通过外显子-51的跳读在DMD患者中用于肌养蛋白挽救的寡聚化合物

通过外显子-51的跳读在dmd患者中用于肌养蛋白挽救的寡聚化合物
技术领域
1.本发明属于治疗性核酸分子的一般技术领域，并且特别是可用于在患有迪谢内肌营养不良(duchenne muscular dystrophy，dmd)的患者中使用剪接-转换技术来恢复肌养蛋白活性的治疗性核酸分子的一般技术领域。
2.更特别地，本发明提供了新的寡聚化合物，其可能包含一个或更多个三环-脱氧核糖核酸(tricyclo-deoxyribonucleic acid，tc-dna)核苷和与所述寡聚化合物直接共价连接或经由间隔物共价连接的一个或更多个脂质部分，用于靶向人肌养蛋白基因的外显子51。
3.这些寡聚化合物，并且特别是下文中设计为sqy51的寡聚化合物，满足了超过百分之十的具有明显缺失的dmd患者的治疗需要；它们与全身递送相容，它们进入整个肌肉组织(包括心脏和平滑肌)，它们穿过血脑屏障，同时显示出很少的生物累积。


背景技术：

4.反义技术是用于降低特定基因产物的表达的有效手段，并且因此可用于治疗、诊断和研究应用。通常来说，反义技术背后的原理是反义化合物(核苷酸序列或其类似物)与靶核酸杂交并调节基因表达活性或功能，例如转录和/或翻译。无论具体机制如何，其序列特异性使反义化合物作为用于靶标验证和基因功能化的工具，以及选择性调节参与疾病发病机制的基因之表达的治疗剂，均具有吸引力。


技术实现要素：

5.在一个方面中，本发明涉及包含10至50个单体亚基的寡聚化合物，其序列的至少一部分与以下序列互补：aaggaaacugccaucuccaa(所附序列表中的seq id no:1)。在一些实施方案中，所述寡聚化合物之序列的至少一部分与对应于所附序列表中的seq id no:2之区域 48 62的序列互补。在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含反义寡核苷酸或由反义寡核苷酸组成。在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含至少一个与以下tc-dna核苷酸序列具有至少70％同一性的核苷酸序列：ggagatggcagtttc(所附序列表中的seq id no:3)。在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含三环-dna反义寡核苷酸或由三环-dna反义寡核苷酸组成。在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含三环-硫代磷酸酯dna反义寡核苷酸或由三环-硫代磷酸酯dna反义寡核苷酸组成。在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷和至少一个经修饰核糖核酸核苷。在一些实施方案中，所述经修饰核糖核酸核苷是2
’‑
o-甲基rna核苷。在一些实施方案中，所述寡聚化合物的单体亚基通过磷酸二酯核苷间键联连接。在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含对应于以下核苷酸序列之一的核苷酸序列或由其组成：
[0006]-5
’‑
ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:4)，
[0007]-5
′‑
ggagatggcagtttc-3
′
(所附序列表中的seq id no:5)，
[0008]-5
’‑
ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:6)，以及
[0009]-5
′‑
ggagatggcagtttc-3
′
(所附序列表中的seq id no:7)，
[0010]
其中tcdna核苷酸以大写字母显示，而经修饰核糖核酸核苷以小写字母显示。在一些实施方案中，其中所述寡聚化合物与一个或更多个脂质部分组合。在一些实施方案中，所述寡聚化合物选自：
[0011]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3
′
(所附序列表中的seq id no:4)，
[0012]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:5)，
[0013]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:6)，以及
[0014]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:7)。
[0015]
在另一个方面中，本发明涉及药物组合物，其包含作为活性成分的本公开内容的寡聚化合物和可药用载剂。
[0016]
在另一个方面中，本发明涉及本文中公开的寡聚化合物或本文中公开的药物组合物，其用于在有需要的患者中治疗迪谢内肌营养不良。
[0017]
在另一个方面中，本发明涉及在有需要的患者中治疗迪谢内肌营养不良的方法。在一些实施方案中，该方法包括向所述患者施用治疗有效量的本文中公开的寡聚化合物或本文中公开的药物组合物。
具体实施方式
[0018]
本发明包含可用于患有dmd的患者的剪接-转换技术的治疗性核酸分子。更特别地，本发明包含这样的治疗性核酸分子，其不存在本领域已知分子的缺点(例如毒性)并且可用于恢复半功能性肌养蛋白。
[0019]
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。本文中使用的标题仅是为了方便起见，并且不应被解释为对本发明的任何方面和实施方案的公开内容进行限制。
[0020]
表述“寡聚化合物”和术语“寡核苷酸”是指包含10至50个由核苷间键联基团连接的单体亚基的合成化合物。寡核苷酸的长度可由串联或连接在一起的单体亚基的数目表示为术语
“‑
聚体(-mer)”。例如，包含10个单体亚基的寡核苷酸为10-聚体(或十聚体)，并且包含25个单体亚基的寡核苷酸为25-聚体。本发明的寡核苷酸和寡聚化合物分别按照5’至3’末端的顺序从左到右列出。在一些实施方案中，所述10至50个单体亚基中的至少两个是三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷。在一些实施方案中，独立地选自天然存在的核苷、经修饰核苷或核苷模拟物。寡聚化合物可以是单链或双链的。在一个实施方案中，寡聚化合物是双链的(即，双链体)。在一些实施方案中，寡聚化合物是单链的。
[0021]
本文中使用的表述“单体亚基”意在包含适于寡聚物合成的所有形式的单体亚基，包括并且通常是指单体亚基例如α-d-核糖核苷、β-d-核糖核苷、α-d-2
’‑
脱氧核糖核苷、β-d-2
’‑
脱氧核糖核苷、天然存在的核苷、经修饰核苷，并且在此特别是三环-脱氧核糖核酸
(tc-dna)核苷、2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷、锁核酸(locked nucleic acid，lna)核苷、肽核酸(peptide nucleic acid，pna)核苷、2
’‑
脱氧2
’‑
氟-阿拉伯糖核苷、己糖醇核酸(hexitol nucleic acid，hna)核苷；以及磷酸二酰胺吗啉代(phosphorodiamidate morpholino，pmo)核苷、核苷的模拟物、天然存在的核苷酸、经修饰核苷酸，并且在此特别是三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷酸和2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷酸，以及核苷酸的类似物。有利地，本文中使用的表述“单体亚基”是指天然存在的核苷和经修饰核苷，并且在此特别是指核糖核苷、脱氧核糖核苷、三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷、2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷、锁核酸(lna)核苷、肽核酸(pna)核苷、2
’‑
脱氧-2
’‑
氟-阿拉伯糖核苷、己糖醇核酸(hna)核苷和磷酸二酰胺吗啉代(pmo)核苷，并且是指天然存在的核苷酸和经修饰核苷酸，且在此特别是指核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷酸、2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷酸、锁核酸(lna)核苷酸、肽核酸(pna)核苷酸、2
’‑
脱氧-2
’‑
氟-阿拉伯糖核苷酸、己糖醇核酸(hna)核苷酸和磷酸二酰胺吗啉代(pmo)核苷酸。更特别地，本文中使用的表述“单体亚基”是指经修饰核苷酸，并且在此特别是三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷酸和2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷酸。
[0022]
术语“碱基类似物”，也称为“经修饰核碱基”，是指具有模拟天然dna或rna碱基的分子结构的dna或rna碱基的化学修饰。碱基类似物包括但不限于5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷、5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和n-2、n-6和o-6取代的嘌呤(包括2-氨基丙基腺嘌呤)、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。碱基类似物还包括但不限于5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基衍生物和另一些烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基衍生物和另一些烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶、2-硫胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶(以及嘧啶碱基的另一些炔基衍生物)、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤代、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羟基和另一些8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤代并且特别是5-溴、5-三氟甲基和另一些5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-f-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮-腺嘌呤、3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮-腺嘌呤、通用碱、三环嘧啶例如吩嗪胞苷(1h-嘧啶并[5,46][1，4]苯并嗪-2(3h)-酮)、吩噻嗪胞苷(1h-嘧啶并[5,4-6][1,4]苯并噻嗪-2(3h)-酮)、g-钳(g-clamp)例如取代的吩嗪胞苷(例如9-(2-氨基乙氧基)-h-嘧啶并[5,4-6][1,4]苯并嗪-2(3h)-酮)、咔唑胞苷(2h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-酮)、以及吡啶吲哚胞苷(2h-吡啶并[3’,2’:4,5]吡咯并[2,3-《f]嘧啶-2-酮)。碱基类似物还可包括其中嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环(例如7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮鸟苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮)取代的那些。经修饰核碱基的制备是本领域已知的。
[0023]
本文中使用的术语“互补”是指可通过互补核苷或核苷酸之间的传统沃森-克里克(watson crick)碱基配对或其他非传统类型的配对(例如，hoogsteen或反向hoogsteen氢键)与另一核酸序列形成氢键的核酸序列。“互补”(或“可特异性杂交”)是指示足够程度的互补性或精确配对以使寡聚化合物与前mrna或mrna靶标之间发生稳定和特异性结合的术语。
[0024]
本领域应理解，核酸分子不需要与待互补的靶核酸序列100％互补。也就是说，两
个核酸分子可以不完全互补。互补性由核酸分子中可与第二核酸分子形成氢键的连续残基的百分比表示。例如，如果第一核酸分子具有10个核苷酸，并且第二核酸分子具有10个核苷酸，则第一与第二核酸分子之间的5、6、7、8、9或10个核苷酸的碱基配对分别代表50％、60％、70％、80％、90％和100％的互补性。“完全”互补的核酸分子意指其中第一核酸分子的所有连续残基与第二核酸分子中相同数目的连续残基形成氢键的那些，其中所述核酸分子要么都具有相同数目的核苷酸(即，具有相同的长度)要么两个分子具有不同的长度。
[0025]
表述“反义寡核苷酸”是指与靶序列互补的dna或rna或寡聚化合物的单链。反义寡核苷酸能够与具有互补编码或非编码核苷酸序列的mrna或前mrna杂交。在这种情况下，该靶核苷酸序列对应于所附序列表中的序列seq id no:1，并且通常对应于与所附序列表中的seq id no:2的区域 48 62相对应的序列。
[0026]
在本公开内容的范围内，两个核苷酸序列之间(或两个氨基酸序列之间)的“同一性百分比”意指进行比较的两个序列之间的相同核苷酸(或氨基酸)残基的百分比，该百分比是在两个序列之间实现最佳比对(最优比对)之后获得的。本领域技术人员知道能够获得这样的同一性百分比并且涉及同源算法或计算机程序例如blast程序的不同技术。
[0027]
术语“三环-dna”(tc-dna)是指一类约束性寡脱氧核糖核苷酸类似物，其中每个核苷酸通过引入环丙烷环来限制主链的构象柔性并优化扭转角y的主链几何形状而被修饰。详细地，tc-dna在结构上与dna的不同之处在于核苷的中心c(3’)与c(5’)之间的另外的乙烯桥，环丙烷单元与该乙烯桥融合以进一步增强结构刚性。
[0028]
本文中使用的术语“核苷间键联基团”是指本领域已知的能够连接(优选连接)所述三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷与另外的tc-dna核苷、除tc-dna核苷之外的核苷、非核苷(包括肽、蛋白质)的任何键联基团。教导这样的可能的键联基团的代表性专利为但不限于美国专利5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,264,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；5,677,439；5,646,269和5,792,608。因此，术语“核苷间键联基团”包括磷键联基团和非磷键联基团。非磷键联基团不包含磷原子，并且非磷键联基团的一些实例包括，并且通常且优选地选自烷基、芳基、优选地苯基、苄基或苯甲酰基、环烷基、亚烷基芳基、亚烷基二芳基、烷氧基、烷氧基亚烷基、烷基磺酰基、炔烃、醚，各自彼此独立地任选地被氰基、硝基、卤素取代；羧基、酰胺、胺、氨基、亚胺、硫醇、硫化物、亚砜、砜、氨基磺酸酯、磺酸酯、磺酰胺、硅氧烷或其混合物。通常且优选地，所述核苷间键联基团是磷键联基团，并且所述磷键联基团是指包含处于p
iii
或pv价态的磷原子的部分。进一步优选地，所述核苷间键联基团是磷键联基团。再次进一步优选地，所述核苷间键联基团选自磷酸二酯键联基团、磷酸三酯键联基团、硫代磷酸酯键联基团、二硫代磷酸酯键联基团、膦酸酯键联基团，优选h-膦酸酯键联基团或甲基膦酸酯键联基团；硫代膦酸酯键联基团，优选h-硫代膦酸酯键联基团、甲基硫代膦酸酯键联基团；亚膦酸酯键联基团、硫代氨基磷酸酯键联(phosphorthioamidate linkage)、氨基磷酸酯键联基团或亚磷酸酯键联基团。在一些实施方案中，所述核苷间键联基团选自磷酸二酯键联基团、磷酸三酯键联基团、硫代磷酸酯键联基团或膦酸酯键联基团，其中膦酸酯优选为h-膦酸酯键联基团或甲基膦酸酯键联基团。
[0029]
本文中使用的，术语“核苷”是指包含核碱基和与所述核碱基共价连接的糖的化合
物。此外，术语“核苷”意指包括可使用天然或化学寡聚物合成并入寡聚物中的所有形式的天然存在的或经修饰的核苷或核苷模拟物。通常且优选地，本文中使用的术语“核苷”是指天然存在的核苷、经修饰核苷或核苷类似物。术语“经修饰核苷”旨在包括如本领域技术人员已知和本文中所述的对核苷的糖和/或核碱基进行的修饰。术语“核苷模拟物”旨在包括用于替代糖和核碱基的那些结构。核苷模拟物的一些实例包括这样的核苷，其中核碱基被吩嗪部分(例如9-(2-氨基乙氧基)-1,3-二氮杂吩嗪-2-酮基团)替代，并且糖部分被环己烯基或双环[3.1.0]己基部分替代。术语“核苷”还包括修饰(例如多于一种核碱基修饰、多于一种糖修饰或者至少一种核碱基和至少一种糖修饰)的组合。
[0030]
核苷的糖包括但不限于单环、双环或三环环系统，优选三环或双环系统或者单环核糖或脱氧核糖。糖的修饰还包括但不限于经修饰立体化学构型、基团的至少一个取代或基团的至少一个缺失。经修饰糖通常且优选地为rna和dna中天然存在的核糖基部分(即，呋喃糖基部分)的修饰形式，例如双环糖、四氢吡喃、2
’‑
修饰的糖、3
’‑
修饰的糖、4
’‑
修饰的糖、5
’‑
修饰的糖或4
’‑
取代的糖。合适的糖修饰的一些实例是技术人员已知的，并且包括但不限于2’,3’和/或4’取代的核苷(例如4
’‑
s-修饰的核苷)；2
’‑
o-修饰的rna核苷酸残基，例如2
’‑
o-烷基或2
’‑
o-(取代的)烷基，例如2
’‑
o-甲基、2
’‑
o-(2-氰乙基)、2
’‑
o-(2-甲氧基)乙基(2
’‑
moe)、2
’‑
o-(2-硫甲基)乙基；2
’‑
o-(卤代烷氧基)甲基，例如2
’‑
o-(2-氯乙氧基)甲基(mcem)，2
’‑
o-(2,2-二氯乙氧基)甲基(dcem)；2
’‑
o-烷氧基羰基，例如2
’‑
o-[2-(甲氧基羰基)乙基](moce)、2
’‑
o-[2-(n-甲基氨基甲酰基)乙基](mce)、2
’‑
o-[2-(n,n-二甲基氨基甲酰基)乙基](dmce)，特别是2
’‑
o-甲基修饰或2
’‑
o-甲氧基乙基(2
’‑
o-moe)；或者其他经修饰糖部分，例如吗啉代(pmo)、阳离子吗啉代(pmoplus)或经修饰吗啉代基团，例如pmo-x。术语“pmo-x”是指这样的经修饰吗啉代基团，其包含至少一个3’或5’端修饰，例如3
’‑
荧光标签、3’猝灭剂(例如3
’‑
羧基荧光素、3
’‑
基因工具蓝(gene tools blue)、3
’‑
丽丝胺、3
’‑
dabcyl)、3
’‑
亲和标签和用于化学键联的官能团(例如3
’‑
生物素、3
’‑
伯胺、3
’‑
二硫酰胺、3
’‑
吡啶基二硫代)、5
’‑
末端修饰(5
’‑
伯胺、5
’‑
dabcyl)、3
’‑
叠氮化物、3
’‑
炔烃、5
’‑
叠氮化物、5
’‑
炔烃，或如wo2011/150408和us2012/0065169中公开的。
[0031]“双环糖部分”包含两个相互连接的环系统，例如双环核苷，其中糖部分具有2
’‑
o-ch(烷基)-4’或2
’‑
o-ch2-4’基团、锁核酸(lna)、木糖基-lna、α-l-lna、β-d-lna、cet(2
’‑
o,4
’‑
c约束性乙基)lna、cmoet(2
’‑
o,4
’‑
c约束性甲氧基乙基)lna、亚乙基桥联核酸(ena)、己糖醇核酸(hna)、氟化hna(f-hna)、吡喃糖基-rna(pyranosyl-rna，p-rna)或3
’‑
脱氧吡喃糖基-dna(p-dna)
[0032]
本文中使用的术语“脂质部分”是指通常且有利地来源于烃、油、脂肪(例如脂肪酸、甘油酯)、甾醇、类固醇以及这些化合物的衍生物形式的部分。合适的脂质部分包括来源于脂肪酸及其衍生物、烃及其衍生物以及甾醇例如胆固醇的部分。本文中使用的术语脂质部分还包括两亲化合物部分，其包含脂质部分和亲水性部分二者。
[0033]
本文中使用的术语“烃”涵盖仅由氢和碳通过共价键连接的化合物。该术语涵盖开链(脂族)烃，包括直(非支化)链和支链烃，以及饱和和单不饱和和多不饱和烃。该术语还涵盖包含一个或更多个芳环的烃，优选该术语不包括含有一个或更多个芳环的烃。术语“直的”和“非支化”在本文中可互换使用。
[0034]
本文中使用的术语“脂肪酸”是指以羧酸基团终止的烃链，其中所述烃链通常且优
选地为通常为3至32个碳长的烷基或烯基，并且因此其是饱和或不饱和的，并且其任选地被以下取代：一个或更多个，优选一个羧基(-cooh)；一个或更多个，优选一个c
1-32
烷基；一个或更多个，优选一个磷酸酯基团(hop(o)(oh)o-)；一个或更多个，优选一个膦酸酯基团(hop(o)o-)；一个或更多个，优选一个硫代磷酸酯基团(hop(o)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二硫代磷酸酯基团(hop(s)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二磷酸酯基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-)；一个或更多个，优选一个三磷酸酯基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-)；一个或更多个苯基(-c6h5)；一个或更多个被卤素，优选碘或羧基取代的苯基。如果脂肪酸包含一个或更多个双键，并因此是不饱和的，则可能存在顺式或反式几何异构。本文中使用的术语“脂肪酸部分”是指来源于本文中定义的脂肪酸的部分，其中所述脂肪酸的一个羧基(-cooh)发生变化并且是所述脂肪酸部分的-c(o)-基团，根据本发明，该-c(o)-基团与所述寡核苷酸直接连接或经由间隔物连接。优选地，本文中使用的术语“脂肪酸”是指以羧酸基团终止的烃链，其中所述烃链通常且优选地为通常为3至32个碳长的烷基或烯基，并因此其是饱和或不饱和的，并且其任选地被以下取代：一个或更多个，优选一个羧基(-cooh)；一个或更多个，优选一个c
1-32
烷基；一个或更多个，优选一个磷酸酯基团(hop(o)(oh)o-)；一个或更多个，优选一个膦酸酯基团(hop(o)o-)；一个或更多个，优选一个硫代磷酸酯基团(hop(o)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二硫代磷酸酯基团(hop(s)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二磷酸酯基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-)；一个或更多个，优选一个三磷酸酯基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-)；一个或更多个苯基(-c6h5)；一个或更多个被卤素，优选碘或羧基取代的苯基。优选地，所述脂肪酸具有偶数个碳原子，其中所述脂肪酸的羧基(-cooh)或所述脂肪酸部分的所述-c(o)-基团的碳原子包括在碳原子数的计数中。
[0035]
因此，直链脂肪酸优选包含偶数或奇数(优选偶数)个碳原子(通常为3至32个碳)，并且可以是饱和或不饱和的，并且可包含或被修饰以包含多种取代基，优选一个或更多个，优选一个羧基(-cooh)；一个或更多个，优选一个c
1-32
