析的代谢标志物及其应用

本发明涉及诊断检测，具体涉及一种用于缺血性脑卒中复发风险分析的代谢标志物组合及其应用。

背景技术：

1、缺血性脑卒中（ischemic stroke）作为全球第二大死亡原因，具有高发病率、高致残率及高复发的特征。尽管二级预防策略（如抗血小板治疗和危险因素控制）的应用降低了部分复发风险，但患者预后仍不理想：发病后3个月内复发率为1.9%-6%，1年内升至7.2%-8.0%，5年复发率甚至高达41%。复发性脑卒中常伴随更严重的神经功能缺损和死亡率，导致医疗资源消耗与社会经济负担加剧。这一现状凸显了精准评估复发风险并优化个体化干预的迫切需求。

2、目前临床广泛应用的评估工具主要包括essen评分（esrs）和影像学指标。esrs等临床评分系统通过整合年龄、既往病史等变量进行风险分层，但其预测效能有限（auc值多低于0.7），且未涵盖代谢紊乱等新兴危险因素。影像学技术如血管壁磁共振成像（vwmri）可评估斑块强化程度和狭窄率，但其依赖大型设备、操作复杂且成本高昂，难以在基层医疗机构普及。此外，基于血液生物标志物（如lp-pla2、s100β蛋白）的研究虽取得进展，但单一标志物的敏感性和特异性不足，缺乏多维度整合分析。这些局限性导致现有方法难以满足精准医学时代对复发风险动态监测的需求。

3、液相色谱-质谱联用（lc-ms）技术凭借高灵敏度和广谱覆盖能力，成为代谢标志物发现的核心工具。其在卒中领域的应用多集中于急性期诊断，例如通过赖氨酸、犬尿氨酸等代谢物区分卒中亚型。然而，现有研究多聚焦于诊断标志物的筛选，针对复发风险的代谢谱特征仍不明确，且缺乏基于纵向随访数据的预后模型构建。传统模型常忽略代谢通路的动态交互及时间-事件数据特性，导致预测效能不稳定。

4、基于此，有必要提供一种用于缺血性脑卒中复发风险分析的血浆代谢标志物组合及应用，精准量化个体化复发风险，为临床二级预防策略优化提供高效决策支持。

技术实现思路

1、针对上述问题，本研究系统整合缺血性脑卒中人群的代谢物数据与随访信息，筛选出5个关键代谢标志物并构建风险分析模型。本发明提供如下技术方案：

2、本发明提供一种用于缺血性脑卒中复发风险分析的血浆代谢标志物，所述血浆代谢标志物选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，肉碱c10:0，和肉碱c12:0中的至少一种。

3、作为一种简化的方案，所述血浆代谢标志物选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，肉碱c10:0和肉碱c12:0的至少一种。

4、作为一种简化的方案，所述血浆代谢标志物至少选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，和肉碱c12:0中的至少一种。

5、作为一种简化的方案，所述血浆代谢标志物肉碱c10:1，肉碱c8:0，和肉碱c12:0中的至少一种。

6、作为一种简化的方案，所述血浆代谢标志物至少肉碱c10:1和肉碱c8:0中的至少一种。

7、本发明还提供所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的代谢标志物在制备分析缺血性脑卒中复发风险的试剂盒中的应用。

8、本发明提供一种试剂盒，包括用于缺血性脑卒中复发风险分析的代谢标志物的标准品，即包括选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，肉碱c10:0和肉碱c12:0的至少一种的标准品。

9、所述检测试剂盒还可以包括溶剂和内标物。作为优选，所述溶剂为甲醇、50%乙腈水溶液，所述内标物为l-苯基丙氨酸。

10、本发明还提供一种用于缺血性脑卒中复发风险分析的代谢标志物的筛选方法，包括如下步骤：分别采集缺血性脑卒中复发组样本和缺血性脑卒中未复发组样本；采用lc-ms检测缺血性脑卒中复发组样本和缺血性脑卒中未复发组样本，经判别分析，获得候选差异代谢物；对所述差异代谢物及其组合进行受试者工作特征曲线分析，确定用于缺血性脑卒中复发风险分析和评估的代谢标志物。

11、本发明还提供一种lc-ms检测方法，包括以下步骤：

12、（1）待测样本处理，

13、以l-苯基丙氨酸的甲醇内标提取液和50%乙腈水溶液处理血液样本，制备待测样本；

14、（2）以待测代谢标志物的标准样为外标，进行lc-ms检测，分析待测样本中待测标志物的含量；

15、所述待测代谢标志物选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，肉碱c10:0和肉碱c12:0中的至少一种化合物；

16、（3）存储和输出检测结果。

17、在其中一些实施例中，lc-ms检测的条件为：

18、色谱柱：waters acquity uplc hss t3 c18 1.8μm，2.1mm*100mm；

19、流动相：a相为含0 .04％乙酸水溶液，b相为含0 .04％乙酸的乙腈溶液，流速0.4ml/min；

20、洗脱梯度程序为：

21、0 min，a相与b相的体积比为95:5；

22、11.0 min，a相与b相的体积比为10:90；

23、12.0 min，a相与b相的体积比为10:90；

24、12.1min，a相与b相的体积比为95:5；

25、14.0min，a相与b相的体积比为95:5。

26、本发明的有益效果：

27、本发明对比缺血性脑卒中复发和缺血性脑卒中未复发人群血浆代谢组的差异性，筛选出针对缺血性脑卒中复发风险分析的5种代谢标志物，单个代谢标志物roc曲线下的面积auc值大于0.8，在0.89~0.931之间；多个代谢标志物组合的性能明显优于单个代谢标志物，roc曲线下的面积auc值为0.915~0.934。

28、采用本发明的5种血浆代谢标志物进行检测诊断时能够在降低缺血性脑卒中复发风险评估成本的同时，提升缺血性脑卒中复发高风险人群的筛选，仅通过取血检测就能实现诊断，无需额外采集组织样本，能够很好地替代或减少对现有影像学检查、免疫法检测等诊断模式或方法，提高诊断率和便捷性，兼具临床可及性和成本效益优势。

29、本发明所选代谢物覆盖脂质代谢、能量代谢及线粒体功能，为机制研究和干预靶点开发提供新方向。

1.一种用于缺血性脑卒中复发风险分析的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，肉碱c10:0和肉碱c12:0的至少一种。

2.根据权利要求1所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物至少选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，和肉碱c12:0中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物肉碱c10:1，肉碱c8:0，和肉碱c12:0中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的血浆代谢标志物，其特征在于，所述血浆代谢标志物至少肉碱c10:1和肉碱c8:0中的至少一种。

5.权利要求1至4任何一项所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的代谢标志物在制备分析缺血性脑卒中复发风险的试剂盒中的应用。

6.一种用于缺血性脑卒中复发风险分析的试剂盒，其特征在于，包括选自肉碱c10:1，肉碱c8:0，肉碱c6:0，肉碱c10:0和肉碱c12:0的至少一种的标准品。

7.根据权利要求6所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的试剂盒，其特征在于，还包括溶剂和内标物。

8.根据权利要求7所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的试剂盒，其特征在于，所述溶剂为甲醇、50%乙腈水溶液，所述内标物为l-苯基丙氨酸。

9.一种权利要求1至4任一项所述的用于缺血性脑卒中复发风险分析的代谢标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

10.一种lc-ms检测方法，其特征在于：