一种分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法及其装置和应用与流程

技术特征：
1.一种分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：s1：将含ev颗粒的流体样本与功能化磁性纳米颗粒混合，得mnp@poly-ev复合体，磁分离后进行封闭处理，得封闭处理mnp@poly-ev复合体；s2：将封闭处理mnp@poly-ev复合体与生物素修饰的凝集素混合，磁分离后再与链酶亲和素偶联的酶分子混合，得酶标记的mnp@poly-ev复合体；s3：将酶标记的mnp@poly-ev复合体与酶分子对应底物混合反应后，进行光学信号检测。2.根据权利要求1所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，其特征在于：s1中，所述含ev颗粒的流体样本与所述功能化磁性纳米颗粒的混合时间为至少10min。3.根据权利要求1所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，其特征在于：s2中，所述生物素化ev与所述链酶亲和素偶联的酶分子的混合时间为至少10min。4.根据权利要求1所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，其特征在于：s3中，所述混合反应的时间为至少5min。5.一种分析流体样本细胞外囊泡聚糖的装置，其特征在于：包括：功能化磁性纳米颗粒，其用于捕获含ev颗粒的流体样本中的细胞外囊泡，得mnp@poly-ev复合体；封闭液，其用于封闭处理所述mnp@poly-ev复合体，得封闭处理mnp@poly-ev复合体；生物素修饰的凝集素，其用于对所述封闭mnp@poly-ev复合体进行亲和标记，得生物素化ev；链酶亲和素偶联的酶分子，其用于与所述生物素化ev进行特异性结合，得酶标记磁性复合体；酶分子对应底物，其用于与所述酶标记磁性复合体反应。6.根据权利要求5所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的装置，其特征在于：所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的装置，包括：入口单元，所述入口单元被配置为接收含ev颗粒的流体样本；混合单元，所述混合单元被配置有：功能化磁性纳米颗粒，其用于捕获所述含ev颗粒的流体样本中的细胞外囊泡，得mnp@poly-ev复合体；封闭液，其用于封闭处理所述mnp@poly-ev复合体，得封闭处理mnp@poly-ev复合体；生物素修饰的凝集素，其用于对所述封闭处理mnp@poly-ev复合体进行亲和标记，得生物素化ev；链酶亲和素偶联的酶分子，其用于与所述生物素化ev进行特异性结合，得酶标记磁性复合体；酶分子对应底物，其用于与所述酶标记磁性复合体反应；磁分离单元，所述磁分离单元被配置为依序磁分离获得mnp@poly-ev复合体、生物素化ev、酶标记磁性复合体；检测单元，所述检测单元被配置为在所述含ev颗粒的流体样本通过所述磁分离单元后测量所述含ev颗粒的流体样本的荧光信号。7.根据权利要求1或2所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，或权利要求5或6所
述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的装置，其特征在于：所述含ev颗粒的流体样本包括对含ev颗粒的溶液经差速冷冻离心法获得，所述差速冷冻离心法的离心力为2000g～150000g，时间为30min～200min。8.根据权利要求1或2所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，或权利要求5或6所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的装置，其特征在于：所述含ev颗粒的流体样本中ev颗粒与功能化磁性纳米颗粒的质量比为0.005～0.1：1。9.根据权利要求1或2所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，或权利要求5或6所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的装置，其特征在于：所述生物素修饰的凝集素中凝集素包括伴刀豆凝集素a、小扁豆凝集素、豌豆凝集素、橙黄网胞盘菌凝集素、荆豆凝集素i、小麦胚芽凝集素、番茄凝集素、马铃薯凝集素、曼陀罗凝集素、琥珀酸小麦胚凝集素、加纳籽凝集素ii、红细胞凝集素、白细胞凝集素、蓖麻凝集素i、刺桐凝集素、木菠萝素凝集素、花生凝集素、双花扁豆凝集素、大豆凝集素、绒毛蚕豆凝集素、加纳籽凝集素i、黑接骨木凝集素的至少一种。10.一种如权利要求1～4任一项所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法，或如权利要求5～9任一项所述的分析流体样本细胞外囊泡聚糖的装置在分析流体样本细胞外囊泡聚糖中的应用。

技术总结
本发明公开了一种分析流体样本细胞外囊泡聚糖的方法及其装置和应用，所述方法包括S1：将含EV颗粒的流体样本与功能化磁性纳米颗粒混合，得MNP@poly-EV复合体，磁分离后进行封闭处理，得封闭处理MNP@poly-EV复合体；S2：将封闭处理MNP@poly-EV复合体与生物素修饰的凝集素混合，磁分离后再与链酶亲和素偶联的酶分子混合，得酶标记的MNP@poly-EV复合体；S3：将酶标记的MNP@poly-EV复合体与酶分子对应底物混合反应后，进行光学信号检测。本发明提出的方法简便，耗时短，在优化条件下，单次操作时间不超过1小时，相对于ELSIA等方法大大缩短。该方法通用性好，可检测不同形式的EV样品。可检测不同形式的EV样品。可检测不同形式的EV样品。


技术研发人员：杨根 闫宇飞 王志刚
受保护的技术使用者：国科温州研究院（温州生物材料与工程研究所）
技术研发日：2023.05.18
技术公布日：2023/10/4