烷基；一个或更多个，优选一个磷酸酯基团(hop(o)(oh)o-)；一个或更多个，优选一个膦酸酯基团(hop(o)o-)；一个或更多个，优选一个硫代磷酸酯基团(hop(s)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二硫代磷酸酯基团(hop(s)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二磷酸酯基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o)；一个或更多个，优选一个三磷酸酯基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-)；一个或更多个苯基(-c6h5)；一个或更多个被卤素，优选碘或羧基取代的苯基。
[0036]
术语“脂肪二酸”是指如本文中定义但在ω位置处具有另外的羧酸基团的脂肪酸。因此，脂肪二酸是二羧酸。本文中使用的术语“脂肪二酸部分”是指来源于如本文中定义的脂肪二酸的部分，其中所述脂肪二酸的一个羧基(-cooh)发生变化并且是所述脂肪二酸部分的-c(o)-基团，根据本发明，该-c(o)-基团与所述寡核苷酸直接连接或经由间隔物连接。脂肪二酸的一些优选实施方案是任选地被以下取代的饱和脂肪二酸：一个或更多个，优选一个c
1-32
烷基；一个或更多个，优选一个磷酸酯基团(hop(o)(oh)o-)；一个或更多个，优选一个膦酸酯基团(hop(o)o-)；一个或更多个，优选一个硫代磷酸基团(hop(o)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二硫代磷酸基团(hop(s)(sh)o-)；一个或更多个，优选一个二磷酸基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o-)(oh)-o-)；一个或更多个，优选一个三磷酸酯基团(ho-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-p(o)(oh)-o-)；一个或更多个，优选一个苯基(-c6h5)；一个或更多个，优选一个
被卤素，优选碘或羧基取代的苯基。优选的一些实例包括任选地被一个c
6-24
烷基(例如3-十五烷基戊二酸(pdg))取代的戊二酸。
[0037]
本文中使用的术语“烷基磷酸酯部分”是指c
3-32
烷基-o-p(o)(oh)-o-的基团，其中所述c
3-32
烷基独立地选自本文中定义的c
3-32
烷基。
[0038]
本文中使用的术语“烷基膦酸酯部分”是指c
3-32
烷基-o-p(o)-o-的基团，其中所述c
3-32
烷基独立地选自本文中定义的c
3-32
烷基。
[0039]
本文中使用的术语“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成、不包含不饱和、具有1至32个碳原子(例如，(c
1-32
)烷基或c
1-32
烷基)的直或支化的烃链基团，并且其可以或通常通过单键与分子的其余部分连接。无论何时出现在本文中，数值范围例如“1至32”是指在给定范围中的每个整数。例如，“1至32个碳原子”意指烷基可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等、多至且包括32个碳原子组成，但是本定义还旨在涵盖其中未具体指定数值范围的术语“烷基”的出现。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(可与异丙基互换使用；本文可互换地缩写为ipr或pri)、正丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基(可与1,1-二甲基乙基或叔丁基互换使用)、正戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。除非说明书中另有具体说明，否则烷基任选地被一个或更多个取代基取代，所述取代基独立地为烯基、烷氧基、羧基(-cooh)、杂烷基、杂烯基、羟基、磷酸酯基(-op(o)(oh)o-)、膦酸酯基(-op(o)o-)、任选地被卤素，优选碘或羧基取代的苯基(-c6h4)。优选地，本文中使用的术语“烷基”是指本文中定义的未经取代的烷基。
[0040]
本文中使用的术语“亚烷基”是指来源于本文中定义的烷基的直或支化的烃链双基团，其中所述烷基的一个氢被切割掉，产生所述亚烷基的第二基团。举例来说，亚烷基的一些实例是-ch
2-、-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch
2-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-ch
2-或-ch(ch2ch3)-。
[0041]
本文中使用的术语“烯基”是指仅由碳和氢原子组成、包含至少一个双键、并具有3至32个碳原子(即(c
3-32
)烯基或c
3-32
烯基)的直或支化的烃链基团，其可以或通常通过单键与分子的其余部分连接。无论何时出现在本文中，数值范围例如“3至32”是指给定范围内的每个整数——例如，“3至32个碳原子”意指烯基可由3个碳原子、4个碳原子等、多至且包括32个碳原子组成。典型的烯基包括但不限于乙烯基(即，乙烯基)、丙-1-烯基(即，烯丙基)、丁-1-烯基、戊-1-烯基和戊-1,4-二烯基。每个双键可以是(e)或(z)构型。因此，如果适用的话，烯基可包括其(e)-构型、其(z)-构型、及其任意比例的混合物中的每个所述双键。除非说明书中另有具体说明，否则烯基任选地被一个或更多个取代基取代，所述取代基独立地为烯基、烷氧基、羧基(-cooh)、杂烷基、杂烯基、羟基、磷酸酯基(-op(o)(oh)o-)、膦酸酯基(-op(o)o-)、任选地被卤素，优选碘或羧基取代的苯基(-c6h4)。优选地，本文中使用的术语“烯基”是指本文中定义的未经取代的烯基。
[0042]
本文中使用的术语“亚烯基”是指来源于本文中定义的烯基的直或支化的烃链双基团，其中所述烯基的一个氢被切割掉，产生所述亚烯基的第二基团。
[0043]
术语“炔基”是指仅由碳和氢原子组成、包含至少一个三键、具有2至10个碳原子(即(c
2-32
)炔基或c
2-32
炔基)的直或支化的烃链基团。无论何时出现在本文中，数值范围例如“2至32”是指给定范围内的每个整数——例如，“2至32个碳原子”意指炔基可以由2个碳原子、3个碳原子等、多至且包括32个碳原子组成。典型的炔基包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。除非说明书中另有具体说明，否则炔基任选地被一个或更多个取
代基取代，所述取代基独立地为烯基、羧基(-cooh)、杂烷基、杂烯基、磷酸酯基(-op(o)(oh)o-)、膦酸酯基(-op(o)o-)、任选地被卤素，优选碘或羧基取代的苯基(-c6h4)。优选地，本文中使用的术语“炔基”是指本文中定义的未经取代的炔基。
[0044]
本文中使用的术语“亚炔基”是指来源于本文中定义的炔基的直或支化的烃链双基团，其中所述炔基的一个氢被切割掉，产生所述亚炔基的第二基团。
[0045]
术语“烷氧基”是指基团-o-烷基，其包括通过氧与母体结构连接的1至32个碳原子的直的、支化的构型及其组合。一些实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基和环己氧基。“低级烷氧基”是指含有一至六个碳的烷氧基，也称为(c
1-6
)烷氧基或o-c
1-6
烷基。
[0046]
术语“经取代的烷氧基”是指其中烷基成分被取代的烷氧基(即-o-(经取代的烷基))。除非说明书中另有具体说明，否则烷氧基的烷基部分任选地被一个或更多个取代基取代，所述取代基独立地为烯基、羧基(-cooh)、杂烷基、杂烯基、磷酸酯基(-op(o)(oh)o-)、膦酸酯基(-op(o)o-)、任选地被卤素，优选碘或羧基取代的苯基(-c6h4)。
[0047]
术语“酰基”是指基团(烷基)-c(o)-、(芳基)-c(o)-、(杂芳基)-c(o)-和(杂烷基)-c(o)-，其中该基团通过羰基官能团与母体结构连接。除非说明书中另有具体说明，否则酰基的烷基、芳基或杂芳基部分任选地被一个或更多个取代基取代，所述取代基独立地为烯基、羧基(-cooh)、杂烷基、杂烯基、磷酸酯基(-op(o)(oh)o-)、膦酸酯基(-op(o)o-)、任选地被卤素，优选碘或羧基取代的苯基(-c6h4)。
[0048]
除非说明书中另有具体说明，否则术语“氨基”或“胺”是指-n(ra)2基团，其中每个ra独立地是氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。当-n(ra)2基团具有两个除氢之外的ra取代基时，其可以与氮原子组合来形成4-、5-、6-或7-元环。例如，-n(ra)2旨在包括但不限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。除非说明书中另有具体说明，否则氨基或胺基任选地被一个或更多个取代基取代，所述取代基独立地为烯基、羧基(-cooh)、杂烷基、杂烯基、磷酸酯基(-op(o)(oh)o-)、膦酸酯基(-op(o)o-)、任选地被卤素，优选碘或羧基取代的苯基(-c6h4)。
[0049]
术语“芳族的”或“芳基”或“ar”是指具有6至10个环原子的芳族基团(例如c6至c
10
芳族或c6至c
10
芳基)，其具有至少一个具有共轭π电子系统的环，其是碳环(例如苯基、芴基和萘基)。由经取代的苯衍生物形成并在环原子处具有自由价的二价基团称为经取代的亚苯基。来源于单价多环烃基的二价基团(其名称通过从具有自由价的碳原子去除一个氢原子而以
“‑
基(-yl)”结尾)是通过在相应单价基团的名称上添加
“‑
亚基(-idene)”来命名的，例如，具有两个连接点的萘基被称为亚萘基。无论何时出现在本文中，数值范围例如“6至10”是指给定范围内的每个整数；例如，“6至10个环原子”意指芳基可以由6个环原子、7个环原子等、多至且包括10个环原子组成。该术语包括单环或稠环多环(即，共享相邻环原子对的环)基团。
[0050]
术语“芳烷基”或“芳基烷基”是指这样的(芳基)烷基-基团，其中芳基和烷基如本文中所公开，并且其任选地被分别描述为是芳基和烷基的合适取代基的一个或更多个取代基取代。
[0051]
本文中可互换使用的术语“羧基”或“羧基的”是指-(c＝o)oh基团。
[0052]
术语“环烷基”是指仅包含碳和氢并且可以是饱和的或部分不饱和的单环或多环
基团。环烷基包括具有3至10个环原子的基团(即(c
3-10
)环烷基或c
3-10
环烷基)。无论何时出现在本文中，数值范围例如“3至10”是指给定范围内的每个整数——例如，“3至10个碳原子”意指环烷基可以由3个碳原子等、多至且包括10个碳原子组成。环烷基的一些说明性实例包括但不限于以下部分：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、降冰片基(norbornyl)等。
[0053]
术语“氟烷基”是指被一个或更多个如上定义的氟基团取代的如上定义的烷基，例如三氟甲基、二氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基等。氟烷基基团的烷基部分可以如上对烷基定义的那样任选地被取代。
[0054]
本文使用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘，优选碘。在一些实施方案中，卤素取代基是碘。
[0055]
本文中使用的术语“杂烷基”和“杂烯基”是指任选地经取代的烷基和烯基基团，并且其具有一个或更多个选自除碳之外的原子的主链链原子，例如氧、氮、硫、磷或其组合。可以给出数值范围，例如c1至c4杂烷基，其是指总的链长，在该实例中是4个原子长。
[0056]
术语“杂芳基”或“杂芳族的”或“hetar”是指包括一个或更多个选自氮、氧和硫的环杂原子并且其可以是单环、双环、三环或四环环系的5至18元芳族基团(例如，c5至c
13
杂芳基)。无论何时出现在本文中，数值范围例如“5至18”是指给定范围内的每个整数——例如，“5至18个环原子”意指杂芳基可由5个环原子、6个环原子等、多至且包括18个环原子组成。来源于单价杂芳基的二价基团(其名称通过从具有自由价的原子去除一个氢原子而以
“‑
基”结尾)通过向相应单价基团的名称添加
“‑
亚基”来命名——例如，具有两个连接点的吡啶基是亚吡啶基。
[0057]
术语“立体异构体”是指具有相同化学结构，但在空间中原子或基团的排列方面不同的化合物。
[0058]“非对映体”是指具有两个或更多个手性中心的立体异构体，其中化合物不是彼此的镜像。非对映体具有不同的物理特性，例如熔点、沸点、谱性质以及化学和生物反应性。非对映体的混合物可以在高分辨率分析程序(例如电泳和色谱)下分离。
[0059]“对映体”是指化合物的两种立体异构体，其是彼此不可重叠的镜像。
[0060]
本文中使用的立体化学定义和惯例通常遵循s.p.parker,ed.,mcraw-hiff dictionary of chemical terms(1984),mcgraw-hill book company,new york；和eliel,e.and wilen,s.,“stereochemistry of organic compounds”,john wiley&sons,inc.,new york,1994。
[0061]
化学式中的符号(*)、(#)和(
§
)表示i)连接点，ii)基团，和/或iii)非共享电子。
[0062]
本文中使用的术语“反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide，aon)”是指能够与具有互补核苷酸序列的mrna或前mrna相互作用和/或杂交从而改变基因表达的寡核苷酸或寡聚化合物。
[0063]
本文中使用的术语“保护基”旨在意指这样的基团，其选择性地阻断多官能化合物中的一个或更多个反应位点，使得化学反应可以选择性地在另一个未受保护的反应位点上进行，并且该基团可在选择性反应完成之后被容易地除去或脱保护。多种保护基例如在protecting groups in organic synthesis,t.w.greene and p.g.m.wuts,第3版,john wiley&sons,new york 1999中公开。
[0064]
本文中可互换使用的术语“针对氨基的保护基”“针对氨基基团的保护基”或“氨基保护基”是本领域公知的，并且包括在以下中详细描述的那些：protecting groups in organic synthesis,t.w.greene and p.g.m.wuts,第3版,john wiley&sons,new york(1999)；greene’s protective groups in organic synthesis,p.g.m.wuts,第5版,john wiley&sons,(2014)；以及current protocols in nucleic acid chemistry,由s.l beaucage et al.编辑,06/2012,并在此特别是在第2章中。适于本发明的“氨基保护基”包括并且通常且优选地在每次出现时独立地选自氨基甲酸甲酯、氨基甲酸乙酯、9-芴基甲基氨基甲酸酯(9-fluorenylmethyl carbamate，fmoc)、9-(2-磺基)芴基甲基氨基甲酸酯、2,7-二叔丁基-[9-(10,10-二氧代-10,10,10,10-四氢噻吨基)]甲基氨基甲酸酯(dbd-tmoc)、4-甲氧基苯甲酰基氨基甲酸酯(phenoc)、2,2,2-三氯乙基氨基甲酸酯(troc)、2-三甲基甲硅烷基乙基氨基甲酸酯(teoc)、2-苯基乙基氨基甲酸酯(hz)、1,1-二甲基-2,2-二溴乙基氨基甲酸酯(db-t-boc)、1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙基氨基甲酸酯(tcboc)、氨基甲酸苄酯(cbz)、对甲氧基苄基氨基甲酸酯(moz)和2,4,6-三甲基苄基氨基甲酸酯、(4-甲氧基苯基)二苯基甲基(mmtr)；以及甲酰胺、乙酰胺、苯甲酰胺。
[0065]
本文中可互换使用的术语“针对羟基的保护基”“针对羟基基团的保护基”或“羟基保护基”是本领域公知的，并且包括在以下中详细描述的那些：protecting groups in organic synthesis,t.w.greene and p.g.m.wuts,第3版,john wiley&sons,new york(1999)；greene’s protective groups in organic synthesis,p.g.m.wuts,第5版,john wiley&sons,(2014)，以及current protocols in nucleic acid chemistry,由s.l.beaucage et al.编辑,06/2012,并在此特别是在第2章中。在某个实施方案中，本发明的“羟基保护基”包括并且通常且优选地在每次出现时独立地选自乙酰基、苯甲酰基、苄基、β-甲氧基乙氧基甲基醚(mem)、二甲氧基三苯甲基、[双-(4-甲氧基苯基)苯基甲基](dmtr)、甲氧基甲基醚(mom)、甲氧基三苯甲基[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基](mmt)、对甲氧基苄基醚(pmb)、甲硫基甲基醚、新戊酰(pivaloyl，piv)、四氢吡喃基(thp)、四氢呋喃(thf)、三苯甲基(三苯基甲基，tr)、甲硅烷基醚，例如叔丁基二苯基甲硅烷基醚(tbdps)、三甲基甲硅烷基(tms)、叔丁基二甲基甲硅烷基(tbdms)、三异丙基甲硅烷基氧基甲基(tom)和三异丙基甲硅烷基(tips)醚；甲基醚、乙氧基乙基醚(ee)。
[0066]
本发明的“羟基保护基”的一些优选实例包括并且在每次出现时独立地选自乙酰基、叔丁基、叔丁氧基甲基、甲氧基甲基、四氢吡喃基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、对氯苯基、2,4-二硝基苯基、苄基、苯甲酰基、对苯基苯甲酰基、2,6-二氯苄基、二苯基甲基、对硝基苄基、三苯基甲基(三苯甲基)、4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基(tbdms)、叔丁基二苯基甲硅烷基(tbdps)、三苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、苯甲酰基甲酸酯、氯乙酰基、三氯乙酰基、三氟乙酰基、新戊酰、9-芴基碳酸甲酯、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯、4-单甲氧基三苯甲基(mmtr)、4,4
’‑
二甲氧基三苯甲基(dmtr)和4,4
’‑4”‑
三甲氧基三苯甲基(tmtr)、2-氰基乙基(ce或cne)、2-(三甲基甲硅烷基)乙基(tse)、2-(2-硝基苯基)乙基、2-(4-氰基苯基)乙基、2-(4-硝基苯基)乙基(npe)、2-(4-硝基苯基磺酰基)乙基、3,5-二氯苯基、2,4-二甲基苯基、2-硝基苯基、4-硝基苯基、2,4,6-三甲基苯基、2-(2-硝基苯基)乙基、丁基硫羰基、4,4
’‑4”‑
三(苯甲酰氧基)三苯甲基、二苯基氨基甲酰基、乙酰丙基(levulinyl)、2-(二
溴甲基)苯甲酰基(dbmb)、2-(异丙基硫代甲氧基甲基)苯甲酰基(ptmt)、9-苯基呫吨-9-基(pixyl)或9-(对甲氧基苯基)黄嘌呤-9-基(mox)。
[0067]
本文中使用并且缩写为bx的术语“核碱基”是指未经修饰或天然存在的核碱基以及经修饰或非天然存在的核碱基及其合成模拟物。核碱基是包含一个或更多个能够与核酸的杂环碱基形成氢键的原子或原子团的任何杂环碱基。
[0068]
核碱基的典型且优选的一些实例是嘌呤碱基或嘧啶碱基，其中优选地所述嘌呤碱基是嘌呤或经替换的嘌呤，并且所述嘧啶碱基是嘧啶或经替换的嘧啶。更优选地，核碱基是(i)腺嘌呤(a)、(ii)胞嘧啶(c)、(iii)5-甲基胞嘧啶(mec)、(iv)鸟嘌呤(g)、(v)尿嘧啶(u)或(vi)5-甲基尿嘧啶(meu)，或者(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的衍生物。术语“(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的衍生物”和“核酸碱基衍生物”在本文中可互换使用。(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)的衍生物以及核碱基衍生物分别是本领域技术人员已知的，并例如在sharma v.k.et al,med.chem.commun.,2014,5,1454-1471中描述，并且包括但不限于5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、烷基腺嘌呤(例如6-甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤)、烷基鸟嘌呤(例如6-甲基鸟嘌呤、2-丙基鸟嘌呤)、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶、5-卤代胞嘧啶、炔基嘧啶碱基(例如5-丙炔基(-c＝c-ch3)尿嘧啶、5-丙炔基(-c＝c-ch3)胞嘧啶)、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、假尿嘧啶、4-硫尿嘧啶；8-取代的嘌呤碱基(例如8-卤代-、8-氨基-、8-硫醇-、8-硫代烷基-、8-羟基-腺嘌呤或鸟嘌呤)、5-取代的嘧啶碱基(例如5-卤代-，特别是5-溴-、5-三氟甲基-尿嘧啶或-胞嘧啶)；7-甲基鸟嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-f-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、7-脱氮腺嘌呤、3-脱氮鸟嘌呤、3-脱氮腺嘌呤、疏水碱基、泛主碱基(promiscuous base)、尺寸扩大碱基(size-expanded base)或氟化碱基。在某些实施方案中，核碱基包括但不限于三环嘧啶，例如1，3-二氮杂吩嗪-2-酮、1，3-二氮杂吩噻嗪-2-酮或9-(2-氨基乙氧基)-1，3-二氮杂吩嗪-2-酮(g-钳)。术语“核碱基衍生物”还包括其中嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环(例如7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮鸟苷、2-氨基吡啶或2-吡啶酮)替代的那些。本公开内容的另一些核酸碱基包括但不限于技术人员已知的那些(例如美国专利3,687,808；swayze et al.，the medicinal chemistry of oligonucleotides，in antisense a drug technology，第6章，第143至182页(crooke，s.t.，编辑，2008)；the concise encyclopedia of polymer science and engineering，kroschwitz，j.i.，编辑，john wiley&sons，1990，第858至859页；englisch etal.，angewandte chemie，international edition，1991，第30卷(6)，第613至623页；sanghvi，y.s.，antisense research and applications，crooke，s.t.和lebleu，b.编辑，crc出版，1993，第273至302页)。术语“核碱基衍生物”还包括其中嘌呤或嘧啶碱基被对应于本公开内容的间隔物(特别是用于内部连接所述寡聚化合物，优选所述寡核苷酸的所述一个或更多个脂质部分)的部分取代的那些。对应于间隔物的所述部分的特定连接是本领域技术人员已知的。优选的核碱基衍生物包括甲基化腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶和胞嘧啶以及核碱基衍生物，优选(i)、(ii)、(iii)或(iv)的核碱基衍生物，其中各自的氨基(优选环外氨基)被酰基保护基或二烷基甲酰胺基(优选二甲基甲酰胺基(dimethylformamidino，dmf))保护，并且还包括核碱基衍生物，例如2-氟尿嘧啶、2-氟胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、2,6-二氨基
嘌呤、氮杂胞嘧啶和嘧啶类似物例如假异胞嘧啶和假尿嘧啶。经修饰核碱基的制备是本领域已知的，并且描述于美国专利no.3,687,808，4,845,205；5，130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,645,985；5,750,692；5,830,653；5,763,588；6,005,096；和5,681,941。
[0069]
在一些实施方案中，一个或更多个脂质部分彼此独立地在以下处与所述寡聚化合物连接：(i)所述寡聚化合物的末端残基，(ii)所述寡聚化合物的5’末端，(iii)所述寡聚化合物的3’末端；(iv)所述寡聚化合物的内部残基。
[0070]
术语“末端”是指寡聚化合物的端部或末端，其中整数(3’，5’，等)表示寡聚化合物的核苷中包含的糖的碳原子。本文中使用的术语“5’末端基团”或“3’末端基团”是指分别位于5’末端或3’末端的基团。
[0071]
本文中可互换使用的术语“天然的”或“天然存在的”是指天然来源的化合物。
[0072]
术语“外显子包含(exon inclusion)”是指寡核苷酸介导的过程，例如反义寡核苷酸与靶标前mrna进行碱基配对以阻断外显子或内含子剪接增强子，并阻断相应的剪接阻遏物和/或破坏不利的二级结构，导致剪接体更有效地识别外显子并恢复外显子表达。
[0073]
术语“剪接”是本领域技术人员已知的，并因此在本文中使用。本文中使用的术语“剪接”是指转录后前mrna的修饰，其中将内含子去除并连接外显子。
[0074]
本文中使用的表述“外显子跳读”是指导致从完全加工的mrna中去除原本将留在成熟mrna中的外显子的过程。通过阻断剪接体接近一个或更多个剪接供体或受体位点，或者涉及剪接定义的外显子或内含子内的任何其他位点，寡核苷酸可以阻止剪接反应并导致靶外显子从完全加工的mrna中排除。外显子跳读是在前mrna的成熟过程期间在细胞核中实现的。外显子跳读包括通过使用与前mrna中关键序列互补的反义寡核苷酸来掩蔽参与靶外显子剪接的这样的关键序列。例如，本文中提供的寡聚化合物可通过掩蔽肌养蛋白前mrna内的内含子/外显子连接处的剪接位点，从而在将前mrna加工成成熟mrna期间促进突变外显子的缺失而适用于外显子跳读。在本发明中，如前所定义的寡聚化合物能够引发人dmd前mrna外显子51的跳读。本文中使用且详细描述的表述“引发人dmd前mrna外显子51的跳读”是指排除外显子51，从而挽救dmd mrna阅读框(例如，在来自具有适当突变的患者的细胞中)，所述dmd mrna阅读框可被翻译成截短的半功能蛋白。
[0075]
表述“体外”是指在对象体外发生的事件。体外测定涵盖其中使用活细胞或死细胞的基于细胞的测定，并且也可涵盖其中不使用完整细胞的无细胞测定。相反，表述“体内”是指在对象的体内发生的事件。
[0076]
表述“有效量”或“治疗有效量”是指足以实现预期应用(包括但不限于疾病治疗)的本文中所述的化合物或化合物之组合的量。治疗有效量可根据预期的应用(体外或体内)、或所治疗的人对象和疾病状况(例如，对象的体重、年龄和性别)、疾病状况的严重程度、施用方式等而变化，其可以由本领域普通技术人员容易地确定。该术语也适合于将在靶细胞中诱导特定反应(例如，血小板黏附和/或细胞迁移的降低)的剂量。具体剂量将根据以下而变化：所选择的特定化合物、所遵循的给药方案、该化合物是否与其他化合物组合施用、施用时间、施用的组织以及在其中携带该化合物的物理递送系统。
[0077]
术语“患者”是指患有dmd疾病并在编码肌养蛋白的基因中具有引发移码突变的明
显遗传缺失的任何对象，所述移码突变可以通过在mrna剪接期间去除外显子51来恢复。
[0078]
在其最广泛的含义中，术语“治疗”及其变化形式是指逆转、减轻、抑制这样的术语所适用的疾病或病症或者这样的疾病或病症的一种或更多种症状的进展，或者预防这样的术语所适用的疾病或病症或者这样的疾病或病症的一种或更多种症状。
[0079]
本文中使用的表述“治疗作用”涵盖在人对象中的治疗益处和/或预防益处。预防作用包括延迟或消除疾病或病症的出现，延迟或消除疾病或病症的症状的发作，减缓、停止或逆转疾病或病症的进展，或其任意组合。
[0080]
表述“可药用盐”是指来源于本领域已知的多种有机和无机抗衡离子的盐。可药用酸加成盐可以用无机酸和有机酸来形成。从其可以衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。从其可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。可药用碱加成盐可以用无机和有机碱形成。从其可以衍生盐的无机碱包括例如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝。从其可以衍生盐的有机碱包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺、经取代的胺，包括天然存在的经取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂。一些具体实例包括异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。在一些实施方案中，可药用碱加成盐选自铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐，优选地所述可药用盐是钠盐。
[0081]
在羟基(oh)或硫醇基(sh)通常且优选地与p(iii)或p(v)结合并存在于本发明的所述一个或更多个脂质部分中(通常且优选地作为所述一个或更多个脂质部分的b基团的一部分)，或存在于所述间隔物中，或存在于所述寡聚化合物中(优选存在于所述寡核苷酸中)，作为所述核苷间键联基团(通常且优选地选自硫代磷酸酯或磷酸二酯)的一部分的情况下，所述羟基(oh)或硫醇基(sh)可以各自彼此独立地作为所述oh基团或以其离子状态例如o-阴离子和可药用阳离子存在，或者作为所述sh基团或以其离子状态例如s-阴离子和可药用阳离子存在。还包括本发明组合物中上述情况之间的任何组合和任何平衡状态，特别地考虑了本领域技术人员已知的所述p(iii)或p(v)上的另一些含氧或含硫的基团，例如(＝o)、(＝s)、另一oh或sh基团。为了简单起见，在本发明的一些方面和一些实施方案中，通常仅描述上述情况之一。举例来说，本发明的优选间隔物在本文中表示为#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(sh)
‑§
。如所示但不限于，本文中包括其中氢位于氧处的间隔物，因此包括，#-nh-c
2-12
亚烷基-op(oh)(s)
‑§
及其所有可药用盐。
[0082]
因此，在羟基(oh)和/或硫醇基(sh)通常且优选地与p(iii)或p(v)结合并存在于本发明的所述一个或更多个脂质部分中(通常且优选地作为所述一个或更多个脂质部分的b基团的一部分)，或存在于所述间隔物中，或存在于所述寡聚化合物中(优选存在于所述寡核苷酸中)，作为所述核苷间键联基团(通常且优选地选自硫代磷酸酯或磷酸二酯)的一部分的情况下，可药用盐是指本发明的组合物，其中一个或更多个所述oh基团或所述sh基团彼此独立地作为所述oh基团或以其离子状态例如o-阴离子及其可药用阳离子存在，或者作为所述sh基团或以其离子状态例如s-阴离子和可药用阳离子存在，并且其中通常且优选地，所述可药用阳离子选自质子化的三甲胺、质子化的二乙胺、质子化的甲胺、铵、钠或钾，进一步优选地，其中所述可药用阳离子是钠。
[0083]
根据本发明，“可药用载剂”意指添加至根据本发明的寡聚化合物以促进其转运、避免其在所述组合物中的显著降解和/或提高其半衰期的任意何物质。有利地，这样的可药
用载剂是无菌且无热原的，并且是指当适当地施用于哺乳动物，特别是人时，不产生不利的、变应性的或其他不良反应的分子实体和组合物。它的选择取决于本发明的药物组合物的应用类型，并且特别是作为其施用方式的函数。有利地，可药用载剂是指无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或任何类型的制剂助剂。
[0084]
当本文中使用范围来描述例如物理或化学特性(例如，分子量或化学式)时，范围的所有组合和子组合以及其中的具体实施方案均旨在包括在内。当提及数字或数值范围时，术语“约”的使用意指所提及的数字或数值范围是实验可变性内(或统计实验误差内)的近似值，并且因此该数字或数值范围可以变化。变化通常为所述数字或数值范围的0％至15％、0％至10％、0％至5％。
[0085]
在约40年前，在zamecnik和stephenson表明寡核苷酸可用于下调特定基因的表达之后，开始了反义技术，特别是基于反义寡核苷酸(aon)的方法。这些aon最初是与靶mrna互补的未经修饰的合成dna，但很快表明进行化学修饰以保护免受核酸酶降解是必要的，特别是在磷酸二酯核苷酸间键联的水平下。
[0086]
硫代磷酸酯(phosphorothioate，ps)主链是最常使用的化学修饰，以保护aon免受核酸酶活性的影响，并提高其对靶rna的稳定性。典型的ps与磷酸二酯(po)键的不同之处在于，非桥联的磷酸酯o-原子被s-原子取代，这赋予了更高的稳定性和提高的细胞摄取。由于与其po对应物相比提高了生物利用度，ps修饰已经表现出提高的效力，并且目前临床项目中的大多数药物包括ps键。然而，虽然它们具有药代动力学优势，但是已知经ps修饰的分子主要由于其与血浆蛋白结合的能力而引起毒性或不期望的作用。ps主链的急性反应/作用可包括免疫细胞活化、补体激活(这在猴研究中已有特别报道)或凝血时间延长(这已知是短暂的，并随寡核苷酸从血液中清除而正常化)。值得注意的是，低水平但持续的补体激活可导致补体耗竭和对血管系统和肾的损害。
[0087]
进行化学修饰的另一个主要位点是糖部分中的2
’‑
位置，并且其已广泛用于反义领域(例如，2
’‑
o-甲基(2’ome)，2
’‑
o-甲氧基乙基(2’omoe)，2
’‑
氟化(2’f)和2
’‑
o-氨基丙基类似物)。确实存在糖主链的许多其他结构修饰，包括磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo)、肽核酸(pna)、锁核酸(lna)、氨基磷酸酯和甲基膦酸酯衍生物以及三环-dna(tc-dna)。这样的aon库提供了许多治疗选择，包括操纵选择性剪接，其中反义分子是所谓的剪接转换寡核苷酸(splice switching oligonucleotide，sso)。在此，反义分子用于通过诱导外显子包含或外显子跳读来调节剪接变体的比率或纠正剪接缺陷；适合于治疗许多神经肌肉疾病(包括迪谢内肌营养不良(dmd))的方法。
[0088]
迪谢内肌营养不良(dmd)是x-连锁的隐性病症，每3500名活的男性出生者中就有一名受到影响。在法国该病症在男性中的估计患病率为1至9/100,000，因此符合孤儿疾病的条件。其由编码肌养蛋白的dmd基因中的突变引起，所述肌养蛋白是存在于多种组织中，特别是肌纤维(即，横纹肌和平滑肌)和神经元(特别是中枢神经系统的区域)中的427kda的大蛋白。肌养蛋白位于接近质膜内表面的位置，通过膜肌养蛋白相关糖蛋白复合物将肌动蛋白细胞主链与细胞外基质连接。肌养蛋白的缺乏使得骨骼肌纤维特别容易受到机械应力的影响，并经历反复的坏死循环。结果是，患者展现出进行性的骨骼肌无力，随时间的推移，骨骼肌被脂肪纤维化组织替代，导致到12岁时失去行走能力，因此因呼吸衰竭或心肌病导致过早死亡。另外，约三分之一的dmd患者还表现出认知障碍，表明神经元和脑功能受到显
著损害。
[0089]
从由79个外显子构成的主要14-kb mrna转录物翻译而来的全长肌养蛋白是模块化蛋白，幸运的是，如果保留放阅读框，其可以支持多个外显子的缺失。该现象发生在临床上较温和的疾病贝克肌营养不良(becker muscular dystrophy，bmd)中，其中维持开放阅读框架的缺失导致截短的半功能形式的肌养蛋白的合成。虽然dmd是由基因中发生的多种类型的突变引起的，但大多数突变是导致框外缩短的mrna翻译成不稳定且无功能的截短的肌养蛋白的明显缺失。因此，20年前提出，使用aon干扰选定外显子的剪接过程可能是用于dmd来恢复半功能性肌养蛋白的合适治疗方法，从而将严重的dmd转化为较轻的bmd。
[0090]
已针对反义诱导的外显子跳读，对两种类型的化合物(具有全长硫代磷酸酯主链的2
’‑
o-甲基修饰的核糖寡聚物(2’ome-ps)和磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo))进行了广泛测试。在dmd的动物模型和临床试验中，两种类型的反义分子均显示出在全身递送之后挽救骨骼肌中的肌养蛋白。然而，在dmd患者中使用靶向外显子51的2’ome-ps和pmo aon的进一步研究未能显示出显著的临床益处，很可能是由于肌养蛋白挽救水平不足(lu et al,mol.ther.nucleic acids.,2014,第3卷,e152)。
[0091]
国际申请wo 2010/115993提出了三环-dna反义寡核苷酸(tricyclo-dna antisense oligonucleotide，tc-dna aon)，其中通过引入环丙烷环限制主链的构象柔性来修饰所有核苷酸。这些tc-dnaaon可被设计成用于跳读肌养蛋白前mrna内的突变外显子23或突变外显子51。设计用于跳读突变外显子51的tc-dna aon是tc-dna aon h51( 68 82)、tc-dnaaon h51( 70 84)和tc-dnaaon h51( 73 87)，其中数值是指人肌养蛋白基因(dmd基因)的外显子51。此外，国际申请wo 2013/053928公开了这样的核酸分子，其包含通过核苷间硫代磷酸酯键联连接的三环核苷的序列，从而形成三环-硫代磷酸酯dna分子(tc-dna-ps)。本技术举例说明了tc-dna-ps反义寡核苷酸用于肌养蛋白前mrna的外显子23跳读的用途，所述用途通过dmd的mdx小鼠模型中的进一步工作得到了巩固，其表明具有完整ps主链的tc-dna aon诱导的外显子23的有效跳读水平是用2’ome-ps和pmo相应aon所达到的水平的5至6倍高(goyenvalle et al,nat.med.,2015,第21卷，第270至275页)。在处理12周之后，与野生型小鼠相比，这转化为肌养蛋白水平的更大挽救，特别是在膈肌和心脏中，在那里水平分别达到50％和40％。然而，磷酸酯主链中硫对氧的取代，虽然显著改善了生物分布，促进了非特异性蛋白结合以及固有免疫系统的活化(例如，补体激活、凝血和提高的促炎细胞因子)，但其也可能导致最坏的急性毒性，最好的长期毒性(dirin and winkler,expert opin.biol.ther.,2013,第13卷,第875至888页；echevarria et al,nucleic acid ther.,2019,第99卷,第148至160页)。已提出可替代方案(例如控制硫代磷酸酯立体化学)来解决这种情况(iwamoto et al,nat.biotech.,2017,第35卷,第845至851页)，但最近在dmd患者中进行的临床测试结果并不令人满意。
[0092]
另外，国际申请wo 2018/193428提出了另一种策略，包括将包含一个或更多个tc-dna核苷的寡聚化合物与与该寡聚化合物共价连接的一个或更多个脂质部分组合。在组合了至少一个脂质部分的不同寡聚化合物中，例如本技术中所公开的，化合物sy-0487在外显子51跳读研究中显示了最好的初步结果，并由此被认为是迄今为止在dmd中跳读外显子51的最好的基于tc-dna的化合物。化合物sy-0487在本文件中被设计为syn51。
[0093]
本发明使得可以解决先前定义的技术问题并实现既定目标。
[0094]
事实上，不希望受任何特定理论的束缚，已经鉴定了dmd基因中的特定序列，并且更特别地由人dmd基因编码的前mrna的外显子51中的特定序列，其反向互补序列形成了用于治疗患有dmd的患者的令人感兴趣的化合物。
[0095]
如本领域技术人员所理解的，在细胞核中，真核基因被转录成包含外显子和内含子二者的前信使rna(pre messenger rna，前mrna)。为了形成成熟的mrna，剪接发生在外显子和内含子边界处的特定序列(剪接位点)中，从而去除内含子并将外显子相互连接以形成mrna，随后将其翻译成蛋白质。在过去的三十年期间，鉴于dmd治疗，已经开发了剪接-转换方法来干扰这样的机制。特别地，通过使用多种类型的反义寡核苷酸使外显子23的3’末端的供体剪接位点退火，已经在mdx小鼠中报道了小鼠dmd基因的外显子23的成功跳读。对于外显子51，本领域技术人员已经开发了许多化合物，其中一些已经在临床水平下进行了评价，在对患者细胞进行筛选研究之后选择，它们中的大多数靶向包含在这样的区域中的序列：跨越由人dmd基因编码的前mrna的外显子51之 66 95。
[0096]
在本发明中，选择的特定序列位于本领域技术人员通常靶向的区域的上游；很可能是因为覆盖本发明中实施的序列的区域在本领域技术人员实践的体外筛选期间没有表现得特别突出。
[0097]
令人惊讶地发现，本发明的寡聚化合物，特别是当与脂质部分(例如棕榈酰基)共价连接时，对血清蛋白具有意想不到的结合特性。无论考虑何种物种，这类化合物通常结合载脂蛋白(即，hdl和ldl的结构蛋白组分)，而本发明的化合物优先并有利地结合人和非人灵长类血液样品中的血清白蛋白；这样的特性潜在地显著提高了化合物的生物利用度及其在骨骼肌和心脏组织中的传播。值得注意的是，该有价值的优点是本发明的寡聚化合物所特有的。
[0098]
因此，本发明包括包含10至50个单体亚基的寡聚化合物，其序列的至少一部分与以下序列互补：aaggaaacugccaucuccaa(所附序列表中的seq id no:1)。
[0099]
有利地并且根据它们所包含的单体亚基，在一些实施方案中，本发明的寡聚化合物包含以下或由以下组成：寡脱氧核糖核苷酸、寡核糖核苷酸、吗啉代、三环-dna寡核苷酸、三环-硫代磷酸酯-dna寡核苷酸和lna寡核苷酸。
[0100]
应当注意，在根据本发明的寡聚化合物中所包含的单体亚基中，不仅可以发现五种经典的核碱基，即腺嘌呤(a)、胞嘧啶(c)、鸟嘌呤(g)、胸腺嘧啶(t)和尿嘧啶(u)，还可以发现碱基类似物。
[0101]
在一个方面中，根据本发明的寡聚化合物的部分序列与之互补的序列aaggaaacugccaucuccaa(所附序列表中的seq id no:1)是由人dmd基因编码的前mrna之外显子51的位置 45 64所限定的区域。由人dmd基因编码的前mrna之外显子51具有以下序列：
[0102][0103][0104]
(所附的序列表中的seq id no:2)。
[0105]
有利地，在一些实施方案中，根据本发明的寡聚化合物的至少部分序列与所附序
列表中seq id no:2的区域 48 62所对应的序列互补。该区域也对应于所附序列表中seq id no:1的区域 4 18。
[0106]
因此，当每个分子中足够数目的相应位置被可以彼此结合的核碱基占据时，本发明的寡聚化合物和前mrna的靶核苷酸序列彼此互补，以允许如上所示的本发明的寡聚化合物与前mrna的靶核苷酸序列之间的稳定缔合。本领域技术人员认识到，可在不消除寡聚化合物保持缔合的能力的情况下包含错配。因此，本文中描述的是本发明的寡聚化合物，有利地是反义寡核苷酸，其可包含多至约20％的错配核苷酸(即，不是与靶标的相应核苷酸互补的核碱基)。特别地，本发明的寡聚化合物，有利地是反义寡核苷酸，包含不超过约15％，更优选不超过约10％，最优选不超过5％的错配或没有错配。
[0107]
通常来说，根据本发明的寡聚化合物包含反义寡核苷酸或由反义寡核苷酸组成。
[0108]
另外，在本发明中，选择反义寡核苷酸(aon)序列以使其具有特异性，即aon仅与靶标前mrna的序列而不与其他核酸序列完全互补。本发明的实践中使用的aon可以是本领域技术人员已知的任何合适的类型(例如，寡脱氧核糖核苷酸、寡核糖核苷酸、吗啉代、三环-dna、三环-硫代磷酸酯-dna、lna、u7-或u1修饰的aon或其缀合产物例如肽缀合的或纳米粒复合的aon)(bell et al,chembiochem,2009,第10卷,第2691至2703页)。根据本发明的寡聚化合物并且特别是aon的长度通常为约10至约50个核苷酸，特别是约11至约40个核苷酸，约12至约30个核苷酸或约13至约20个核苷酸，并且长度可以为例如约10、或约15、或约20或约30个核苷酸或更长。通常来说，吗啉代-aon为约25至30个核苷酸长，ppmo aon为约20至25个核苷酸长，且三环-aon为约10至20个核苷酸长，u7和u1修饰的aon可能携带约50个核苷酸的更长的反义序列。表述“约x个核苷酸”意指x个核苷酸
±
2个核苷酸。
[0109]
在一个具体实施方案中，根据本发明的寡聚化合物包含至少一个与seq id no:1的反向互补序列具有至少70％同一性的核苷酸序列。
[0110]
因此，根据本发明的寡聚化合物包含至少一个与seq id no:1的反向互补序列具有至少70％同一性并且可以表现出至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或甚至至少99％同一性的核苷酸序列。
[0111]
在一个更具体的实施方案中，根据本发明的寡聚化合物包含至少一个与以下tc-dna核苷酸序列具有至少70％同一性的核苷酸序列：
[0112]
ggagatggcagtttc(所附序列表中的seq id no:3)。
[0113]
因此，根据本发明的寡聚化合物包含至少一个与tc-dna核苷酸序列seq id no:3具有至少70％同一性并且可以表现出至少73％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少93％、至少95％或甚至至少99％同一性的核苷酸序列。
[0114]
同一性百分比是统计值，并且两个序列之间的差异沿着这些序列随机分布。两个序列之间的差异可以由序列的不同修饰类型：核苷酸(或氨基酸)残基的缺失、替换或添加组成。
[0115]
在一个具体实施方案中，根据本发明的寡聚化合物包含至少一个与tc-dna核苷酸序列seq id no:3相同的核苷酸序列。
[0116]
为了在体内使用，根据本发明的寡聚化合物并且特别是aon可以被稳定化。“稳定化的”寡聚化合物或aon是指对体内降解(例如，通过核酸外切酶或核酸内切酶)具有相对抗性的寡聚化合物或aon。稳定可以是长度或二级结构的函数。或者，寡聚化合物或aon稳定可
以通过磷酸酯主链修饰来实现。
[0117]
本发明优选的稳定化的寡聚化合物或aon具有经修饰主链，例如，具有硫代磷酸酯键联以提供最大的活性并保护寡聚化合物或aon以免于被胞内核酸外切酶和核酸内切酶降解。另一些可能的稳定修饰包括磷酸二酯修饰、磷酸二酯与硫代磷酸酯修饰的组合、甲基-膦酸酯、甲基-硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、对乙氧基，及其组合。寡聚化合物或aon的化学稳定的经修饰形式还包括“吗啉代”(磷酸二酰胺吗啉代寡聚物，pmo)、2
’‑
o-met寡聚物、三环-dna(tc-dna)寡聚物(国际申请wo 2010/115993)、三环-硫代磷酸酯dna寡聚物(国际申请wo 2013/053928)、lna等，其均是本领域技术人员已知的(bell et al,chembiochem,2009,第10卷,第2691至2703页)。
[0118]
在本发明的一个具体实施方案中，寡聚化合物主要包含三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷。因此，本发明的寡聚化合物包含三环-dna反义寡核苷酸或由三环-dna反义寡核苷酸组成。在该实施方案中，根据本发明的三环-dna反义寡核苷酸包含对应于核苷酸序列seq id no:3的核苷酸序列或其组成。
[0119]
在该实施方案中，不同的tc-dna核苷可以通过磷酸二酯键联连接。或者，至少两个相邻的tc-dna核苷可以通过硫代磷酸酯(ps)键联连接。本文中可互换使用的表述“硫代磷酸酯键联”或“硫代磷酸酯修饰”是指“核酸分子中两个相邻核苷之间的5’...-o-p(s)-o-...3”部分。有利地，根据本发明的寡聚化合物中的所有tc-dna核苷均通过ps键联连接。因此，本发明的寡聚化合物包含三环-硫代磷酸酯dna反义寡核苷酸或由三环-硫代磷酸酯dna反义寡核苷酸组成。如果本公开内容的寡聚化合物中存在其他修饰，则后者包括磷酸二酯、甲基膦酸酯、甲基-硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯和对乙氧基修饰，及其组合。
[0120]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(1)化合物或其可药用盐：
[0121][0122]
其中：
[0123]
bx是核碱基；
[0124]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分；
[0125]
q1、q2、q3、q4和q5各自独立地选自氢(h)、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、经取代的c
1-6
烷基、经取代的c
2-6
烯基、经取代的c
2-6
炔基和-(ch2)
n-c(o)-r6’
，其中n为0至6，并且其中r6’
选自oh、nh2、o-c
1-32
烷基和nh-c
1-32
烷基；
[0126]
z1和z2各自独立地选自h、卤素、c
1-6
烷基、c
1-6
烷氧基、o-c
2-6
烯基、o-c
2-6
炔基、经取代的c
1-6
烷基、经取代的c
1-6
烷氧基、经取代的o-c
2-6
烯基和取代的o-c
2-6
炔基。
[0127]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(1)的化合物，其中q5是h。
[0128]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(1)的化合物，其中bx选自胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(1)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包
含式(1)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0129]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(2)的化合物：
[0130][0131]
其中：
[0132]
bx是核碱基；
[0133]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0134]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(2)的化合物，其中bx选自胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(2)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(2)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0135]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(3)的化合物(也称为c(6’)-官能化的tc-dna)：
[0136][0137]
其中：
[0138]
bx是核碱基；
[0139]
r6’
选自oh、nh2、o-c
1-32
烷基和nh-c
1-32
烷基；
[0140]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0141]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(3)的化合物，其中bx选自胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(3)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(3)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0142]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(4)的化合物(也称为6
’‑
氟-tc-dna)：
[0143][0144]
其中：
[0145]
bx是核碱基；
[0146]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0147]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(4)的化合物，其中bx选自胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(4)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(4)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0148]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(5)的化合物(也称为2
’‑
氟-tc-dna)：
[0149][0150]
其中：
[0151]
bx是核碱基；
[0152]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0153]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(5)的化合物，其中bx选自胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(5)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(5)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0154]
因此，在一个实施方案中，寡聚化合物的所述一个或更多个核苷tc-dna核苷包含式(5’)的化合物(也称为2
’‑
氟-tc-ana)：
[0155][0156]
其中：
[0157]
bx是核碱基；
[0158]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0159]
在一个实施方案中，寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(5’)的化合物，其中bx选自胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(5’)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，本发明的寡聚化合物的tc-dna核苷包含式(5’)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0160]
制备用于寡聚化合物的式(1)和式(2)的化合物的一般方法是本领域已知的，包括美国专利申请no.2015/0141637、2016/0002280和2014/0296323中描述的方法，其公开内容通过引用并入本文。用于tc-dna的标准亚磷酰胺结构单元已在本领域例如在steffens and leumann,helv.chim.acta 1997,80,2426-2439中有所描述。制备式(3)的化合物的方法已例如在lietard and leumann,j.org.chem.2012,77,4566-77中有所描述，其公开内容通过引用并入本文。制备式(4)的化合物的方法已例如在medvecky,istrate,and leumann,j.org.chem.2015,80,3556-65中有所描述，其公开内容通过引用并入本文。制备式(5)和(5’)的化合物的方法已例如在istrate,medvecky,and leumann,org.lett.2015,17,1950-53中有所描述，其公开内容通过引用并入本文。
[0161]
在本发明的另一个具体实施方案中，寡聚化合物包含至少一个三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷和至少一个经修饰核糖核酸核苷。本领域技术人员已知的任何经修饰rna核苷都可以在本发明中实施。经修饰rna核苷对引入其的寡聚分子赋予灵活性。特别地，该经修饰rna核苷是2
’‑
修饰的rna核苷，例如2
’‑
o-甲基、2
’‑
甲氧基乙氧基、2
’‑
氟、2
’‑
烯丙基、2
’‑
o-[2-(甲基氨基)-2-氧乙基]、2
’‑
氨基和2
’‑
o-(n-甲基氨基甲酸酯)。更特别地，该经修饰rna核苷是2
’‑
o-甲基rna核苷。另外，根据该具体实施方案的寡聚化合物的单体亚基通常通过磷酸二酯核苷间键联连接。
[0162]2’‑
修饰的rna核苷和另一些核苷
[0163]
在一个实施方案中，寡聚化合物的除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷彼此独立地为2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷。
[0164]
在一个实施方案中，寡聚化合物的除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷是式(6)的rna核苷(rna核苷)：
[0165][0166]
其中：
[0167]
bx是核碱基；
[0168]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0169]
在一个实施方案中，寡聚化合物的除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷是式(6)的rna核苷，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合
物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(6)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(6)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0170]
在一个实施方案中，优选的本发明组合物的寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(7)的化合物(2
’‑
o-甲基-rna核苷)：
[0171][0172]
其中：
[0173]
bx是核碱基；
[0174]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0175]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(7)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(7)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(7)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0176]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(8)的化合物(2
’‑
o-炔丙基-rna核苷)：
[0177][0178]
其中：
[0179]
bx是核碱基；
[0180]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0181]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(8)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(8)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(8)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0182]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(9)的化合物(2
’‑
o-丙基氨基-rna核苷)：
[0183][0184]
其中：
[0185]
bx是核碱基；
[0186]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0187]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(9)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(9)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(9)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0188]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(10)的化合物(2
’‑
氨基-rna核苷)：
[0189][0190]
其中：
[0191]
bx是核碱基；
[0192]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0193]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(10)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(10)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(10)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0194]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(11)的化合物(2
’‑
氟-rna核苷)：
[0195][0196]
其中：
[0197]
bx是核碱基；
[0198]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0199]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(11)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(11)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(11)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0200]
在一个实施方案中，寡聚化合物的除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷包含式(11’)的化合物(2
’‑
脱氧2
’‑
氟-阿拉伯糖核苷(2
’‑
fana)：
[0201][0202]
其中：
[0203]
bx是核碱基；
[0204]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0205]
在一个实施方案中，寡聚化合物的除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷包含式(11’)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(11’)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(11’)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0206]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(12)的化合物(2
’‑
o-甲氧基乙基-rna核苷，或2
’‑
moe核苷)：
[0207][0208]
其中：
[0209]
bx是核碱基；
[0210]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0211]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(12)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(12)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(12)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0212]
在一个实施方案中，寡聚化合物的除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷包含式(13)的化合物(吗啉代核苷)：
[0213][0214]
其中：
[0215]
bx是核碱基；
[0216]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0217]
在一个实施方案中，寡聚化合物的除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷包含式(13)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(13)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(13)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0218]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(14)的化合物(锁核酸或lna核苷)：
[0219][0220]
其中：
[0221]
bx是核碱基；
[0222]
t1和t2中的一者是核苷间键联基团，并且t1和t2中的另一者是or1、or2、5’末端基团、3’末端基团或核苷间键联基团，其中r1是h或羟基保护基，并且r2是磷部分。
[0223]
在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(14)的化合物，其中bx选自胞嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤和尿嘧啶。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(14)的化合物，其中bx是经修饰碱基。在一个实施方案中，寡聚化合物的2
’‑
修饰的rna核苷包含式(14)的化合物，其中bx是选自5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、肌苷和2,6-二氨基嘌呤的经修饰碱基。
[0224]
制备用于寡聚化合物的式(6)至式(14)的化合物的通用方法是本领域已知的，包括美国专利no.4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,81l；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,670,633；5,700,920；5,792,847；和6,600,032；美国专利申请no.2015/0141637、2016/0002280和2014/0296323；以及renneberg,et al,j.am.chem.soc.,2002,124,5993-6002所述的方法，其公开内容通过引用并入本文。
[0225]
在一个实施方案中，所述寡聚化合物还包含除tc-dna核苷之外的一个或更多个核
苷，其中所述除tc-dna核苷之外的一个或更多个核苷彼此独立地选自
[0226]
核糖核酸(ribonucleic acid，rna)核苷；
[0227]
脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，dna)核苷；
[0228]2’‑
修饰的rna核苷
[0229]
双环核酸(2’,4
’‑
bna)核苷，优选选自具有2
’‑
o-n-c桥联系统的2’,4
’‑
bna(2’,4
’‑
bna
nc
)、亚乙基核酸(ena)核苷和的立体异构体；
[0230]
肽核酸(pna)核苷；
[0231]2’‑
脱氧2
’‑
氟-阿拉伯糖(fana)核苷；
[0232]
己糖醇核酸(hna)核苷；以及
[0233]
磷酸二酰胺吗啉代(pmo)核苷。
[0234]
可用于本发明的另一些核苷是本领域技术人员已知的，例如如在biochemistry,2005,44,9045-9057中描述的另一亲脂性2
’‑
o-烷基rna。
[0235]
在一个实施方案中，寡聚化合物包含非核苷，在本领域中也称为非核苷接头、非核苷酸接头(non-nucleotide linker)和非核苷酸基接头(non-nucleotidylic linker)，其是例如呋喃核糖酮部分的糖碳的高度灵活的替代物，并且其可用于替代本发明寡聚化合物的tc-dna核苷和除tc-dna核苷之外的核苷。示例性的非核苷酸是式(15)中示出的1,3-丙二醇基团，其显示为连接两个示例性的磷酸二酯核苷间键联：
[0236][0237]
式(15)中的波浪线表示本文中所述的另外的寡聚重复核苷和核苷间键联单元。
[0238]
本发明的非核苷酸可以用于本文中所述的任何核苷间键联，包括其中式(15)中示出的磷酸二酯核苷间键联被一个或更多个硫代磷酸酯核苷间键联替代的一些实施方案。
[0239]
在一个实施方案中，非核苷酸是1,3-丙二醇基团。合成1,3-丙二醇基团并将其并入到寡聚化合物中是本领域已知的，并且例如在seela and kaiser,nuc.acids res.1987,15,3113-29中有所描述。在一个实施方案中，寡聚化合物包含由硫代磷酸酯核苷间键联、磷酸二酯核苷间键联或其混合物连接的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个1,3-丙二醇基团。
[0240]
替代的非核苷也可以用于本发明的寡聚化合物，例如不同长度的乙二醇寡聚物(即，一个、两个、三个或更多个乙二醇单元连接以形成单个非核苷)。例如在pils and micura,nuc.acids res.2000,28,1859-63中描述了多种合适的乙二醇基团。非核苷的合成和使用也已在例如美国专利no.5,573,906中进行了描述，其公开内容通过引用并入本文。
[0241]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物不包含除tc-dna核苷之外的核苷。
[0242]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷。
[0243]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的50％或更多是tc-dna核苷。
[0244]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的60％或更多是tc-dna核苷。
[0245]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的70％或更多是tc-dna核苷。
[0246]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的75％或更多是tc-dna核苷。
[0247]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的80％或更多是tc-dna核苷。
[0248]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的85％或更多是tc-dna核苷。
[0249]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的90％或更多是tc-dna核苷。
[0250]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物包含一个或更多个tc-dna核苷和一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所有核苷的95％或更多是tc-dna核苷。
[0251]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地选自
[0252]
i.2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷；
[0253]
ii.核糖核酸(rna)核苷；
[0254]
iii.脱氧核糖核酸(dna)核苷；
[0255]
iv.锁核酸(lna)核苷；
[0256]
v.肽核酸(pna)核苷；
[0257]
vi.2
’‑
脱氧2
’‑
氟-阿拉伯糖核苷；
[0258]
vii.己糖醇核酸(hna)核苷；以及
[0259]
viii.磷酸二酰胺吗啉代(pmo)核苷。
[0260]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
修饰的核糖核酸(2
’‑
修饰的rna)核苷。
[0261]
在一些实施方案中，所述2
’‑
修饰的rna核苷并入到形成自身互补的沃森-克里克(watson-crick)碱基对的至少两个相邻位置中。
[0262]
在一些实施方案中，所述2
’‑
修饰的rna核苷并入到形成自身互补的沃森-克里克碱基对的三个或更多个相邻位置中。
[0263]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为核糖核酸(rna)核苷。
[0264]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为脱氧核糖核酸(dna)核苷。
[0265]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为锁核酸(lna)核苷。
[0266]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为肽核酸(pna)核苷。
[0267]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核
苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
脱氧2
’‑
氟-阿拉伯糖核苷。
[0268]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为己糖醇核酸(hna)核苷。
[0269]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为磷酸二酰胺吗啉代(pmo)核苷。
[0270]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地选自
[0271]
i.rna核苷；
[0272]
ii.2
’‑
o-甲基-rna核苷；
[0273]
iii.2
’‑
o-炔丙基-rna核苷；
[0274]
iv.2
’‑
o-丙基氨基-rna核苷；
[0275]
v.2
’‑
o-氨基-rna核苷；
[0276]
vi.2
’‑
氟-rna核苷；
[0277]
vii.2
’‑
o-甲氧基乙基-rna核苷；
[0278]
viii.吗啉代核苷；以及
[0279]
ix.锁核酸核苷。
[0280]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为rna核苷。
[0281]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
o-甲基-rna核苷。
[0282]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
o-炔丙基-rna核苷。
[0283]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
o-丙基氨基-rna核苷。
[0284]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
o-氨基-rna核苷。
[0285]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
氟-rna核苷。
[0286]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为2
’‑
o-甲氧基乙基-rna核苷。
[0287]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为吗啉代核苷。
[0288]
在一些实施方案中，所述寡聚化合物还包含一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷，其中所述一个或更多个除tc-dna核苷之外的核苷彼此独立地为锁核酸rna核苷。
[0289]
核苷间键联基团
[0290]
在一个实施方案中，寡聚化合物的核苷间键联基团独立地选自硫代磷酸酯键联、二硫代磷酸酯键联、磷酸二酯键联、磷酸三酯键联、氨基烷基磷酸三酯键联、甲基膦酸酯键联、烷基膦酸酯键联、5
’‑
亚烷基膦酸酯键联、膦酸酯键联、亚膦酸酯键联、氨基磷酸酯键联、3
’‑
氨基氨基磷酸酯键联(3
’‑
aminophosphoramidate linkage)、氨基烷基氨基磷酸酯键联、硫代氨基磷酸酯键联、硫代烷基膦酸酯键联、硫代烷基磷酸三酯键联、硒代磷酸酯键联(selenophosphate linkage)和硼代磷酸酯键联(boranophosphate linkage)。
[0291]
在一些实施方案中，寡聚化合物的核苷间键联独立地选自硫代磷酸酯键联和磷酸二酯键联。在一个实施方案中，寡聚化合物的核苷间键联仅包含磷酸二酯键联。
[0292]
示例性的硫代磷酸酯键联在式(16)中示出：
[0293][0294]
示例性的磷酸二酯键在式(17)中示出：
[0295][0296]
式(16)和式(17)中的波浪线表示本文中所述的另外的寡聚重复核苷和核苷间键联。
[0297]
制备用于寡聚化合物的核苷间键联的一般方法是本领域已知的，包括描述于以下中的方法：美国专利
[0298]
no.3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；5,194,599；5,565,555；5,527,899；5,721,218；5,672,697和5,625,050，其公开内容通过引用并入本文。硫代磷酸酯可以由磷酸三酯制备，例如，使用krotz et al，org.proc.r&d 2004，8，852-58中描述的苯乙酰二硫化物(phenylacetyl disulfide，pads)化学物质作为固相合成的一部分，使用例如四个反应的3
’‑
至5
’‑
延伸循
环(去三苯甲基化、偶联、使用pads硫化和加帽)，随后进行去保护、从支持物上切割和纯化步骤。
[0299]
本文中使用的术语“磷部分”是指包含处于p
iii
或pv价态的磷原子的部分，并且其由式(18)表示：
[0300][0301]
其中
[0302]
w表示o、s或se，或者w表示电子对；
[0303]
r3和r4彼此独立地为h、卤素、oh、or5、nr6r7、sh、sr8、c1至c6烷基、c1至c6卤代烷基、c1至c6烷氧基、c1至c6卤代烷氧基、c1至c6氨基烷基；其中r5为c1至c9烷基、c1至c6烷氧基，各自彼此独立地任选地被氰基、硝基、卤素、-nhc(o)c1至c3烷基、-nhc(o)c1至c3卤代烷基、c1至c3烷基磺酰基取代；芳基、c1至c6亚烷基芳基、c1至c6亚烷基二芳基，各自彼此独立地任选地被氰基、硝基、卤素、c1至c4烷氧基、c1至c4卤代烷基、c1至c4卤代烷氧基、nhc(o)c1至c3烷基、nhc(o)c1至c3卤代烷基、c1至c3烷基磺酰基取代；乙酰基；羟基保护基；其中r6和r7彼此独立地为氢、c1至c9烷基，任选地被氰基、硝基、卤素、c2至c6烯基、c3至c6环烷基、c1至c3烷氧基取代；芳基，任选地被氰基、硝基、卤素、c1至c3烷基、c1至c3烷氧基取代；氨基保护基；或者与其所连接的氮原子一起形成杂环，其中优选地，所述杂环选自吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基和高哌嗪，其中所述杂环任选地被c1至c3烷基取代；并且其中r8是硫醇保护基；并且其中波浪线指示与式(1)至(14)中任一者中或本文中未通过式明确示出的核苷之类似形式中的所述or2基团之氧的连接。当w表示o、s或se时，则所述磷部分中的所述p原子处于其pv价态。当w表示电子对时，则所述磷部分中的所述p原子处于其p
iii
价。式(18)部分包括任何可能的立体异构体。进一步包括在由式(18)表示的所述部分中的是其盐，其中通常且优选地，所述盐在用无机碱或胺处理之后形成，并且通常且优选地，盐来源于与作为(彼此独立的)所述r3和r4的oh或sh基团反应。导致与oh或sh基团形成所述盐的优选的无机碱或胺是本领域公知的，并且通常且优选地是三甲胺、二乙胺、甲胺或氢氧化铵。如果合适，本发明中包括的这些磷部分也缩写为“o-hb
”，其中所述hb

是指形成的抗衡阳离子。
[0304]
本文中使用的术语“磷部分”包括并且通常且优选地在每次出现时独立地选自来源于以下的部分：膦酸酯、亚磷酸三酯、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷酸三酯、磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或亚磷酸酰胺。因此，在一个实施方案中，式(1)至(14)中任一者中或本文中未通过式明确示出的核苷之类似形式中的所述or2基团在每次出现时独立地选自膦酸酯、亚磷酸三酯、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、磷酸三酯、磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或亚磷酸酰胺。可用于本发明的另一些磷部分在tetrahedron report number 309(beaucage and lyer,tetrahedron,1992,48,2223-2311)中公开，其公开内容通过引用并入本文。
[0305]
本文中使用的术语“磷部分”优选地是指式(1)至(14)中任一者中或本文中未通过式明确示出的核苷之类似形式中所定义的基团r2，其包含处于p
iii
或pv价态的磷原子，并且其在每次出现时独立地由式(19)、式(20)或式(21)表示，
[0306][0307]
其中y为o、s或se，并且其中y优选地为o或s，更优选地y为o；并且其中r5和r5’
在每次出现时彼此独立地为氢、c1至c9烷基、c1至c6烷氧基，各自彼此独立地任选地被氰基、硝基、卤素、-nhc(o)c1至c3烷基、-nhc(o)c1至c3卤代烷基、c1至c3烷基磺酰基取代；芳基、c1至c6亚烷基芳基、c1至c6亚烷基二芳基，各自彼此独立地任选地被氰基、硝基、卤素、c1至c4烷氧基、c1至c4卤代烷基、c1至c4卤代烷氧基、-nhc(o)c1至c3烷基、nhc(o)c1至c3卤代烷基、c1至c3烷基磺酰基取代；羟基保护基；其中r6和r7彼此独立地为氢、c1至c9烷基，任选地被氰基、硝基、卤素、c2至c6烯基、c3至c6环烷基、c1至c3烷氧基取代；芳基，优选苯基，任选地被氰基、硝基、卤素、c1至c3烷基、c1至c3烷氧基取代；氨基保护基；或者与其所连接的氮原子一起形成杂环，其中优选地，所述杂环选自吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基和高哌嗪，其中所述杂环任选地被c1至c3烷基取代；并且其中r8是硫醇保护基；并且其中波浪线指示与式(1)至(5)中任一者中的所述or2基团的氧的连接。
[0308]
有利地，在一个具体实施方案中，寡聚化合物可包含一个或更多个并且优选数个三环-脱氧核糖核酸(tc-dna)核苷，和至少一个经修饰核糖核酸核苷并且有利地仅一个经修饰核糖核酸核苷。后者可存在于根据本发明的寡聚化合物的序列中的任何地方。
[0309]
特别地，根据本发明的寡聚化合物包含以下核苷酸序列之一或由其组成：
[0310]-5
’‑
ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:4)，
[0311]-5
’‑
ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:5)，
[0312]-5
’‑
ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:6)，以及
[0313]-5
’‑
ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:7)。
[0314]
其中tcdna核苷酸以大写字母显示，而先前定义的经修饰核糖核酸核苷以小写字母显示。该分型适于下文中的所有序列。
[0315]
特别地，在上述序列中分别在位置 7、 8、 9和 10处的经修饰rna核苷是2
’‑
修饰的rna核苷，更特别地，是2
’‑
o-甲基rna核苷。
[0316]
在该最后一种替代方案中，当寡聚化合物由对应于序列seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6或seq id no:7的核苷酸序列组成时，该化合物分别被设计为regone.7、regone.8、regone.9或regone.10。
[0317]
有利地，在一些实施方案中，对应于所附序列表中的序列seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6或seq id no:7的核苷酸序列中的15个单体亚基通过磷酸二酯(phosphodiester，po)键连接。
[0318]
在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:4具有至少70％、至少73％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少93％、至少95％或至少99％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:4相同的核苷酸序列。
[0319]
在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:5具有至少70％、至少
73％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少93％、至少95％或至少99％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:5相同的核苷酸序列。
[0320]
在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:6具有至少70％、至少73％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少93％、至少95％或至少99％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:6相同的核苷酸序列。
[0321]
在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:7具有至少70％、至少73％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少93％、至少95％或至少99％同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，寡聚化合物包含至少一个与seq id no:7相同的核苷酸序列。
[0322]
在一个具体实施方案中，根据本发明的寡聚化合物可以与一个或更多个脂质部分组合。换句话说，一个或更多个脂质部分可以与寡聚化合物直接或间接(即通过间隔物)共价连接。
[0323]
在一些实施方案中，根据本发明的寡聚化合物可以与一个或更多个脂质部分组合，优选恰好一个脂质部分，其中所述一个或更多个脂质部分与所述寡聚化合物直接或通过间隔物共价连接。
[0324]
任何脂质部分均可以在本发明中实施。
[0325]
在一个实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地选自脂肪酸部分、脂肪二酸部分、甘油脂部分、甘油磷脂部分、鞘脂部分、磷脂、烷基磷酸酯部分和烷基膦酸酯部分。
[0326]
在一个实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地选自脂肪酸部分、脂肪二酸部分、磷脂、烷基磷酸酯部分和烷基膦酸酯部分。
[0327]
在一个优选实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪酸部分。在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪二酸部分。在另一个实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为甘油脂部分。在另一个实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为甘油磷脂部分。在另一个实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为鞘脂部分。在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为烷基磷酸酯部分。在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为烷基膦酸酯部分。
[0328]
在一个实施方案中，一个或更多个脂质部分在ph为7.4时带负电荷，其中通常所述7.4的ph对应于生理ph。
[0329]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地选自脂肪酸部分、脂肪二酸部分、烷基磷酸酯部分和烷基膦酸酯部分。
[0330]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪酸部分或脂肪二酸部分。
[0331]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪酸部分，其中所述脂肪酸部分是饱和脂肪酸部分。在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪酸部分，其中所述脂肪酸部分是不饱和脂肪酸部分。
[0332]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪二酸部分，其中所述脂肪二酸部分是饱和脂肪二酸部分。在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪二酸部分，其中所述脂肪酸部分是不饱和脂肪二酸部分。
[0333]
在一个非常优选的实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪酸部分，其中所述脂肪酸部分是饱和的非支化脂肪酸部分。
[0334]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪酸部分，其中所述脂肪酸部分来源于饱和的非支化脂肪酸。在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪二酸部分，其中所述脂肪二酸部分来源于饱和的非支化脂肪二酸。
[0335]
在一个非常优选的实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为脂肪酸部分或脂肪二酸部分，其中所述脂肪酸部分是饱和的非支化脂肪酸部分，并且其中所述脂肪二酸部分是饱和的非支化脂肪二酸部分。
[0336]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(i)部分或其可药用盐：
[0337]
a-b-*
ꢀꢀ(i)[0338]
其中a是c
3-32
烷基、c
3-32
烯基、c
3-32
炔基、hooc-c
3-32
亚烷基、hooc-c
3-32
亚烯基或hooc-c
3-32
亚炔基，并且b是c(o)、op(oh)、op(o)(oh)、op(o)(sh)、nh-c(o)、nh-p(o)(oh)、nh-p(o)(sh)；并且其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点。
[0339]
在另一个优选实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地选自式(a)至(u)中的任一者：
[0340]
a.c
3-32
烷基-c(o)-*，
[0341]
b.c
3-32
烯基-c(o)-*，
[0342]
c.c
3-32
炔基-c(o)-*，
[0343]
d.c
3-32
烷基-op(oh)-*，
[0344]
e.c
3-32
烯基-op(oh)-*，
[0345]
f.c
3-32
炔基-op(oh)-*，
[0346]
g.c
3-32
烷基-op(o)(oh)-*，
[0347]
h.c
3-32
烯基-op(o)(oh)-*，
[0348]
i.c
3-32
炔基-op(o)(oh)-*，
[0349]
j.c
3-32
烷基-op(o)(sh)-*，
[0350]
k.c
3-32
烯基-op(o)(sh)-*，
[0351]
l.c
3-32
炔基-op(o)(sh)-*，
[0352]
m.c
3-32
烷基-nh-c(o)-*，
[0353]
n.c
3-32
烯基-nh-c(o)-*，
[0354]
o.c
3-32
炔基-nh-c(o)-*，
[0355]
p.c
3-32
烷基-nh-p(o)(oh)-*，
[0356]
q.c
3-32
烯基-nh-p(o)(oh)-*，
[0357]
r.c
3-32
炔基-nh-p(o)(oh)-*，
[0358]
s.hooc-c
3-32
亚烷基-c(o)-*，
[0359]
t.hooc-c
3-32
亚烯基-c(o)-*，以及
[0360]
u.hooc-c
3-32
亚炔基-c(o)-*，
[0361]
其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点。
[0362]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0363]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0364]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
炔基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0365]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-op(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0366]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-op(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0367]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
炔基-op(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0368]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-op(o)(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0369]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-op(o)(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0370]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
炔基-op(o)(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0371]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-op(o)(sh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0372]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-op(o)(sh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0373]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
炔基-op(o)(sh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0374]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-nh-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0375]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-nh-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0376]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
炔基-nh-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0377]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-nh-p(o)(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0378]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-nh-p(o)(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0379]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
炔基-nh-p(o)(oh)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0380]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式hooc-c
3-32
亚烷基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0381]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式hooc-c
3-32
亚烯基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0382]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式hooc-c
3-32
亚炔基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分。
[0383]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为来自式(a)至(d)中任一者的部分：
[0384]
a.c
3-32
烷基-c(o)-*，
[0385]
b.hooc-c
3-32
亚烷基-c(o)-*，
[0386]
c.c
3-32
烷基-op(o)(oh)-*
[0387]
d.c
3-32
烷基-op(o)(sh)-*
[0388]
其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中优选所述c
3-32
烷基是非支化c
3-32
烷基，并且其中还优选所述c
3-32
烷基是具有奇数个碳原子的非支化c
3-32
烷基，并且其中优选所述c
3-32
亚烷基是非支化c
3-32
亚烷基，并且其中还优选所述c
3-32
亚烷基是具有奇数个碳原子的非支化c
3-32
亚烷基。
[0389]
在另一个优选实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键
的点，并且其中优选所述c
3-32
烷基是非支化c
3-32
烷基，并且其中还优选所述c
3-32
烷基是具有奇数个碳原子的非支化c
3-32
烷基。
[0390]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分，并且其中所述c
3-32
烷基是非支化c
3-32
烷基。
[0391]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烷基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分，并且其中所述c
3-32
烷基是具有奇数个碳原子的非支化c
3-32
烷基。
[0392]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中优选所述c
3-32
烯基是支化c
3-32
烯基，并且其中还优选所述c
3-32
烯基是具有奇数个碳原子的支化c
3-32
烯基。
[0393]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分，并且其中所述c
3-32
烯基是支化c
3-32
烯基。
[0394]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式c
3-32
烯基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中优选所述组合物恰好包含一个脂质部分，并且其中所述c
3-32
烯基是具有奇数个碳原子的支化c
3-32
烯基。
[0395]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为饱和c
8-26
脂肪酸部分，其中优选所述饱和c
8-26
脂肪酸部分来源于辛酸(c8)、癸酸(c10)、月桂酸(c12)、肉豆蔻酸(c14)、棕榈酸(c16)、硬脂酸(c18)、花生酸(c20)、二十四烷酸(c22)或蜡酸(c24)。
[0396]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为饱和脂肪酸部分，其中所述饱和脂肪酸部分来源于辛酸(c8)、癸酸(c10)、月桂酸(c12)、肉豆蔻酸(c14)、棕榈酸(c16)、硬脂酸(c18)、花生酸(c20)、二十四烷酸(c22)和蜡酸(c24)。
[0397]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为来源于棕榈酸(c16)或硬脂酸(c18)的饱和脂肪酸部分，其中优选所述一个或更多个脂质部分为来源于棕榈酸(c16)的饱和脂肪酸部分。
[0398]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为不饱和c
14-22-脂肪酸部分，其中优选所述不饱和c
14-22-脂肪酸部分来源于肉豆蔻油酸、棕榈油酸、十六碳烯酸(sapienic acid)、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、反亚油酸、α-亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸和二十二碳六烯酸。在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分是来源于棕榈油酸的饱和脂肪酸部分。
[0399]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为不饱和脂肪酸部分，其中所述不饱和脂肪酸部分来源于肉豆蔻油酸、棕榈油酸、十六碳烯酸、油酸、反油酸、异油酸、亚油酸、反亚油酸、α-亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸和二十二碳六烯酸。
[0400]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分是来源于油酸的不饱和脂肪酸部
分。
[0401]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(hooc)-c
3-32
亚烷基-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中优选所述c
3-32
亚烷基是非支化c
3-32
亚烷基，并且其中还优选所述c
3-32
亚烷基是具有奇数个碳原子的非支化c
3-32
亚烷基。
[0402]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(hooc)-(ch2)
r-(ch)(c
5-25
烷基)-(ch2)
t-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，其中r彼此独立地为1至3的整数，其中t彼此独立地为1至3的整数。
[0403]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(hooc)-(ch2)
r-(ch)[(ch2)sch3]-(ch2)
t-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中r彼此独立地为1至3的整数，其中s彼此独立地为4至24的整数，其中t彼此独立地为1至3的整数。
[0404]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(hooc)-(ch2)
r-(ch)[(ch2)sch3]-(ch2)
t-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中r彼此独立地为1或2的整数，其中s彼此独立地为5至19的整数，其中t彼此独立地为1或2的整数。
[0405]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(hooc)-(ch2)
r-(ch)[(ch2)sch3]-(ch2)
t-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中r为1，其中s彼此独立地为4至24的整数，优选5至19，其中t为1。
[0406]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(hooc)-(ch2)
r-(ch)[(ch2)sch3]-(ch2)
t-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中r为1，其中s彼此独立地为5至19的整数，优选11至17，其中t为1。
[0407]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地为式(hooc)-(ch2)
r-(ch)[(ch2)sch3]-(ch2)
t-c(o)-*的部分，其中所述星号(*)表示针对所述寡聚化合物或所述间隔物的所述共价键的点，并且其中r为1，其中s为15，其中t为1。
[0408]
因此，在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分是3-十五烷基戊二酸(pdg)。
[0409]
在一些实施方案中，所述脂质部分与所述寡聚化合物直接连接。
[0410]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分通过间隔物与所述寡聚化合物连接。
[0411]
在一个实施方案中，所述间隔物具有5至30个c原子，优选5至25个c原子，更优选5至20个c原子，或最优选5至17个c原子。在另一些实施方案中，所述间隔物具有4至20个杂原子，优选4至18个杂原子，更优选4至14个杂原子，或最优选4至12个杂原子。杂原子的特别优选的实例是n和o原子。h原子不是杂原子。
[0412]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0413]
#-nh-c
2-12
亚烷基
‑§
，
[0414]
#-nh-c
2-12
亚烷基-op(oh)
‑§
，
[0415]
#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(sh)
‑§
，
[0416]
#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(oh)
‑§
，
[0417]
#-sh-c
2-12
亚烷基
‑§
，
[0418]
#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-c(o)
‑§
，
[0419]
#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(oh)
‑§
，以及
[0420]
#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(sh)
‑§
，
[0421]
其中所述c
2-12
亚烷基中的一个或更多个-ch
2-部分任选地独立地被以下替代：-o-、-s-、-nh-、-c(o)-、-c(o)o-、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、-op(oh)o-、op(o)(sh)o-、op(o)(oh)o-、nhp(o)(oh)o-、nhp(o)(sh)o-或-(o-ch
2-ch2)
k-，其中k为1至8的整数，并且其中所述c
2-12
亚烷基中的一个或更多个-ch
2-部分彼此独立地任选地被一个或更多个-cooh、-nh2、-op(o)(oh)2或-oh取代(并由此意味着所述c
2-12
亚烷基的一个或更多个-ch
2-部分中的一个或两个(优选一个)氢原子彼此独立地任选地被一个或更多个-cooh、-nh2、-op(o)(oh)2或-oh取代)，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0422]
在一个非常优选的实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0423]
a.#-nh-c
2-12
亚烷基
‑§
，
[0424]
b.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(oh)
‑§
，
[0425]
c.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(sh)
‑§
，
[0426]
d.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(oh)
‑§
，
[0427]
e.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-c(o)
‑§
，
[0428]
f.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(oh)
‑§
，以及
[0429]
g.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(sh)
‑§
，
[0430]
其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0431]
在一个非常优选的实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0432]
a.#-nh-c
2-12
亚烷基
‑§
，
[0433]
b.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(oh)
‑§
，
[0434]
c.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(sh)
‑§
，
[0435]
d.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(oh)
‑§
，
[0436]
e.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-c(o)
‑§
，
[0437]
f.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(oh)
‑§
，以及
[0438]
g.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(sh)
‑§
，
[0439]
其中所述c
2-12
亚烷基中的一个或更多个-ch
2-部分任选地独立地被以下替代：-o-、-s-、-nh-、-c(o)-、-c(o)o-、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、-op(oh)o-、op(o)(sh)o-、op(o)(oh)o-、nhp(o)(oh)o-、nhp(o)(sh)o-或-(o-ch
2-ch2)
k-，其中k为1至8的整数，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的
共价键的点。
[0440]
在一个非常优选的实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0441]
a.#-nh-c
2-12
亚烷基
‑§
，
[0442]
b.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(oh)
‑§
，
[0443]
c.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(sh)
‑§
，
[0444]
d.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(oh)
‑§
，
[0445]
e.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-c(o)
‑§
，
[0446]
f.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(oh)
‑§
，以及
[0447]
g.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(sh)
‑§
，
[0448]
其中所述c
2-12
亚烷基中的一个或更多个-ch
2-部分任选地独立地被以下替代：-o-、-s-、-nh-、-c(o)-、-c(o)o-、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、-op(oh)o-、op(o)(sh)o-、op(o)(oh)o-、nhp(o)(oh)o-、nhp(o)(sh)o-或-(o-ch
2-ch2)
k-，其中k为1至8的整数，并且其中所述c
2-12
亚烷基中的一个或更多个-ch
2-部分彼此独立地任选地被一个或更多个-cooh、-nh2、-op(o)(oh)2或-oh取代，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0449]
在一个非常优选的实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0450]
a.#-nh-c
2-12
亚烷基
‑§
，
[0451]
b.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(oh)
‑§
，
[0452]
c.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(sh)
‑§
，
[0453]
d.#-nh-c
2-12
亚烷基-op(o)(oh)
‑§
，
[0454]
e.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-c(o)
‑§
，
[0455]
f.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(oh)
‑§
，以及
[0456]
g.#-nh-c
2-12
亚烷基-nh-p(o)(sh)
‑§
，
[0457]
其中所述c
2-12
亚烷基中的一个或更多个-ch
2-部分独立地任选地被以下替代：-o-、-s-、-nh-、-c(o)-、-c(o)o-、苯基、三唑基、环戊基、环己基、琥珀酰亚胺基、-op(oh)o-、op(o)(sh)o-、op(o)(oh)o-、nhp(o)(oh)o-、nhp(o)(sh)o-或-(o-ch
2-ch2)
k-，其中k为1至8的整数，并且其中所述c
2-12
亚烷基中的一个或更多个-ch
2-部分彼此独立地任选地被一个或更多个-cooh、-nh2、-op(o)(oh)2或-oh取代，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0458]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0459]
a.-nh-(ch2)
m-，
[0460]
b.-nh-(ch2)
m-x-，
[0461]
c.-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-，
[0462]
d.-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x-，
[0463]
e.-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-，
[0464]
f.-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-x-，
[0465]
g.-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)
m-，
[0466]
h.-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)
m-x-，
[0467]
i.-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x-，
[0468]
j.-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)rx-，
[0469]
其中x彼此独立地为op(oh)、op(o)(sh)或op(o)(oh)，其中k彼此独立地为1至8的整数，其中m彼此独立地为2至12的整数，其中n彼此独立地为2至4的整数，其中p彼此独立地为1至5的整数，其中q彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2。
[0470]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0471]
a.#-nh-(ch2)m‑§
，
[0472]
b.#-nh-(ch2)
m-x
‑§
，
[0473]
c.#-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p
‑§
，
[0474]
d.#-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
，
[0475]
e.#-nh-ch(cooh)-(ch2)q‑§
，
[0476]
f.#-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-x
‑§
，
[0477]
g.#-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)m‑§
，
[0478]
h.#-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)
m-x
‑§
，
[0479]
i.#-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
，
[0480]
j.#-nh-ch(cooh)-(ch2)
q-c(o)-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
r-x
‑§
，
[0481]
其中x彼此独立地为op(oh)、op(oh)(s)或op(o)(oh)，其中k彼此独立地为1至8的整数，其中m彼此独立地为2至12的整数，其中n彼此独立地为2至4的整数，其中p彼此独立地为1至5的整数，其中q彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0482]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0483]
a.-z-nh-(ch2)
m-x-[0484]
b.-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x-[0485]
c.-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x-[0486]
d.-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x-[0487]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-ch[(ch2)2cooh]-c(o)-，其中x彼此独立地为op(oh)、op(o)(sh)、op(o)(oh)、nhp(o)(oh)、nhp(o)(sh)或nh-c(o)，其中k彼此独立地为1至8的整数，其中m彼此独立地为2至12的整数，其中n彼此独立地为2至4的整数，并且其中p彼此独立地为1至5的整数，其中q彼此独立地为1至6的整数，优选3或6，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2。
[0488]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0489]
a.#-z-nh-(ch2)
m-x
‑§
[0490]
b.#-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
[0491]
c.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x
‑§
[0492]
d.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x
‑§
[0493]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-ch[(ch2)2cooh]-c(o)-，其中x彼此独立地为op(oh)、op(o)(sh)、op(o)(oh)、nhp(o)(oh)、nhp(o)(sh)或nh-c(o)，其中k彼此独立地为1至8的整数，其中m彼此独立地为2至12的整数，其中n彼此独立地为2至4的整数，并且其中p彼此独立地为1至5的整数，其中q彼此独立地为1至6的整数，优选3或6，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0494]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0495]
a.#-z-nh-(ch2)
m-x
‑§
[0496]
b.#-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
[0497]
c.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x
‑§
[0498]
d.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x
‑§
[0499]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-ch[(ch2)2cooh]-c(o)-，其中x彼此独立地为op(oh)、op(o)(sh)、op(o)(oh)、nhp(o)(oh)、nhp(o)(sh)或nh-c(o)，其中k彼此独立地为1或2的整数，其中m彼此独立地为4至8的整数，其中n彼此独立地为2至4的整数，并且其中p彼此独立地为1至2的整数，其中q彼此独立地为1至6的整数，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0500]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0501]
a.#-z-nh-(ch2)
m-x
‑§
[0502]
b.#-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
[0503]
c.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x
‑§
[0504]
d.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x
‑§
[0505]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-ch[(ch2)2cooh]-c(o)-，x彼此独立地为op(oh)、op(o)(sh)或op(o)(oh)，其中k彼此独立地为1或2的整数，其中m彼此独立地为4至8的整数，其中n为2，并且其中p为1，其中q彼此独立地为1至6的整数，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0506]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0507]
a.#-z-nh-(ch2)
m-x
‑§
[0508]
b.#-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
[0509]
c.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x
‑§
[0510]
d.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x
‑§
[0511]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-ch[(ch2)2cooh]-c(o)-，x彼此独立地为op(o)(sh)或op(o)(oh)，其中k彼此独立地为1或2的整数，其中m彼此独立地为4至8的整数，其中n为2，并且其中p为1，其中q彼此独立地为1至6的整数，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0512]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0513]
a.#-z-nh-(ch2)
m-x
‑§
[0514]
b.#-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
[0515]
c.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x
‑§
[0516]
d.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x
‑§
[0517]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-ch[(ch2)2cooh]-c(o)-，x彼此独立地为op(o)(sh)，其中k彼此独立地为1或2的整数，其中m彼此独立地为4至8的整数，其中n为2，并且其中p为1，其中q彼此独立地为1至6的整数，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0518]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0519]
a.#-z-nh-(ch2)
m-x
‑§
[0520]
b.#-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
[0521]
c.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x
‑§
[0522]
d.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x
‑§
[0523]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-ch[(ch2)2cooh]-c(o)-，x彼此独立地为op(o)(oh)，其中k彼此独立地为1或2的整数，其中m彼此独立地为4至8的整数，其中n为2，并且其中p为1，其中q彼此独立地为1至6的整数，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，并且其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0524]
在一些实施方案中，所述间隔物包含，优选为，独立地选自下式中的任一者：
[0525]
a.#-z-nh-(ch2)
m-x
‑§
[0526]
b.#-z-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-x
‑§
[0527]
c.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]-nh-(ch2)
q-x
‑§
[0528]
d.#-z[-nh-(ch2)
n-(o-ch
2-ch2)
k-o-(ch2)
p-c(o)-]
r-nh-(ch2)
q-(o-ch
2-ch2)
k-x
‑§
[0529]
其中-z-彼此独立地表示键或-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-c(o)-或-nh-c[(ch2)2cooh]-c(o)-，x彼此独立地为op(o)(sh)或op(o)(oh)，其中k为1，其中m为6，其中n为2，并且其中p为1，其中q彼此独立地为1至6的整数，其中r彼此独立地为1至3的整数，优选1或2，其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0530]
在一些实施方案中，间隔物包含，优选为，#-z-nh-(ch2)m-x
‑§
，其中-z-表示键，x彼此独立地为op(o)(sh)或op(o)(oh)，其中m为6，其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0531]
在一些实施方案中，间隔物包含，优选为，#-z-nh-(ch2)m-x
‑§
，其中
–
z-表示键，x为op(o)(oh)，其中m为6，其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0532]
在一些实施方案中，间隔物包含，优选为，#-z-nh-(ch2)m-x
‑§
，其中
–
z-表示键，x为op(o)(sh)，其中m为6，其中所述(#)表示针对所述脂质部分的共价键的点，并且所述(
§
)表示针对所述寡聚化合物的共价键的点。
[0533]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分与所述寡聚化合物直接共价连接
或经由间隔物(通过-op(o)(sh)-或-op(o)(oh)-部分)共价连接，所述-op(o)(sh)-或-op(o)(oh)-部分通常且优选地包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内，其中所述-op(o)(sh)-或所述-op(o)(oh)-部分与所述寡聚化合物的5
’‑
末端oh-基团或3
’‑
末端oh-基团连接。
[0534]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分彼此独立地在以下处与所述寡聚化合物连接：(i)所述寡聚化合物的末端残基，(ii)所述寡聚化合物的5’末端，(iii)所述寡聚化合物的3’末端；(iv)所述寡聚化合物的内部残基。
[0535]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选所述恰好一个脂质部分，彼此独立地在所述寡聚化合物的末端残基处与所述寡聚化合物连接。
[0536]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选所述恰好一个脂质部分，彼此独立地在所述寡聚化合物的5’末端处与所述寡聚化合物连接。
[0537]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选所述恰好一个脂质部分，彼此独立地在所述寡聚化合物的3’末端处与所述寡聚化合物连接。
[0538]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选所述恰好一个脂质部分，彼此独立地在所述寡聚化合物的内部残基处与所述寡聚化合物连接。
[0539]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(sh)-或-op(o)(oh)-或-nhp(o)(oh)-或-nhp(o)(sh)-或-nh-c(o)-部分)共价连接，所述-op(o)(sh)-或-op(o)(oh)-或-nhp(o)(oh)-或-nhp(o)(sh)-或-nh-c(o)-部分通常且优选地包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内，其中所述-op(o)(sh)-或所述-op(o)(oh)-或所述-nhp(o)(oh)-或所述-nhp(o)(sh)-或所述-nh-c(o)-部分与所述寡聚化合物的5
’‑
末端oh-基团或3
’‑
末端oh-基团连接。
[0540]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(sh)-或-op(o)(oh)-部分)共价连接，其中所述-op(o)(sh)-或所述-op(o)(oh)-部分与所述寡聚化合物的5
’‑
末端oh-基团或3
’‑
末端oh-基团连接，并且其中通常且优选地所述-op(o)(sh)-或所述-op(o)(oh)-部分包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内。
[0541]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(sh)-部分)共价连接，其中所述-op(o)(sh)-部分与所述寡聚化合物的5
’‑
末端oh-基团或3
’‑
末端oh-基团连接，并且其中通常且优选地所述-op(o)(sh)-部分包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内。
[0542]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(sh)-部分)共价连接，其中所述-op(o)(sh)-部分与所述寡聚化合物的5
’‑
末端oh-基团连接，并且其中通常且优选地所述-op(o)(sh)-部分包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内。
[0543]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(sh)-部分)共价连接，其中所述-op(o)(sh)-部分与所述寡聚化合物的3
’‑
末端oh-基团连接，并且其中通
常且优选地所述-op(o)(sh)-部分包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内。
[0544]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(oh)-部分)共价连接，其中所述-p(o)(oh)-部分与所述寡聚化合物的5
’‑
末端oh-基团或3
’‑
末端oh-基团连接，并且其中通常且优选地所述-op(o)(oh)-部分包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内。
[0545]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(oh)-部分)共价连接，其中所述-p(o)(oh)-部分与所述寡聚化合物的5
’‑
末端oh-基团连接，并且其中通常且优选地所述-op(o)(oh)-部分包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内。
[0546]
在一些实施方案中，所述一个或更多个脂质部分，优选恰好一个脂质部分与所述寡聚化合物，优选与所述寡核苷酸直接共价连接，或经由间隔物(通过-op(o)(oh)-部分)共价连接，其中所述-p(o)(oh)-部分与所述寡聚化合物的3
’‑
末端oh-基团连接，并且其中通常且优选地所述-op(o)(oh)-部分包含在所述一个或更多个脂质部分或所述间隔物内。
[0547]
在一个具体实施方案中，至少一个与寡聚化合物连接的脂质部分是饱和脂肪酸部分，更特别的是来源于棕榈酸(c16)或硬脂酸(c18)的饱和脂肪酸部分，并且最特别的是来源于棕榈酸(c16)的饱和脂肪酸部分。在一些实施方案中，至少一个脂质部分包含棕榈酸(c16)。
[0548]
在本发明中，至少一个脂质部分在以下处与寡聚化合物连接：(i)所述寡聚化合物的末端残基，(ii)所述寡聚化合物的5
’‑
末端，(iii)所述寡聚化合物的3
’‑
末端；或(iv)所述寡聚化合物的内部残基。
[0549]
当寡聚化合物与至少一个脂质部分之间的键联是直接的时，共价键意味着寡聚化合物的一个原子和至少一个脂质部分的一个原子。
[0550]
当寡聚化合物与至少一个脂质部分之间的连接是间接的时，存在间隔物。该间隔物的第一原子与寡聚化合物的一个原子共价连接，而该间隔物的不同于第一原子的第二原子与至少一个脂质部分的一个原子共价连接。
[0551]
公开的任何间隔物均可以在本发明中实施。在一个具体实施方案中，本发明中实施的间隔物具有以下式(a)或(b)：
[0552][0553][0554]
其中表示针对脂质部分的共价键的点，并且(
§
)表示针对寡聚化合物的共价键的点。
[0555]
应注意，式(b)的间隔物与下式(b’)的间隔物相平衡：
[0556][0557]
因此，式(b)和式(b’)是等效的，并且可以互换使用。
[0558]
在一个更具体的实施方案中，间隔物具有式(b)，并且有利地，该间隔物的亚烷基链为6个碳原子长。
[0559]
在一些实施方案中，根据本发明的寡聚化合物选自：
[0560]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(ph)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：4)，
[0561]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3
′
(所附序列表中的seq id no：5)，
[0562]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(ph)-ggagatggcagtttc-3
′
(在所附序列表中的seq id no：6)，以及
[0563]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(在所附序列表中的seq id no：7)。
[0564]
在一些实施方案中，根据本发明的寡聚化合物选自：
[0565]-棕榈酸酯-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3
′
(所附序列表中的seq id no：4)，
[0566]-棕榈酸酯-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：5)，
[0567]-棕榈酸酯-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：6)，以及
[0568]-棕榈酸酯-nh-c
2-12
亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：7)。
[0569]
在一些实施方案中，根据本公开内容的寡聚化合物选自：
[0570]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：4)，
[0571]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：5)，
[0572]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：6)，以及
[0573]-c
8-26-饱和脂肪酸部分-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：7)。
[0574]
作为根据本发明的寡聚化合物的一些具体实例，可以列举：
[0575]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-regone.7，
[0576]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-regone.8(下文中设计为sky51)，
[0577]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-regone.9，以及
[0578]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-regone.10。
[0579]
换句话说，根据本发明的寡聚化合物选自：
[0580]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：4)，
[0581]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：5)，
[0582]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：6)，以及
[0583]-棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的
seq id no：7)。
[0584]
在一些实施方案中，寡聚化合物是棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3
′
(所附序列表中的seq id no：4)。
[0585]
在一些实施方案中，寡聚化合物是棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no：5)。
[0586]
在一些实施方案中，寡聚化合物是棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3
′
(所附序列表中的seq id no：6)。
[0587]
在一些实施方案中，寡聚化合物是棕榈酸酯-nh-c6亚烷基-op(＝s)(oh)-ggagatggcagtttc-3’(所附序列表中的seq id no:7)。
[0588]
本发明涉及如先前所定义的寡聚化合物，其用作药物。因此，本发明涉及包含作为活性成分的根据本发明的寡聚化合物和可药用载剂的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物包含治疗有效量的本文中所述的寡聚化合物。
[0589]
根据本发明的药物组合物可以通过全身途径；通过肠胃外途径；通过表面途径；通过经口途径；通过直肠途径；通过鼻内途径或通过吸入使用；所述肠胃外途径例如静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内、颅内、肌内或皮下途径。
[0590]
作为用于经口施用的固体组合物，可以使用片剂、丸剂、粉剂等，其中根据本发明的寡聚化合物与一种或更多种常规使用的惰性稀释剂和可能的另一些物质例如如润滑剂、着色剂、包衣剂等混合。
[0591]
作为可药用的用于经口或眼部施用的液体组合物，可以使用包含常规使用的惰性稀释剂，以及可能的另一些物质例如润湿产品、甜味剂、增稠剂等的混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂。
[0592]
用于肠胃外施用的无菌组合物可以是水性或非水性(油性)溶液剂、混悬剂或乳剂。作为溶剂或载剂，可以使用水、丙二醇、植物油或其他合适的有机溶剂。这些组合物还可以包含佐剂，例如分散剂或湿润剂、助悬剂、等张剂、乳化剂等。
[0593]
用于表面施用的组合物可以是例如乳膏剂、洗剂、经口喷雾剂、鼻或眼滴剂或气雾剂。
[0594]
本领域技术人员将认识到，待施用的寡聚化合物的量将是足以诱导不想要的疾病症状的改善的量。这样的量尤其可根据这样的因素如患者的年龄、体重、整体身体状况等而变化，并且可根据具体情况来确定。该量也可根据治疗方案的其他组分(例如，施用其他药物例如类固醇等)而变化。本领域技术人员将认识到，这样的参数通常是在临床试验期间得到的。此外，本领域技术人员将认识到，尽管疾病症状可以通过本文中所述的治疗完全缓解，但是这不是绝对的要求。即使是部分或间歇性的症状缓解也可能对接受者具有很大的益处。另外，患者的治疗通常不是单一事件。相反，寡聚化合物可能会多次施用，根据获得的结果，其可能是相隔数天、相隔数周、或相隔数个月、或甚至相隔数年。
[0595]
本发明还涉及如前所定义的寡聚化合物或如前所定义的药物组合物，其用于在有需要的患者中治疗迪谢内肌营养不良。
[0596]
在另一个方面中，本公开内容包括用于在有需要的患者中治疗迪谢内肌营养不良的方法。在一些实施方案中，该方法包括向患者施用治疗有效剂量的本文中公开的寡聚化合物或本文中公开的药物组合物。
[0597]
本领域已知剪接-转换策略可用于治疗患有dmd疾病的患者。具体而言，患有dmd的患者的显著亚群(对应于具有带走一个或数个外显子例如δ43-50，δ45-50，δ47-50，δ48-50，δ49-50，δ50，δ52或δ52-58的明显缺失的那些)可潜在地受益于旨在实现外显子51的跳读的本发明，但是每个患者的临床益处将取决于由其特定遗传缺失产生的截短的肌养蛋白的质量。
[0598]
本领域技术人员将认识到，具有许多方法来确定或测量响应于治疗(例如剪接转换)的效力水平。这样的方法包括但不限于测量或检测患者细胞或合适的动物模型中的挽救蛋白的活性。如果种间同源性允许，则还可以通过使用rt-pcr用来评估患者细胞以及正常细胞或野生型动物模型中靶标外显子的存在来测量旨在修饰mrna的外显子组成之治疗方案的效力。
[0599]
根据以下参考附图的详细描述，本发明的其他特征和优点将变得明显。
附图说明
[0600]
图1示出了序列regone(seq id no:3)。图1a示出了具有完整tc-dna约束性糖主链的regone序列的确切形状——3d建模是通过使用一组适当的计算机工具以及从nmr、cd光谱结构研究和tc-dna的晶体结构获得的公开实验数据实现的。图1b示出了regone序列与其自身的部分配对——符号“|”是指可能的沃森-克里克配对——如果其是由规范dna构成的寡聚物，则该结构将是不稳定的(tm低于15℃)。然而，这些二聚体的3d建模表明，这样的形式可能存在于具有预组织的约束性主链例如tc-dna的情况下——“g≡c”配对以黑色指示，“a＝t”配对以深灰色指示，不参与碱基配对的核苷酸以柔灰色(soft grey)指示。
[0601]
图2示出了在用具有2ome-核糖的等效核苷酸改变单个tc-dna核苷酸之后，基于regone tc-dna的寡核苷酸的整体形状的结果。图2a示出了3d形状上位置8处的这样的修饰的推定效果——后续寡聚物被命名为“regone.8”(seq id no:5)。2’ome-核苷酸在tc-dna串内引入了弯曲点，这破坏了其整体预组织结构，因此消除了其维持由不完整碱基配对产生的二聚体形式的能力。图2b示出了非变性条件下的凝胶电泳实验，表明regone.8确实不再能够形成二聚体。仅由tcdna核苷酸组成的相同序列系统地呈现了在凝胶中不同地迁移的二聚化形式(注意二聚化形式的比例可能更高)。
[0602]
图3示出了化合物sqy51的组成。图3a示出了其包含在其5’末端通过c6接头与棕榈酰基残基共价连接的反义寡核苷酸regone.8(seq id no:5)。sqy51的化学式为c
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15
s；精确质量5669.35；分子量5672.46。图3b示出了在非变性条件下的凝胶电泳实验，表明棕榈酰基残基的添加对寡核苷酸的二聚化特性没有影响。sqy51仍然不能够形成二聚体，而其具有完整tc-dna核苷酸的对应物能够形成二聚体。
[0603]
图4示出了使用针对sqy51和具有完整硫代磷酸酯核苷间键联的相同化合物(sqy51-ps)的人血清进行补体测定的结果。磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered saline，pbs)用作补体激活的阴性对照，而酵母聚糖(zymosan)(存在于酵母表面上的具有通过β-1,3-糖苷键连接的重复葡萄糖单元的葡聚糖)用作阳性对照。用于体外测试补体激活的实验药物浓度为2mg/ml，其模拟了约150mg/kg的体内剂量方案并且理论c
max
为约0.4mm(可能多得多，因为在该推断中考虑了血液(如血浆)体积)。
[0604]
图5示出了使用针对sqy51和具有完整硫代磷酸酯核苷间键联的相同化合物
α)的水平(图10d)。
[0610]
图11示出了在以50mg/kg/周的剂量进行4周处理结束之后的一周或五周之后，猴组织中sqy51的生物分布；用信标法(beacon method)测量化合物的量。图示出了在处理结束之后一周(白色图)和在另外4周之后(黑色图)的sqy51定量的叠加结果。％指示在4周洗脱之后的清除率。
[0611]
图12示出了猴组织中外显子51-跳读的肌养蛋白mrna的水平。图12a举例说明了在以50mg/kg/周的剂量每周注射4次sqy51之后一周，使用巢式rt-pcr对腓肠肌、四头肌、三角肌、二头肌、膈肌、心脏、小脑、脊髓、皮肤、胃、十二指肠和回肠中外显子-51跳读的检测。用pcr1(ex46f/ex53r)和pcr2(ex47fi/ex52ri)顺序扩增逆转录的mrna，以描绘由正常剪接的肌养蛋白mrna产生的886个碱基对(base-pair，bp)的扩增子，以及由于sqy51的作用而导致缺失外显子-51的653bp的扩增子。图12b示出了与在最后一次注射之后一周时的水平相比，处理后5周时横纹肌中剩余跳读水平的百分比(黑色图)(以灰色展示的背景是指每种肌肉在处理后一周时达到的水平；n＝4只动物/组)。
[0612]
图13示出了在以50mg/kg/周的剂量处理4周之后一周时，猴组织中sqy51与syn51的生物分布的比较；使用lc-ms/ms测量化合物的量。图示出了sqy51定量(白色图)和syn51(黑色图)的叠加结果。
[0613]
特定实施方案的详细讨论
[0614]
现参考以下实施例描述本文中涵盖的实施方案。这些实施例仅出于举例说明的目的提供，并且本文中涵盖的公开内容不应该被解释为局限于这些实施例，而是应该被解释为涵盖由于本文中提供的教导而变得明显的任何和所有变化。
[0615]
实施例1：用于治疗迪谢内肌营养不良的化合物
[0616]
通常来说，小的反义寡核苷酸涉及使用其骨架通过约束性糖主链而变得更具刚性的核酸，例如lna(锁核酸)或三环-dna就是这种情况。图1示出了由三环-dna核苷酸构成的regone序列(seq id no:3)，其对核糖部分的约束使寡聚物具有整体形状，使得寡聚物的tm提高了2至3℃/核苷酸。作为提醒，寡核苷酸或寡聚化合物的熔解温度(melting temperature，tm)是指50％的寡核苷酸与其补体形成双链体时的温度。与这种预先配置的刚性相对应的是，不应该形成同二聚体的序列仍然可以形成同二聚体，并因此在体内被证明具有高毒性，特别是当核苷酸间连接是硫代磷酸(ps)类型以改善生物分布时(echevarria et al,nucleic acid ther.,2019,第99卷，第148至160页；aupy et al,mol ther nucleic acids.,2019,第19卷，第371至383页)。
[0617]
通过在该序列中引入非约束性核苷酸解决了regone同源二聚化的趋势。如图2中所示，这样的修饰破坏了三环-dna寡聚物的组织结构(very organization)，所述三环-dna寡聚物目前具有一定程度的内在灵活性，使得将无法维持不完美的配对。这通过以下得到证实：(i)regone变体的3d建模，其中第八个tc-dna核苷酸被等效的2
’‑
o-甲基-核糖rna(所谓的regone.8)替代，以及(ii)凝胶电泳实验，其表明随后的化合物不再能够形成同二聚体。在核苷酸编号-8和-9处获得了最大的修饰作用，在核苷酸编号-7和-10处获得较小程度的修饰作用，并且在其他位置处根本没有修饰作用。因此，修饰应该位于核苷酸7与10之间——regone.7(seq id no:4)，regone.8(seq id no:5)，regone.9(seq id no:6)和regone.10(seq id no:7)。在位置1、2、3、4、5、6、11、12、13、14或15处的其他修饰不能令人
满意地影响分子的整体预组织结构，所述结构仍能够耐受二聚体形成。
[0618]
为了保证或至少不损害regone.8在静脉内注射条件下的安全性，优选通过磷酸二酯(po)键而不是如本领域技术人员所主张的硫代磷酸酯(ps)来连接寡聚物的15个核苷酸，以满足有效的生物分布。此外，三环-dna类的寡聚物在生物流体中具有令人满意的稳定性，并因此不需要该修饰(即ps-键)，相反，如果化合物不再是可生物降解的，则所述修饰可被证明是不利的。最后，regone.8(seq id no:5)在其5’末端经由c6接头与棕榈酰基残基共价连接，如图3中所示。该最终化合物(c
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s)被命名为sqy51。
[0619]
实施例2：对人血液的体外毒性评估
[0620]
有利地，sqy51不激活人血清中的补体，而具有硫代磷酸酯核苷间键联的相同化合物(sqy51-ps)激活补体(图4)；特别地考虑了这样的体外测定的实验药物浓度为2mg/ml，其模拟了约150mg/kg的体内剂量方案，并且理论c
max
为约0.4mm——可能多得多，因为该推断考虑血液(如血浆)体积。
[0621]
aon静脉内注射期间的另一个令人担忧的问题是其可能与凝血系统相互作用。存在数种常规测试来评估候选药物对凝血的影响，例如凝血酶原时间(pt)和活化部分凝血活酶时间(aptt)。后者是测量在存在实验药物的情况下血液凝集所需的时间的两种血液测试。凝集时间(pt和aptt)的延长指示抗凝血作用(出血过多的风险)，而缩短则指示促凝血作用(形成凝块——血栓形成的风险)。用于凝集测定的实验药物浓度为2mg/ml，其模拟了约150mg/kg的体内剂量方案，并且理论c
max
为约0.4mm(可能多得多，因为在该推断中考虑了血液(如血浆)体积)。图5清楚地示出了sqy51没有显著地改变人血浆中的凝血参数，而sqy51-ps显著地改变，特别是通过提高外源性凝血途径(aptt)的凝血时间。
[0622]
实施例3：寡聚物捕获的血清蛋白
[0623]
另一个重要的主题是使用哪种实验模型来验证aon领域的创新。最常见的是，技术人员仅确定了新的aon对组织培养中适当细胞的效力，然后可能在体内使用鼠模型。不幸的是，这样的方法预先假定反义化合物将以相同的方式与体液相互作用而与物种无关，该假设必须得到证实。为此，研究了血清中的哪些蛋白质能够与sqy51结合。虽然大多数经测试的序列(即，具有相同类型的设计)给出了非常相似的捕获谱，但是值得注意的是，sqy51是独特的，因为其在物种之间表现出主要差异。
[0624]
sqy51分子优先保留人和猕猴血清中的血清白蛋白，而其在小鼠血清中是apo-a1(图6a)。
[0625]
用gromacs进行的分子动力学研究(abraham et al,softwarex,2015,第1-2卷,第19至25页)表明，sqy51只能通过其棕榈酰基部分与小鼠白蛋白相互作用(图6b)。与图6a示出的实验数据一致，3d分析显示sqy51与人白蛋白更强烈地相互作用；在此，除与棕榈酰基残基相互作用之外，regone.8部分也可以与蛋白质相互作用以加强组装。
[0626]
图6c公开了使用不同的生物素化的化合物(例如syn51(棕榈酰基-氨基-c6-seq id no:8)、m23d(棕榈酰基-氨基-c6-seq id no:9)和sqy51(棕榈酰基-氨基-c6-seq id no:5))对从人、猕猴和小鼠血清中回收的蛋白质的sds-page分析；生物素部分通过c3接头连接在每个寡核苷酸的3’末端。所附序列表中的序列seq id no:8读作：5’aagauggcatttcta-3’，并且所附序列表中的序列seq id no:9读作：5
’‑
cctcggcttacct-3’，其中tcdna核苷以大写字母显示，而2’ome-核苷以小写字母显示。
[0627]
注意m23d是完整的tc-dna寡聚物，而syn51和sqy51二者均包含在tc-dna链内。m23d捕获了独立于测试物种的类似蛋白质模式(白蛋白和载脂蛋白)，其与人和猕猴中的syn51捕获的类似。只有sqy51具有优先固定人或非人来源的灵长类血清中的白蛋白的特性。
[0628]
如图6中所示，sqy51优先保留人和非人灵长类血清中的血清白蛋白，同时其主要与小鼠中的载脂蛋白相互作用。用人和小鼠白蛋白进行sqy51的3d建模证实了两种蛋白质均可以接收棕榈酰基残基。尽管如此，其还显示出sqy51的regone.8部分自身可以与人白蛋白相互作用以加强组装，而与小鼠白蛋白不会发生这种情况。sqy51的这种物种特异性表现是独特的，并且显然是本领域技术人员不可预见的。这也表明有必要进一步评估该化合物在合适的动物模型(例如，非人灵长类)例如食蟹猴中的优势。
[0629]
实施例4：化合物sqy51(本发明)和syn51(现有技术)在食蟹猴中的药代动力学和毒性评价
[0630]
首先，将sqy51的药代动力学与syn51的药代动力学进行比较，syn51同样包含具有三环-dna核苷和2
’‑
o-修饰的rna核苷(seq id no:8)的寡聚15聚体序列和脂质部分。
[0631]
值得注意的是，在图7a中，sqy51在血液房室中是稳定的(例如，质谱分析揭示了，在整个动力学研究中，sqy51在血浆样品中基本保持完整——未显示——尽管在输注之后24小时时可检测到少量形式，缺乏棕榈酰基残基，并在cmax为约0.1％时达到顶点)。
[0632]
重要的是，与sqy51相比，syn51捕获的血清蛋白显示出平行的蛋白质组，而与物种无关(例如，血清白蛋白和载脂蛋白)。在药物代谢动力学谱中反映了这种对血液蛋白的亲和力的差异。事实上，尽管两种化合物在静脉内输注(50mg/kg)之后都遵循双指数衰减，但是其在血液中的次要pk参数是不同的；2-房室分析(2c模型)得出syn51的消除半衰期为约20小时，而sqy51的消除半衰期为约5倍长(图7)。
[0633]
下表1示出了在食蟹猴中单次(50mg/kg)静脉内输注之后，sqy51和syn51的次要pk参数的比较。通过lc-ms/ms评估不同时间点处血液样品中sqy51和syn51的量。已根据2c模型(双指数动力学)计算了次要pk参数。
[0634]
表1
[0635][0636]
重要的是要注意，sqy51在整个消除阶段保持稳定——整个研究中的质谱分析揭示了sqy51在血流中保持完整并保留其棕榈酰基部分。
[0637]
鉴于sqy51在血液中的高持久性，由于其与灵长类血清白蛋白的特殊结合特性，因
此检查这样的长期存在是否会引发有害事件，例如补体激活(图8)、凝血功能障碍(图9)和促炎细胞因子升高(图10)至关重要。使用sqy51没有观察到这些潜在的有害事件中的任一者，但是当化合物包含ps型核苷酸间键时观察到了这些潜在的有害事件。
[0638]
关于图10中研究的促炎细胞因子，白介素1β(il-1β)由活化的巨噬细胞产生，并且其是炎症固有应答的重要介质。白介素6(il-6)(炎性细胞因子)可由巨噬细胞响应于称为病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern，pamp)的分子分泌，所述分子与固有免疫系统的检测分子，称为模式识别受体(pattern recognition receptor，prr)(包括存在于细胞表面和细胞内房室的toll样受体(toll-like receptor，tlr))结合。单核细胞/巨噬细胞是单核细胞趋化蛋白1(mcp-1)的主要来源，但是其也可以由其他细胞类型包括内皮细胞和成纤维细胞产生，它们对外周循环和组织中的抗病毒免疫应答是重要的。肿瘤坏死因子α(tnf-α)是由活化的巨噬细胞和单核细胞响应于感染和损伤自然产生的促炎细胞因子，其介导低血压、弥漫性凝血和广泛的组织损伤。
[0639]
在以50mg/kg的剂量每周注射四次之后的一周和五周，对sqy51在身体多种组织中的生物分布进行了分析(图11)。首先，正如预期地那样，肾和肝是累积该化合物的主要器官。
[0640]
下表2示出了在用sqy51或syn51进行4周处理(50mg/kg/周)之后一周食蟹猴肌肉中外显子-51跳读的比较。平均来说，sqy51的效率是syn51的10倍多。
[0641]
表2
[0642][0643]
因此，在横纹肌中，心脏看起来是主要靶标。第二，重要的是要注意，在仅经过4周另外的洗脱之后，组织中sqy51的量非常显著地降低，特别是在肾中。事实上，在处理之后的四周之后，观察到所有组织中的清除率均超过70％。
[0644]
实施例5：化合物sqy51在食蟹猴中的效力
[0645]
巢式rt-pcr分析显示了在全身施用sqy51之后猴组织中外显子-51跳读的水平(图12)，因此确认了其反义部分广泛递送至整个肌肉组织包括骨骼肌、心脏和平滑肌的肌核(myo-nuclei)。
[0646]
值得注意的是，尽管sqy51在肌肉中具有高清除率(参见图11)，但是第5周时外显子51跳读的水平与第1周时检测到的水平相对相似，并因此无论是否进行洗脱都几乎保持
不变，表明清除的化合物主要是sqy51的非生产性部分，可能滞留在间质流体或内体房室中，在那里其被清除或受到破坏。此外，该持久作用表明，用sqy51处理可以中断超过一个月或两个月而没有明显的益处损失，从而为身体提供时间来清除在有风险的组织(例如肾和肝)中假定过量的三环-dna寡聚物。
[0647]
最后，新的化合物sqy51相对于syn51具有重要优势，迄今为止syn51被认为是用于跳读dmd中的外显子-51的最好的基于tc-dna的化合物：(i)由于其内在特性(例如，与人&nhp血清白蛋白的更高特异性结合)，sqy51在全身递送之后在猴肌肉中显示出改善的生物分布(图13)，以及(ii)横纹肌中的后续外显子-51跳读水平为10倍高，表明sqy51具有真正的治疗益处。